本發(fā)明涉及一種對(duì)百合鐮刀菌根腐病病原菌有拮抗作用的鄰苯二甲酸降解菌及其應(yīng)用，特別涉及一株對(duì)百合鐮刀菌根腐病病原菌有拮抗作用的鄰苯二甲酸降解菌及其在防治百合鐮刀菌根腐病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：1904年德國(guó)微生物學(xué)家lorenzhiltner提出了根際概念,他將根際定義為根系周?chē)?、受根系生長(zhǎng)影響的土體。大多數(shù)根際微生物對(duì)植物無(wú)害，或?qū)χ参锷L(zhǎng)有促進(jìn)作用。它們?cè)诟H的生命活動(dòng)中，由呼吸作用放出二氧化碳或代謝產(chǎn)酸有助于難溶礦物質(zhì)的溶解，增加植物對(duì)磷及其他礦質(zhì)元素的吸收。它們分泌的生長(zhǎng)激素類(lèi)物質(zhì)(如吲哚乙酸，赤霉素等)還能促進(jìn)植物生長(zhǎng)。另外，許多根際微生物及其代謝產(chǎn)物能夠抑制植物病原菌的生長(zhǎng)發(fā)育，因此從根際土壤中篩選植物病原菌的拮抗菌，用于植物病害的生物防治既可以減少化學(xué)農(nóng)藥帶來(lái)的環(huán)境污染，又解決了抗病品種篩選周期長(zhǎng)、抗病單一的缺點(diǎn)，已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。具有生防作用的土壤微生物在植物病害防治中具有很強(qiáng)的應(yīng)用潛力，特別是對(duì)于植物根部病害的防治是當(dāng)前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。具有生防作用的微生物種類(lèi)繁多，包括真菌、細(xì)菌、放線菌等。其中由于生防細(xì)菌具有繁殖快、種類(lèi)多、易于人工培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)在生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用。生防細(xì)菌防治植物病害所涉及的因素很多，其作用方式也各有不同，目前研究的比較清楚的防病機(jī)制主要有拮抗、競(jìng)爭(zhēng)、寄生及誘導(dǎo)植物獲得系統(tǒng)抗病性等。其中的拮抗作用使指細(xì)菌通過(guò)同化作用產(chǎn)生抗菌物質(zhì)來(lái)抑制有害病原物的生長(zhǎng)和發(fā)展，或者直接殺滅病原物。由于生防細(xì)菌拮抗病原菌的能力易通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，所以拮抗目標(biāo)病原菌的能力已成為生防菌篩選的首要評(píng)價(jià)指標(biāo)。大量的研究表明植物根部分泌的物質(zhì)不僅能夠直接抑制植物自身的生長(zhǎng)，產(chǎn)生自毒作用，而且能夠間接地刺激土傳病原菌，導(dǎo)致病害發(fā)生加重。鄰苯二甲酸是甜瓜、豇豆、甜椒等多種植物的主要自毒物質(zhì)之一，它在抑制植物自身生長(zhǎng)的同時(shí)還能夠促進(jìn)病原尖孢鐮刀菌對(duì)植物的致病作用。鄰苯二甲酸也是百合根部分泌的主要的自毒物質(zhì)，在多年連續(xù)種植百合的土壤中大量積累，并能夠促進(jìn)百合尖孢鐮刀菌毒素的產(chǎn)生以及致病性相關(guān)酶的活性。因此減少連作百合田地里鄰苯二甲酸的含量，對(duì)于百合尖孢鐮刀菌枯萎病的防治具有重要意義。尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii)是引起百合根腐病的主要病原菌。由于百合的連年種植及種植面積的不斷擴(kuò)大，病害發(fā)生日益嚴(yán)重，已成為危害百合的重要病害之一，該病主要危害植株的地下部分，導(dǎo)致百合萎蔫、黃化、種球和鱗莖腐爛，嚴(yán)重影響百合的產(chǎn)量和品質(zhì)，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。百合枯萎病是土傳病害，鐮刀菌可以以菌絲體在種球內(nèi)或以菌絲體、厚垣孢子或菌核隨病殘?bào)w長(zhǎng)期存活于土壤中。目前化學(xué)防治方法是防治百合枯萎病的主要措施，但是由于該病的土傳特性及病原菌抗藥性的產(chǎn)生，使化學(xué)防治方法收效甚微。同時(shí)化學(xué)農(nóng)藥的長(zhǎng)期、大量和反復(fù)使用，帶來(lái)環(huán)境污染。因此，應(yīng)用綠色無(wú)污染的生物防治來(lái)防治百合鐮刀菌枯萎病是未來(lái)發(fā)展的方向。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一株對(duì)百合鐮刀菌根腐菌有拮抗作用的鄰苯二甲酸降解菌及其在防治百合根腐病中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的百合鐮刀菌根腐病拮抗菌為臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)cgmccno.13340。所述臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3，已于2016年11月25日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)cgmcc，地址為：中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào))的保藏編號(hào)為no.13340。