本發(fā)明屬于植物基因工程領域，涉及一種調控藍莓果實中花青素含量的蛋白及其編碼基因與應用。
背景技術：
：藍莓是杜鵑花科(ericaceae)越橘屬(vaccinium)植物，果實中含有豐富的花青素，具有防止腦神經老化、強心、抗癌軟化血管、增強人機體免疫等保健功能。藍莓可鮮食，也可加工成果汁飲料、果酒飲等，具有極高的經濟價值。隨著人類保健意識的提高，越來越表現(xiàn)出對富含花青素類食物的青睞，因此藍莓在世界范圍內，特別是在我國的需求量逐年上升，消費者對藍莓果實的品質要求也越來越高。因此尋找與花青素生物合成有關的基因并研究其具體功能，以及調控途徑具有重要的理論和實踐意義。早期研究植物花青素生物合成主要集中在花青素生物合成途徑中的相關基因上，通過異源轉化單個或多個功能基因來提高植物花青素的含量，雖然轉基因植株的花青素生物合成和積累量有所提高，但效果不太明顯。最近，許多調節(jié)花青素生物合成的轉錄因子從許多植物中分離出來。研究結果表明通過這些轉錄因子調節(jié)后期的許多功能基因的表達，可以大大提高轉基因植株的花青素產量，從而很大程度上促進了植物花青素調控方面的研究工作并取得突破性進展。myb是最大的植物轉錄因子家族成員之一，包括r2r3-myb、bhlh結構以及wdr蛋白,這些蛋白通過形成mbw復合體結構激活轉錄，mbw復合體通過一些特定的作用元件直接作用于dna的啟動子區(qū)，進而調控目的基因的表達。對myb的轉錄調控機制的研究主要集中在調控植物生長以及相應逆境脅迫上。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種調控藍莓果實中花青素含量的蛋白及其編碼基因與應用。本發(fā)明所提供的蛋白質，來源于藍莓，命名為vcmyb5，具體是如下(a)或(b)或(c)：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；(b)將序列1的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加，且來源于藍莓并與植物果實中花青素含量相關的由序列1衍生的蛋白質；(c)與(a)或(b)中任一所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性，且來源于藍莓并與植物果實中花青素含量相關的蛋白質。為了便于所述蛋白質的純化，可在所述蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如下表所示的標簽。表：標簽的序列標簽殘基序列poly-arg5-6(通常為5個)rrrrrpoly-his2-10(通常為6個)hhhhhhflag8dykddddkstrep-tagii8wshpqfekc-myc10eqkliseedl編碼所述蛋白質的核酸分子也屬于本發(fā)明的保護范圍。所述核酸分子可以是dna，如cdna、基因組dna或重組dna；所述核酸分子也可以是rna，如mrna、hnrna或trna等。在本發(fā)明的一個實施例中，所述核酸分子具體為編碼所述蛋白質的基因，所述基因具體可為如下1)或2)或3)的dna分子：1)序列表中序列2所示的dna分子；2)在嚴格條件下與1)限定的dna分子雜交且編碼所述蛋白質的dna分子；3)與1)或2)限定的dna序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性，且編碼所述蛋白質的dna分子。上述嚴格條件可為用6×ssc，0.5％sds的溶液，在65℃下雜交，然后用2×ssc，0.1％sds和1×ssc，0.1％sds各洗膜一次。含上述核酸分子的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌也屬于本發(fā)明的保護范圍。所述重組載體可為重組表達載體，也可為重組克隆載體。所述重組表達載體可用現(xiàn)有的植物表達載體構建。所述植物表達載體包括雙元農桿菌載體和可用于植物微彈轟擊的載體等，如pcambia1300、pcubi1390、pchf3、pgreen0029、pcambia3301、pbi121、pbin19、pcambia2301、pcambia1301-ubin或其它衍生植物表達載體。所述植物表達載體還可包含外源基因的3’端非翻譯區(qū)域，即包含聚腺苷酸信號和任何其它參與mrna加工或基因表達的dna片段。所述聚腺苷酸信號可引導聚腺苷酸加入到mrna前體的3’端。使用所述基因構建重組表達載體時，在其轉錄起始核苷酸前可加上任何一種增強型、組成型、組織特異型或誘導型啟動子，例如花椰菜花葉病毒(camv)35s啟動子、泛素基因ubiquitin啟動子(pubi)、脅迫誘導型啟動子rd29a等，它們可單獨使用或與其它的植物啟動子結合使用；此外，使用本發(fā)明的基因構建重組表達載體時，還可使用增強子，包括翻譯增強子或轉錄增強子，這些增強子區(qū)域可以是atg起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來自轉錄起始區(qū)域或結構基因。