本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及噁二唑類(lèi)衍生物、其制備方法及其在醫(yī)藥研究上的應(yīng)用，本發(fā)明公開(kāi)了噁二唑類(lèi)衍生物作為IDO抑制劑，用于治療具有IDO介導(dǎo)的色氨酸代謝途徑病理學(xué)特征的疾病，所述的疾病包括癌癥、阿爾茨海默病、自身免疫性疾病、抑郁癥、焦慮癥、白內(nèi)障、心理障礙和艾滋病。
背景技術(shù)：
腫瘤生物治療是應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)及其相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)行腫瘤防治的新療法，因其安全、有效、不良反應(yīng)低等特點(diǎn)，成為繼手術(shù)、放療、化療之后腫瘤治療的第四種模式(Clin Cancer Res,1997；3:2623-2629)，其通過(guò)調(diào)動(dòng)宿主的天然防御機(jī)制，比如抑制IDO介導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸機(jī)制，或給予天然產(chǎn)生的靶向性很強(qiáng)的物質(zhì)來(lái)獲得抗腫瘤的效應(yīng)。
吲哚胺2,3-雙加氧酶(Indoleamine-pyrrole-2,3-dioxygenase，IDO)是一種含鐵血紅素單體蛋白，由403個(gè)氨基酸殘基組成，包括兩個(gè)折疊的α-螺旋結(jié)構(gòu)域，大結(jié)構(gòu)域包含催化口袋，底物可在催化口袋內(nèi)與IDO發(fā)生疏水等作用(Int J Biochem Cell Biol.2007；39(12):2167-72)。在哺乳動(dòng)物中，有兩種基因編碼的非相關(guān)的含有血紅素的酶可以催化色氨酸的氧化降解：IDO和色氨酸2,3-雙加氧酶(TDO)。每種酶催化相同的反應(yīng)：在犬尿氨酸路徑的第一個(gè)限速步驟色氨酸分解代謝中促進(jìn)吲哚環(huán)的2,3-雙鍵的氧化分解。TDO的表達(dá)主要限于肝臟，似乎作為一個(gè)自我平衡或“管家”基因，無(wú)法被免疫系統(tǒng)的信號(hào)所誘導(dǎo)或調(diào)解(Nat Rev Immunol.2004；4(10):762-74)。IDO是催化色氨酸轉(zhuǎn)化為甲酰犬尿氨酸的酶，廣泛分布在人和其他哺乳動(dòng)物(兔、鼠)除肝臟以外的組織中，是肝臟以外唯一可催化色氨酸分解代謝的限速酶，而色氨酸是細(xì)胞維持活化和增殖所必需的氨基酸，也是構(gòu)成蛋白質(zhì)不可缺少的重要成分(Adv Exp Med Biol.2003；527:455-63、Biochim Biophys Acta.2001；1527(3):167-75)。IDO與干擾素(interferon，IFN)、白細(xì)胞介素(interleukin，IL)、腫瘤壞死因子等多種細(xì)胞因子關(guān)系密切，它們?cè)谝欢l件下可激活I(lǐng)DO(J Psychiatry Neurosci.2004；29(1):11–17、Med Hypotheses.2003；61(5-6):519-25)。而T-細(xì)胞的細(xì)胞周期中存在一個(gè)對(duì)色氨酸水平非常敏感的調(diào)節(jié)點(diǎn)，一方面，IDO使局部色氨酸耗竭，致使T-細(xì)胞停滯于G1期中期，從而抑制了T細(xì)胞的增殖；另一方面，IDO催化色氨酸代謝產(chǎn)生的主要產(chǎn)物犬尿素由氧自由基介導(dǎo)引起細(xì)胞內(nèi)氧化劑和抗氧化劑改變而誘導(dǎo)T-細(xì)胞凋亡，這是存在于機(jī)體的固有的免疫抑制機(jī)制。目前大量研究表明IDO在白血病細(xì)胞中較高表達(dá)，使局部T細(xì)胞增殖受抑，抑制T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，使T-細(xì)胞活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受阻，從而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞逃逸免疫系統(tǒng)的攻擊。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)大多數(shù)人類(lèi)腫瘤組成性地表達(dá)IDO(J Exp Med.2002；196(4):459-68、Nat Med.2003；9(10):1269-74、Trends Mol Med.2004；10(1):15-8)。因此，IDO是一個(gè)具潛力的癌癥免疫治療的靶標(biāo)。
公開(kāi)的選擇性抑制IDO的抑制劑專(zhuān)利申請(qǐng)包括WO2004094409、WO2006122150、WO2007075598、WO200409387、WO2008147283、WO2013174947、WO2008075991、WO2004093871、WO2005051321、WO2006056304、WO2010005958和WO2014066834等。
IDO抑制劑作為藥物在醫(yī)藥行業(yè)具有良好的應(yīng)用前景，但是目前尚未找到很好的IDO抑制劑可作為上市藥物，為了達(dá)到更好的腫瘤治療效果的目的，更好的滿足市場(chǎng)需求，發(fā)明人希望能開(kāi)發(fā)出新一代的高效低毒的選擇性IDO抑制劑。本發(fā)明將提供一種新型結(jié)構(gòu)的選擇性IDO抑制劑，并發(fā)現(xiàn)具有此類(lèi)結(jié)構(gòu)的化合物表現(xiàn)出優(yōu)異的效果和作用，特別是優(yōu)異的藥代吸收活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用的鹽，
其中：
選自順式異構(gòu)體、反式異構(gòu)體和順?lè)串悩?gòu)體的混合物；
環(huán)A選自環(huán)烷基、雜環(huán)基和雜芳基；
環(huán)B為芳基或雜芳基；
R1相同或不同，且各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、氰基、氨基、鹵素、烯基、炔基、羥基、硝基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基各自獨(dú)立地任選進(jìn)一步被選自羥基、鹵素、氨基、氰基、烷基、烷氧基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基中的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代；
R2相同或不同，且各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、羥基、氨基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、-OR3、-C(O)R3、-C(O)OR3、-S(O)mR3、-C(O)NR3R4、-OC(O)NR3R4、-NR3R4、-NR3C(O)R4和-NR3S(O)mR4，其中所述的烷基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基各自獨(dú)立地任選被選自烷基、鹵素、氨基、硝基、氰基、羥基、羥烷基、烷氧基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-NR5R6、-C(O)NR5R6、-NR5C(O)R6和-NR5S(O)mR6中的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代；
R3和R4相同或不同，且各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、羥基、氨基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-NR5R6、-C(O)NR5R6、-NR5C(O)R6和-NR5S(O)mR6，其中所述的烷基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基各自獨(dú)立地任選被選自烷基、鹵代烷基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、烷氧基、羥烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基中的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代；
R5和R6相同或不同，且各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、羥基、氨基、羧酸酯基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中所述的烷基、氨基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基各自獨(dú)立地任選被選自烷基、鹵素、羥基、氨基、羧酸酯基、硝基、氰基、烷氧基、羥烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基中的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代；
m為0、1或2；
n為0、1、2、3、4或5；且
x為0、1、2、3、4或5。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中環(huán)B為芳基，優(yōu)選苯基。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中R1為氫原子或鹵素。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中R2選自氫原子、烷基、羥基、氨基、-C(O)R3、-S(O)mR3、-OC(O)NR3R4、-NR3C(O)R4和-NR3S(O)mR4；R3、R4和m如通式(I)中所定義。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中n為1或2。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中x為0或1。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(II)所示的化合物：
或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用鹽，
其中：
選自順式異構(gòu)體、反式異構(gòu)體和順?lè)串悩?gòu)體的混合物；
G選自C、O、N、S(O)m和S；
R2相同或不同，且各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、羥基、氨基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、-OR3、-C(O)R3、-C(O)OR3、-S(O)mR3、-C(O)NR3R4、-OC(O)NR3R4、-NR3R4、-NR3C(O)R4和-NR3S(O)mR4，其中所述的烷基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基各自獨(dú)立地任選被選自烷基、鹵素、氨基、硝基、氰基、羥基、羥烷基、烷氧基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-NR5R6、-C(O)NR5R6、-NR5C(O)R6和-NR5S(O)mR6中的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代；
x為0、1或2；
y為0、1、2或3；
z為0、1、2或3；且
環(huán)B、R1、R3～R6、m和n如通式(I)中所定義。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中環(huán)A選自環(huán)己基、茚滿基、吡唑基、環(huán)戊基、吡喃基、環(huán)丁基、哌啶基、氮雜環(huán)丁烷基和吡咯烷基。
通式(I)的典型化合物包括但不限于：
或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用鹽。
本發(fā)明還提供一種制備通式(I)所示化合物的中間體，該中間體為通式(III)所示化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用鹽，
其中：
環(huán)B選自芳基和雜芳基；
R1相同或不同，且各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、氰基、氨基、鹵素、烯基、炔基、羥基、硝基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基各自獨(dú)立地任選被選自羥基、鹵素、氨基、氰基、烷基、烷氧基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基中的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代；
n為0、1、2、3、4或5。
本發(fā)明還提供一種制備通式(I)所示化合物的中間體，該中間體為通式(V)所示化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用鹽，