所述臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3分離自連作3年的百合的根際土壤，為革蘭氏陽(yáng)性菌。菌體在lb培養(yǎng)基上能形成微黃色的菌落，菌落圓形邊緣規(guī)則，光滑扁平不透明，表面濕潤(rùn)，能夠在以鄰苯二甲酸為唯一碳源的msm培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。以上述臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3為活性成分的生物菌劑或微生物菌肥也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明中對(duì)百合鐮刀菌根腐病病原菌有拮抗作用的鄰苯二甲酸降解菌為臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3，對(duì)引起百合根腐病的鐮刀菌具有較好的抑制作用，可以對(duì)該病害起到較好的防治作用。所述百合的品種為東方百合西伯利亞(lilium‘orientalhybrids’cv.siberia)，所述引起百合根腐病的鐮刀菌為尖孢鐮刀菌，即為尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii)。臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3對(duì)鄰苯二甲酸具有很好的降解作用。本發(fā)明的對(duì)百合鐮刀菌根腐病菌有拮抗作用的鄰苯二甲酸降解菌為臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3，分離自連作3年的百合的根際土壤，是一株百合根際細(xì)菌。平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)表明該菌株對(duì)引起百合根腐病的尖孢鐮刀菌有較好的拮抗作用。離體鱗片防效試驗(yàn)表明該菌株對(duì)百合鐮刀菌根腐病的防效可達(dá)80％。盆栽試驗(yàn)表明該菌株對(duì)百合鐮刀菌根腐病的防效可達(dá)65.2％。該菌株的獲得有望為百合鐮刀菌根腐病的防治提供一條環(huán)保、簡(jiǎn)單、有效的途徑。本發(fā)明的臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3是一株具有良好生防應(yīng)用前景的菌株。附圖說(shuō)明圖1為臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3和百合根腐病病原菌的對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果；圖中，a為無(wú)抑制效果的對(duì)照菌，b為h3y3對(duì)病原菌(fusariumoxysporum)的拮抗效果。圖2為臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3在百合離體鱗片上對(duì)尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii)的防治試驗(yàn)結(jié)果；圖中a為清水對(duì)照，b為尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii)接種處理，c為預(yù)先接種h3y3后3天接種尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii)。圖3為臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)h3y3菌液對(duì)百合鐮刀菌根腐病的防治試驗(yàn)；圖中，a為清水對(duì)照處理，b為病原菌尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii)對(duì)照處理，c為預(yù)先接種h3y33天后接種尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii)處理。具體實(shí)施方式下述實(shí)施例中的方法，如無(wú)特別說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中的百分含量，如無(wú)特別說(shuō)明，均為質(zhì)量百分含量。下述實(shí)施例中的百合品種東方百合西伯利亞(lilium‘orientalhybrids’cv.siberia)種球可從北京農(nóng)學(xué)院園林學(xué)院購(gòu)買(mǎi)。實(shí)施例1、拮抗百合根腐病菌的鄰苯二甲酸降解菌的篩選本菌株是從北京農(nóng)學(xué)院東大地溫室連續(xù)種植3年百合的根際土壤中分離到的，具體方法為：稱(chēng)取根際土壤5g，放入裝有100mlmsm液體培養(yǎng)基(每l含磷酸氫二鉀5.8g，磷酸二氫鉀4.5g，硫酸銨2.0g，氯化鎂0.16g，氯化鈣0.02g，氯化鈉0.2g,二水合氯化錳0.0015g，氯化鐵0.0018g，蒸餾水1000ml，ph7.0)的300ml三角瓶(加入鄰苯二甲酸0.02mg)，30℃，避光，170rpm，震蕩培養(yǎng)7天；取上述土壤懸浮液2ml富集培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入裝有100ml液體msm培養(yǎng)基的300ml三角瓶(加入鄰苯二甲酸0.03mg)繼續(xù)培養(yǎng)7天，培養(yǎng)條件同上；取上述富集培養(yǎng)物2ml轉(zhuǎn)入裝有100mlmsm液體培養(yǎng)基的300ml三角瓶(加入鄰苯二甲酸0.04mg)繼續(xù)培養(yǎng)7天，培養(yǎng)條件同上；取上述富集培養(yǎng)物2ml轉(zhuǎn)入裝有100mlmsm液體培養(yǎng)基的300ml三角瓶(加入鄰苯二甲酸0.05mg)繼續(xù)培養(yǎng)7天，培養(yǎng)條件同上。