為了便于對轉基因植物細胞或植物進行鑒定及篩選，可對所用重組表達載體進行加工，如加入可在植物中表達的編碼可產生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因、具有抗性的抗生素標記物或是抗化學試劑標記基因等。也可不加任何選擇性標記基因，直接以逆境篩選轉化植株。所述表達盒由能夠啟動所述基因表達的啟動子，所述基因，以及轉錄終止序列組成。所述蛋白質或所述核酸分子或所述重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌在如下任一中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍：(a)調控植物果實中花青素含量；(b)調控植物果實成熟時間；(c)調控植物果皮著色時間；(d)調控植物果實中花青素合成途徑相關基因的表達；(e)選育果實中花青素含量提高或降低的植物品種；(f)選育果實成熟時間提前或延后的植物品種；(g)選育果皮著色時間提前或延后的植物品種。其中，所述調控植物果實中花青素含量、所述調控植物果實成熟時間、所述調控植物果皮著色時間具體體現(xiàn)為：在所述植物果實中所述蛋白質(或所述基因)vigs后，在所述植物果實(尤其是果肉)中，所述蛋白質(或所述基因)的表達量越低，所述植物果實中花青素含量越高，所述植物果實成熟時間越提前，所述植物果皮著色時間越提前。在所述植物果實(尤其是果肉)中，所述蛋白質(或所述基因)的表達量越高，所述植物果實中花青素含量越低。其中，所述選育果實中花青素含量提高/果實成熟時間提前/果皮著色時間提前的植物品種的方法，具體可包括將所述植物果實(尤其是果肉)中所述蛋白質(或所述基因)表達量較低的植株作為親本進行雜交的步驟。所述選育果實中花青素含量降低/果實成熟時間延后/果皮著色時間延后的植物品種的方法，具體可包括將所述植物果實(尤其是果肉)中所述蛋白質(或所述基因)表達量較高的植株作為親本進行雜交的步驟。本發(fā)明還提供了一種培育果實中花青素含量提高和/或果實成熟時間提前和/或果皮著色時間提前的植物的方法，以及一種培育果實中花青素含量降低和/或果實成熟時間延后和/或果皮著色時間延后的植物的方法。本發(fā)明所提供的培育果實中花青素含量提高和/或果實成熟時間提前和/或果皮著色時間提前的植物的方法，可包括如下步驟：降低受體植物中權利要求1所述蛋白質的表達量和/或活性，從而得到果實中花青素含量提高和/或果實成熟時間提前和/或果皮著色時間提前的植物。本發(fā)明所提供的培育果實中花青素含量降低和/或果實成熟時間延后和/或果皮著色時間延后的植物的方法，可包括如下步驟：提高受體植物中權利要求1所述蛋白質的表達量和/或活性，從而得到果實中花青素含量降低和/或果實成熟時間延后和/或果皮著色時間延后的植物。本發(fā)明還提供了一種培育轉基因植物的方法。本發(fā)明所提供的培育轉基因植物的方法，可為如下(a)或(b)：(a)培育具有如下(a1)-(a3)所示性狀中至少一種的轉基因植物的方法，具體可包括如下步驟：抑制受體植物中所述蛋白質的編碼基因的表達，得到轉基因植物；從所得轉基因植物中得到與所述受體植物相比，具有如下(a1)-(a3)所示性狀中至少一種的轉基因植物：(a1)果實中花青素含量提高；(a2)果實成熟時間提前；(a3)果皮著色時間提前。(b)培育具有如下(b1)-(b3)所示性狀中至少一種的轉基因植物的方法，包括如下步驟：向受體植物中轉入所述蛋白質的編碼基因，得到轉基因植物；從所得轉基因植物中得到與所述受體植物相比，具有如下(b1)-(b3)所示性狀中至少一種的轉基因植物：(b1)果實中花青素含量降低；(b2)果實成熟時間延后；(b3)果皮著色時間延后。在方法(a)中，所述蛋白質在所述轉基因植物果實(尤其是果肉)中的表達量低于所述受體植物。在方法(b)中，所述蛋白質在所述轉基因植物果實(尤其是果肉)中的表達量高于所述受體植物。所述基因具體可為如下1)或2)或3)的dna分子：1)序列表中序列2所示的dna分子；2)在嚴格條件下與1)限定的dna分子雜交且編碼所述蛋白質的dna分子；3)與1)或2)限定的dna序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性，且編碼所述蛋白質的dna分子。上述嚴格條件可為用6×ssc，0.5％sds的溶液，在65℃下雜交，然后用2×ssc，0.1％sds和1×ssc，0.1％sds各洗膜一次。