本發(fā)明涉及到解一株淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)H47和短小芽孢桿菌及蘇云金桿菌微生物發(fā)酵苦楝制備植物源殺蟲(chóng)劑的生產(chǎn)方法，屬于微生物和發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

苦楝(Melia azedarach)為楝科落葉喬木植物，高10-20m；樹(shù)皮灰褐色，縱裂。分枝廣展，小枝有葉痕。葉為2-3回奇數(shù)羽狀復(fù)葉，長(zhǎng)20-40cm；小葉對(duì)生，卵形、橢圓形至披針形，頂生一片通常略大，長(zhǎng)3-7cm，寬2-3cm，先端短漸尖，基部楔形或?qū)捫ㄐ?，多少偏斜，邊緣有鈍鋸齒，幼時(shí)被星狀毛，后兩面均無(wú)毛，側(cè)脈每邊12-16條，廣展，向上斜舉。圓錐花序約與葉等長(zhǎng)，無(wú)毛或幼時(shí)被鱗片狀短柔毛；花芳香；花萼5深裂，裂片卵形或長(zhǎng)圓狀卵形，先端急尖，外面被微柔毛；花瓣淡紫色，倒卵狀匙形，長(zhǎng)約1cm，兩面均被微柔毛，通常外面較密；雄蕊管紫色，無(wú)毛或近無(wú)毛，長(zhǎng)7-8mm，有縱細(xì)脈，管口有鉆形、2-3齒裂的狹裂片10枚，花藥10枚，著生于裂片內(nèi)側(cè)，且與裂片互生，長(zhǎng)橢圓形，頂端微凸尖；子房近球形，5-6室，無(wú)毛，每室有胚珠2顆，花柱細(xì)長(zhǎng)，柱頭頭狀，頂端具5齒，不伸出雄蕊管。核果球形至橢圓形，長(zhǎng)1-2cm，寬8-15mm，內(nèi)果皮木質(zhì)，4-5室，每室有種子1顆；種子橢圓形?；ㄆ?-5月，果期10-12月。生于曠野或路旁，常栽培于屋前房后。該植物在濕潤(rùn)的沃土上生長(zhǎng)迅速，對(duì)土壤要求不嚴(yán)，在酸性土、中性土與石灰?guī)r地區(qū)均能生長(zhǎng)，是平原及低海拔丘陵區(qū)的良好造林樹(shù)種，在村邊路旁種植更為適宜。

該種是材用植物，亦是藥用植物，其花、葉、果實(shí)、根皮均可入藥，用根皮可驅(qū)蛔蟲(chóng)和鉤蟲(chóng)，但有毒，用時(shí)要嚴(yán)遵醫(yī)囑，根皮粉調(diào)醋可治疥癬，用苦楝子做成油膏可治頭癬。此外，果核仁油可供制潤(rùn)滑油和肥皂等。根據(jù)各家對(duì)苦楝的研究，發(fā)現(xiàn)苦楝也有殺蟲(chóng)的效果，其中的的川楝素對(duì)菜青蟲(chóng)等具有很強(qiáng)的胃毒作用，可以破壞中腸組織，阻斷神經(jīng)傳導(dǎo)而導(dǎo)致害蟲(chóng)麻痹、昏迷、死亡，因而可用于制備植物源殺蟲(chóng)劑。