取最后一次培養(yǎng)懸浮液2ml,1ml,0.5ml,和0.1ml均勻涂布于msm平板(每l含磷酸氫二鉀5.8g，磷酸二氫鉀4.5g，硫酸銨2.0g，氯化鎂0.16g，氯化鈣0.02g，氯化鈉0.2g,二水合氯化錳0.0015g，氯化鐵0.0018g，瓊脂18g，蒸餾水1000ml，ph7.0；加入鄰苯二甲酸0.5mg)。涂好的msm平板于30℃，置培養(yǎng)，連續(xù)觀察7d，隨機(jī)挑取單個(gè)菌落100個(gè)，再次劃線純化保存?zhèn)溆?。在倒好的msm平板中央接種新鮮的百合根腐病病原菌(該病原菌分離自百合根腐病發(fā)病病植株，保存于北京農(nóng)學(xué)院園林學(xué)院)菌餅，在距離菌餅3cm處用滅菌牙簽接種分離純化后的菌株，進(jìn)行拮抗菌株篩選。通過(guò)多年的篩選，共篩選出37株對(duì)百合根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株。其中效果最好的一株命名為h3y3,與其他的菌株有顯著差異，該菌株對(duì)百合根腐病病原菌拮抗作用如圖1所示。實(shí)施例2、h3y3菌株種屬鑒定采用常規(guī)生理生化及16srdna序列分析對(duì)h3y3菌株進(jìn)行鑒定，確認(rèn)該菌株屬于臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌。該菌株的生理生化及基本生物學(xué)特性見(jiàn)表3。表3.h3y3的基本生物學(xué)特征注：“+”表示能夠利用碳源(或氮源)，“－”表示不能利用碳源(或氮源)以h3y3的基因組dna為模板，以細(xì)菌16srdna序列通用引物作為引物(27f：5’-agagtitgatcctggctcag-3’；反向引物為1492r：5’-tacgggtaccttgttacgactt-3’)，pcr擴(kuò)增出約為1.5kb左右的產(chǎn)物片段，用27f引物測(cè)序得到1424個(gè)核苷酸(序列表中序列1)。將該序列與臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacillustaichungensis)進(jìn)行blast比對(duì)，結(jié)果表明h3y3的16srdna序列與paenibacillustaichungensis(登陸號(hào)：hq224631)同源性最高，達(dá)99％。依據(jù)《常見(jiàn)細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，h3y3菌株以上生理生化特征均與類(lèi)芽胞桿菌屬相同，結(jié)合上述分子鑒定，將其鑒定為臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)。將h3y3命名為臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)h3y3。該臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)h3y3菌株，已于2016年11月25日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)cgmcc，地址為：中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏號(hào)為cgmccno.13340。實(shí)施例3、臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)h3y3cgmccno.13340對(duì)百合鐮刀菌根腐病的防治效果評(píng)價(jià)1.離體鱗片法測(cè)定將臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)h3y3cgmccno.13340接種到lb培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，蒸餾水1000ml，ph7.0)，于30℃、170rpm震蕩培養(yǎng)過(guò)夜，然后4000rpm離心10min去除上清液，以無(wú)菌水重懸沉淀菌體并調(diào)節(jié)至濃度為od600＝0.5。從供試百合(東方百合西伯利亞(lilium‘orientalhybrids’cv.siberia))鱗莖上剝下健康的鱗片用75％酒精消毒10min，無(wú)菌水沖洗3次。用制備好的h3y3菌懸液浸泡無(wú)菌百合鱗片1小時(shí)后，置于鋪有滅菌紗布的培養(yǎng)皿中，每培養(yǎng)皿加入10ml無(wú)菌水保濕。22℃培養(yǎng)2天后接種0.5ml106cfu/ml的病原菌(尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii))孢子懸浮液。每處理3片鱗片，3次重復(fù)。無(wú)菌水作對(duì)照。培養(yǎng)10天后觀察發(fā)病情況。按照下面的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算不同處理的病情指數(shù)和防效。