本實用新型屬于試劑盒或試劑箱技術領域，具體涉及一種NK細胞培養(yǎng)試劑盒。
背景技術：
NK細胞(Natural Killer Cell)又稱自然殺傷細胞，占外周血淋巴細胞的10％～15％。它是人體防御體系的第一道屏障。它通常處于休眠狀態(tài)，一旦被激活，它們會滲透到大多數(shù)組織中攻擊腫瘤細胞和病毒感染細胞。NK細胞是人體先天免疫的核心組成部分，是腫瘤細胞免疫的基礎。目前，隨著生物治療臨床應用的廣泛發(fā)展，NK細胞治療取得了一定的臨床療效。據(jù)報道，多種細胞因子組合被廣泛應用于NK細胞的體外培養(yǎng)，如IL-2、IL-7、IL-15、IL-18等單獨或組合均能有效的誘導、刺激特定的NK細胞增殖和促進其分化成熟，其中IL-2和IL-15的作用尤為明顯。大量的研究表明IL-7的合理運用和管理，可對患者免疫功能進行調(diào)節(jié)，來治療淋巴細胞耗竭、腫瘤或自身免疫性疾病。赫賽汀(Herceptin)是針對HER-2的人源化克隆單抗，與腫瘤細胞表面HER-2結合后，末端的Fc片段可與NK細胞表面的Fcγ受體結合，激活NK細胞，促進NK細胞對抗體結合腫瘤細胞的殺傷作用。
使用NK細胞進行免疫治療，需要首先在體外擴增大量的具有較高殺傷活性的NK細胞。因此，本領域技術人員致力于開發(fā)能夠在體外高效擴增具有較高殺傷活性的NK細胞的技術。
技術實現(xiàn)要素：
本實用新型提出一種NK細胞培養(yǎng)試劑盒，該試劑盒采用單克隆抗體聯(lián)合細胞因子的方法，在保證NK細胞體外擴增倍數(shù)、細胞比例的前提下，提高擴增產(chǎn)物的殺傷活性。
本實用新型的技術方案是這樣實現(xiàn)的：
一種NK細胞培養(yǎng)試劑盒，包括盒體與可開啟的盒蓋，所述盒體內(nèi)部安裝有海綿固定板，所述海綿固定板上面設置有無血清培養(yǎng)基放置槽、包被細胞培養(yǎng)瓶放置槽、淋巴分離液放置槽以及細胞因子存儲單元，所述無血清培養(yǎng)基放置槽位于所述海綿固定板的左側，所述包被細胞培養(yǎng)瓶放置槽、淋巴分離液放置槽以及細胞因子存儲單元均位于所述海綿固定板的右側，所述淋巴分離液放置槽以及細胞因子存儲單元均位于所述包被細胞培養(yǎng)瓶放置槽上方，所述淋巴分離液放置槽位于所述細胞因子存儲單元與所述無血清培養(yǎng)基放置槽之間。
進一步，所述細胞因子存儲單元包括細胞因子IL-2放置槽、細胞因子IL-7放置槽以及細胞因子IL-15放置槽。
進一步，所述細胞因子IL-2放置槽的數(shù)量為4個，所述細胞因子IL-7放置槽的數(shù)量以及細胞因子IL-15放置槽的數(shù)量均為1個。
本實用新型的有益效果：
本實用新型提供一種配套齊全的培養(yǎng)NK細胞培養(yǎng)試劑盒，采用單克隆抗體聯(lián)合細胞因子的方法，保證NK細胞體外擴增倍數(shù)，提高活化免疫細胞的殺傷活性。
附圖說明
為了更清楚地說明本實用新型實施例或現(xiàn)有技術中的技術方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本實用新型的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
圖1為本實用新型NK細胞培養(yǎng)試劑盒的結構示意圖。
附圖標示：1、盒體，2、可開啟的盒蓋，3、海綿固定板，4、無血清培養(yǎng)基放置槽，5、包被細胞培養(yǎng)瓶放置槽，6、淋巴分離液放置槽，7、細胞因子IL-2放置槽，8、細胞因子IL-7放置槽，9、細胞因子IL-15放置槽。
具體實施方式
下面將結合本實用新型實施例中的附圖，對本實用新型實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本實用新型一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本實用新型中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本實用新型保護的范圍。
參照圖1，一種NK細胞培養(yǎng)試劑盒，包括盒體1、可開啟的盒蓋2以及安裝在盒體1內(nèi)部的海綿固定板3，海綿固定板3起到減震作用。海綿固定板3上面設置有無血清培養(yǎng)基放置槽4、包被細胞培養(yǎng)瓶放置槽5、淋巴分離液放置槽6以及細胞因子存儲單元。無血清培養(yǎng)基放置槽4位于海綿固定板3的左側，包被細胞培養(yǎng)瓶放置槽5、淋巴分離液放置槽6以及細胞因子存儲單元均位于海綿固定板3的右側。淋巴分離液放置槽6以及細胞因子存儲單元均位于包被細胞培養(yǎng)瓶放置槽5上方。淋巴分離液放置槽6位于細胞因子存儲單元與無血清培養(yǎng)基放置槽4之間。細胞因子存儲單元包括4個細胞因子IL-2放置槽7、1個細胞因子IL-7放置槽8以及1個細胞因子IL-15放置槽9。
利用該細胞培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)NK細胞的步驟如下：
1)抽取外周血30ml～50ml，離心管內(nèi)800g×8分鐘離心全血，收集自體血漿，經(jīng)56℃(干熱或水浴鍋)滅活30分鐘后，800g×8分鐘離心，取上層血漿與另一支滅菌過的離心管，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2)用PBS稀釋去血漿后的外周血至血漿分離前全血體積的一倍。
3)取淋巴細胞分離液至無菌的15ml離心管中，每管5ml，將已稀釋的外周血輕輕加入到淋巴分離液液面上層，保持與分離液的界面，每管加約10ml外周血稀釋液。
4)750g×15分鐘離心，常溫。
5)離心后吸取單個核細胞層至50ml無菌離心管中，加PBS至45ml，混勻，450g×8分鐘離心，洗1次。
6)棄上清液，再用40ml PBS重懸，混勻，取少量計數(shù)。離心260g×8分鐘，再洗滌1次。
7)用無血清培養(yǎng)基重懸分離得到的單個核細胞，調(diào)整細胞密度為1.0×106/ml，轉移到已用赫賽汀包被細胞培養(yǎng)瓶，按容積比5％的濃度添加已滅活血漿，然后加入細胞因子IL-7至終濃度1000ng/ml，IL-15至終濃度1000ng/ml，置于飽和濕度、37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
8)連續(xù)培養(yǎng)14天，每2至3天根據(jù)細胞的生產(chǎn)情況，補加含有2000UI/ml的IL-2的無血清培養(yǎng)基，調(diào)整細胞密度至0.8×106/ml，并按容積比5％的濃度添加已滅活血漿，血漿不夠時，可逐漸降低濃度，甚至不加血漿。
以上所述僅為本實用新型的較佳實施例而已，并不用以限制本實用新型，凡在本實用新型的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本實用新型的保護范圍之內(nèi)。