其中：
環(huán)A、環(huán)B、R1、R2、x和n如通式(I)中所定義。
本發(fā)明還提供一種制備通式(I)所示化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用鹽的方法，該方法包括：
通式(III)化合物在室溫堿性條件下與通式(VI)反應(yīng)，得到通式(I)化合物；
其中：
環(huán)A、環(huán)B、R1、R2、x和n如通式(I)中所定義。
本發(fā)明還提供一種制備通式(I)所示化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用鹽的方法，該方法包括：
通式(V)化合物在室溫堿性條件下開(kāi)環(huán)，得到通式(I)化合物；
其中：
環(huán)A、環(huán)B、R1、R2、x和n如通式(I)中所定義。
本發(fā)明的另一方面涉及一種藥物組合物，其含有治療有效劑量的通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或可藥用的鹽，以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。本發(fā)明還涉及一種制備上述組合物的方法，其包括將通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或其混合物形式、或其可藥用的鹽與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑相混合。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用鹽，或包含其的藥物組合物在制備用于預(yù)防和/或治療預(yù)防具有IDO介導(dǎo)的色氨酸代謝途徑的病理學(xué)特征的疾病的藥物中的用途。IDO抑制劑可以用于心臟障礙的抑制以及治療其他具有IDO介導(dǎo)的色氨酸代謝途徑的病理學(xué)特征的疾病，這些疾病包括諸如AIDS等病毒的感染，諸如艾滋病、萊姆病和鏈球菌感染等細(xì)胞感染、骨髓增生異常綜合征、神經(jīng)退行性病癥(例如阿爾茨海默病、亨廷頓病和帕金森病)、自身免疫性疾病、抑郁癥、焦慮癥、心理障礙、癌癥(包括T細(xì)胞白血病和結(jié)腸癌)、眼睛疾病(例如白內(nèi)障和與年齡相關(guān)的黃化)，其中所述的癌癥可以選自乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、直腸癌、胰腺癌、腦癌、皮膚癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、腎癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、輸卵管腫瘤、卵巢瘤、腹膜腫瘤、IV期黑色素瘤、實(shí)體瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)膠母細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞癌、乳突腎性瘤、頭頸部腫瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小細(xì)胞肺癌。
本發(fā)明還涉及通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用鹽，或包含其的藥物組合物，其用于預(yù)防和/或治療預(yù)防具有IDO介導(dǎo)的色氨酸代謝途徑的病理學(xué)特征的疾病。這些疾病包括諸如AIDS等病毒的感染，諸如艾滋病、萊姆病和鏈球菌感染等細(xì)胞感染、骨髓增生異常綜合征、神經(jīng)退行性病癥(例如阿爾茨海默病、亨廷頓病和帕金森病)、自身免疫性疾病、抑郁癥、焦慮癥、心理障礙、癌癥(包括T細(xì)胞白血病和結(jié)腸癌)、眼睛疾病(例如白內(nèi)障和與年齡相關(guān)的黃化)，其中所述的癌癥可以選自乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、直腸癌、胰腺癌、腦癌、皮膚癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、腎癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、輸卵管腫瘤、卵巢瘤、腹膜腫瘤、IV期黑色素瘤、實(shí)體瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)膠母細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞癌、乳突腎性瘤、頭頸部腫瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小細(xì)胞肺癌。
本發(fā)明還涉及一種治療預(yù)防和/或治療預(yù)防具有IDO介導(dǎo)的色氨酸代謝途徑的病理學(xué)特征的疾病的方法，其包括向患者施用治療有效劑量的通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用鹽，或包含其的藥物組合物。所述疾病包括諸如AIDS等病毒的感染，諸如艾滋病、萊姆病和鏈球菌感染等細(xì)胞感染、骨髓增生異常綜合征、神經(jīng)退行性病癥(例如阿爾茨海默病、亨廷頓病和帕金森病)、自身免疫性疾病、抑郁癥、焦慮癥、心理障礙、癌癥(包括T細(xì)胞白血病和結(jié)腸癌)、眼睛疾病(例如白內(nèi)障和與年齡相關(guān)的黃化)，其中所述的癌癥可以選自乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、直腸癌、胰腺癌、腦癌、皮膚癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、腎癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、輸卵管腫瘤、卵巢瘤、腹膜腫瘤、IV期黑色素瘤、實(shí)體瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)膠母細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞癌、乳突腎性瘤、頭頸部腫瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小細(xì)胞肺癌。
本發(fā)明另一方面涉及一種治療癌癥的方法，該方法包括向患者施用治療有效劑量的本發(fā)明的通式(I)所述的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用鹽。該方法顯示出突出的療效和較少的副作用，其中所述的癌癥可以選自乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、直腸癌、胰腺癌、腦癌、皮膚癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、腎癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、輸卵管腫瘤、卵巢瘤、腹膜腫瘤、IV期黑色素瘤、實(shí)體瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)膠母細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞癌、乳突腎性瘤、頭頸部腫瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小細(xì)胞肺癌，優(yōu)選為輸卵管腫瘤、腹膜腫瘤、IV期黑色素瘤、骨髓瘤和乳腺癌，更優(yōu)選為乳腺癌。
含活性成分的藥物組合物可以是適用于口服的形式，例如片劑、糖錠劑、錠劑、水或油混懸液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑?？砂凑毡绢I(lǐng)域任何已知制備藥用組合物的方法制備口服組合物，此類(lèi)組合物可含有一種或多種選自以下的成分：甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以提供悅目和可口的藥用制劑。片劑含有活性成分和用于混合的適宜制備片劑的無(wú)毒的可藥用的賦形劑。這些賦形劑可以是惰性賦形劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒劑和崩解劑，例如微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、玉米淀粉或藻酸；粘合劑，例如淀粉、明膠、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯膠；和潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。這些片劑可以不包衣或可通過(guò)掩蓋藥物的味道或在胃腸道中延遲崩解和吸收，因而在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)提供緩釋作用的已知技術(shù)將其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物質(zhì)，例如羥丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素，或延長(zhǎng)時(shí)間物質(zhì)例如乙基纖維素、醋酸丁酸纖維素。
也可用其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合的硬明膠膠囊，或其中活性成分與水溶性載體例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合的軟明膠膠囊提供口服制劑。
水懸浮液含有活性物質(zhì)和用于混合的適宜制備水懸浮液的賦形劑。此類(lèi)賦形劑是懸浮劑，例如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯膠；分散劑或濕潤(rùn)劑可以是天然產(chǎn)生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物，例如十七碳亞乙基氧基鯨蠟醇(heptadecaethyleneoxy cetanol)，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的縮合產(chǎn)物，例如聚環(huán)氧乙烷山梨醇單油酸酯，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如聚環(huán)氧乙烷脫水山梨醇單油酸酯。水混懸液也可以含有一種或多種防腐劑例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。
油混懸液可通過(guò)使活性成分懸浮于植物油如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，或礦物油例如液體石蠟中配制而成。油懸浮液可含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可加入上述的甜味劑和矯味劑，以提供可口的制劑?？赏ㄟ^(guò)加入抗氧化劑例如丁羥茴醚或α-生育酚保存這些組合物。
通過(guò)加入水可使適用于制備水混懸也的可分散粉末和顆粒提供活性成分和用于混合的分散劑或濕潤(rùn)劑、懸浮劑或一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或濕潤(rùn)劑和懸浮劑可說(shuō)明上述的例子。也可加入其他賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。通過(guò)加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組合物。
本發(fā)明的藥物組合物也可以是水包油乳劑的形式。油相可以是植物油例如橄欖油或花生油，或礦物油例如液體石蠟或其混合物。適宜的乳化劑可以是天然產(chǎn)生的磷脂，例如大豆卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯例如山梨坦單油酸酯，和所述偏酯和環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚環(huán)氧乙烷山梨醇單油酸酯。乳劑也可以含有甜味劑、矯味劑、防腐劑和抗氧劑?？捎锰鹞秳├绺视汀⒈?、山梨醇或蔗糖配制糖漿和酏劑。此類(lèi)制劑也可含有緩和劑、防腐劑、著色劑和抗氧劑。
本發(fā)明的藥物組合物可以是無(wú)菌注射水溶液形式?？梢允褂玫目山邮艿娜苊交蛉軇┯兴⒘指袷弦汉偷葷B氯化鈉溶液。無(wú)菌注射制劑可以是其中活性成分溶于油相的無(wú)菌注射水包油微乳。例如將活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后將油溶液加入水和甘油的混合物中處理形成微乳。可通過(guò)局部大量注射，將注射液或微乳注入患者的血流中?；蛘?，最好按可保持本發(fā)明化合物恒定循環(huán)濃度的方式給予溶液和微乳。為保持這種恒定濃度，可使用連續(xù)靜脈內(nèi)遞藥裝置。這種裝置的實(shí)例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型靜脈注射泵。
