本發(fā)明涉及psa3蛋白在參與psi的組裝以及維持psi穩(wěn)定中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：：在藍(lán)細(xì)菌、藻類和植物中廣泛存在兩大類類囊體膜蛋白復(fù)合體，一個(gè)為光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)，另一個(gè)為光系統(tǒng)ii復(fù)合體(psii)。psi大約有600kd，由兩個(gè)小一點(diǎn)的亞復(fù)合體組成。psi幾乎一半的亞基都是由葉綠體基因組編碼的。psi的兩個(gè)亞復(fù)合體分別是：①核心復(fù)合體，負(fù)責(zé)從類囊體囊腔側(cè)的質(zhì)體藍(lán)素轉(zhuǎn)移電子到基質(zhì)側(cè)的鐵氧還蛋白；②lhci復(fù)合體，負(fù)責(zé)捕獲光能量。核心復(fù)合體由9個(gè)膜蛋白(psaa、psab、psaf-psal)和3個(gè)外圍的亞基(psac、psad和psae)組成。lhci復(fù)合體由細(xì)胞核編碼的四種lhca蛋白以及部分lhcb蛋白組成，lhca蛋白位于類囊體膜內(nèi)部。psaa和psab以異源二聚體的形式參與電荷分離和電子轉(zhuǎn)移，核心復(fù)合體的其他亞基圍繞在psaa/psab異源二聚體周圍參與psi的穩(wěn)定以及與lhci復(fù)合體的結(jié)合。psi大概包含兩百種葉綠素、類胡蘿卜素、鐵硫簇和質(zhì)體醌等輔基基團(tuán)?，F(xiàn)有技術(shù)中，對(duì)psi的生物發(fā)生知之甚少。有證據(jù)表明：光合真核生物中psi的組裝起始于膜上psaa/psab二聚體的形成；隨后psac、psad和psae組成所謂的“基質(zhì)橋”添加到基質(zhì)側(cè)的psaa/psab二聚體上；在最后的步驟中，其它亞基被組裝到psi中。到目前為止，已經(jīng)鑒定出六個(gè)蛋白，負(fù)責(zé)psi的累積以及參與psi組裝過程的不同階段，其中包括質(zhì)體編碼的蛋白ycf3和ycf4，以及細(xì)胞核編碼的蛋白y3ip1、pyg7/ycf37、ppd1和psa2。ycf3、ycf4和y3ip1結(jié)合在類囊體膜的基質(zhì)側(cè)，有研究表明它們參與了psi基質(zhì)橋的組裝過程。ppd1和psa2依附在類囊體膜的囊腔側(cè)。pyg7是一個(gè)內(nèi)膜蛋白，最近研究表明，pyg7在衣藻中的同源體負(fù)責(zé)psi的生物發(fā)生，尤其是在有氧條件下并且可以防止鐵硫簇在組裝過程中被氧化。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供psa3蛋白在參與psi的組裝以及維持psi穩(wěn)定中的應(yīng)用。本發(fā)明首先保護(hù)鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)的應(yīng)用，為如下(a1)至(a6)中的至少一種：(a1)參與光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的組裝；(a2)參與光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的形成；(a3)維持光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的穩(wěn)定性；(a4)用于制備參與光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的組裝的產(chǎn)品；(a5)用于制備參與光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的形成的產(chǎn)品；(a6)用于制備維持光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的穩(wěn)定性的產(chǎn)品。本發(fā)明還保護(hù)鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)的應(yīng)用，為如下(b1)至(b10)中的至少一種：(b1)參與光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的組裝；(b2)參與光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的形成；(b3)維持光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的穩(wěn)定性；(b4)維持光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的水平；(b5)維持光合真核生物中psaa蛋白的水平；(b6)用于制備參與光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的組裝的產(chǎn)品；(b7)用于制備參與光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的形成的產(chǎn)品；(b8)用于制備維持光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的穩(wěn)定性的產(chǎn)品；(b9)用于制備維持光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的水平的產(chǎn)品；(b10)用于制備維持光合真核生物中psaa蛋白的水平的產(chǎn)品。本發(fā)明還保護(hù)鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)的應(yīng)用，為如下(c1)至(c6)中的至少一種：(c1)與pyg7蛋白結(jié)合；(c2)檢測(cè)pyg7蛋白；(c3)純化或富集pyg7蛋白；(c4)制備用于結(jié)合pyg7蛋白的產(chǎn)品；(c5)制備用于檢測(cè)pyg7蛋白的產(chǎn)品；(c6)制備用于純化或富集pyg7蛋白的產(chǎn)品。本發(fā)明還保護(hù)鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)和pyg7蛋白的應(yīng)用，為如下(d1)至(d6)中的至少一種：(d1)共同參與光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的組裝；(d2)共同參與光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的形成；(d3)共同維持光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的穩(wěn)定性；(d4)用于制備參與光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的組裝的產(chǎn)品；(d5)用于制備參與光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的形成的產(chǎn)品；(d6)用于制備維持光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的穩(wěn)定性的產(chǎn)品。