1.一種快速鑒定分枝桿菌的引物,其特征在于,所述引物為以分枝桿菌Hsp65基因為靶向基因、基于PCR擴增技術(shù)設(shè)計的引物,包括上游引物和下游引物,所述上游引物為:5’-ACCAACGATGGTGTGTCCAT-3’,下游引物為:5’-CTTGTCGAACCGCATACCCT-3’。
2.一種快速鑒定分枝桿菌的方法,其特征在于,包括如下步驟:
S1、從標本中提取總的細菌DNA;
S2、以步驟S1所述的總的細菌DNA為模板DNA,利用權(quán)利要求1中所述的引物進行PCR擴增,PCR擴增反應(yīng)條件包括:94℃預(yù)變性5min,94℃變性1min,60℃退火1min,72℃延伸1min,進行35個循環(huán),最后72℃延伸10min,結(jié)束后4℃保存;
S3、通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增效果,并對擴增產(chǎn)物進行純化;將純化后的PCR擴增產(chǎn)物進行常規(guī)Sanger測序;
S4、對Sanger測序法得到的基因序列進行分析和處理,獲得檢測標本中Hsp65靶向基因的序列,將Hsp65靶向基因的序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行比對,確定分枝桿菌的菌種類型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速鑒定分枝桿菌的方法,其特征在于,所述步驟S1中的標本選自痰液、支氣管肺泡灌洗液、胸膜液、腹膜液、尿液、羊膜水、外周血和組織標本中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速鑒定分枝桿菌的方法,其特征在于,所述步驟S2中PCR擴增反應(yīng)的反應(yīng)體系為:2×Taq PCR Master Mix 12.5μL、模板DNA2μL、上游引物1μL、下游引物1μL和ddH2O 8.5μL;所述上游引物和下游引物的濃度為10pmoL/μL。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速鑒定分枝桿菌的方法,其特征在于,所述分枝桿菌包括結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)、、田鼠分枝桿菌(M.microti)、非洲分枝桿菌(M.africanum)、牛分枝桿菌(M.bovis)、堪薩斯分枝桿菌(M.kansasii)、瘰疬分枝桿菌(M.scrofulaceum)、猿猴分枝桿菌(M.simiae)、胃分枝桿菌(M.gastri)、海分枝桿菌(M.marinum)、潰瘍分枝桿菌(M.ulcerans)、膿腫分枝桿菌(M.abscessus)、不產(chǎn)色分枝桿菌(M.nonchromogenicum)、愛知分枝桿菌(M.aichiense)、鳥分枝桿菌(M.avium)、迪氏分枝桿菌(M.diernhoferi)、次要分枝桿菌(M.triviale)、偶然分枝桿菌(M.fortuitum)、土地分枝桿菌(M.terrae)、胞內(nèi)分枝桿菌(M.intracellulare)、戈登分枝桿菌(M.gordonae)、蟾蜍分枝桿菌(M.xenopi)、龜分枝桿菌(M.chelonae)、龜分枝桿菌龜亞種(M.chelonae subsp.chelonae)、龜分枝桿菌膿腫亞種(M.chelonae subsp.abscessus)、施氏分枝桿菌(M.shimoidei)、亞洲分枝桿菌(M.asiaticum)、恥垢分枝桿菌(M.smegmatis)、抗熱分枝桿菌(M.thermoresistibile)、田野分枝桿菌(M.agri)、母牛分枝桿菌(M.vaccae)、草分枝桿菌(M.phlei)。