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一種胡蘿卜軟腐歐文氏菌、其分泌的植物免疫激活蛋白及應用的制作方法

文檔序號:12696835閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種胡蘿卜軟腐歐文氏菌Erwinia carotovora subsp. Carotovora strain Ecc 36,該菌于2015年11月27日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心進行了保藏,保藏號為:CGMCC No. 11751。

2.權利要求1所述的胡蘿卜軟腐歐文氏菌分泌的植物免疫激活蛋白HrpNEccPR,其特征在于:其具有SEQ ID NO:1所示的蛋白序列。

3.表達權利要求2所述蛋白的基因,其特征在于:其具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

4.權利要求2所述的植物免疫激活蛋白HrpNEccPR粗品的制備方法,其特征在于:將所述胡蘿卜軟腐歐文氏菌Ecc 36發(fā)酵液離心收集菌體,用無菌水懸浮,將懸浮液煮沸,離心收集上清,冷凍干燥,獲得所述植物免疫激活蛋白HrpNEccPR粗品。

5.根據(jù)權利要求4所述的方法,其特征在于:所述無菌水的用量為發(fā)酵液質量的1/2,將所述懸浮液煮沸30分鐘,在9000rpm下將懸浮液離心30分鐘。

6.根據(jù)權利要求4所述的方法,其特征在于:所述植物免疫激活蛋白HrpNEccPR粗品中蛋白含量不低于43wt%。

7.根據(jù)權利要求4所述的方法,其特征在于:其具體步驟為:將所述胡蘿卜軟腐歐文氏菌Ecc36菌株在LB固體培養(yǎng)基上采用劃線法,25℃培養(yǎng)24小時,獲得單菌落,挑取單菌落于液體LB培養(yǎng)基中,于25℃過夜培養(yǎng),獲得Ecc36菌株種子,然后以10wt%接種于液體LB培養(yǎng)基中,25℃培養(yǎng)48小時,9000rpm離心30分鐘,收集菌體,加入原液體LB培養(yǎng)基1/2倍的無菌水懸浮,將其懸浮液煮沸30分鐘,9000rpm離心30分鐘,收集上清,冷凍干燥,獲得所述植物免疫激活蛋白HrpNEccPR粗品。

8.權利要求2所述植物免疫激活蛋白HrpNEccPR在制備防治植物軟腐病生物制劑中的應用。

9.利用權利要求2所述植物免疫激活蛋白HrpNEccPR制備的噴施藥液,其特征在于:其中植物免疫激活蛋白HrpNEccPR的含量為18-100mg/L。

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