本發(fā)明還保護(hù)鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)和pyg7蛋白的應(yīng)用，為如下(e1)至(e10)中的至少一種：(e1)共同參與光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的組裝；(e2)共同參與光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的形成；(e3)共同維持光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的穩(wěn)定性；(e4)共同維持光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的水平；(e5)共同維持光合真核生物中psaa蛋白的水平；(e6)用于制備參與光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的組裝的產(chǎn)品；(e7)用于制備參與光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的形成的產(chǎn)品；(e8)用于制備維持光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的穩(wěn)定性的產(chǎn)品；(e9)用于制備維持光合真核生物中光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的水平的產(chǎn)品；(e10)用于制備維持光合真核生物中psaa蛋白的水平的產(chǎn)品。本發(fā)明還保護(hù)一種制備光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體受損的光合真核生物的方法，包括如下步驟：敲除光合真核生物基因組中編碼鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)的基因，得到光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體受損的光合真核生物。本發(fā)明還保護(hù)一種制備光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體受損的光合真核生物的方法，包括如下步驟：突變光合真核生物基因組中編碼鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)的基因，得到光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體受損的光合真核生物。本發(fā)明還保護(hù)一種制備光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體受損的光合真核生物的方法，包括如下步驟：抑制光合真核生物中鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)的活性，得到光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體受損的光合真核生物。本發(fā)明還保護(hù)一種多肽片段，由鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)c末端的54個(gè)氨基酸殘基組成。所述多肽片段具體可為序列表的序列3第224-277位氨基酸殘基組成的多肽片段。本發(fā)明還保護(hù)所述多肽片段的應(yīng)用，為如下(f1)或(f2)：(f1)參與鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)和pyg7蛋白的結(jié)合；(f2)用于制備參與鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)和pyg7蛋白的結(jié)合的產(chǎn)品。以上任一所述光合真核生物具體可為植物，例如玉米或擬南芥。所述鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)具體可為如下(g1)或(g2)或(g3)或(g4)或(g5)：(g1)序列表的序列1所示的蛋白質(zhì)；(g2)序列表的序列3所示的蛋白質(zhì)；(g3)在(g1)的n端或/和c端連接標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)；(g4)在(g2)的n端或/和c端連接標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)；(g5)將(g1)或(g2)或(g3)或(g4)經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體(psⅰ)的組裝相關(guān)的由其衍生的蛋白質(zhì)。所述pyg7蛋白可為如下(h1)或(h2)或(h3)：(h1)序列表的序列5所示的蛋白質(zhì)；(h2)在(h1)的n端或/和c端連接標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)；(h3)將(h1)或(h2)經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與(h1)具有相同功能的由其衍生的蛋白質(zhì)。以上任一所述標(biāo)簽具體見表1。表1標(biāo)簽的序列標(biāo)簽殘基序列poly-arg5-6(通常為5個(gè))rrrrrpoly-his2-10(通常為6個(gè))hhhhhhflag8dykddddkstrep-tagii8wshpqfekc-myc10eqkliseedl以上任一所述編碼鈣平衡調(diào)節(jié)因子(psa3蛋白)的基因可為如下(j1)或(j2)或(j3)或(j4)：(j1)編碼區(qū)如序列表中序列2所示的dna分子；(j2)編碼區(qū)如序列表中序列4所示的dna分子；(j3)在嚴(yán)格條件下與(j1)或(j2)限定的dna序列雜交且編碼所述蛋白質(zhì)的dna分子；(j4)與(j1)或(j2)限定的dna序列具有90％以上同源性且編碼所述蛋白質(zhì)的dna分子。上述嚴(yán)格條件可為用0.1×sspe(或0.1×ssc)，0.1％sds的溶液，在dna或者rna雜交實(shí)驗(yàn)中65℃下雜交并洗膜。psa3基因突變后導(dǎo)致玉米和擬南芥中psⅰ的特異缺失。核糖體模式實(shí)驗(yàn)和同位素脈沖標(biāo)記實(shí)驗(yàn)分析表明葉綠體編碼的psi亞基的合成速率在突變體中并未改變，這表明psa3蛋白功能包含在psi翻譯后的生物發(fā)生過程。psa3蛋白定位在葉綠體類囊體膜的基質(zhì)側(cè)，其所在復(fù)合體大小比成熟psi復(fù)合體略微小一些。酵母雙雜交和雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證明psa3蛋白與pyg7蛋白互作，并且psa3蛋白和pyg7蛋白分別被發(fā)現(xiàn)位于相似分子量大小的類囊體膜相關(guān)復(fù)合體中。