本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其涉及一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基及其制備方法。

背景技術(shù)：

培養(yǎng)基是微生物發(fā)酵過程或動植物細(xì)胞培養(yǎng)過程中供微生物或動、植物細(xì)胞生長、繁殖或累積代謝產(chǎn)物所必需的營養(yǎng)基質(zhì)。一般培養(yǎng)基的成分包括:碳源、氮源、礦物質(zhì)，以及其他必需物質(zhì)，如某些生物自身不能合成的物質(zhì)，如某些氨基酸、維生素或核苷酸等。此外，培養(yǎng)基中還常加入ph緩沖劑以維持穩(wěn)定的ph。

現(xiàn)有技術(shù)中固體培養(yǎng)基一般都是以瓊脂為主要凝固的載體再輔以其他營養(yǎng)物質(zhì)，但是應(yīng)用于斜面培養(yǎng)基時存在一定的問題，由于瓊脂在40℃-45℃時的凝固速度過快，凝固時間過短導(dǎo)致在進(jìn)行斜面培養(yǎng)基制備時，容易造成凝固不均，斜面上下厚度差異太大的問題，一方面會影響菌液的生長營養(yǎng)均衡度，另一方面會造成涂布時出現(xiàn)涂布不均，太薄的地方劃線時出現(xiàn)劃破劃爛的情況從而影響后期試驗的準(zhǔn)確性問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提出了一種有效控制培養(yǎng)基的凝固速度，提高斜面培養(yǎng)基制備時厚度均一性和培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)均勻分布問題的納米凝膠斜面培養(yǎng)基及其制備方法。

技術(shù)方案：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基，在普通的斜面瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上用部分納米凝膠粒子以及瓊脂糖凝膠替代部分的瓊脂粉，具體以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計算首先用納米凝膠粒子替代20％-30％的瓊脂粉，再用瓊脂糖凝膠替代25％-35％的瓊脂粉；

所述納米凝膠粒子為氧化鋅-二氧化鈦納米復(fù)合材料的制備：將氯化鋅溶于十倍體積的無水乙醇的酸性溶液中，低溫等離子反應(yīng)器中反應(yīng)10-20min后加入二氧化鈦粉末繼續(xù)反應(yīng)20-30min，反應(yīng)溫度為-12～-6℃，反應(yīng)完畢后取出充分超聲攪拌至液相分散均勻；調(diào)節(jié)ph為2-3，后再置于低溫等離子體反應(yīng)器內(nèi)-5-0℃靜置12h以上，形成均一溶膠，再取出蒸發(fā)干燥轉(zhuǎn)變?yōu)槟z，得納米凝膠粒子。

更為優(yōu)選的，所述瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖與tae溶液以2:3的質(zhì)量比配制而成。

更為優(yōu)選的，所述納米凝膠粒子在除培養(yǎng)基溶劑蒸餾水外的質(zhì)量百分比含量不高于50％。

更為優(yōu)選的，所述納米凝膠粒子的尺寸小于0.1μm。

本發(fā)明還公開了上述一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟：

a)培養(yǎng)基基液的配制：按所需用途的斜面瓊脂培養(yǎng)基配方，稱取除瓊脂粉外的其他原料，溶解攪拌均勻成培養(yǎng)基基液，調(diào)節(jié)到所需ph；

b)培養(yǎng)基的配制：向已經(jīng)調(diào)節(jié)好ph的培養(yǎng)基基液中加入計算好的所需量的瓊脂粉、瓊脂糖凝膠后加熱攪拌至完全溶解再加入納米凝膠粒子，繼續(xù)加熱攪拌至完全溶解，按斜面瓊脂培養(yǎng)基的制備方法分裝、傾斜凝固得到目的培養(yǎng)基；

c)后處理：滅菌處理后保溫待用，得到所需納米凝膠斜面培養(yǎng)基。

所述滅菌處理具體方式為化學(xué)滅菌活處理方式進(jìn)行，高壓消毒的方式會對瓊脂糖凝膠產(chǎn)生破壞。

有益效果：本發(fā)明提供的一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基及其制備方法，屬于微生物培養(yǎng)領(lǐng)域。在普通的斜面瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上用部分納米凝膠粒子以及瓊脂糖凝膠替代部分的瓊脂粉，具體以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計算首先用納米凝膠粒子替代20％-30％的瓊脂粉，再用瓊脂糖凝膠替代25％-35％的瓊脂粉；有效延緩了培養(yǎng)基的凝固時間以及凝固速度，提高了斜面培養(yǎng)基制備時厚度均一性程度，也提高了培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)的均勻分布程度，從而有效保證培養(yǎng)以及后續(xù)測試結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免多次重復(fù)試驗，縮短試驗時間、減少誤差，有利于提高試驗的精確程度，此外，本發(fā)明的制備方法設(shè)計合理，操作簡單方便。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明：

一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基，在普通的斜面瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上用部分納米凝膠粒子以及瓊脂糖凝膠替代部分的瓊脂粉，具體以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計算首先用納米凝膠粒子替代20％-30％的瓊脂粉，再用瓊脂糖凝膠替代25％-35％的瓊脂粉；

實施例1：

一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基，用于金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)，具體包括如下成分：葡萄糖20g、蛋白胨15g、氯化鈉5g、牛肉膏0.5g、瓊脂粉7g、納米凝膠粒子6g、瓊脂糖凝膠7g；加蒸餾水配制至1l；