藥物組合物可以是用于肌內(nèi)和皮下給藥的無(wú)菌注射水或油混懸液的形式?？砂匆阎夹g(shù)，用上述那些適宜的分散劑或濕潤(rùn)劑和懸浮劑配制該混懸液。無(wú)菌注射制劑也可以是在腸胃外可接受的無(wú)毒稀釋劑或溶劑中制備的無(wú)菌注射溶液或混懸液，例如1,3-丁二醇中制備的溶液。此外，可方便地用無(wú)菌固定油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，可使用包括合成甘油單或二酯在內(nèi)的任何調(diào)和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制備注射劑。
可按用于直腸給藥的栓劑形式給予本發(fā)明化合物?？赏ㄟ^(guò)將藥物與在普通溫度下為固體但在直腸中為液體，因而在直腸中會(huì)溶化而釋放藥物的適宜的無(wú)刺激性賦形劑混合來(lái)制備這些藥物組合物。此類(lèi)物質(zhì)包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，藥物的給藥劑量依賴(lài)于多種因素，包括但并非限定于以下因素：所用具體化合物的活性、患者的年齡、患者的體重、患者的健康狀況、患者的行被、患者的飲食、給藥時(shí)間、給藥方式、排泄的速率、藥物的組合等；另外，最佳的治療方式如治療的模式、通式化合物(I)的日用量或可藥用的鹽的種類(lèi)可以根據(jù)傳統(tǒng)的治療方案來(lái)驗(yàn)證。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明
除非有相反陳述，在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中使用的術(shù)語(yǔ)具有下述含義。
術(shù)語(yǔ)“烷基”指飽和脂肪族烴基團(tuán)，其為包含1至20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)，優(yōu)選含有1至12個(gè)碳原子的烷基，更優(yōu)選含有1至6個(gè)碳原子的烷基。非限制性實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構(gòu)體等。更優(yōu)選的是含有1至6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基，非限制性實(shí)施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基可以在任何可使用的連接點(diǎn)上被取代，所述取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，其獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、環(huán)烷硫基、雜環(huán)烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
術(shù)語(yǔ)“亞烷基”是指烷基的一個(gè)氫原子進(jìn)一步被取代，例如：“亞甲基”指-CH2-、“亞乙基”指-(CH2)2-、“亞丙基”指-(CH2)3-、“亞丁基”指-(CH2)4-等。
術(shù)語(yǔ)“烯基”指由至少由兩個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳-碳雙鍵組成的如上定義的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，其獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、環(huán)烷硫基、雜環(huán)烷硫基。
術(shù)語(yǔ)“炔基”指分子中含有C≡C的不包含炔成為炔烴，列如：乙炔、丙炔、1-丁炔、2-丁炔、3-甲基-1-丁炔或2-戊炔等。炔基可以是取代的或非取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，其獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、環(huán)烷硫基、雜環(huán)烷硫基。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”指飽和或部分不飽和單環(huán)或多環(huán)環(huán)狀烴取代基，環(huán)烷基環(huán)包含3至20個(gè)碳原子，優(yōu)選包含3至12個(gè)碳原子，更優(yōu)選包含3至6個(gè)碳原子。單環(huán)環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚基、環(huán)庚三烯基、環(huán)辛基等；多環(huán)環(huán)烷基包括螺環(huán)、稠環(huán)和橋環(huán)的環(huán)烷基，優(yōu)選為茚滿基。
術(shù)語(yǔ)“螺環(huán)烷基”指5至20元的單環(huán)之間共用一個(gè)碳原子(稱(chēng)螺原子)的多環(huán)基團(tuán)，其可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。優(yōu)選為6至14元，更優(yōu)選為7至10元。根據(jù)環(huán)與環(huán)之間共用螺原子的數(shù)目將螺環(huán)烷基分為單螺環(huán)烷基、雙螺環(huán)烷基或多螺環(huán)烷基，優(yōu)選為單螺環(huán)烷基和雙螺環(huán)烷基。更優(yōu)選為4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元單螺環(huán)烷基。螺環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括：
術(shù)語(yǔ)“稠環(huán)烷基”指5至20元，系統(tǒng)中的每個(gè)環(huán)與體系中的其他環(huán)共享毗鄰的一對(duì)碳原子的全碳多環(huán)基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。優(yōu)選為6至14元，更優(yōu)選為7至10元。根據(jù)組成環(huán)的數(shù)目可以分為雙環(huán)、三環(huán)、四環(huán)或多環(huán)稠環(huán)烷基，優(yōu)選為雙環(huán)或三環(huán)，更優(yōu)選為5元/5元或5元/6元雙環(huán)烷基。稠環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括：
術(shù)語(yǔ)“橋環(huán)烷基”指5至20元，任意兩個(gè)環(huán)共用兩個(gè)不直接連接的碳原子的全碳多環(huán)基團(tuán)，其可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。優(yōu)選為6至14元，更優(yōu)選為7至10元。根據(jù)組成環(huán)的數(shù)目可以分為雙環(huán)、三環(huán)、四環(huán)或多環(huán)橋環(huán)烷基，優(yōu)選為雙環(huán)、三環(huán)或四環(huán)，更有選為雙環(huán)或三環(huán)。橋環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括：
所述環(huán)烷基環(huán)可以稠合于芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基環(huán)上，其中與母體結(jié)構(gòu)連接在一起的環(huán)為環(huán)烷基，非限制性實(shí)例包括茚基、四氫萘基、苯并環(huán)庚烷基等。環(huán)烷基可以是任選取代的或非取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，其獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、環(huán)烷硫基、雜環(huán)烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”指飽和或部分不飽和單環(huán)或多環(huán)環(huán)狀烴取代基，其包含3至20個(gè)環(huán)原子，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子為選自氮、氧或S(O)m(其中m是整數(shù)0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環(huán)部分，其余環(huán)原子為碳。優(yōu)選包含3至12個(gè)環(huán)原子，其中1～4個(gè)是雜原子；最優(yōu)選包含3至8個(gè)環(huán)原子，其中1～3個(gè)是雜原子；最優(yōu)選包含5至6個(gè)環(huán)原子，其中1～2或1～3個(gè)是雜原子。單環(huán)雜環(huán)基的非限制性實(shí)例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫咪唑基、二氫呋喃基、二氫吡唑基、二氫吡咯基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌嗪基、吡喃基、氮雜環(huán)丁烷基等，優(yōu)選1、2、5-噁二唑基、吡喃基、哌啶基、氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基或嗎啉基。多環(huán)雜環(huán)基包括螺環(huán)、稠環(huán)和橋環(huán)的雜環(huán)基。
術(shù)語(yǔ)“螺雜環(huán)基”指5至20元的單環(huán)之間共用一個(gè)原子(稱(chēng)螺原子)的多環(huán)雜環(huán)基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子為選自氮、氧或S(O)m(其中m是整數(shù)0至2)的雜原子，其余環(huán)原子為碳。其可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。優(yōu)選為6至14元，更優(yōu)選為7至10元。根據(jù)環(huán)與環(huán)之間共用螺原子的數(shù)目將螺雜環(huán)基分為單螺雜環(huán)基、雙螺雜環(huán)基或多螺雜環(huán)基，優(yōu)選為單螺雜環(huán)基和雙螺雜環(huán)基。更優(yōu)選為4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元單螺雜環(huán)基。螺雜環(huán)基的非限制性實(shí)例包括：
術(shù)語(yǔ)“稠雜環(huán)基”指5至20元，系統(tǒng)中的每個(gè)環(huán)與體系中的其他環(huán)共享毗鄰的一對(duì)原子的多環(huán)雜環(huán)基團(tuán)，一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子為選自氮、氧或S(O)m(其中m是整數(shù)0至2)的雜原子，其余環(huán)原子為碳。優(yōu)選為6至14元，更優(yōu)選為7至10元。根據(jù)組成環(huán)的數(shù)目可以分為雙環(huán)、三環(huán)、四環(huán)或多環(huán)稠雜環(huán)基，優(yōu)選為雙環(huán)或三環(huán)，更優(yōu)選為5元/5元或5元/6元雙環(huán)稠雜環(huán)基。稠雜環(huán)基的非限制性實(shí)例包括：
術(shù)語(yǔ)“橋雜環(huán)基”指5至14元，任意兩個(gè)環(huán)共用兩個(gè)不直接連接的原子的多環(huán)雜環(huán)基團(tuán)，其可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子為選自氮、氧或S(O)m(其中m是整數(shù)0至2)的雜原子，其余環(huán)原子為碳。優(yōu)選為6至14元，更優(yōu)選為7至10元。根據(jù)組成環(huán)的數(shù)目可以分為雙環(huán)、三環(huán)、四環(huán)或多環(huán)橋雜環(huán)基，優(yōu)選為雙環(huán)、三環(huán)或四環(huán)，更有選為雙環(huán)或三環(huán)。橋雜環(huán)基的非限制性實(shí)例包括：
所述雜環(huán)基環(huán)可以稠合于芳基、雜芳基或環(huán)烷基環(huán)上，其中與母體結(jié)構(gòu)連接在一起的環(huán)為雜環(huán)基，其非限制性實(shí)例包括：
等。
雜環(huán)基可以是任選取代的或非取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，其獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、環(huán)烷硫基、雜環(huán)烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
術(shù)語(yǔ)“芳基”指具有共軛的π電子體系的6至14元全碳單環(huán)或稠合多環(huán)(也就是共享毗鄰碳原子對(duì)的環(huán))基團(tuán)，優(yōu)選為6至10元，例如苯基和萘基。更優(yōu)選苯基。所述芳基環(huán)可以稠合于雜芳基、雜環(huán)基或環(huán)烷基環(huán)上，其中與母體結(jié)構(gòu)連接在一起的環(huán)為芳基環(huán)，其非限制性實(shí)例包括：
