本實(shí)用新型涉及一種用于絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒。

背景技術(shù)：
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微小核糖核酸RNA（microRNA）是一類(lèi)近年來(lái)在真核細(xì)胞和病毒染色體中存在的內(nèi)源性非編碼的單鏈RNA分子，其長(zhǎng)度約22nt。微小核糖核酸RNA在進(jìn)化上呈現(xiàn)高度的保守性，通過(guò)與靶信使RNA3(mRNA3)‘段序列進(jìn)行特異性地堿基互補(bǔ)配對(duì)，引起信使RNA(mRNA)降解或是抑制其蛋白翻譯，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)該mRNA的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)調(diào)控作用。目前，普遍認(rèn)為微小核糖核酸RNA參與許多生理和病理過(guò)程，并在基因表達(dá)調(diào)控上發(fā)揮重要作用。近年來(lái)，有大量研究報(bào)道微小核糖核酸RNA（microRNA）是骨代謝的調(diào)控因子，廣泛參與骨形成和再吸收。國(guó)外研究人員進(jìn)一步驗(yàn)證了微小核糖核酸RNA（microRNA）作為骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)記物的可能性。研究結(jié)果解釋有多個(gè)微小核糖核酸RNA（microRNA）(包括miR-21，miR-133a以及miR-422a，)其在血液中的表達(dá)與骨密度呈現(xiàn)相關(guān)性，提示其可作為絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警的臨床診斷標(biāo)記物。盡管以上研究發(fā)現(xiàn)了可用于絕經(jīng)后婦女這一特殊人群的骨質(zhì)疏松風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警的臨床診斷微小核糖核酸RNA（microRNA）標(biāo)記物，但缺乏以中國(guó)人為受試者的微小核糖核酸RNA（microRNA）高通量篩選研究。在一項(xiàng)對(duì)134名來(lái)自中國(guó)的絕經(jīng)后婦女進(jìn)行的臨床研究中，我們通過(guò)芯片高通量篩選的方式，尋找到(包括miR-194-5P)在內(nèi)的多個(gè)微小核糖核酸RNAs（microRNAs），為潛在適用于中國(guó)人群的絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松臨床診斷標(biāo)記物。目前尚無(wú)針對(duì)于絕經(jīng)后婦女的血液微小核糖核酸RNA（microRNA）診斷方法及其配套的試劑盒。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本實(shí)用新型的目的是提供一種固定96孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板和384孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板牢固，使用效果好的用于絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒。

上述的目的通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種用于絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒，其組成包括:試劑盒底板，所述的試劑盒底板連接長(zhǎng)方形板框，所述的長(zhǎng)方形板框包括左框板、前框板、右框板、后框板，所述的左框板、所述的前框板、所述的右框板、所述的后框板順次連接，所述的左框板開(kāi)有橫U形左插槽，所述的試劑盒底板開(kāi)有半口形底插槽，所述的右框板開(kāi)有橫U形右插槽，所述的橫U形左插槽、所述的半口形底插槽、所述的橫U形右插槽之間相通并插入中隔板，所述的試劑盒底板與所述的長(zhǎng)方形板框組成底盒體，所述的中隔板將所述的底盒體分成前腔體和后腔體，所述的前腔體內(nèi)裝入96孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板，所述的后腔體內(nèi)裝入384孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板。

所述的用于絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒，所述的前腔體內(nèi)緊配合插入前固定框，所述的前固定框壓住所述的96孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板的邊緣，所述的前固定框連接前卡板圈，所述的前卡板圈具有前卡槽，所述的前卡槽內(nèi)卡入前腔體的壁，所述的后腔體內(nèi)緊配合插入后固定框，所述的后固定框壓住所述的384孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板的邊緣，所述的后固定框連接后卡板圈，所述的后卡板圈具有后卡槽，所述的后卡槽內(nèi)卡入后腔體的壁。

所述的用于絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒，所述的后框板連接彈性折板，所述的彈性折板連接上蓋，所述的上蓋連接彈性折板圈，所述的彈性折板圈連接磁扣，所述的磁扣連接所述的長(zhǎng)方形板框的上部。

有益效果：

1.本實(shí)用新型既能夠裝入96孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板也能夠裝入384孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板，可選性強(qiáng)，使用方便靈活。

2.本實(shí)用新型的前卡板圈與前卡槽固定的96孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板牢固、穩(wěn)定；后卡板圈與后卡槽固定的384孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板牢固、穩(wěn)定；使用安全，效果好。

3.本實(shí)用新型的定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈反應(yīng)PCR芯片與傳統(tǒng)的定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈反應(yīng)PCR技術(shù)相比，定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈反應(yīng)PCR芯片有多種優(yōu)點(diǎn)，包括反應(yīng)體積小、反應(yīng)速度快、操作簡(jiǎn)便、價(jià)格低、樣品用量少、無(wú)污染、節(jié)省試驗(yàn)成本、便于集成化、結(jié)果可靠。

4.本實(shí)用新型發(fā)現(xiàn)的骨質(zhì)疏松多個(gè)微小核糖核酸RNAs（microRNAs），miR-194-5p更加適合中國(guó)絕經(jīng)后婦女人群，有助于這類(lèi)人群的骨質(zhì)疏松風(fēng)險(xiǎn)控制。

附圖說(shuō)明：

附圖1是本產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)示意圖。

附圖2是附圖1的主視剖視圖。

具體實(shí)施方式：

下面將結(jié)合本實(shí)用新型的附圖，對(duì)本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。

