1.致羔羊腦炎糞腸球菌XJ05株EF0591基因缺失株，其保藏編號(hào)為CCTCC NO:M2016503。
2.致羔羊腦炎糞腸球菌XJ05株EF0591基因缺失株的制備方法，包括如下步驟：
致羔羊腦炎糞腸球菌XJ05培養(yǎng)及基因組DNA提??；
根據(jù)EF0591基因序列設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增及回收純化；
將提取的pTX4577質(zhì)粒用Kpn I與Sal I進(jìn)行雙酶切，用膠回收試劑盒回收pTX4577載體大片段，用T4連接酶與回收的純化目的片段過夜連接；連接產(chǎn)物按常規(guī)方法轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，轉(zhuǎn)化成功的重組細(xì)菌能在LK平板上生長(zhǎng)；挑取生長(zhǎng)良好的單個(gè)菌落，LK液體培養(yǎng)基增菌后，提取質(zhì)粒用Kpn I與Sal I雙酶切，經(jīng)電泳鑒定正確后，將重組質(zhì)粒測(cè)序，重組質(zhì)粒命名為pTX4577-△0591；
取上述菌液，用含有pTX4577質(zhì)粒的T7啟動(dòng)子上部分序列作為上游引物，用插入片段的下游序列作為下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；成功構(gòu)建致羔羊腦炎糞腸球菌XJ05株EF0591基因缺失株。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，致羔羊腦炎糞腸球菌XJ05接種在BHI固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)過夜，5000rpm/min離心5min，取沉淀按細(xì)菌基因組DNA小量抽提試劑盒說明書操作進(jìn)行。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，根據(jù)EF0591基因序列設(shè)計(jì)引物EF0591C1和EF0591C2，取中間673bp的片段，在引物EF0591C1引入內(nèi)切酶Kpn I的酶切位點(diǎn)，在引物EF0591C2引入內(nèi)切酶Sal I的酶切位點(diǎn)；以提取的DNA為模板，以EF0591 C1和EF0591 C2為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；PCR條件為：94℃預(yù)變性5min，94℃變性90s，58℃退火90s，72℃延伸1min，共30個(gè)循環(huán),最后1個(gè)循環(huán)結(jié)束后72℃延伸5min；反應(yīng)結(jié)束后，電泳進(jìn)行鑒定，經(jīng)鑒定正確后按膠回收試劑盒提供的步驟進(jìn)行片段回收。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，制備電轉(zhuǎn)化用E.faecalis XJ05感受態(tài)細(xì)胞的具體步驟如下；
挑取糞腸球菌單個(gè)菌至BHI-蔗糖(1:2)培養(yǎng)液中37℃輕微振蕩培養(yǎng)20小時(shí)；
將菌液于分裝于離心棄上清，沉淀用電擊轉(zhuǎn)化緩沖液重懸，冰浴后4℃，4000g離心15分鐘，重復(fù)一次；
棄上清，沉淀用管內(nèi)殘留的電擊轉(zhuǎn)化緩沖液懸浮，將受體菌分裝于eppendorf管中，置于冰浴中立即使用或-80℃凍存?zhèn)溆谩?/p>
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，電轉(zhuǎn)化的具體步驟如下；
加重組穿梭質(zhì)粒pTX4577-△0591到E.Faecalis XJ05感受態(tài)細(xì)胞中，混合均勻?qū)⑵滢D(zhuǎn)移到預(yù)先處理過的電轉(zhuǎn)杯中；
調(diào)整電轉(zhuǎn)儀為1.5kv，5ms，電擊3次，完畢后立刻加入1ml BHI培養(yǎng)基，37℃放置60min；
8000r/min離心5min，棄上清，將剩余細(xì)菌吹打后均勻涂布于含卡那霉素的BHI平板上，37℃溫箱中培養(yǎng)24h；
待平板上長(zhǎng)出單個(gè)菌落后，挑取單菌落到BHI液體培養(yǎng)基中(含卡那霉素10μg/mL)，然后37℃條件下?lián)u床中培養(yǎng)24h。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，構(gòu)建致羔羊腦炎糞腸球菌XJ05株EF0591基因缺失株時(shí)PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性4min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30個(gè)循環(huán)；72℃再延伸l0min。
8.權(quán)利要求1所述的致羔羊腦炎糞腸球菌XJ05株EF0591基因缺失株在確定表面蛋白EF0591在糞腸球菌XJ05在導(dǎo)致羔羊腦炎發(fā)生中的作用中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為細(xì)胞黏附、侵染能力確定中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為生物被膜形成能力確定中的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為毒力確定中的應(yīng)用。