綜上所述，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，缺乏psa3蛋白使得光系統(tǒng)ⅰ復(fù)合體不能正確組裝，從而psaa蛋白迅速被降解掉，進(jìn)一步來說，psa3蛋白和pyg7蛋白共同在psi組裝的類囊體膜基質(zhì)側(cè)輔助psi復(fù)合體的組裝和穩(wěn)定。本發(fā)明對(duì)于光合真核生物psⅰ的研究具有重大應(yīng)用價(jià)值。附圖說明圖1為實(shí)施例2中三葉期的待測(cè)植株的表型。圖2為實(shí)施例2中westernblot檢測(cè)zm-psa3蛋白水平。圖3為實(shí)施例2中westernblot檢測(cè)psaa蛋白、d2蛋白、peta蛋白和atpb蛋白的水平。圖4為實(shí)施例3中表型鑒定的結(jié)果。圖5為實(shí)施例3中westernblot檢測(cè)的結(jié)果。圖6為實(shí)施例4中第一向電泳的結(jié)果。圖7為實(shí)施例4中第二向電泳的結(jié)果。圖8為實(shí)施例5的結(jié)果。圖9為實(shí)施例6的結(jié)果。圖10為實(shí)施例7的結(jié)果。圖11為實(shí)施例8的結(jié)果。圖12為實(shí)施例9的結(jié)果。具體實(shí)施方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。在序列表的序列1所示的zm-psa3蛋白的c末端融合his6標(biāo)簽，然后作為免疫原免疫兔子，得到zm-psa3蛋白的多克隆抗體，簡(jiǎn)稱zm-psa3抗體。用于檢測(cè)psaa蛋白的一抗：as06172，agrisera。用于檢測(cè)d2蛋白的一抗：as06146pre，agrisera。用于檢測(cè)peta蛋白的一抗：as06119，agrisera。用于檢測(cè)atpa/atpb蛋白的一抗：as05085pre，agrisera。用于檢測(cè)psad蛋白的一抗：as09461，agrisera。用于檢測(cè)flag標(biāo)簽的一抗：as152871,agrisera。用于檢測(cè)psac的一抗：as10939,agrisera。用于檢測(cè)psaf的一抗：as06104,agrisera。用于檢測(cè)psak的一抗：as04049,agrisera。用于檢測(cè)psal的一抗：as06108,agrisera。實(shí)施例1、psa3蛋白的功能發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明人構(gòu)建了mu轉(zhuǎn)座子誘導(dǎo)的玉米突變體庫，從中篩選不能進(jìn)行光合作用的突變株(具有黃化表型的植株)，采用深度測(cè)序方法鑒定mu-轉(zhuǎn)座子的插入與表型共分離，鑒定到若干個(gè)插入突變。一個(gè)突變株在特定基因的起始密碼子附近存在一個(gè)插入位點(diǎn)，將該突變株命名為突變株甲。另一個(gè)突變株在相同的特定基因的第三外顯子處存在一個(gè)插入位點(diǎn)，將該突變株命名為突變株乙。突變株甲和突變株乙缺乏psi反應(yīng)中心蛋白(psaa蛋白)，但是psii核心亞基、細(xì)胞色素b6f復(fù)合體、atp合酶和rubisco水平與野生株基本一致，植株葉片顯示升高的葉綠素?zé)晒?，?dāng)種子能量耗盡后在土壤中培養(yǎng)三周后死亡。結(jié)果表明，所述特定基因編碼參與psⅰ組裝/穩(wěn)定的蛋白，將該特定基因命名為zm-psa3基因(開放閱讀框如序列表的序列2所示)，將該基因編碼的蛋白質(zhì)命名為zm-psa3蛋白(如序列表的序列1所示)。序列表的序列1所示蛋白質(zhì)的原注釋為鈣平衡調(diào)節(jié)因子(calciumhomeostasisregulator)。zm-psa3基因?yàn)殡[性基因，純合基因型的植株發(fā)生黃化表型。zm-psa3基因主要在嫩葉組織中表達(dá)，與激活葉綠體的發(fā)育時(shí)期相吻合。在擬南芥基因組中尋找zm-psa3基因的同源基因，將其命名為at-psa3基因(at3g55250，開放閱讀框如序列表的序列4所示)，將該基因編碼的蛋白質(zhì)命名為at-psa3蛋白(如序列表的序列3所示，第1-45位為信號(hào)肽，第46-277位為成熟蛋白)。序列表的序列3所示蛋白質(zhì)的原注釋為鈣平衡調(diào)節(jié)因子(calciumhomeostasisregulator)。at-psa3蛋白存在于葉綠體蛋白組中。從擬南芥salk突變體庫(thesalkcollection，網(wǎng)址為：http://signal.salk.edu)商購(gòu)在at3g55250中發(fā)生t-dna插入的突變體擬南芥(編號(hào)為sail_503_b01；突變體擬南芥的背景植株為哥倫比亞生態(tài)型擬南芥，col-0)，將其命名為at-psa3突變體。經(jīng)全基因組測(cè)序，與哥倫比亞生態(tài)型擬南芥相比，at-psa3突變體的差異僅在于一條染色體在at-psa3基因中插入了t-dna(插入位置為“agcttcttaaag”之前,位于基因的第三個(gè)外顯子處)，另一條染色體未發(fā)生任何插入。at-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體均發(fā)生了所述t-dna插入)表現(xiàn)出黃化表型，移栽到土中很快死亡。at-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體均發(fā)生了所述t-dna插入)播種在含2％蔗糖的ms培養(yǎng)基中，植株出現(xiàn)灰綠、生長(zhǎng)緩慢的表型，葉片具有高葉綠素?zé)晒?，缺乏psi的psaa蛋白。實(shí)施例2、突變體玉米與野生型玉米的比較以玉米hiii的種子胚為受體，利用cas9技術(shù)定向敲除zm-psa3基因，得到突變體玉米，將其命名為zm-psa3突變體。經(jīng)全基因組測(cè)序，與玉米hiii相比，zm-psa3突變體的差異僅在于一條染色體中的zm-psa3基因喪失了編碼功能，另一條染色體的zm-psa3基因與受體相同。待測(cè)植株分別為：玉米hiii和zm-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體中的zm-psa3基因均喪失了編碼功能)。1、表型鑒定三葉期的待測(cè)植株的表型見圖1。圖1中，左側(cè)植株為玉米hiii，右側(cè)植株為zm-psa3突變體的純合后代。與玉米hiii相比，zm-psa3突變體的純合后代生長(zhǎng)緩慢。采用mini-pamchlorophyllfluorometer(walz)觀察三葉期待測(cè)植株的表型(參考文獻(xiàn)：meurerj,meierhoffk,westhoffp(1996)isolationofhigh-chlorophyll-fluorescencemutantsofarabidopsisthalianaandtheircharacterisationbyspectroscopy,immunoblottingandnorthernhybridisation.planta198:385-396)。與玉米hiii相比，zm-psa3突變體的純合后代的葉片具有高葉綠素?zé)晒狻?