芳基可以是取代的或非取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，其獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、環(huán)烷硫基、雜環(huán)烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”指包含1至4個(gè)雜原子、5至14個(gè)環(huán)原子的雜芳族體系，其中雜原子選自氧、硫和氮。雜芳基優(yōu)選為5至10元，含1至3個(gè)雜原子；更優(yōu)選為5元或6元，含1至2個(gè)雜原子；優(yōu)選例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，優(yōu)選為咪唑基、噻唑基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更有選吡唑基或噻唑基。所述雜芳基環(huán)可以稠合于芳基、雜環(huán)基或環(huán)烷基環(huán)上，其中與母體結(jié)構(gòu)連接在一起的環(huán)為雜芳基環(huán)，其非限制性實(shí)例包括：
雜芳基可以是任選取代的或非取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，其獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、環(huán)烷硫基、雜環(huán)烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的環(huán)烷基)，其中烷基、環(huán)烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實(shí)例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基、環(huán)己氧基。烷氧基可以是任選取代的或非取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，其獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷氧基、環(huán)烷硫基、雜環(huán)烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”指被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的烷基，其中烷基如上所定義。
術(shù)語(yǔ)“鹵代烷氧基”指被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定義。
術(shù)語(yǔ)“羥烷基”指被羥基取代的烷基，其中烷基如上所定義。
術(shù)語(yǔ)“羥基”指-OH基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”指氟、氯、溴或碘。
術(shù)語(yǔ)“氨基”指-NH2。
術(shù)語(yǔ)“氰基”指-CN。
術(shù)語(yǔ)“硝基”指-NO2。
術(shù)語(yǔ)“氧代基”指＝O。
術(shù)語(yǔ)“羰基”指C＝O。
術(shù)語(yǔ)“羧基”指-C(O)OH。
術(shù)語(yǔ)“異氰酸基”指-NCO。
術(shù)語(yǔ)“肟基”指＝N-OH。
術(shù)語(yǔ)“巰基”指-SH。
術(shù)語(yǔ)“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或-C(O)O(環(huán)烷基)，其中烷基、環(huán)烷基如上所定義。
術(shù)語(yǔ)“酰鹵”指含有-C(O)-鹵素的基團(tuán)的化合物。
“任選”或“任選地”意味著隨后所描述的事件或環(huán)境可以但不必發(fā)生，該說(shuō)明包括該事件或環(huán)境發(fā)生或不發(fā)生的場(chǎng)合。例如，“任選被烷基取代的雜環(huán)基團(tuán)”意味著烷基可以但不必須存在，該說(shuō)明包括雜環(huán)基團(tuán)被烷基取代的情形和雜環(huán)基團(tuán)不被烷基取代的情形。
“取代的”指基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)氫原子，優(yōu)選為最多5個(gè)，更優(yōu)選為1～3個(gè)氫原子彼此獨(dú)立地被相應(yīng)數(shù)目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學(xué)位置，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠在不付出過(guò)多努力的情況下確定(通過(guò)實(shí)驗(yàn)或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的氨基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結(jié)合時(shí)可能是不穩(wěn)定的。
“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學(xué)上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學(xué)組分的混合物，以及其他組分例如生理學(xué)/可藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進(jìn)對(duì)生物體的給藥，利于活性成分的吸收進(jìn)而發(fā)揮生物活性。
“可藥用鹽”是指本發(fā)明化合物的鹽，這類(lèi)鹽用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)時(shí)具有安全性和有效性，且具有應(yīng)有的生物活性。
本發(fā)明中“X選自A、B、或C”、“X選自A、B和C”、“X為A、B或C”、“X為A、B和C”等不同用語(yǔ)均表達(dá)了相同的意義，即表示X可以是A、B、C中任意一種或幾種。
本發(fā)明化合物的合成方法
為了完成本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
本發(fā)明通式(I)所示的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或其可藥用的鹽的制備方法，包括以下步驟：
在加熱酸性條件下，通式(A)化合物被氧化得到通式(III)化合物；得到的通式(III)化合物在室溫堿性條件下與通式(VI)反應(yīng)得到通式(I)化合物；或者得到的通式(III)化合物在室溫堿性條件下與通式(VI)反應(yīng)得到通式(V)化合物；得到的通式(V)化合物在堿性條件下開(kāi)環(huán)得到通式(I)化合物。
提供堿性條件的試劑包括有機(jī)堿和無(wú)機(jī)堿類(lèi)，所述的有機(jī)堿類(lèi)包括但不限于三乙胺、吡啶、N,N-二異丙基乙胺、正丁基鋰、二異丙基氨基鋰、醋酸鉀、叔丁醇鈉或叔丁醇鉀，所述的無(wú)機(jī)堿類(lèi)包括但不限于氫化鈉、磷酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀或碳酸銫。提供堿性條件的試劑優(yōu)選為氫氧化鈉。
所用的氧化劑包括但不限于：二氧化硒、雙氧水、高錳酸鉀或二氧化錳，優(yōu)選30％的雙氧水溶液。
提供酸性條件的試劑包括但不限于三氟乙酸、甲酸、乙酸、鹽酸、鹽酸二氧六環(huán)、硫酸或甲磺酸，優(yōu)選三氟乙酸。
上述反應(yīng)優(yōu)選在溶劑中進(jìn)行，所用溶劑包括但不限于：醋酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氫呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亞砜、1,4-二氧六環(huán)、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物；
其中：
環(huán)A、環(huán)B、R1、R2、x和n如通式(I)中所述定義。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但這些實(shí)施例并非限制著本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例
化合物的結(jié)構(gòu)是通過(guò)核磁共振(NMR)或質(zhì)譜(MS)來(lái)確定的。NMR的測(cè)定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測(cè)定溶劑為氘代二甲基亞砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，內(nèi)標(biāo)為四甲基硅烷(TMS)，化學(xué)位移是以10-6(ppm)作為單位給出。
MS的測(cè)定用FINNIGAN LCQAd(ESI)質(zhì)譜儀(生產(chǎn)商：Thermo,型號(hào)：Finnigan LCQ advantage MAX)。
HPLC的測(cè)定使用安捷倫1200DAD高壓液相色譜儀(Sunfire C18 150×4.6mm色譜柱)和Waters 2695-2996高壓液相色譜儀(Gimini C18 150×4.6mm色譜柱)。
激酶平均抑制率及IC50值的測(cè)定用NovoStar酶標(biāo)儀(德國(guó)BMG公司)。
薄層層析硅膠板使用煙臺(tái)黃海HSGF254或青島GF254硅膠板，薄層色譜法(TLC)使用的硅膠板采用的規(guī)格是0.15mm～0.2mm，薄層層析分離純化產(chǎn)物采用的規(guī)格是0.4mm～0.5mm硅膠板。
柱層析一般使用煙臺(tái)黃海200～300目硅膠為載體。
本發(fā)明的已知的起始原料可以采用或按照本領(lǐng)域已知的方法來(lái)合成，或可購(gòu)買(mǎi)自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organnics，Aldrich Chemical Company，韶遠(yuǎn)化學(xué)科技(Accela ChemBio Inc)、達(dá)瑞化學(xué)品等公司。
實(shí)施例中如無(wú)特殊說(shuō)明，反應(yīng)均在氬氣氛或氮?dú)夥障逻M(jìn)行。
氬氣氛或氮?dú)夥帐侵阜磻?yīng)瓶連接一個(gè)約1L容積的氬氣或氮?dú)鈿馇颉?/p>
氫氣氛是指反應(yīng)瓶連接一個(gè)約1L容積的氫氣氣球。
加壓氫化反應(yīng)使用Parr 3916EKX型氫化儀和清藍(lán)QL-500型氫氣發(fā)生器或HC2-SS型氫化儀。
氫化反應(yīng)通常抽真空，充入氫氣，反復(fù)操作3次。
微波反應(yīng)使用CEM Discover-S 908860型微波反應(yīng)器。
實(shí)施例中如無(wú)特殊說(shuō)明，反應(yīng)中的溶液是指水溶液。
實(shí)施例中如無(wú)特殊說(shuō)明，反應(yīng)的溫度為室溫。
室溫為最適宜的反應(yīng)溫度，溫度范圍是20℃～30℃。
實(shí)施例中的反應(yīng)進(jìn)程的監(jiān)測(cè)采用薄層色譜法(TLC)，反應(yīng)所使用的展開(kāi)劑的體系有：A：二氯甲烷和甲醇體系，B：正己烷和乙酸乙酯體系，C：石油醚和乙酸乙酯體系，D：丙酮，溶劑的體積比根據(jù)化合物的極性不同而進(jìn)行調(diào)節(jié)。
純化化合物采用的柱層析的洗脫劑的體系和薄層色譜法的展開(kāi)劑的體系包括：A：二氯甲烷和甲醇體系，B：正己烷和乙酸乙酯體系，C：正己烷、乙酸乙酯和二氯甲烷體系，D：石油醚和乙酸乙酯體系，E：乙酸乙酯，溶劑的體積比根據(jù)化合物的極性不同而進(jìn)行調(diào)節(jié)，也可以加入少量的三乙胺和酸性或堿性試劑等進(jìn)行調(diào)節(jié)。
實(shí)施例1
N-(3-氯苯基)-N'-羥基-4-(((1R,4R)-4-(氨磺?；被?環(huán)己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
第一步
4-(3-氯苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮1b
將3-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-氯苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮1a(2.0g，7.15mmol，采用專(zhuān)利申請(qǐng)“WO2006122150”公開(kāi)的方法制備而得)溶解于5mL三氟乙酸中，加入5mL 30％的過(guò)氧化氫溶液，升溫至45℃攪拌12小時(shí)。反應(yīng)液冷卻至25℃，加入20mL乙酸乙酯稀釋?zhuān)尤?0mL飽和硫代硫酸鈉溶液淬滅反應(yīng)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(15mL×2)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，殘余物用高效液相色譜法純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物1b(600mg，黃色油狀物)，產(chǎn)率40％。
MS m/z(LC-MS):279.0[M-30]
第二步