發(fā)病率(％)＝出現(xiàn)病斑鱗片數(shù)/供試鱗片數(shù)株×100病情指數(shù)(％)＝[∑(各級(jí)發(fā)病鱗片數(shù)×該病級(jí))]/(調(diào)查總鱗片數(shù)×最高病級(jí))×100防效(％)＝(對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對(duì)照病情指數(shù)×100表1.離體鱗片病情分級(jí)(病級(jí))標(biāo)準(zhǔn)病級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)鱗片無(wú)病斑1級(jí)鱗片病斑面積在20％以下2級(jí)鱗片病斑面積在20％-40％之間3級(jí)鱗片病斑面積在40％-60％之間4級(jí)鱗片病斑面積在60％-80％之間5級(jí)鱗片病斑面積在80％至全部腐爛注：病情級(jí)數(shù)按發(fā)病癥狀和程度不同分為0級(jí)、1級(jí)、2級(jí)、3級(jí)、4級(jí)和5級(jí)。人工接種10天后，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果(圖2)，結(jié)果見(jiàn)表2，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明預(yù)先接種h3y3后能夠有效的抑制百合根腐病病原菌的生長(zhǎng),防效可達(dá)80％。表2、離體鱗片法測(cè)定h3y3對(duì)百合鐮刀菌根腐病的防治效果2.盆栽實(shí)驗(yàn)將臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)h3y3分離株接種到lb培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，蒸餾水1000ml，ph7.0)，于30℃、170rpm震蕩培養(yǎng)過(guò)夜，然后4000rpm離心去除上清液，以無(wú)菌水重懸沉淀菌體調(diào)節(jié)至濃度為od600＝0.5。用制備好的臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)h3y3菌懸液浸泡百合種球，70rpm搖床震蕩培養(yǎng)2小時(shí)，以無(wú)菌水作對(duì)照。將接種后的種球種植在盛有連續(xù)4年種植百合帶有病原菌(尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii))的土壤的營(yíng)養(yǎng)缽中。光照培養(yǎng)箱25℃/20℃(光照/黑暗16/8h)培養(yǎng)2天后，每營(yíng)養(yǎng)缽接種20ml106cfu/ml的病原菌(尖孢鐮刀菌百合專(zhuān)化型(fusariumoxysporumf.sp.lilii))孢子懸浮液。每處理3盆，3次重復(fù)。繼續(xù)在光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，40天后觀察記錄發(fā)病情況。發(fā)病率(％)＝出現(xiàn)病斑種球數(shù)/供試種球數(shù)×100病情指數(shù)(％)＝[∑(各級(jí)發(fā)病種球數(shù)×該病級(jí))]/(調(diào)查總種球數(shù)×最高病級(jí))×100防效(％)＝(對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對(duì)照病情指數(shù)×100表3.盆栽試驗(yàn)病情分級(jí)(病級(jí))標(biāo)準(zhǔn)病級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)種球表面無(wú)病斑1級(jí)種球表面病斑面積在20％以下2級(jí)種球表面病斑面積在20％-40％之間3級(jí)種球表面病斑面積在40％-60％之間4級(jí)種球表面病斑面積在60％-80％之間5級(jí)種球表面病斑面積在80％至全部腐爛注：病情級(jí)數(shù)按發(fā)病癥狀和程度不同分為0級(jí)、1級(jí)、2級(jí)、3級(jí)、4級(jí)和5級(jí)。人工接種40d后，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果(圖3)，結(jié)果見(jiàn)表4。清水對(duì)照組的百合種球均有病斑出現(xiàn)，病情指數(shù)達(dá)到31.1％。h3y3菌懸液預(yù)先處理之后接種病原菌病情指數(shù)僅為17.8％，防效達(dá)到65.2％。試驗(yàn)結(jié)果表明預(yù)先接種h3y3能夠有效的預(yù)防百合鐮刀菌根腐病的發(fā)生，是一種比較好的防治百合鐮刀菌根腐病的方法。表4、h3y3對(duì)百合鐮刀菌根腐病的溫室防治效果實(shí)施例4、臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)h3y3降解鄰苯二甲酸能力測(cè)定將臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)h3y3分離株接種到lb培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，蒸餾水1000ml，ph7.0)，于30℃、170rpm震蕩培養(yǎng)過(guò)夜，然后4000rpm離心去除上清液，以無(wú)菌水重懸沉淀菌體調(diào)節(jié)至濃度為od600＝0.5。稱(chēng)取500g連作百合的土壤，置于營(yíng)養(yǎng)缽中，每營(yíng)養(yǎng)缽接種od600＝0.5的h3y3菌懸液50ml，攪拌均勻后于光照培養(yǎng)箱25℃/20℃(光照/黑暗16/8h)，放置60天后測(cè)定鄰苯二甲酸含量。