、zm-psa3蛋白水平的鑒定提取三葉期待測(cè)植株葉片的總蛋白，進(jìn)行sds-page和westernblot，檢測(cè)zm-psa3蛋白水平，結(jié)果見圖2。圖2中，1對(duì)應(yīng)玉米hiii，2對(duì)應(yīng)zm-psa3突變體的純合后代。玉米hiii中zm-psa3蛋白對(duì)應(yīng)約26kda的條帶。zm-psa3突變體的純合后代中檢測(cè)不到zm-psa3蛋白。3、其他蛋白表達(dá)量檢測(cè)提取三葉期待測(cè)植株葉片的總蛋白，進(jìn)行sds-page和westernblot，檢測(cè)psaa蛋白、d2蛋白、peta蛋白和atpb蛋白的水平。結(jié)果見圖3。圖3中，1對(duì)應(yīng)玉米hiii，2對(duì)應(yīng)zm-psa3突變體的純合后代。與玉米hiii相比，zm-psa3突變體的純合后代中psaa蛋白水平顯著降低，d2蛋白、peta蛋白和atpb蛋白的水平均無顯著差異。實(shí)施例3、野生型擬南芥、突變型擬南芥以及回補(bǔ)株系擬南芥的比較提及pcambia1300-flag載體的文獻(xiàn)(在文獻(xiàn)中的相應(yīng)名稱為“amodifiedpcambia1300containingeitherthemycorflagcodingsequence”)：zhaoy,xies,lix,wangc,chenz,laij,gongz.。repressorofsilencing5encodesamemberofthesmallheatshockproteinfamilyandisrequiredfordnademethylationinarabidopsis.plantcell.2014jun；26(6):2660-2675.。一、回補(bǔ)株系的獲得1、將序列表的序列4自5’末端第1-831位核苷酸所示的雙鏈dna分子插入pcambia1300-flag載體的xbai和sali酶切位點(diǎn)之間，得到重組質(zhì)粒。根據(jù)測(cè)序結(jié)果，對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下：在pcambia1300-flag載體的xbai和sali酶切位點(diǎn)之間插入了序列表的序列4自5’末端第1-831位核苷酸所示的dna分子，該dna分子與載體骨架上的部分核苷酸融合，表達(dá)c末端融合三個(gè)flag標(biāo)簽的at-psa3蛋白(簡(jiǎn)稱psa3-flag蛋白)。2、將步驟1得到的重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌gv3101，得到重組農(nóng)桿菌。3、采用蘸花法將步驟2得到的重組農(nóng)桿菌對(duì)at-psa3突變體進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，收集再生植株的種子(t0代種子)。4、t0代種子長(zhǎng)成的植株即為t1代植株，t1代植株自交獲得t1代種子，t1代種子長(zhǎng)成的植株即為t2代植株，t2代植株自交獲得t2代種子，t2代種子長(zhǎng)成的植株即為t3代植株。對(duì)t1代植株和隨機(jī)抽樣的t2代植株進(jìn)行pcr鑒定(提取基因組dna，采用f1和r1組成的引物對(duì)進(jìn)行pcr擴(kuò)增，如果得到800-900bp的擴(kuò)增產(chǎn)物，鑒定為陽性)，如果某一t1代植株及其抽樣檢測(cè)的t2代植株均鑒定為陽性，該t1代植株及其自交后代為一個(gè)回補(bǔ)株系。f1：atatctagaatggtggttgtcactcacatc；r1：atagtcgacaagactctatgttttgttgttgaagg。二、相關(guān)鑒定待測(cè)植株分別為：at-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體均發(fā)生了所述t-dna插入)、哥倫比亞生態(tài)型擬南芥、回補(bǔ)株系中背景植株為“兩條染色體均發(fā)生了所述t-dna插入”的純合突變體的t3代植株。用于鑒定背景植株為“兩條染色體均發(fā)生了所述t-dna插入”的純合突變體的方法：提取基因組dna，分別采用引物對(duì)甲(f2和r2組成)和引物對(duì)乙(f3和r2組成)進(jìn)行pcr擴(kuò)增，如果采用引物對(duì)甲不能實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增且采用引物對(duì)乙可以實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增，鑒定為陽性。f2：ttgaacattgatgcgccaac；r2：ccatacggcaaacaccatct；f3：tagcatctgaatttcataaccaatctcgatacac。萌發(fā)3周后的待測(cè)植株的表型見圖4a。采用mini-pamchlorophyllfluorometer(walz)觀察萌發(fā)3周后的待測(cè)植株的表型(參考文獻(xiàn)：meurerj,meierhoffk,westhoffp(1996)isolationofhigh-chlorophyll-fluorescencemutantsofarabidopsisthalianaandtheircharacterisationbyspectroscopy,immunoblottingandnorthernhybridisation.planta198:385-396)。照片見圖4b。與哥倫比亞生態(tài)型擬南芥相比，at-psa3突變體的純合后代生長(zhǎng)緩慢、具有高葉綠素?zé)晒狻；匮a(bǔ)株系的t3代植株回補(bǔ)了at-psa3突變體的純合后代的上述表型，與哥倫比亞生態(tài)型基本一致。提取萌發(fā)3周后的待測(cè)植株的葉片的總蛋白，進(jìn)行sds-page和westernblot，檢測(cè)psaa蛋白、d2蛋白、peta蛋白、atpa蛋白和psa3-flag蛋白的水平。結(jié)果見圖5。圖5中，1對(duì)應(yīng)哥倫比亞生態(tài)型擬南芥，2對(duì)應(yīng)at-psa3突變體的純合后代，3對(duì)應(yīng)回補(bǔ)株系的t3代植株。與哥倫比亞生態(tài)型擬南芥相比，at-psa3突變體的純合后代中psaa蛋白水平顯著降低，d2蛋白、peta蛋白和atpa蛋白的水平均無顯著差異?；匮a(bǔ)株系的t3代植株中psaa蛋白、d2蛋白、peta蛋白和atpa蛋白的水平均與哥倫比亞生態(tài)型擬南芥無顯著差異。實(shí)施例4、psa3蛋白負(fù)責(zé)psi的蛋白積聚和在psi組裝中間體中起作用試驗(yàn)材料分別為：玉米hiii、實(shí)施例2得到的zm-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體中的zm-psa3基因均喪失了編碼功能)、哥倫比亞生態(tài)型擬南芥、at-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體均發(fā)生了所述t-dna插入)。