在方法(a)中，抑制所述受體植物中所述蛋白質的編碼基因的表達具體可通過如下實現(xiàn)：向所述受體植物中導入ptrv2-vcmyb5載體和ptrv1載體；所述ptrv2-vcmyb5載體為將所述基因插入到ptrv2載體的酶切位點ecori和bamhi之間后得到的重組載體。在方法(b)中，所述基因具體可通過所述重組表達載體導入所述受體植物中，得到所述轉基因植物。所述重組表達載體為將所述基因插入到植物表達載體的多克隆位點后得到的能夠表達所述基因的重組載體。在上述兩種方法中，均可通過使用ti質粒、ri質粒、植物病毒載體、直接dna轉化、顯微注射、電導、農桿菌介導、基因槍等常規(guī)生物學方法將相應載體轉化植物細胞或組織，并將轉化的植物組織培育成植株。在本發(fā)明中，所述果實中花青素含量具體為果肉中花青素含量。在本發(fā)明中，所述調控植物果實中花青素合成途徑相關基因的表達具體為調控植物果肉中花青素合成途徑相關基因的表達。其中，所述花青素合成途徑相關基因為如下中任一種或任幾種：vcpal基因、vcc4h基因、vc4cl基因、vcchs基因。相應的，在本發(fā)明中，所述調控植物果實中花青素合成途徑相關基因的表達具體體現(xiàn)為：在所述植物果實中，所述蛋白質(或所述基因)的表達量越高，所述pal基因、所述vcc4h基因、所述vc4cl基因、和/或所述vcchs基因的表達量越低；在所述植物果實中，所述蛋白質(或所述基因)的表達量越低，所述vcpal基因、所述vcc4h基因、所述vc4cl基因、和/或所述vcchs基因的表達量越高。在本發(fā)明中，所述植物可為越橘屬植物，如藍莓。在本發(fā)明的一個實施例中，所述藍莓具體為藍莓品種‘喜來(sierra)’。本發(fā)明的實驗證明，將本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的新基因vcmyb5構建到ptrv2載體中，通過所述vigs沉默體系的方法注入藍莓果實中，得到vcmyb5基因沉默的藍莓果實，轉基因的藍莓果實成熟期提前，果皮表現(xiàn)為提前著色，所述轉基因藍莓果實花青素含量顯著高于對照組藍莓果實的花青素含量。上述結果表明vcmyb5基因及其編碼的蛋白負調控藍莓果實中花青素的生物合成。本發(fā)明對于培育花青素含量更高的藍莓新品種具有重要意義。附圖說明圖1為正常生長與vcmyb5基因vigs后藍莓果實生長發(fā)育曲線。圖2為vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后的果實表型。其中“水、侵染液、空載體、vcmyb5”分別表示利用所述vigs體系在所述植物果實中注入“無菌水、侵染液、空ptrv1+空ptrv2、空ptrv1+ptrv1-vcmyb5”的所述植物果實表型變化圖。圖3為vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默的載體檢測。其中，a為ptrv1載體檢測；b為ptrv2載體檢測。m：dna分子量標準；“1、2、3、5”分別表示利用所述vigs體系在所述植物果實中注入“無菌水、侵染液、攜帶空ptrv1+空ptrv2的農桿菌侵染液、攜帶空ptrv1+ptrv1-vcmyb5的農桿菌侵染”的所述植物果實中所述載體的檢測情況。圖4為vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后vcmyb5基因在藍莓果皮和果肉中的表達量變化。其中“ck-水、ck-侵染液、ck-空載體、vcmyb5”分別表示利用所述vigs體系在所述植物果實中注入“無菌水、侵染液、攜帶空ptrv1+空ptrv2的農桿菌侵染液、攜帶空ptrv1+ptrv1-vcmyb5的農桿菌侵染”的所述植物果皮和果肉中所述vcmyb5基因的表達量變化，所述“ck”表示對照組。圖中，不同小寫字母之間表示差異顯著(p<0.05)。圖5為vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后花青素合成途徑中的相關基因在藍莓果皮和果肉中的表達量變化。圖中，“ck”表示的是注射“攜帶空ptrv1+空ptrv2的農桿菌侵染液”的所述植物的果皮和果肉；不同小寫字母之間表示差異顯著(p<0.05)。圖6為vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后，藍莓果皮和果肉中的花青素含量變化。其中“ck-水、ck-侵染液、ck-空載體、vcmyb5”分別表示利用所述vigs體系在所述植物果實中注入“無菌水、侵染液、攜帶空ptrv1+空ptrv2的農桿菌侵染液、攜帶空ptrv1+ptrv1-vcmyb5的農桿菌侵染”的所述植物果皮和果肉中的花青素含量變化，所述“ck”表示對照組。圖中，不同小寫字母之間表示差異顯著(p<0.05)。具體實施方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。