((1R,4R)-4-((4-(4-(3-氯苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯1c
將4-(3-氯苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮1b(135mg，0.433mmol)溶于3mL四氫呋喃中，加入((1r,4r)-4-氨基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(206mg，0.962mmol，上海畢得醫(yī)藥科技有限公司)，加入1.5mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液用1N鹽酸調(diào)節(jié)pH至2，用乙酸乙酯萃取(30mL)，合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物1c(50mg，黃色固體)，產(chǎn)物不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
MS m/z(LC-MS):475.2[M-1]
第三步
3-(4-(((1R,4R)-4-氨基環(huán)己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-氯苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮1d
將((1R,4R)-4-((4-(4-(3-氯苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯1c(50mg，0.1048mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入0.5mL三氟乙酸，攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物1d(60mg，黃色油狀物)，產(chǎn)物不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。MS m/z(LC-MS):377.1[M+1]
第四步
N-[4-({4-[4-(3-氯苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基}氨基)環(huán)己基]氨基磺酰胺1e
將粗品3-(4-(((1R,4R)-4-氨基環(huán)己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-氯苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮1d(60mg，0.105mmol)溶于2.5mL吡啶中，加入氨基磺酰胺(60mg，0.63mmol)，于130℃微波反應(yīng)15分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物1e(100mg，黃色固體)，產(chǎn)物不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
MS m/z(ESI):454.2[M-1]
第五步
N-(3-氯苯基)-N'-羥基-4-(((1R,4R)-4-(氨磺?；被?環(huán)己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒1
將粗品N-[4-({4-[4-(3-氯苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-y基}氨基)環(huán)己基]氨基磺酰胺1e(100mg，0.105mmol)溶于5mL四氫呋喃中，加入1mL 2N的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，用乙酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液至酸性，減壓濃縮，用高效液相色譜法純化所得殘留物，得標(biāo)題產(chǎn)物1(12mg，白色固體)，產(chǎn)率25％。
MS m/z(ESI):430.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.56(s,1H),8.94(s,1H),7.18(t,1H),6.94(dd,1H),6.83(m,1H),6.67(dd,1H),6.45-6.55(m,3H),6.01(d,1H),3.20-3.27(m,1H),3.05-3.10(m,1H),1.95-2.05(m,4H),1.23-1.32(m,4H)
實(shí)施例2
N-(3-溴-4-氟苯基-4-((2,3-二氫-1H-茚-2-基)氨基)-N'-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
第一步
4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮2b
將3-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮2a(13.0g，41.1mmol，采用專(zhuān)利申請(qǐng)“WO2014066834”公開(kāi)的方法制備而得)加入150mL三氟乙酸中，加入90mL雙氧水溶液(30％)，于45℃反應(yīng)48小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，冷卻，加入300mL飽和硫代硫酸鈉溶液和150mL乙酸乙酯，攪拌反應(yīng)20分鐘，用碘化鉀試紙檢測(cè)無(wú)過(guò)氧化物。分液，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物2b(4.5g，棕黃色固體)，產(chǎn)率30％。
MS m/z(LC-MS):342.9[M-30]
第二步
N-(3-溴-4-氟苯基-4-((2,3-二氫-1H-茚-2-基)氨基)-N'-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒2
將4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮2b(286mg，0.77mmol)，2,3-二氫-1H-茚-2-胺2c(123mg，0.922mmol)溶于5mL四氫呋喃中，加入0.924mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)4小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入20mL乙酸乙酯和5mL水，分液，水相用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物2(100mg，黃色固體)，產(chǎn)率30％。
MS m/z(ESI):432.3/434.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.44(s,1H),8.88(s,1H),7.25-7.27(m,2H),7.11-7.19(m,4H),6.77-6.80(m,1H),6.35-6.36(d,1H),4.28-4.33(m,1H),3.28-3.34(m,2H),2.9-2.95(m,2H).
實(shí)施例3
N-(3-溴-4-氟苯基-N'-羥基-4-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
將4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮2b(100mg，0.27mmol)，1-甲基-1H-吡唑-4-胺3a(26.1mg，0.27mmol)溶于5mL四氫呋喃中，加入32.4mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)1.5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入冰水中，用1N鹽酸調(diào)節(jié)pH至中性，用乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以洗脫劑體系A(chǔ)純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物3(10mg，黃色固體)，產(chǎn)率10％。
MS m/z(ESI):396.3/398.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.52(s,1H),9.02(s,1H),8.61-8.62(m,1H),7.79-7.80(m,1H),7.46-7.48(m,1H),7.17-7.19(m,1H),6.78-6.79(m,1H),5.75(s,1H),3.82(s,3H).
實(shí)施例4
N-(3-溴-4-氟苯基)-4-(環(huán)戊基氨基)-N'-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
將4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮2b(100mg，0.27mmol)，環(huán)戊烷胺4a(28mg，0.32mmol)溶于20mL四氫呋喃中，加入0.32mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入30mL水中，用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，有機(jī)相依次用飽和氯化銨溶液洗滌，飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物4(50mg，白色固體)，產(chǎn)率48.5％。MS m/z(ESI):384.3/386.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.43(s,1H),8.86(s,1H),7.10-7.20(m,2H),6.75-6.78(m,1H),6.08-6.09(m,1H),3.76-3.80(m,1H),1.89-1.98(m,2H),1.23-1.64(m,6H).
實(shí)施例5
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-(((1R,4R)-4-羥基環(huán)己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
將4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮2b(100mg，0.27mmol)，(1R,4R)-4-氨基環(huán)己醇5a(37.15mg，0.32mmol)溶于5mL四氫呋喃中，加入0.3mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入20mL飽和氯化銨溶液，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有機(jī)相，用飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以洗脫劑體系A(chǔ)純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5(20mg，淺黃色固體)，產(chǎn)率14.9％。
MS m/z(ESI):414.3/416.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.48(s,1H),8.88(s,1H),7.17-7.21(m,1H),7.10-7.13(m,1H),6.76-6.79(m,1H),5.98-6.00(m,1H),4.57-4.58(m,1H),3.43-3.46(m,1H),3.25-3.27(m,1H),1.99-2.01(m,2H),1.81-1.83(m,2H),1.23-1.32(m,4H)
實(shí)施例6
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((四氫-2H-吡喃-4-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
將4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮2b(100mg，0.27mmol)，四氫-2H-吡喃-4-胺6a(33mg，0.32mmol)溶于10mL四氫呋喃中，加入0.32mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入30mL水中，用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有機(jī)相，依次用飽和氯化銨溶液洗滌，飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物6(45mg，白色固體)，產(chǎn)率42.1％。
MS m/z(ESI):400.3/402.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.47(s,1H),8.89(s,1H),7.16-7.20(t,1H),7.10-7.12(m,1H),6.76-6.79(m,1H),6.15-6.16(m,1H),3.82-3.85(m,2H),3.48-3.54(m,1H),3.36-3.41(m,2H),1.91-1.94(m,2H),1.42-1.51(m,6H).