1、取處于三葉期的玉米試驗(yàn)材料的新鮮葉片，取萌發(fā)三周后的擬南芥試驗(yàn)材料的新鮮葉片，分別提取類囊體膜蛋白(參考文獻(xiàn)：彭連偉，lpa1調(diào)控?cái)M南芥psⅱ組裝的分子機(jī)理研究，2006，蘭州大學(xué))。2、將步驟1得到的類囊體膜蛋白溶解在ddm(n-dodecyl-d-maltoside)后進(jìn)行blue-nativepage(bn-page)。然后，將bn-page膠上的蛋白復(fù)合體轉(zhuǎn)移到纖維素膜上，進(jìn)行westernblot，采用psad蛋白的一抗檢測(cè)psi(psad蛋白的存在形式為組裝在psi中)。結(jié)果見圖6。圖6中，1對(duì)應(yīng)玉米hiii，2對(duì)應(yīng)zm-psa3突變體的純合后代，3對(duì)應(yīng)哥倫比亞生態(tài)型擬南芥，4對(duì)應(yīng)at-psa3突變體的純合后代。根據(jù)bn-page的結(jié)果，psi的染色條帶(參考文獻(xiàn)：pengl,fukaoy,fujiwaram,takamit,shikanait(2009)efficientoperationofnad(p)hdehydrogenaserequiressupercomplexformationwithphotosystemiviaminorlhci755inarabidopsis.plantcell21:3623-3640)在zm-psa3突變體的純合后代以及at-psa3突變體的純合后代中均減少：一條是相應(yīng)的ndh-psi超級(jí)復(fù)合體，另一條是psi和psii的二聚物(共遷移體)。根據(jù)westernblot的結(jié)果，在玉米hiii中存在一個(gè)明顯的具有psad蛋白的比較小的復(fù)合體(見圖中的“*”標(biāo)注)，但在zm-psa3突變體的純合后代中缺失了，該條帶應(yīng)為psi組裝中間體(參考文獻(xiàn)：wittenbergg,jarvis,hojkam,tothsz,meyereh,aroem,schottlerma,bockr802(2017)identificationandcharacterizationofastableintermediateinphotosystemi803assemblyintobacco.plantj)。4、完成步驟3后，進(jìn)行第二向電泳(sds-ureapage)。結(jié)果見圖7。圖7中，左上對(duì)應(yīng)哥倫比亞生態(tài)型擬南芥，右上對(duì)應(yīng)at-psa3突變體的純合后代，左下對(duì)應(yīng)玉米hiii，右下對(duì)應(yīng)zm-psa3突變體的純合后代。在zm-psa3突變體的純合后代以及at-psa3突變體的純合后代中psi的亞基均缺失了。實(shí)施例5、psa3蛋白不負(fù)責(zé)葉綠體編碼psi亞基和組裝因子的基因表達(dá)為了探索psa3如何參與psi的生物發(fā)生，分析葉綠體編碼的psi亞基和psi組裝因子的表達(dá)情況。試驗(yàn)材料分別為：玉米hiii、實(shí)施例2得到的zm-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體中的zm-psa3基因均喪失了編碼功能)、哥倫比亞生態(tài)型擬南芥、at-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體均發(fā)生了所述t-dna插入)。取萌發(fā)10天后的擬南芥試驗(yàn)材料的離體葉片，進(jìn)行脈沖標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。描述脈沖標(biāo)記實(shí)驗(yàn)的參考文獻(xiàn)：liuj,yangh,luq,wenx,chenf,pengl,zhangl,luc(2012)psbp-domainprotein1,anuclear-encodedthylakoidlumenalprotein,isessentialforphotosystemiassemblyinarabidopsis.plantcell24:4992-5006。結(jié)果見圖8。at-psa3突變體的純合后代中psaa蛋白和psab蛋白合成未受影響。1小時(shí)/2小時(shí)后，at-psa3突變體的純合后代中psaa蛋白和psab蛋白的降解速度比在哥倫比亞生態(tài)型擬南芥中快。取處于三葉期的玉米試驗(yàn)材料，進(jìn)行核糖體圖譜分析(ribosomeprofiling)。描述核糖體圖譜分析的參考文獻(xiàn)：zoschker,watkinsk,barkana(2013)arapidmicroarray-basedribosomeprofiling809methodelucidateschloroplastribosomebehaviorinvivoplantcell25:2265-2275。結(jié)果見表2。玉米hiii、zm-psa3突變體的純合后代，psaa/b，psac和ycf3的mrna均沒有差異。表2玉米hiiizm-psa3突變體的純合后代psaa2161824567psab2628527925psac2722120335psai1810816554psaj1952319541ycf351386670ycf434035624綜上所述，psa3蛋白是在psi亞基蛋白的翻譯后過程中起作用。實(shí)施例6、psa3蛋白結(jié)合在葉綠體類囊體膜蛋白的基質(zhì)側(cè)1、提取三葉期玉米hiii的葉片的總蛋白，分成類囊體和基質(zhì)兩部分(參考文獻(xiàn)：彭連偉，lpa1調(diào)控?cái)M南芥psⅱ組裝的分子機(jī)理研究，2006，蘭州大學(xué))。分別進(jìn)行sds-page和westernblot(檢測(cè)psa3蛋白)。發(fā)現(xiàn)psa3蛋白主要富集在類囊體部分，在基質(zhì)里也有少量分布。2、采用na2co3或者nabr處理完整的類囊體(如果可以將psa3蛋白洗掉，則說明psa3蛋白位于類囊體的基質(zhì)側(cè)；如果洗不掉，則位于類囊體的囊腔側(cè))。然后進(jìn)行sds-page和westernblot(檢測(cè)psa3蛋白)。結(jié)果表明，na2co3或者nabr可以將大部分psa3蛋白洗掉。psa3蛋白位于類囊體膜的囊腔側(cè)。3、用蛋白酶k(proteinasek)或者嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)處理完整類囊體。然后進(jìn)行sds-page和westernblot(檢測(cè)psa3蛋白)。結(jié)果表明，psa3蛋白被降解，而類囊體囊腔側(cè)的oe23蛋白仍舊完整。4、用tritonx-100將類囊體膜全部溶解，同時(shí)添加蛋白酶k(proteinasek)或者嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)。結(jié)果表明，psa3蛋白和oe23蛋白都會(huì)被降解。以上結(jié)果見圖9(p代表沉淀，s代表上清)。以上結(jié)果都表明psa3蛋白依附于葉綠體類囊體膜的基質(zhì)側(cè)。實(shí)施例7、psa3蛋白在psi組裝因子突變體中的積聚為了進(jìn)一步探索psa3蛋白與其他psi生物發(fā)生相關(guān)蛋白之間的關(guān)系，比較了psa3蛋白和光合相關(guān)蛋白在其他相關(guān)玉米psi突變體中的表達(dá)情況。