ptrv2載體和ptrv1載體：由北京農學院沈元月教授饋贈。均記載于“jiahf,shenyy,(2013)virus-inducedgenesilencinginstrawberryfruit.methodsinmolecularbiology.975:211-218.”一文，公眾可從申請人處獲得，僅可用于重復本發(fā)明實驗使用。藍莓品種‘喜來(sierra)’：取材于秦皇島天碩農業(yè)科技開發(fā)有限公司。實施例1、轉錄因子vcmyb5及其編碼基的獲得提取藍莓品種‘喜來(sierra)’的總rna，并反轉錄得到cdna，然后以所得cdna為模板，采用引物f和引物r進行pcr擴增，。引物f：5’-atgaattatctgagaccag-3’；引物r：5’-tcaaatcaacaatgattcgg-3’。對擴增產物進行測序，可知所得cdna核苷酸序列為序列表中序列2，與genbank中的序列進行比較，確定它屬于藍莓r2r3-myb類轉錄因子，將其所示的基因命名為vcmyb5，編碼的蛋白命名為vcmyb5，其氨基酸序列為序列表中序列1。上述cdna(序列1)也可以通過人工合成獲得。實施例2、基因瞬時vigs沉默體系在藍莓果實中的建立以及vcmyb5基因的功能研究一、重組表達載體的獲得將實施例1所得的pcr產物與peasy-t載體(全式金公司產品)相連接，得到的連接產物用限制性內切酶ecori和bamhi(賽默飛世爾科技公司產品)進行雙酶切，得到酶切產物(含有上述vcmyb5基因的dna片段，核苷酸序列為序列表中序列3(序列3僅是在序列2兩端添加酶切位點)，酶切產物與經相同酶切的ptrv2載體相連接，連接產物轉化大腸桿菌dh5a感受態(tài)細胞(天根公司產品)，并涂布在含有100μg/ml氨芐青霉素的lb平板上培養(yǎng)過夜。挑取白色單菌落，在lb液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜并進行菌落pcr鑒定；同時堿法提取質粒dna進行序列測定。測序結果表明，所得重組載體為將序列表中序列2所示的vcmyb5基因的dna片段插入ptrv2載體的酶切位點ecori和bamhi間后得到的重組載體，命名為ptrv2-vcmyb5。二、以vcmyb5為對象在藍莓果實中建立vigs基因沉默體系將ptrv1載體、ptrv2載體以及上述步驟一制備的重組載體ptrv2-vcmyb5轉化農桿菌gv3101的感受態(tài)細胞，得到重組菌gv3101/ptrv1、gv3101/ptrv2和gv3101/ptrv2-vcmyb5。對于gv3101/ptrv2-vcmyb5，提取質粒送去測序，證實其中含有重組載體ptrv2-vcmyb5。具體vigs步驟如下：1.活化：將上述重組菌gv3101/ptrv1、gv3101/ptrv2以及gv3101/ptrv2-vcmyb5單克隆接種于含有100μg/ml卡那霉素、50μg/ml利福平和50μg/ml慶大霉素的lb液體培養(yǎng)基中，28℃振蕩培養(yǎng)兩天。2.搖菌：將步驟1所述活化的gv3101/ptrv1、gv3101/ptrv2以及gv3101/ptrv2-vcmyb5農桿菌轉接到含有100μg/ml卡那霉素、50μg/ml利福平、50μg/ml慶大霉素、20mm/l2-嗎啉乙醋酸(mes)和10mm/l乙酰丁香酮(as)的lb液體培養(yǎng)基中，28℃振蕩培養(yǎng)4-6h使菌液濃度od600≈0.6。3.侵染液培養(yǎng)：將步驟2所述的菌液在20℃條件下，5000rpm/min離心5min。將上述所得農桿菌沉淀用含有20mm/l2-嗎啉乙醋酸(mes)和10mm/l乙酰丁香酮(as)的10mm/lmgcl2侵染液重懸并用所述侵染液調節(jié)菌液濃度至od600≈1.0。將gv3101/ptrv1與gv3101/ptrv2(或gv3101/ptrv2-vcmyb5)按照1:1的比例混勻后靜置2-4h。4.注射：用0.45mm的1ml注射器將重組菌gv3101/ptrv2(或gv3101/ptrv2-vcmyb5)與gv3101/ptrv1的混合液小心地注入白果期‘喜來(sierra)’藍莓的果實。待果實成熟(20天左右)后采樣，觀察表形，并進行相關的分子和生理檢測。(1)轉vcmyb5藍莓果實的發(fā)育曲線統(tǒng)計自注射后藍莓果實的生長發(fā)育時間曲線，繪制生長發(fā)育曲線圖。每個發(fā)育時期隨機取10個藍莓果實，稱重后取平均值。每個處理組的藍莓取樣按上述稱重方法重復3次，最后取上述3次取樣后果實重量均值的平均數(shù)繪制生長發(fā)育曲線。結果如圖1所示，vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后，藍莓果實注射部分果皮提前著色，成熟期提前14天左右，果實重量與對照組無顯著差異。