實(shí)施例7、8
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-(((1s,3s)-3-(氨磺?；被?環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒7
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-(((1r,3r)-3-(氨磺?；被?環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒8
第一步
(3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯7a
將2b(1.00g，2.69mmol)，3-氨基環(huán)丁烷甲酸叔丁酯(500mg，2.69mmol，采用公知的方法“ACS Medicinal Chemistry Letters,2014,5(6),700-705”制備而得)加入20mL四氫呋喃中，攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮反應(yīng)液，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物7a(1.0g，黃色固體)，產(chǎn)率72.7％。
第二步
3-(4-((3-氨基環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮7b
將7a(1.09g，1.95mmol)溶解于5mL 4M的鹽酸中，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和碳酸氫鈉溶液至pH為7，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物7b(643mg，黃色固體)，產(chǎn)品不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
第三步
N-(3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)丁基)氨磺?；被姿崾宥□?c
將粗品7b(138mg，0.34mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(9.2mg，0.092mmol)，滴加預(yù)制的5mL 2M的氯磺?；被姿崾宥□?0.1mL，0.36mmol，采用公知的方法“Bioorganic&Medicinal Chemistry,2014,22(22),6353-6359”制備而得)的二氯甲烷溶液，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入5mL水和20mL二氯甲烷，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物7c(150mg，黃色固體)，產(chǎn)率70％。
第四步
N-[3-({4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基}氨基)環(huán)丁基]氨基磺酰胺7d
將7c(150mg，0.255mmol)加入5mL 4N的鹽酸二氧六環(huán)中，攪拌反應(yīng)4小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物7d(98mg，黃色固體)，產(chǎn)率80％。
第五步
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-(((1S,3S)-3-(氨磺酰基氨基)環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒7
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-(((1R,3R)-3-(氨磺?；被?環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒8
將7d(98mg，0.2mmol)溶于4mL四氫呋喃中，加入0.5mL 2N的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用高效液相色譜法純化所得殘留物，得標(biāo)題產(chǎn)物7(20mg，無(wú)色粘稠物)，產(chǎn)率43.5％，標(biāo)題產(chǎn)物8(12mg，白色固體)，產(chǎn)率26.1％。
實(shí)施例7:
MS m/z(ESI):464.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.50(br,1H),8.93(s,1H),7.17-7.21(m,1H),7.11-7.14(m,1H),7.00-7.02(m,1H),6.76-6.78(m,1H),6.53(s,2H),6.44-6.45(m,1H),3.86-3.96(m,2H),2.27-2.33(m,4H).
實(shí)施例8:
MS m/z(ESI):464.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.55(br,1H),8.91(s,1H),7.17-7.21(m,1H),7.10-7.11(m,1H),6.89-6.91(m,1H),6.76-6.79(m,1H),6.55(s,2H),6.28-6.29(m,1H),3.63-3.64(m,1H),3.45-3.47(m,1H),2.70-2.72(m,2H),1.90-1.93(m,2H).
實(shí)施例9、10
N-(3-溴4-氟苯基)-N'-羥基-4-(((1S,3S)-3-羥基環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒9
N-(3-溴4-氟苯基)-N'-羥基-4-(((1R,3R)-3-羥基環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒10
第一步
4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((3-羥基環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮9a
將2b(42.7mg，0.12mmol)溶于四氫呋喃中，加入3-氨基環(huán)丁醇(20mg，0.23mmol)，加入0.69mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)15分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，分液，水相用1N鹽酸調(diào)節(jié)pH至7，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和氯化銨溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以展開(kāi)劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物9a(40mg，白色固體)，產(chǎn)率42.3％。
第二步
N-(3-溴4-氟苯基)-N'-羥基-4-(((1S,3S)-3-羥基環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒9
N-(3-溴4-氟苯基)-N'-羥基-4-(((1R,3R)-3-羥基環(huán)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒10
將9a(40mg，0.1mmol)溶于5mL四氫呋喃中，加入0.08mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，分液，水相用1N鹽酸調(diào)節(jié)pH至7，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化銨溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用高效液相色譜法純化所得殘留物，得標(biāo)題產(chǎn)物9(13mg，黃色固體)，產(chǎn)率69.4％，標(biāo)題產(chǎn)物10(3mg，黃色固體)，產(chǎn)率16.0％。
實(shí)施例9
MS m/z(ESI):387.3[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12-7.14(m,1H),7.07-7.03(t,1H),6.83-6.86(m,1H),4.41-4.44(t,1H),4.08-4.11(m,1H),2.29-2.32(t,4H).
實(shí)施例10
MS m/z(ESI):387.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.11-7.13(m,1H),7.03-7.07(t,1H),6.83-6.85(m,1H),3.97-4.04(m,1H),3.54-362(m,1H),2.67-2.83(m,2H),1.83-1.90(m,2H).
實(shí)施例11、12
4-(((1S,3S)-3-氨基環(huán)丁基)氨基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒11
4-(((1R,3R)-3-氨基環(huán)丁基)氨基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒12
將7b(100mg，0.2433mmol)溶于5mL四氫呋喃中，加入0.4mL 2M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用高效液相色譜法純化所得殘留物，得標(biāo)題產(chǎn)物11(11mg，粘稠固體)，產(chǎn)率23.5％，標(biāo)題產(chǎn)物12(7mg，粘稠固體)，產(chǎn)率15.0％。
實(shí)施例11
MS m/z(ESI):385.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.47(br,1H),8.96(s,1H),8.00-8.05(m,2H),7.17-7.21(m,1H),7.08-7.12(m,1H),6.73-6.79(m,1H),6.61-6.62(m,1H),4.18-4.24(m,1H),3.70-3.75(m,1H),2.30-2.45(m,4H).
實(shí)施例12
MS m/z(ESI):385.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.68(br,1H),8.93(s,1H),8.18-8.20(m,2H),7.17-7.23(m,1H),7.09-7.11(m,1H),6.77-6.79(m,1H),6.46-6.48(m,1H),3.77-3.82(m,1H),3.05-3.11(m,1H),2.67-2.69(m,2H),2.11-2.16(m,2H).
實(shí)施例13、14
(1S,3S)-3-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基甲脒基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)丁基甲基氨基甲酸酯13
(1R,3R)-3-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基甲脒基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)丁基甲基氨基甲酸酯14
第一步
3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)丁基(4-硝基苯基)碳酸酯13a
將9a(250mg，0.607mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入三乙胺(79.7mg，0.789mmol)，滴加預(yù)制的10mL的4-硝基苯基氯甲酸酯(146mg，0.728mmol)的二氯甲烷溶液，攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入2mL水淬滅反應(yīng)，用二氯甲烷萃取，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物13a(300mg，黃色固體)，產(chǎn)率86％。
第二步
3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)丁基甲基氨基甲酸酯13b
將13a(300mg，0.52mmol)加入10mL四氫呋喃中，加入2mL甲胺，攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物13b(300mg，黃色固體)，產(chǎn)品不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
第三步
(1S,3S)-3-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基甲脒基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)丁基甲基氨基甲酸酯13
(1R,3R)-3-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基甲脒基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)環(huán)丁基甲基氨基甲酸酯14
將粗品13b(300mg，0.14mmol)溶于2mL四氫呋喃中，加入0.5mL 2N的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液調(diào)節(jié)pH為7，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用高效液相色譜法純化所得殘留物，得標(biāo)題產(chǎn)物13(77.7mg，白色固體)，產(chǎn)率77.7％，標(biāo)題產(chǎn)物14(65mg，白色固體)，產(chǎn)率45.9％。
實(shí)施例13
MS m/z(ESI):443.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.40(br,1H),8.90(s,1H),7.16-7.20(m,1H),7.10-7.12(m,1H),6.98-6.99(m,1H),6.74-6.78(m,1H),6.47-6.48(m,1H),4.56-4.64(m,1H),3.58-3.68(m,1H),2.67-2.72(m,2H),2.54-2.55(m,3H),1.96-2.03(m,2H).
實(shí)施例14
MS m/z(ESI):443.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.40(br,1H),8.91(s,1H),7.16-7.21(m,1H),7.10-7.13(m,1H),7.04-7.07(m,1H),6.76-6.79(m,1H),6.53-6.54(m,1H),4.96-4.99(m,1H),4.01-4.06(m,1H),2.54-2.55(m,3H),2.31-2.34(m,4H).