每處理3盆，無(wú)菌水做對(duì)照。土壤樣品處理放置于通風(fēng)干燥處晾曬后進(jìn)行研磨，過(guò)60目篩。稱(chēng)取1kg土壤樣品置于圓底燒瓶中，加入5l去離子水浸泡24h后用濾紙過(guò)濾。濾液采用高效液相色譜儀進(jìn)行分析，色譜柱：xdb-c18柱(4.6mm×250mm),柱溫室溫。乙酸/甲醇(99/1,v/v)作為分離相，流速為0.5ml/min，外標(biāo)法計(jì)算鄰苯二甲酸含量。h3y3處理60天后土壤中鄰苯二甲酸的含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表5。清水對(duì)照組的鄰苯二甲酸含量為每克土壤干重18.3μg，h3y3處理組鄰苯二甲酸含量為12.4μg，降解率為32.2％。表5、h3y3對(duì)土壤中鄰苯二甲酸的降解效果處理每克土壤鄰苯二甲酸含量(μg)降解率(％)清水對(duì)照18.3/h3y312.432.2％由上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌(paenibacilustaichungensis)h3y3菌株對(duì)土壤中的鄰苯二甲酸殘留具有很好的降解作用。以上說(shuō)明對(duì)本發(fā)明而言只是說(shuō)明性的，而非限制性的，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員理解，在不脫離所附權(quán)利要求所限定的精神和范圍的情況下，可做出許多修改、變化或等效，但都將落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。序列表<110>北京農(nóng)學(xué)院<120>對(duì)百合鐮刀菌有拮抗作用的鄰苯二甲酸降解菌及其應(yīng)用<130>whoi170004<160>1<210>1<211>1424<212>dna<213>臺(tái)中類(lèi)芽胞桿菌（paenibacillustaichungensis）<400>1aagtcgagcggacttgaagagaagcttgcttctctgatggttagcggcggacgggtgagt60aacacgtaggcaacctgccctcaagtttgggacaactaccggaaacggtagctaataccg120aatagttgttttcttctcctgaagaaaactggaaagacggagcaatctgtcacttgggga180tgggcctgcggcgcattagctagttggtggggtaacggctcaccaaggcgacgatgcgta240gccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacggg300aggcagcagtagggaatcttccgcaatgggcgaaagcctgacggagcaatgccgcgtgag360tgatgaaggttttcggatcgtaaagctctgttgccagggaagaacgcttgggagagtaac420tgctctcaaggtgacggtacctgagaagaaagccccggctaactacgtgccagcagccgc480ggtaatacgtagggggcaagcgttgtccggaattattgggcgtaaagcgcgcgcaggcgg540tcatttaagtctggtgtttaatcccggggctcaaccccggatcgcactggaaactgggtg600acttgagtgcagaagaggagagtggaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagatatgt660ggaggaacaccagtggcgaaggcgactctctgggctgtaactgacgctgaggcgcgaaag720cgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctag780gtgttaggggtttcgatacccttggtgccgaagttaacacattaagcactccgcctgggg840agtacggtcgcaagactgaaactcaaaggaattgacggggacccgcacaagcagtggagt900atgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatccctctgatcg960gtacagagatgtatctttccttcgggacagaggagacaggtggtgcatggttgtcgtcag1020ctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgc1080cagcatttcggatgggcactctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtgggga1140tgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtactacaatggccggta1200caacgggctgtgaagccgcgaggtggaacgaatcctaaaaagccggtctcagttcggatt1260gcaggctgcaactcgcctgcatgaagtcggaattgctagtaatcgcggatcagcatgccg1320cggtgaatacgttcccgggtcttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttataaca1380cccgaagtcggtggggtaaccgcaaggagccagccgccgaaggt1424當(dāng)前第1頁(yè)12