亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

一種快速直接PCR檢測牛肺炎支原體的試劑盒及其應用的制作方法

文檔序號:12584641閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種快速直接PCR檢測牛肺炎支原體的試劑盒,包含以下試劑:

PCR擴增試劑,陽性對照和陰性對照。

2.根據(jù)權利要求1所述快速直接PCR檢測牛肺炎支原體的試劑盒,其特征在于:所述PCR擴增試劑含有2×Direct PCR Mix、10pM正向引物、10pM反向引物、5U/μl Hot Strart Taq酶、滅菌ddH2O。

3.根據(jù)權利要求2所述快速直接PCR檢測牛肺炎支原體的試劑盒,其特征在于:所述正向引物為PF:5’-CCTTAGGCAGTTTCTTTATAA-3’,所述反向引物為PR:5’-CATGCATGTCGAGCGATGAT-3’。

4.一種快速直接PCR檢測牛肺炎支原體的試劑盒的應用,包括以下步驟:

第一步、樣品的采集,分為病料和鼻咽拭子采集,所述病料采集為無菌條件下采集病料10mg~100mg,裝入無RNA酶污染的離心管中備用,所述鼻咽拭子采集為采集鼻咽液,裝入無RNA酶污染的離心管中備用;

第二步、樣品處理,鼻咽拭子中加入200μl滅菌ddH2O,擠壓后棄掉拭子,研磨后的固體狀樣品2mg,加入20μl滅菌ddH2O,震蕩混勻;快速渦旋5秒,取1μl上清作為模板;

第三步、直接PCR反應,反應體系為20μl,取處理后的樣品上清1μl,加入PCR擴增試劑19μl,充分混勻,陽性對照和陰性對照分別取1μl加入20μl PCR擴增試劑,PCR擴增程序為98℃30s;然后35個循環(huán):98℃5s,55℃5s,72℃5s;最后72℃1min;

第四步、PCR產(chǎn)物的檢測,取5μl擴增產(chǎn)物直接加到含溴化乙錠的瓊脂糖凝膠中,同時加入DNA Marker(2000bp)對照,電壓為100V,電泳20min,然后在凝膠成像儀中觀察結果,如果樣品能擴增出1389bp條帶,說明樣品為陽性,陽性對照也擴增出1390bp條帶,陰性對照沒有條帶。

5.根據(jù)權利要求4所述快速直接PCR檢測牛肺炎支原體的試劑盒的應用,其特征在于:所述第三步中的反應體系為20μl,處理后的樣品1μl,10pmol/μl的正向引物1μl,10pmol/μl的反向引物1μl,2×Direct PCR Mix 10μl、5U/μl Hot Strart Taq酶0.5μl、加滅菌ddH2O至20μl,充分混勻。

6.根據(jù)權利要求5所述用于牛肺炎支原體直接PCR檢測的試劑盒的應用,其特征在于:擴增長度為1390bp。

7.根據(jù)權利要求4所述快速直接PCR檢測牛肺炎支原體的試劑盒的應用,其特征在于:所述第四步中瓊脂糖凝膠電泳時的凝膠濃度為1.0%,其中含有1%的凝膠染料。

當前第2頁1 2 3 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1