實(shí)施例15
(R)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-氨磺?；量┩?3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒15
第一步
(R)-3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5--噁二唑-3-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯15b
將(S)-3-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯15a(150mg，0.81mmol，阿達(dá)瑪斯)溶于10mL四氫呋喃中，加入2b(200mg，0.54mmol)，1.08mL 1N氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入50mL飽和氯化銨溶液中，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物15b(230mg，白色固體)，產(chǎn)率83.9％。
第二步
(R)-4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-(吡咯烷-3-基氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮15c
將15b(230mg，0.45mmol)加入10mL二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物15c(200mg，黃色油狀物)，產(chǎn)品不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
第三步
(R)-((3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)吡咯烷-1-基)磺酰基)甲酸叔丁酯15d
將粗品15c(200mg，0.49mmol)溶于3mL二氯甲烷中，于0℃下加入三乙胺(148mg，1.47mmol)，加入氯磺酰基氨基甲酸叔丁酯(210mg，0.98mmol)，緩慢升至室溫，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入30mL二氯甲烷中，依次用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，飽和氯化銨溶液洗滌，飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系A(chǔ)純化所得殘余物，得標(biāo)題產(chǎn)物15d(80mg，白色固體)，產(chǎn)率27.8％
第四步
(R)-3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)吡咯烷-1-磺酰胺15e
將15d(80mg，0.14mmol)加入10mL二氯甲烷中，加入0.5mL三氟乙酸，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物15e(80mg，白色固體)，產(chǎn)品不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
第五步
(R)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-氨磺?；量┩?3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒15
將粗品15e(80mg，0.16mmol)溶于5mL四氫呋喃中，加入0.13mL 2.5N的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入30mL水中，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和氯化銨溶液洗滌，飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以展開(kāi)劑體系A(chǔ)純化所得殘余物，得標(biāo)題產(chǎn)物15(40mg，白色固體)，產(chǎn)率52.6％。
MS m/z(ESI):365.2[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.09-7.14(m,1H),7.03-7.07(t,1H),6.82-6.87(m,1H),4.20(s,1H),3.52-3.560(m,1H),3.39-3.42(m,2H),2.28-2.30(m,1H),2.02-2.03(m,1H),1.87(s,1H).
實(shí)施例16
(S)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-氨磺酰基吡咯烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒16
采用實(shí)施例15的合成路線，將原料15a替換為(R)-3-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，制得標(biāo)題產(chǎn)物16(15mg，灰白色固體)，收率：57％。
MS m/z(ESI):466.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.51(s,1H),8.91(s,1H),7.11-7.20(m,2H),6.78-6.84(m,3H),6.35-6.37(m,1H),4.08-4.12(m,1H),3.42-3.45(m,1H),3.17-3.23(m,3H),3.09-3.10(m,1H),2.18-2.21(m,1H),1.88-1.92(m,1H).
實(shí)施例17
4-((1-乙?；哙?4-基)氨基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒17
將1-(4-氨基哌啶-1-基)乙酮17a(46mg，0.32mmol)溶于10mL四氫呋喃中，加入2b(100mg，0.27mmol)，加入0.81mL 2.5N的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入30mL飽和氯化銨溶液中，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和氯化銨溶液洗滌，飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系A(chǔ)純化所得殘余物，得標(biāo)題產(chǎn)物17(40mg，白色固體)，產(chǎn)率33.9％。
MS m/z(ESI):443.4[M+1]
實(shí)施例18
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒18
第一步
3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸叔丁酯18b
將2b(500mg，1.34mmol)和3-氨基氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸叔丁酯18a(277.7mg，1.61mmol，韶遠(yuǎn))加入20mL四氫呋喃中，加入2.68mL 1N的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)16小時(shí)。將反應(yīng)液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物18b(400mg，白色固體)，產(chǎn)率60.0％。
第二步
3-(4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮18c
將18b(497mg，1mmol)加入2mL 1.4-二氧六環(huán)中，加入8mL 4M的鹽酸二氧六環(huán)，LC-MS監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完全。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和碳酸氫鈉溶液至pH為7，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物18c(329.7mg，白色固體)，產(chǎn)品不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
第三步
4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮18d
將粗品18c(39.7mg，0.1mmol)溶于3mL甲醇中，加入0.2mL N,N-二異丙基乙基胺，加入0.5mL乙酸，加入多聚甲醛(10mg，0.3mmol)，反應(yīng)10分鐘，加入氰基硼氫化鈉(9.4mg，0.15mmol)，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和碳酸氫鈉溶液，水，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系A(chǔ)純化所得殘余物，得標(biāo)題產(chǎn)物18d(15mg，白色固體)，產(chǎn)率36.5％
第四步
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
將18d(30mg，0.07mmol)溶于15mL四氫呋喃中，加入1mL 2.5N的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和氯化銨溶液，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系A(chǔ)純化所得殘余物，得標(biāo)題產(chǎn)物18(8mg，白色固體)，產(chǎn)率28.5％。
MS m/z(ESI):385.1[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.12-7.14(m,1H),7.04-7.08(m,1H),6.83-6.87(m,1H),4.48-4.51(m,1H),4.20-4.25(m,2H),4.01-4.05(m,2H),2.83(s,3H).
實(shí)施例19
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-氨磺?；s環(huán)丁烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒19
第一步
(3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-基)磺?；被姿崾宥□?9a
將18c(137.4mg，0.35mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(0.195mL，1.4mmol)，加入氯磺酰基氨基甲酸叔丁酯(75.5mg，0.35mml)，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入2mL甲醇，減壓濃縮，用薄層色譜法以展開(kāi)劑體系A(chǔ)純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物19a(100mg，白色固體)，產(chǎn)率49.6％。
第二步
3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-磺酰胺19b
將19a(100mg，0.17mmol)加入3mL 4N的鹽酸二氧六環(huán)中，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物19b(70mg，白色固體)，產(chǎn)品不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
第三步
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-氨磺?；s環(huán)丁烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒19
將粗品19b(70mg，0.147mmol)溶于5mL四氫呋喃中，加入1.5mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和氯化銨溶液，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以展開(kāi)劑體系A(chǔ)純化所得殘留物，得標(biāo)題產(chǎn)物19(12mg，白色固體)，產(chǎn)率18.1％。
MS m/z(ESI):450.1[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(s,1H),7.43-7.45(m,1H),7.18-7.21(m,2H),7.00-7.04(m,1H),6.81-6.85(m,1H),4.68(s,2H),3.75-3.81(m,1H),3.14-3.16(m,1H),2.90-2.95(m,1H),2.66-2.72(m,1H),2.51-2.52(m,1H).
實(shí)施例20
4-((1-乙?；s環(huán)丁烷-3-基)氨基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒20
第一步
3-(4-((1-乙?；s環(huán)丁烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮20a
將18c(29.7mg，0.1mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(30.4mg，0.3mmol)，反應(yīng)體系降溫至0℃，加入預(yù)制的1mL乙酸酐(10.2mg，0.1mmol)的二氯甲烷溶液，于0℃攪拌反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液減壓濃縮，用薄層色譜法以展開(kāi)劑體系A(chǔ)純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物20a(22mg，白色固體)，產(chǎn)率50.1％。
第二步
4-((1-乙?；s環(huán)丁烷-3-基)氨基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒20
將20a(22mg，0.05mmol)溶于2mL四氫呋喃中，加入0.08mL 2.5M的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和氯化銨溶液，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以展開(kāi)劑體系A(chǔ)純化所得殘留物，得標(biāo)題產(chǎn)物20(10mg，白色固體)，產(chǎn)率50％。
MS m/z(ESI):413.3[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.48(s,1H),7.22-7.24(m,1H),7.02-7.07(m,1H),6.92-6.96(m,2H),6.51-6.53(m,1H),4.48-4.56(m,3H),3.96-4.09(m,2H),1.96(s,3H).
實(shí)施例21
(R)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-(甲基磺?；?吡咯烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒21
第一步
(R)-3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氫-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯21a
將2b(200mg，0.54mmol)和15a(150mg，0.81mmol)加入10mL四氫呋喃中，攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系B純化所得殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物21a(230mg，無(wú)色油狀物)，產(chǎn)率83.9％。
第二步
(R)-4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-(吡咯烷-3-基氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮21b
將21a(230mg，0.45mmol)加入10mL二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液減壓濃縮，得到粗品標(biāo)題產(chǎn)物21b(230mg，黃色油狀物)，產(chǎn)品不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
第三步
(R)-4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((1-(甲基磺?；?吡咯烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮21c
將粗品21b(90mg，0.22mmol)溶于10mL二氯甲烷中，降溫至0℃，加入三乙胺(44mg，0.44mmol)，加入甲基磺酰氯(30mg，0.26mmol)，于0℃攪拌反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入飽和碳酸氫鈉溶液中，用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，依次用飽和碳酸氫鈉溶液，飽和氯化銨溶液，飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，得粗品標(biāo)題產(chǎn)物21c(100mg，黃色固體)，產(chǎn)品不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
第四步
(R)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-(甲基磺?；?吡咯烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒21
將粗品21c(100mg，0.2mmol)溶于15mL四氫呋喃中，加入0.16mL 2.5N的氫氧化鈉溶液，攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和氯化銨溶液，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑體系A(chǔ)純化所得殘余物，得標(biāo)題產(chǎn)物21(30mg，白色固體)，產(chǎn)率31.9％。
MS m/z(ESI):463.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.49(s,1H),8.93(s,1H),7.16-7.21(m,1H),7.10-7.12(m,1H),6.75-6.78(m,1H),6.42-6.43(m,1H),4.09-4.12(m,1H),3.52-3.56(m,1H),3.33-3.36(m,2H),3.22-3.23(m,1H),2.91(s,3H),2.18-2.23(m,1H),1.95-1.98(m,1H).