實(shí)施例：

一種用于絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒，其組成包括:試劑盒底板1，所述的試劑盒底板連接長(zhǎng)方形板框，所述的長(zhǎng)方形板框包括左框板2、前框板3、右框板4、后框板5，所述的左框板、所述的前框板、所述的右框板、所述的后框板順次連接，所述的左框板開(kāi)有橫U形左插槽6，所述的試劑盒底板開(kāi)有半口形底插槽7，所述的右框板開(kāi)有橫U形右插槽8，所述的橫U形左插槽、所述的半口形底插槽、所述的橫U形右插槽之間相通并插入中隔板9，所述的試劑盒底板與所述的長(zhǎng)方形板框組成底盒體，所述的中隔板將所述的底盒體分成前腔體10和后腔體11，所述的前腔體內(nèi)裝入96孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板12，所述的后腔體內(nèi)裝入384孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板13；所述的前腔體內(nèi)緊配合插入前固定框14，所述的前固定框壓住所述的96孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板的邊緣，所述的前固定框連接前卡板圈15，所述的前卡板圈具有前卡槽16，所述的前卡槽內(nèi)卡入前腔體的壁，所述的后腔體內(nèi)緊配合插入后固定框17，所述的后固定框壓住所述的384孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板的邊緣，所述的后固定框連接后卡板圈18，所述的后卡板圈具有后卡槽19，所述的后卡槽內(nèi)卡入后腔體的壁；所述的后框板連接彈性折板20，所述的彈性折板連接上蓋21，所述的上蓋連接彈性折板圈22，所述的彈性折板圈連接磁扣23，所述的磁扣連接所述的長(zhǎng)方形板框的上部。

工作原理：

將制備好的患者血液互補(bǔ)脫氧核糖核酸cDNA加入到96孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板或384孔聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)板的反應(yīng)孔內(nèi)，在熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)聚合酶鏈反應(yīng)PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增。該定量聚合酶鏈反應(yīng)PCR芯片在使用時(shí)和常規(guī)的定量聚合酶鏈反應(yīng)PCR操作步驟相同。具體步驟如下：從待檢的患者血液等中提取總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成cDNA，然后將所得的cDNA 直接等量加入含有miR-194-5p引物的孔中，加入聚合酶鏈反應(yīng)PCR試劑，在熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)PCR儀上進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)PCR定量檢測(cè)，以U6為參比，對(duì)miR-194-5p的循環(huán)閾值（CT）的值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，根據(jù)2-ΔΔCT公式計(jì)算miR-194-5p的表達(dá)量。

本產(chǎn)品解決了目前絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥常規(guī)檢測(cè)手段只能在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥發(fā)病后作出診斷，延誤治療時(shí)機(jī)以及目前的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥缺乏基因檢測(cè)的缺陷。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥微小核糖核酸microRNA檢測(cè)試劑盒主要由絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥互補(bǔ)脫氧核糖核酸（cDNA）反應(yīng)體系和聚合酶鏈反應(yīng)（聚合酶鏈反應(yīng)PCR）體系組成。

本產(chǎn)品絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥microRNA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)microRNA-194-5p準(zhǔn)確率高達(dá)99.9%，為臨床診斷絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。

本產(chǎn)品絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥microRNA檢測(cè)試劑盒可以在絕經(jīng)剛開(kāi)始（骨質(zhì)疏松未出現(xiàn)前）作出診斷，為及早治療，把握治療時(shí)機(jī)提供物質(zhì)保障。

本產(chǎn)品絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥microRNA檢測(cè)試劑盒與現(xiàn)有的骨密度儀檢測(cè)方法相結(jié)合，可以有效的降低絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的漏檢率。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥microRNA檢測(cè)試劑盒，主要由絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥互補(bǔ)脫氧核糖核酸cDNA反應(yīng)體系和聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)體系組成。上游和下游引物序列分別為GCTTCGGCACATATACTAAAAT(基因序列，其中G代表鳥(niǎo)嘌呤，C代表胞嘧啶，T代表胸腺嘧啶，A代表腺嘌呤，中文序列是鳥(niǎo)嘌呤-胞嘧啶-胸腺嘧啶-胸腺嘧啶-胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-胞嘧啶-腺嘌呤-胞嘧啶-腺嘌呤-胸腺嘧啶-腺嘌呤-胸腺嘧啶-腺嘌呤-胞嘧啶-胸腺嘧啶-腺嘌呤-腺嘌呤-腺嘌呤-腺嘌呤-胸腺嘧啶)和CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT（胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-胞嘧啶-胸腺嘧啶-胸腺嘧啶-胞嘧啶-腺嘌呤-胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-腺嘌呤-腺嘌呤-胸腺嘧啶-胸腺嘧啶-胸腺嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-胸腺嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-胸腺嘧啶-胞嘧啶-腺嘌呤-胸腺嘧啶）。上游和下游引物序列分別為GCTTCGGCACATATACTAAAAT(基因序列，其中G代表鳥(niǎo)嘌呤，C代表胞嘧啶，T代表胸腺嘧啶，A代表腺嘌呤，中文序列是鳥(niǎo)嘌呤-胞嘧啶-胸腺嘧啶-胸腺嘧啶-胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-胞嘧啶-腺嘌呤-胞嘧啶-腺嘌呤-胸腺嘧啶-腺嘌呤-胸腺嘧啶-腺嘌呤-胞嘧啶-胸腺嘧啶-腺嘌呤-腺嘌呤-腺嘌呤-腺嘌呤-胸腺嘧啶)和CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT（胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-胞嘧啶-胸腺嘧啶-胸腺嘧啶-胞嘧啶-腺嘌呤-胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-腺嘌呤-腺嘌呤-胸腺嘧啶-胸腺嘧啶-胸腺嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-胸腺嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤-胸腺嘧啶-胞嘧啶-腺嘌呤-胸腺嘧啶）。