(2)將vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后的果實橫向切開。結果如圖2所示發(fā)現(xiàn)基因vigs沉默部分在藍莓完全成熟后(對應圖1所述實驗組花后59天果實)果肉著色，由原來的綠色變?yōu)榧t色表現(xiàn)為花青素積累量的上升。(2)對vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后的病毒載體進行檢測。具體操作如下：用ctab法提取上述整個藍莓果實中的dna，用于病毒載體檢測：病毒載體pcr檢測引物：rnai引物(擴增產物560bp)正義引物：5’-ttacaggttatttgggctag-3’；反義引物：5’-ccgggttcaattccttatc-3’。rna2引物(擴增產物300bp)正義引物：5’-ttacgacgaaccaagggagtactac-3’；反義引物：5’-agtcacaattagccctatttagatgt-3’。病毒檢測進行35個循環(huán)。結果如圖3所示，結合圖2表明攜帶基因的載體成功轉入藍莓果實并隨果實發(fā)育表達并轉移。4、通過熒光定量pcr實驗監(jiān)測vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后其在藍莓果皮和果肉中的表達量變化。具體操作如下：通過plantrnakit試劑盒(omega，北京)提取各樣品的總rna，并利用primescripttmrtreagentkit反轉錄試劑盒(tiangen，北京)合成第1鏈cdna作為模板，用于熒光定量檢測。以藍莓ubc28基因為內參基因，通過abisteponeplus熒光實時定量pcr儀檢測vcmyb5基因在上述藍莓果實和果皮的表達量。每個處理的樣品設3個生物學重復。熒光染料使用sybrgreen(tiangen，北京)。反應程序為：95℃預變性15min；95℃變性30s，60℃退火30s，40個循環(huán)。具體引物序列如表1所示：表1用于檢測vcmyb5基因以及內參基因ubc28的引物序列結果如圖4所示，表明vcmyb5基因在藍莓果皮和果肉中的表達量均顯著下降但在藍莓果肉中的表達量下降更顯著。5、通過熒光定量pcr實驗監(jiān)測vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后花青素合成途徑中相關基因(vcpal、vcc4h、vc4cl、vcchs、vcchi、vcdfr、vcf3h、vcrh8、vcans、vcufgt基因)在藍莓果皮和果肉中的表達量變化。以藍莓ubc28基因為內參基因，具體操作如步驟4所述，所用引物如表2所示：表2用于檢測花青素合成途徑中相關基因以及內參基因ubc28的引物序列結果如圖5所示，表明vcmyb5基因vigs沉默后果肉中vcpal、vcc4h、vc4cl、vcchs基因的表達量顯著上升。6、利用液相色譜法檢測vcmyb5基因在藍莓果實中vigs沉默后，藍莓果皮和果肉中的花青素含量變化。具體操作如下：樣品處理：選取10個完全成熟且成熟度一致的藍莓果實，切片后放于液氮中，然后于磨樣儀進行粉碎。稱取1g左右的粉末，加入5ml1％的hcl-甲醇，于4℃黑暗條件下浸提過夜，離心，殘渣再用5ml1％的hcl-甲醇浸提2次，合并上清液，定容至20ml，經微孔濾膜(0.22μm有機濾膜)過濾后，進行液相檢測。液相檢測：所用儀器為agilent產品1200系列液相色譜儀，采用waterssymmetryc18色譜柱(5μm，4.6mm×150mm)，流動相a為10％甲酸，流動相b為乙腈。線性梯度洗脫設計為:0～13min，乙腈為0～20％；20min，乙腈為40％；25min，乙腈為0。檢測波長為520nm，進樣量為每針20μl，柱溫25℃，流速為1ml·min-1?；ㄇ嗨乜偭恳詷藰犹祗每?3-葡萄糖苷的相應面積計算濃度，所述藍莓花青素總量以矢車菊定-3-葡萄糖苷的相應面積計算濃度，其中標樣購買于上海安譜實驗科技股份有限公司。結果如圖6所示，藍莓基因vcmyb5vigs沉默后，藍莓果皮中的花青素含量有上升的趨勢但不顯著，而藍莓果肉中的花青素含量顯著增加。上述結果表明，vcmyb5基因或其編碼的蛋白具備負調控藍莓果實中花青素生物合成的功能。