zm-psa2是類囊體囊腔側(cè)組裝因子，zm-pyg7是類囊體內(nèi)膜上的組裝因子。突變體玉米zm-psa2、突變體玉米zm-pyg7記載于如下文獻(xiàn)：fristedtr,williams-carrierr,merchantss,barkana(2014)athylakoidmembraneproteinharboringadnaj-typezincfingerdomainisrequiredforphotosystemiaccumulationinplants.jbiolchem289:30657-30667。試驗(yàn)材料分別為：玉米hiii、實(shí)施例2得到的zm-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體中的zm-psa3基因均喪失了編碼功能)、突變體玉米zm-psa2的純合后代、突變體玉米zm-pyg7的純合后代。提取各個(gè)三葉期玉米實(shí)驗(yàn)材料的葉片的總蛋白，進(jìn)行sds-page和westernblot。結(jié)果見圖10。圖10中，1對(duì)應(yīng)zm-psa3突變體的純合后代，2對(duì)應(yīng)突變體玉米zm-psa2的純合后代，3對(duì)應(yīng)突變體玉米zm-pyg7的純合后代。各個(gè)突變體的純合后代均少了psi核心亞基的表達(dá)。突變體玉米zm-psa2的純合后代、突變體玉米zm-pyg7的純合后代中，psa3蛋白積聚是正常的，說明psa3蛋白的積聚不依賴psi。在突變體玉米zm-pyg7的純合后代中，psa3蛋白水平略微下降說明pyg7蛋白和psa3蛋白有可能在功能上和生理上是互作的。實(shí)施例8、psa3蛋白存在于類囊體膜蛋白復(fù)合體，位置略低于成熟的psi復(fù)合體試驗(yàn)材料分別為：玉米hiii、實(shí)施例2得到的zm-psa3突變體的純合后代(即兩條染色體中的zm-psa3基因均喪失了編碼功能)、突變體玉米zm-psa2的純合后代、突變體玉米zm-pyg7的純合后代。1、取處于三葉期的玉米試驗(yàn)材料的新鮮葉片，提取類囊體膜蛋白。2、將步驟1得到的類囊體膜蛋白溶解在ddm后進(jìn)行blue-nativepage(bn-page)。然后，將bn-page膠上的蛋白復(fù)合體轉(zhuǎn)移到纖維素膜上，進(jìn)行westernblot(檢測(cè)psa3蛋白和psaa蛋白)。結(jié)果見圖11。圖11中，1對(duì)應(yīng)玉米hiii，2對(duì)應(yīng)zm-psa3突變體的純合后代，4對(duì)應(yīng)突變體玉米zm-psa2的純合后代，3對(duì)應(yīng)突變體玉米zm-pyg7的純合后代。突變體玉米zm-psa2的純合后代、突變體玉米zm-pyg7的純合后代中，psa3蛋白的多聚狀態(tài)都有所變化。突變體玉米zm-psa2的純合后代中，psa3蛋白積聚正常水平甚至更高，這進(jìn)一步提供了psa3蛋白不存在于成熟psi的證據(jù)。突變體玉米zm-pyg7的純合后代中，psa3蛋白復(fù)合體的豐度減少，表明pyg7蛋白對(duì)psa3蛋白結(jié)合和復(fù)合體的形成時(shí)必須的。psa3蛋白所在復(fù)合體的位置略微低于psi復(fù)合體，其遷移在psi復(fù)合體的前端。這些結(jié)果表明pyg7蛋白和psa3蛋白可能是存在于同一個(gè)大的復(fù)合體內(nèi)。實(shí)施例9、psa3和pyg7在酵母和原生質(zhì)體中互作at-pyg7蛋白如序列表的序列5所示。at-pyg7蛋白中，第1至59位為信號(hào)肽，第60-301為成熟蛋白。編碼at-pyg7蛋白的基因命名為at-pyg7基因，開放閱讀框如序列表的序列6所示。一、酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)pccw-suc載體為誘餌表達(dá)載體。pdsl-nx載體(又稱“pdsl-nxvector”)和pdl2-xn載體(又稱“pdl2-xnpreyvector”)為獵物表達(dá)載體。將編碼at-pyg7成熟蛋白的dna分子(序列6第178-903位核苷酸)插入pccw-suc載體，得到表達(dá)融合蛋白atpyg7-cub(包括at-pyg7成熟蛋白和cub，cub位于c端)的重組質(zhì)粒a。將編碼at-psa3成熟蛋白的dna分子(序列4第136-834位核苷酸)插入pdsl-nx載體，得到表達(dá)融合蛋白nubg-atpsa3(包括nubg和at-psa3成熟蛋白，nubg位于n端)的重組質(zhì)粒b。將編碼at-psa3成熟蛋白的dna分子(序列4第136-831位核苷酸)插入pdl2-xn載體，得到表達(dá)融合蛋白atpsa3-nubg(包括at-psa3成熟蛋白和nubg，nubg位于c端)的重組質(zhì)粒c。將編碼at-psa3△c的dna分子(序列4第136-669位核苷酸+taa)插入pdsl-nx載體，得到表達(dá)融合蛋白nubg-atpsa3△c(包括nubg和atpsa3△c，nubg位于n端；at-psa3△c即at-psa3成熟蛋白的c末端缺失了54個(gè)氨基酸殘基)的重組質(zhì)粒d。將重組誘導(dǎo)載體(重組質(zhì)粒a)和重組獵物載體(重組質(zhì)粒b、重組質(zhì)粒c或重組質(zhì)粒d)共同導(dǎo)入nwy32酵母(dualsystemsbiotech公司)，分別在平板甲(-tlha)和平板乙(-tl)上進(jìn)行培養(yǎng)。平板甲為缺乏亮氨酸、色氨酸、組氨酸和腺嘌呤的sd培養(yǎng)基瓊脂平板。平板乙為缺乏亮氨酸、色氨酸的sd培養(yǎng)基瓊脂平板。結(jié)果見圖12a。atpyg7-cub和nubg-atpsa3之間可以檢測(cè)到互作，但是。atpyg7-cub和atpsa3-nubg之間檢測(cè)不到蛋白之間的互作，表明atpsa3蛋白的c末端對(duì)與atpyg7蛋白的互作非常重要。將atpsa3蛋白c末端54個(gè)氨基酸去掉后，則檢測(cè)不到atpsa3蛋白和atpyg7蛋白之間的互作，這也同樣印證了atpsa3蛋白c末端在介導(dǎo)atpsa3蛋白與atpyg7互作上的重要作用。二、熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)(bimolecularfluorescencecomplementationassay，bifc)puc-spyne中具有n-yfp蛋白的編碼序列，puc-spyce中具有c-yfp蛋白的編碼序列。n-yfp蛋白和c-yfp蛋白組成完成的yfp蛋白，產(chǎn)生yfp熒光。將編碼at-psa3成熟蛋白的dna分子(序列4第136-831位核苷酸)插入puc-spyne，得到重組質(zhì)粒e。重組質(zhì)粒e表達(dá)at-psa3成熟蛋白與n-yfp蛋白的融合蛋白(n-yfp蛋白位于c端)，用psa3-yfpn表示。將編碼at-psa3成熟蛋白的dna分子(序列4第136-831位核苷酸)插入puc-spyce，得到重組質(zhì)粒f。重組質(zhì)粒f表達(dá)at-psa3成熟蛋白與c-yfp蛋白的融合蛋白(c-yfp蛋白位于c端)，用psa3-yfpc表示。