所述納米凝膠粒子為氧化鋅-二氧化鈦納米復(fù)合材料的制備：將氯化鋅溶于十倍體積的無水乙醇的酸性溶液中，低溫等離子反應(yīng)器中反應(yīng)10min后加入二氧化鈦粉末繼續(xù)反應(yīng)20min，反應(yīng)溫度為-12℃，反應(yīng)完畢后取出充分超聲攪拌至液相分散均勻；調(diào)節(jié)ph為2，后再置于低溫等離子體反應(yīng)器內(nèi)-5℃靜置12h以上，形成均一溶膠，再取出蒸發(fā)干燥轉(zhuǎn)變?yōu)槟z，得尺寸小于0.1μm的納米凝膠粒子；所述瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖與tae溶液以2:3的質(zhì)量比配制而成。

上述一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟：

a)培養(yǎng)基基液的配制：按所需用途的斜面瓊脂培養(yǎng)基配方，稱取除瓊脂粉外的其他原料，溶解攪拌均勻成培養(yǎng)基基液，調(diào)節(jié)到所需ph；

b)培養(yǎng)基的配制：向已經(jīng)調(diào)節(jié)好ph的培養(yǎng)基基液中加入計算好的所需量的瓊脂粉、瓊脂糖凝膠后加熱攪拌至完全溶解再加入納米凝膠粒子，繼續(xù)加熱攪拌至完全溶解，按斜面瓊脂培養(yǎng)基的制備方法分裝、傾斜凝固得到目的培養(yǎng)基；

c)后處理：滅菌處理后保溫待用，得到所需納米凝膠斜面培養(yǎng)基。

所述滅菌處理具體方式為化學(xué)滅菌活處理方式進(jìn)行，高壓消毒的方式會對瓊脂糖凝膠產(chǎn)生破壞。

實施例2：

一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基，用于金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)，具體包括如下成分：葡萄糖20g、蛋白胨15g、氯化鈉5g、牛肉膏0.5g、瓊脂11g、納米凝膠粒子4g、瓊脂糖凝膠5g；加蒸餾水配制至1l；

所述納米凝膠粒子為氧化鋅-二氧化鈦納米復(fù)合材料的制備：將氯化鋅溶于十倍體積的無水乙醇的酸性溶液中，低溫等離子反應(yīng)器中反應(yīng)20min后加入二氧化鈦粉末繼續(xù)反應(yīng)30min，反應(yīng)溫度為-6℃，反應(yīng)完畢后取出充分超聲攪拌至液相分散均勻；調(diào)節(jié)ph為2-3，后再置于低溫等離子體反應(yīng)器內(nèi)0℃靜置12h以上，形成均一溶膠，再取出蒸發(fā)干燥轉(zhuǎn)變?yōu)槟z，得尺寸小于0.1μm的納米凝膠粒子；所述瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖與tae溶液以2:3的質(zhì)量比配制而成。

一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基的制備方法與實施例1相同。

實施例3：

一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基，用于金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)，具體包括如下成分：葡萄糖20g、蛋白胨15g、氯化鈉5g、牛肉膏0.5g、瓊脂粉9g、納米凝膠粒子5g、瓊脂糖凝膠6g；加蒸餾水配制至1l；

所述納米凝膠粒子為氧化鋅-二氧化鈦納米復(fù)合材料的制備：將氯化鋅溶于十倍體積的無水乙醇的酸性溶液中，低溫等離子反應(yīng)器中反應(yīng)15min后加入二氧化鈦粉末繼續(xù)反應(yīng)25min，反應(yīng)溫度為-9℃，反應(yīng)完畢后取出充分超聲攪拌至液相分散均勻；調(diào)節(jié)ph為2.5，后再置于低溫等離子體反應(yīng)器內(nèi)-3℃靜置12h以上，形成均一溶膠，再取出蒸發(fā)干燥轉(zhuǎn)變?yōu)槟z，得尺寸小于0.1μm的納米凝膠粒子；所述瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖與tae溶液以2:3的質(zhì)量比配制而成。

一種納米凝膠斜面培養(yǎng)基的制備方法與實施例1相同。

對比例：

一種普通斜面培養(yǎng)基，用于金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)，具體包括如下成分：葡萄糖20g、蛋白胨15g、氯化鈉5g、牛肉膏0.5g、瓊脂粉20g、加蒸餾水配制至1l。

制備方法為普通斜面培養(yǎng)基制備方法。

有益效果試驗驗證：

以實施例1-3制備的納米凝膠斜面培養(yǎng)基與對比例的普通斜面培養(yǎng)基進(jìn)行對比試驗；均對金黃色葡萄球菌進(jìn)行培養(yǎng)，測定凝固時間以及觀察斜面厚度均一程度。

每組三個平行試驗，同時觀察培養(yǎng)基分布情況，軟硬程度。結(jié)果見表1：

表1實施例1-3以及對照組凝固時間以及斜面厚度情況對比分析

從表1中數(shù)據(jù)可以看出，實施例1-3的納米凝膠斜面培養(yǎng)基和對照組相比，對于培養(yǎng)基凝固速度上控制較好，且斜面培養(yǎng)基厚度均一性程度高，也提高了培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)的均勻分布程度，從而有效保證了細(xì)菌的最佳培養(yǎng)狀態(tài)以及后續(xù)測試結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免多次重復(fù)試驗，縮短試驗時間、減少誤差，有利于提高試驗的精確程度，此外，本發(fā)明的制備方法設(shè)計合理，操作簡單方便。

應(yīng)當(dāng)指出，以上具體實施方式僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。