<110>北京林業(yè)大學<120>調控藍莓果實中花青素含量的蛋白及其編碼基因與應用<130>gncln170824<160>3<170>patentinversion3.5<210>1<211>213<212>prt<213>藍莓<400>1metasntyrleuargproaspilelysargglyasnilethrproasp151015gluaspaspleuileileargmethisalaleuleuglyasnargtrp202530serleuilealaglyargleuproglyargthraspasngluilelys354045asntyrtrpasnthrhisleuserlysargleuargaspglnglythr505560aspproserthrhislyslysleuserglutyrproasnaspglnpro65707580prolyslysargargasnasnasnarglyslysasnlysserasnleu859095glualaarglysglnlysvalhisasnprolysprolysargilethr100105110serleuserserleusermetserargasnserserpheaspcyspro115120125prolysgluglyleuaspvalglnleuserlyspheaspglyasngly130135140aspglyaspglyvalglypheleuvalglyasnaspglnaspproasp145150155160metvalasnglyseraspileglnargglnserglyleuprovalval165170175serasphisasnasnthrglulysleutyrgluglutyrleuglnleu180185190leuileargthrgluaspleuaspleuleuglnleuaspserpheala195200205gluserleuleuile210<210>2<211>642<212>dna<213>藍莓<400>2atgaattatctgagaccagatattaagaggggaaacatcacccctgacgaggatgacctc60attataagaatgcatgcccttctaggcaatcgatggtctctaattgcgggaagattacca120ggtcgaaccgataacgagataaagaactactggaacactcatcttagcaaaagactccga180gaccaaggaaccgacccgagtacccacaaaaaattatcggaatatcctaacgaccaacca240ccaaagaagaggaggaacaacaatagaaagaagaacaagtcaaatttggaggcccgaaag300cagaaagtccataacccaaagcccaaaaggatcacttctttgagttctttgtcaatgtca360aggaatagtagctttgattgccctcctaaagaaggtttagatgttcaattgtctaaattc420gatggcaatggcgatggcgatggcgttgggtttcttgttggtaatgatcaagatccggat480atggttaatgggtcggacattcaacgccaatctggtttaccagtagtgtctgatcacaac540aatacagagaagctatatgaagagtatcttcaacttctaatcagaacggaagatcttgac600ctacttcagttggattcctttgccgaatcattgttgatttga642<210>3<211>654<212>dna<213>人工序列<220><223><400>3gaattcatgaattatctgagaccagatattaagaggggaaacatcacccctgacgaggat60gacctcattataagaatgcatgcccttctaggcaatcgatggtctctaattgcgggaaga120ttaccaggtcgaaccgataacgagataaagaactactggaacactcatcttagcaaaaga180ctccgagaccaaggaaccgacccgagtacccacaaaaaattatcggaatatcctaacgac240caaccaccaaagaagaggaggaacaacaatagaaagaagaacaagtcaaatttggaggcc300cgaaagcagaaagtccataacccaaagcccaaaaggatcacttctttgagttctttgtca360atgtcaaggaatagtagctttgattgccctcctaaagaaggtttagatgttcaattgtct420aaattcgatggcaatggcgatggcgatggcgttgggtttcttgttggtaatgatcaagat480ccggatatggttaatgggtcggacattcaacgccaatctggtttaccagtagtgtctgat540cacaacaatacagagaagctatatgaagagtatcttcaacttctaatcagaacggaagat600cttgacctacttcagttggattcctttgccgaatcattgttgatttgaggatcc654當前第1頁12