將編碼at-pyg7成熟蛋白的dna分子(序列6第178-903位核苷酸)插入puc-spyne，得到重組質(zhì)粒g。重組質(zhì)粒g表達(dá)at-pyg7成熟蛋白與n-yfp蛋白的融合蛋白(n-yfp蛋白位于c端)，用pyg7-yfpn表示。將編碼at-pyg7成熟蛋白的dna分子(序列6第178-903位核苷酸)插入puc-spyce，得到重組質(zhì)粒h。重組質(zhì)粒h表達(dá)at-pyg7成熟蛋白與c-yfp蛋白的融合蛋白(c-yfp蛋白位于c端)，用pyg7-yfpc表示。將重組質(zhì)粒e和重組質(zhì)粒h共同導(dǎo)入哥倫比亞生態(tài)型擬南芥原生質(zhì)體，16小時(shí)后采用激光共聚焦掃描顯微鏡(lsm510490meta；zeiss)捕獲yfp熒光。將重組質(zhì)粒f和重組質(zhì)粒g共同導(dǎo)入哥倫比亞生態(tài)型擬南芥原生質(zhì)體，16小時(shí)后采用激光共聚焦掃描顯微鏡(lsm510490meta；zeiss)捕獲yfp熒光。結(jié)果見圖12b。yfp熒光在pyg7-psa3中可以觀察到，說明pyg7蛋白與psa3蛋白互作。sequencelisting<110>中國(guó)科學(xué)院植物研究所<120>psa3蛋白在參與psi的組裝以及維持psi穩(wěn)定中的應(yīng)用<130>gncyx171023<160>6<170>patentinversion3.5<210>1<211>269<212>prt<213>玉米<400>1metglyalaleuprovalalahisserleualaleuthralaalaphe151015leuprocysargargproalaalahisglyargcysargargargarg202530tyrargalavalvalalatyrmetgluproasnproasnserproala354045alailealaglyargleuvalglyalaleuproilevalglyleuval505560alaargileleuasnaspgluglyglyvalglyglyaspileileasp65707580phealaglupheargargargvalserlyslyscysthrvalmetasp859095serlysalaphetyrasppheasnglnargargglylysproglyasp100105110prophetyrvalleuleucyscystrpleualaalaileglyalagly115120125leuleulysthrglugluileleugluglyvalalaargleuargile130135140serasnaspilegluphegluglugluthrpheileaspmetmetarg145150155160alaalalysglulysargalalysleulysalaproalaproglnile165170175prometgluthrargalaglulysalaleuglualailetyrvalcys180185190cyspheglyglnaspmetvalgluaspgluaspglulysleuleuarg195200205alaileleuasnalavalpheproservalglyargalaalavalglu210215220argmetvalalasermetalalysglnvalalaserglygluarglys225230235240argaspglyargthrvalserlysgluvalglnglnargglnleulys245250255aspleuglupheleulysglnasnlysleugluserser260265<210>2<211>810<212>dna<213>玉米<400>2atgggggcgctacccgtcgcccacagtctcgctctcaccgccgcgttcctcccgtgccgc60cgccccgcggcccacggccggtgccggcgccggcggtacagagcggtggtggcgtacatg120gagccgaaccccaactcgccggcggccatcgcggggcgcctcgtcggcgcccttcccatc180gtgggcctcgtggcgcgcatcctcaacgacgagggcggcgtcggcggcgacatcatcgac240ttcgccgagttccgccgccgcgtcagcaagaagtgcacggtcatggactccaaggccttc300tacgacttcaaccaacgacgcgggaagccaggcgatcccttctacgttctactgtgctgc360tggctggccgccatcggcgccgggctgctcaaaacggaggagatcttggaaggcgtggcg420cgcctccgcatctccaacgacatcgagttcgaggaggagacgttcatcgacatgatgagg480gcggcaaaggagaaaagggcgaagctgaaggctcctgctccgcagataccgatggagacg540cgggcggagaaggccctcgaagccatctacgtgtgctgcttcggtcaggacatggtggag600gacgaggacgagaagcttctccgggcgatactgaacgccgtgttcccctccgtcgggcgg660gccgcggtcgagaggatggtggcgtccatggccaagcaggtggcctccggcgagaggaag720cgggacgggaggaccgtgtccaaggaagtgcagcagcggcagctcaaggacctggagttt780ctgaagcagaacaagctggagtcgtcgtga810<210>3<211>277<212>prt<213>擬南芥<400>3metvalvalvalthrhisileserthrserphehisglnileserpro151015serphephehisleuargleuargasnproserthrthrserserser202530argprolysleuaspglyglyphealaleuserileargalatyrile354045glulysproasnserpheserthrphealaasnlysvalileglyser505560leuprovalileglyleuleualaargileileseraspgluglygly65707580valglyargaspleuvalaspphealagluphearglysargvalgly859095asnlyscysthrproaspaspserargalaphetyrglupheglngln100105110argargglylysalaglygluproleutyrvalleuleucyscystrp115120125valalaalavalglyalaglyleuleulysserglugluileleuglu130135140glyvalthrargvalserileserasnaspleugluphegluglugln145150155160asnpheilealaleumetthrglualaargglnargargalalysleu165170175asnileaspalaprothrileprometgluleuargvalglulysala180185190leugluglyiletyralacyscyspheargargglyleuilegluglu195200205gluaspglulysleuleulysvalmetleuilealavalpheproser210215220valglulyssergluilegluargileilelysglulysalathrarg225230235240valglugluglyglygluglugluasnvalmetalalysargleupro245250255lysglualaileglnmetglnmetlysaspleuglupheleuglngln260265270glnasnilegluser275<210>4<211>834<212>dna<213>擬南芥<400>4atggtggttgtcactcacatctccacttccttccaccaaatctctccttccttcttccat60ctccgtcttcgtaatccctccaccacttcttcgtctcgtcccaaactcgacggtggtttc120gctttgtcaattcgagcttacatagagaaaccaaactctttctccaccttcgctaacaaa180gtcatcggttctcttcccgttatcggactcctcgctcgaattatcagcgatgaaggcggc240gttggtagagatctcgtcgatttcgctgagtttaggaaacgagttgggaataaatgtact300cctgatgattctagggctttctatgagttccaacagcgacgaggcaaggcaggtgagcct360ttgtatgtgcttctgtgttgttgggttgctgcagtaggtgcaggtcttctcaaatctgaa420gagattcttgaaggtgttactagagttagcatttccaatgatctcgagtttgaagaacag480aacttcattgctttgatgactgaagctagacagagaagagcaaagttgaacattgatgcg540ccaacaataccgatggaactaagagttgaaaaggctcttgaaggtatttatgcttgttgc600tttcggagaggacttattgaagaggaggatgagaagcttcttaaagtgatgttaatagcg660gttttcccatcggttgagaagtctgagatagagagaatcatcaaagagaaggcgacaagg720gttgaggaaggaggagaggaagagaatgttatggcgaaacggttgcctaaagaagctatt780caaatgcagatgaaggatcttgaattccttcaacaacaaaacatagagtcttaa834<210>5<211>301<212>prt<213>擬南芥<400>5metphegluserasnmetvalleuglnthrleuserserserserpro151015proilehisargleutyrleuhishisserglnileleuproserser202530glyserproserlysileserleuglnilehisglyargthrleuala354045ileargserphehisasptyrvalphealagluileseralaarggly505560leuproalaleuasnlysalaserleulyslysleuproilelysgly65707580serthrpheleuleuglyglnserleuleumetvalseralahispro859095glnleualaalaalaalagluileilelysprogluproiletyrglu100105110valglygluleuphegluleuserileglnleusertyrleuleuleu115120125leuleuglyleuleuglyvalglythrphetyrvalileargglnval130135140leuvalargarggluleuaspleuseralalysgluleuglnglugln145150155160valargserglyaspalaseralathrgluleuphegluleuglyala165170175valmetleuargarglysphetyrproalaalaasnlyspheleugln180185190glnalaileglnlystrpaspglyaspaspglnaspleualaglnval195200205tyrasnalaleuglyvalsertyrvalarggluasplysleuasplys210215220glyilealaglnpheglumetalavallysleuglnproglytyrval225230235240thralatrpasnasnleuglyaspalatyrglulyslyslysgluleu245250255proleualaleuasnalapheglugluvalleuleupheaspproasn260265270asnlysvalalaargproargargaspalaleulysaspargvallys275280285leutyrlysglyvalvalalavallysserlyslysarg290295300<210>6<211>906<212>dna<213>擬南芥<400>6atgttcgaatcgaacatggttcttcaaacactatcttcttcttctcctccaattcaccgt60ctctatcttcaccattctcagattctcccttcttctgggtcacccagcaagatttctctt120cagatacatggaaggactttggccattcgatcttttcatgattatgtctttgcagaaatt180tctgctagaggtttaccggctttgaacaaagcttccttgaagaagctaccaatcaaagga240tctacctttctgctggggcagagcttgttgatggtttctgctcacccacagttggcagca300gcagcagaaatcataaagcctgaaccgatttacgaagttggagagttatttgaacttagt360attcagctttcttacttgctgttactactggggttgcttggagttggtactttctatgtg420atccgtcaagtacttgtacgcagagaactagacctctccgctaaagaattgcaggagcaa480gtaaggagcggagatgcaagtgcaacagagctctttgagcttggtgcagtgatgttgaga540aggaagttttatcctgcagccaacaagtttttgcaacaagctatccagaaatgggacggt600gatgatcaagatcttgctcaggtctataacgctcttggagtgagttatgtacgagaggat660aaacttgacaaaggaattgctcagtttgaaatggcggtgaagctgcaacccggttatgta720acagcttggaacaaccttggggatgcttatgagaagaagaaggagttgcctttggcattg780aatgcgtttgaagaagttttgttgtttgatccaaacaataaggtggctcggcctcggcga840gatgcgttgaaggatcgcgtgaagctttataaaggtgttgtggctgttaagtctaagaaa900cggtga906當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12