植物源殺蟲(chóng)劑是直接利用或提取植物的根、莖、葉、花、果、種子等或利用其次生代謝物質(zhì)制成具有殺蟲(chóng)作用的活性物質(zhì)。與生物農(nóng)藥一樣，植物源殺蟲(chóng)劑源于天然，與環(huán)境相容，可在環(huán)境中降解或代謝為簡(jiǎn)單的天然化合物。利用合適的植物促生菌發(fā)酵苦楝，不僅有利于生理活性物質(zhì)的提取，還不易造成活性物質(zhì)的失活，促生菌本身還有較好的殺蟲(chóng)防病和促生作用。有利于改善植物生長(zhǎng)和增強(qiáng)殺蟲(chóng)效果，有利于環(huán)境保護(hù)和苦楝植物本身的有效利用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，本發(fā)明利用苦楝植物為原料，用2013年6月24日保存于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的，保藏編號(hào)為：CCTCCNO：M2013283的解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47(該菌株以下簡(jiǎn)稱(chēng)：解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283)和市售短小芽孢桿菌及市售蘇云金桿菌發(fā)酵制備植物源殺蟲(chóng)劑，有利于改善植物生長(zhǎng)和增強(qiáng)殺蟲(chóng)效果，有利于環(huán)境保護(hù)。

本發(fā)明的發(fā)酵技術(shù)方案：

1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/L計(jì)為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整pH至7.0。按一定比例混合做種子。

2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量?jī)?yōu)良的苦楝，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機(jī)攪碎后待用。

3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行發(fā)酵罐空消。

4)發(fā)酵液實(shí)消：將步驟2所得苦楝放入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來(lái)水至終體積為10L，按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)消滅菌。

5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時(shí)，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有苦楝的發(fā)酵罐中，25—30℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。

6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過(guò)濾，過(guò)濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲(chóng)劑成品。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明提供了發(fā)酵苦楝制得一種生物源殺蟲(chóng)劑的方法。本發(fā)明制備方法及過(guò)程中無(wú)污染安全可靠，發(fā)酵時(shí)間周期短，工藝環(huán)節(jié)少，簡(jiǎn)單易操作，可節(jié)省投資和運(yùn)行費(fèi)用。與傳統(tǒng)化學(xué)藥劑相比，其具綠色安全，環(huán)境友好等優(yōu)勢(shì)，且促生菌本身還有較好的殺蟲(chóng)防病和促生作用，擁有廣闊的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方法：

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅為本發(fā)明的幾個(gè)具體實(shí)施例，但本發(fā)明的設(shè)計(jì)構(gòu)思并不局限于此，凡利用此構(gòu)思對(duì)本發(fā)明進(jìn)行非實(shí)質(zhì)性的改動(dòng)，均應(yīng)屬于侵犯本發(fā)明保護(hù)范圍的行為。

實(shí)施例1

1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/L計(jì)為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整pH至7.0。按1:1:2混合做種子。

2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量?jī)?yōu)良的苦楝，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機(jī)攪碎后待用。

3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行發(fā)酵罐空消。

4)發(fā)酵液實(shí)消：將步驟2所得苦楝放入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來(lái)水至終體積為10L，按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)消滅菌。

5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時(shí)，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有苦楝的發(fā)酵罐中，25℃條件下培養(yǎng)6天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。

6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過(guò)濾，過(guò)濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲(chóng)劑成品。

實(shí)施例2

1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/L計(jì)為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整pH至7.0。按1:1:2混合做種子。

2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量?jī)?yōu)良的苦楝，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機(jī)攪碎后待用。

3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行發(fā)酵罐空消。

4)發(fā)酵液實(shí)消：將步驟2所得苦楝放入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來(lái)水至終體積為10L，按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)消滅菌。

5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時(shí)，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有苦楝的發(fā)酵罐中，25℃條件下培養(yǎng)9天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。

6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過(guò)濾，過(guò)濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲(chóng)劑成品。

實(shí)施例3

1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/L計(jì)為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整pH至7.0。按1:1:2混合做種子。

2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量?jī)?yōu)良的苦楝，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機(jī)攪碎后待用。

3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行發(fā)酵罐空消。

4)發(fā)酵液實(shí)消：將步驟2所得苦楝放入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來(lái)水至終體積為10L，按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)消滅菌。

5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時(shí)，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有苦楝的發(fā)酵罐中，25℃條件下培養(yǎng)12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。

6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過(guò)濾，過(guò)濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲(chóng)劑成品。