1.一種提高異養(yǎng)小球藻蛋白質(zhì)含量的過補償培養(yǎng)方法,其特征在于,采用過補償吸收效應(yīng),在小球藻培養(yǎng)過程中先采用氮缺乏培養(yǎng)基造成氮饑餓,然后快速切換氮充足培養(yǎng)基,高氮源濃度刺激細(xì)胞氮代謝,激發(fā)蛋白質(zhì)合成,以得到高蛋白質(zhì)含量的異養(yǎng)小球藻,其具體培養(yǎng)步驟為:A、培養(yǎng)基的配制:第一階段采用氮缺乏修改BG11+培養(yǎng)基,為低氮濃度培養(yǎng)基,其氮元素濃度為2-6 mmol L-1,第二階段采用氮充足修改BG11+培養(yǎng)基,其氮元素濃度為10-30 mmol L-1;B、接種:二級種子液培養(yǎng)2-6天后,在無菌條件下接種至氮缺乏的修改BG11+發(fā)酵培養(yǎng)基中;C、改變氮濃度:培養(yǎng)到對數(shù)生長初期,第2-4天,采用“無菌離心”手段,將藻體轉(zhuǎn)移至新鮮氮充足修改BG11+培養(yǎng)基中;D、繼續(xù)培養(yǎng):在氮充足培養(yǎng)基中繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)至對數(shù)期末期,第4-8天。
2.根據(jù)權(quán)利1所述,所用小球藻為普通小球藻,但是不僅限于該一種小球藻,所有能利用此方法增加蛋白質(zhì)含量的微藻都應(yīng)該包含在內(nèi)。
3.所用培養(yǎng)基為小球藻通用培養(yǎng)基及其改進(jìn)培養(yǎng)基,包括但不僅限于BG11養(yǎng)基和SE培養(yǎng)基等。
4.權(quán)利1所述,C步驟中,“無菌離心分階段培養(yǎng)法”具體步驟:將發(fā)酵液轉(zhuǎn)移至已滅菌的離心管中,離心,棄去上清液,向離心管中加入氮充足修改BG11+培養(yǎng)基,混勻后傾倒至生物反應(yīng)器中繼續(xù)培養(yǎng),以上整個過程均在無菌條件下操作。
5.權(quán)利1和權(quán)利4所述,氮元素包括有機氮源和無機氮源。
6.權(quán)利1所述,氮缺乏修改BG11+培養(yǎng)基配方為:
(1)氮源,2-6 mmol L-1
(2)有機碳源,5-30 g L-1
(3)K2HPO4, 3.0-5.0 g溶于100 mL dH2O
(4)MgSO4·7H2O, 6.5-8.5 g溶于100 mL dH2O
(5)CaCl2·2H2O, 2.6-4.6 g溶于100 mL dH2O
(6)檸檬酸, 0.4-0.8 g溶于100 mL dH2O
(7)檸檬酸鐵銨, 0.4-0.8 g溶于100 mL dH2O
(8)EDTA-Na2, 0.05-0.15 g溶于100 mL dH2O
(9)Na2CO3, 1.0-3.0 g溶于100 mL dH2O
(10)A5溶液:H3BO3, 2.86 g L-1; MnCl2·4H2O, 1.86 g L-1; ZnSO4·7H2O, 0.22 g L-1; Na2MoO4·2H2O, 0.021 g L-1; CuSO4·5H2O, 0.08 g L-1; Co(NO3)2·6H2O, 0.0 5 g L-1溶于水中,
用1 M NaOH或HCl調(diào)pH至7.1;
說明:配制母液(3)-(10)號時,藥品分別配制,分別存放,(10)號中的藥品按量配制后混合存放;配制工作液時,?。?)-(10)號母液各1 mL,另?。?)氮源2-6 mmol L-1及(2)有機碳源5-30 g L-1,加入蒸餾水中并定容至1000 mL,然后用1 M NaOH或HCl調(diào)節(jié)pH至7.1,并115℃濕熱滅菌20 分鐘。
7.權(quán)利1所述,C步驟中,氮充足修改BG11+培養(yǎng)基配方除氮濃度外,其余成分組成及配制方法與氮缺乏修改BG11+培養(yǎng)基相同。
8.權(quán)利6所述,BG11培養(yǎng)基中加入的為有機碳源,包括但不僅限于葡萄糖和各種多糖物質(zhì)的水解液。
9.根據(jù)上述權(quán)利所述,本發(fā)明適用于小批量培養(yǎng)(搖瓶)和大批量培養(yǎng)(發(fā)酵罐等)。