實(shí)施例22
(S)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-(甲基磺?；?吡咯烷-3-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒22
采用實(shí)施例21的合成路線，將原料15a替換為(S)-3-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，制得標(biāo)題產(chǎn)物22(9mg，白色固體)，收率：63.4％。
MS m/z(ESI):464.2[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ11.48(s,1H),8.92(s,1H),7.17-7.21(t,1H),7.12-7.14(t,1H),6.78-6.80(m,1H),6.42(d,1H),4.11-4.13(m,1H),3.53-3.57(m,1H),3.35-3.37(m,1H),3.21-3.24(m,1H),2.91(s,3H),2.19-2.24(m,1H),1.96-1.99(m,1H),1.24(s,1H).
實(shí)施例23
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-(甲基磺?；?哌啶-4-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒23
采用實(shí)施例21的合成路線，將原料15a替換為4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯，制得標(biāo)題產(chǎn)物23(80mg，白色固體)，收率：70.2％。
MS m/z(ESI):479.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.49(s,1H),8.93(s,1H),7.17-7.22(s,1H),7.10-7.12(m,1H),6.77-6.79(m,1H),6.21-6.23(m,1H),3.43-3.53(m,3H),3.28-3.29(m,5H),2.03-2.06(m,2H),1.49-1.59(m,2H).
實(shí)施例24
N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羥基-4-((1-氨磺?；哙?4-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒24
采用實(shí)施例15的合成路線，將原料15a替換為4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯，制得標(biāo)題產(chǎn)物24(40mg，白色固體)，收率：28.2％。
MS m/z(ESI):480.2[M+1]
生物學(xué)評(píng)價(jià)
以下結(jié)合測(cè)試?yán)M(jìn)一步描述解釋本發(fā)明，但這些實(shí)施例并非意味著限制本發(fā)明的范圍。
測(cè)試?yán)?、本發(fā)明化合物對(duì)人源IDO1蛋白酶抑制活性的測(cè)定
體外人源IDO1蛋白酶活性通過(guò)以下的方法進(jìn)行測(cè)試。
該方法用來(lái)測(cè)定本發(fā)明中的化合物對(duì)人源IDO1蛋白酶活性的抑制作用。
一、實(shí)驗(yàn)材料及儀器
1、酶標(biāo)儀(Synergy HT,BIOTEK)
2、色氨酸(T0254-5G,Sigma-Aldrich)
3、過(guò)氧化氫酶來(lái)源于牛肝臟(C1345-1G,Sigma-Aldrich)
4、亞甲藍(lán)(M9140-25G,Sigma-Aldrich)
5、L-抗壞血酸鈉(A7631-25G,Sigma-Aldrich)
6、4-(二甲基氨基)苯甲醛(D2004-25G,Sigma-Aldrich)
7、三氯乙酸(T9159-100G,Sigma-Aldrich)
8、人源IDO1基因(SC126221,Origene)
二、實(shí)驗(yàn)步驟
IDO1蛋白酶的自制：
將人源IDO1基因通過(guò)基因克隆技術(shù)轉(zhuǎn)入到PET30a質(zhì)粒中，然后轉(zhuǎn)入感受態(tài)的大腸桿菌Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞(KT1003，深圳華因康基因科技有限公司)；在液態(tài)LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)基[根據(jù)《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配制每升培養(yǎng)基]中放大培養(yǎng)，收集菌體，超聲破碎，通過(guò)掛柱，洗脫得到純化的IDO1蛋白酶。
化合物測(cè)試實(shí)驗(yàn)：
用50mM的KPB將24μl的酶(IDO1)100倍稀釋至2400μl，濃度為2.6ng/μl的酶溶液，在96孔反應(yīng)板(AXYGEN，PCR-96-FLT-C)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)反應(yīng)板)每孔加入24μl酶溶液?？瞻卓准尤?4μl KPB[KPB緩沖液的配制(50mM)：用分析天平稱(chēng)取KH2PO4 6.805g放入1000ml的燒杯，用量筒加入去離子水至900ml，用1M的KOH調(diào)整PH至6.5，將其倒入1L的量筒內(nèi)，補(bǔ)水至1L即可。4℃儲(chǔ)存]。在反應(yīng)板加入1μl的化合物或DMSO到對(duì)應(yīng)的反應(yīng)孔中。準(zhǔn)備A液：取200μl 500mM L-抗壞血酸鈉加1050μl KPB，渦輪混合器最大速度混勻3秒。B液：100μl 10mM色氨的酸加100μl 100000unit/ml的過(guò)氧化氫酶，加5μl 10mM的亞甲藍(lán)，最后加1050μl KPB，渦輪混合器最大速度混勻3秒。取1200μl A液與1200μl B液，在渦輪混合器上最大速度混勻3秒。然后將此混合液以每孔24μl加入反應(yīng)板中。將反應(yīng)板放入板式離心機(jī)最高速度離心15秒，使反應(yīng)液體都匯聚到底部，振蕩器混勻30秒，在恒溫孵育箱內(nèi)，37℃，孵育1h。在反應(yīng)板中，每孔加入10μl 30％(W/V)三氯乙酸每孔，在孵育箱內(nèi)65℃孵育15分鐘。將反應(yīng)板在離心機(jī)上4700RPM離心，室溫，5分鐘。用排槍從反應(yīng)板中轉(zhuǎn)移40μl上清液到對(duì)應(yīng)96孔測(cè)試板(Corning，#3599)中。每孔加入40μl 2％(W/V)的4-(二甲基氨基)苯甲醛/冰醋酸溶液，在振蕩器上最大速度，混勻1分鐘。在室溫孵育2分鐘后，在Synergy HT(BIOTEK)上讀取480nm處的吸光值。
本發(fā)明中化合物對(duì)人源IDO1蛋白酶抑制活性通過(guò)以上的試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得的IC50值見(jiàn)表1。
表1本發(fā)明中化合物對(duì)人源IDO1蛋白酶活性抑制IC50
結(jié)論：本發(fā)明化合物對(duì)人源IDO1蛋白酶活性具有明顯的抑制作用。
測(cè)試?yán)?、本發(fā)明化合物對(duì)人源TDO蛋白酶抑制活性的測(cè)定
體外人源TDO蛋白酶活性通過(guò)以下的方法進(jìn)行測(cè)試。
該方法用來(lái)測(cè)定本發(fā)明中的化合物對(duì)人源TDO蛋白酶活性的抑制作用。
一、實(shí)驗(yàn)材料及儀器
1、酶標(biāo)儀(Synergy HT,BIOTEK)
2、色氨酸(T0254-5G,Sigma-Aldrich)
3、過(guò)氧化氫酶來(lái)源于牛肝臟(C1345-1G,Sigma-Aldrich)
4、亞甲藍(lán)(M9140-25G,Sigma-Aldrich)
5、L-抗壞血酸鈉(A7631-25G,Sigma-Aldrich)
6、4-(二甲基氨基)苯甲醛(D2004-25G,Sigma-Aldrich)
7、三氯乙酸(T9159-100G,Sigma-Aldrich)
8、人源TDO(U32989.1,蘇州金唯智生物科技有限公司)
9、Rosseta(CW0811A,北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)
10、渦輪混合器(6776,Corning)
11、迷你板式離心機(jī)(Mini-P25,ABSON life science equipment)
二、實(shí)驗(yàn)步驟
TDO蛋白酶的自制
將構(gòu)建好的含人源TDO基因的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入感受態(tài)的大腸桿菌Rosseta；在液態(tài)LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)基[根據(jù)《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配制每升培養(yǎng)基]中放大培養(yǎng)，收集菌體，超聲破碎，通過(guò)掛柱，洗脫得到純化的TDO1蛋白酶。
化合物測(cè)試實(shí)驗(yàn)：
用50mM的KPB將24μl的酶(TDO)100倍稀釋至2400μl，濃度為2.6ng/μl的酶溶液，在96孔反應(yīng)板(AXYGEN，PCR-96-FLT-C)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)反應(yīng)板)每孔加入加入24μl酶溶液。空白孔加入24μl KPB緩沖液[KPB緩沖液的配制(50mM)：用分析天平稱(chēng)取KH2PO4 6.805g放入1000ml的燒杯，用量筒加入去離子水至900ml，用1M的KOH調(diào)整PH至6.5，將其導(dǎo)入1L的量筒內(nèi)，補(bǔ)水至1L即可。4℃儲(chǔ)存]。在反應(yīng)板加入1μl的化合物或DMSO到對(duì)應(yīng)的反應(yīng)孔中。準(zhǔn)備A液：取200μl 500mM L-抗壞血酸鈉加1050μl KPB，渦輪混合器最大速度混勻3秒。B液：100μl 10mM色氨的酸加100μl 100000unit/ml的過(guò)氧化氫酶，加5μl 10mM的亞甲藍(lán)，最后加1050μl KPB，渦輪混合器最大速度混勻3秒。取1200μl A液與1200μl B液，在渦輪混合器上最大速度混勻3秒。然后將此混合液以每孔24μl加入反應(yīng)板中。將反應(yīng)板放入板式離心機(jī)最高速度離心15秒，使反應(yīng)液體都匯聚到底部，振蕩器混勻30秒，在恒溫孵育箱內(nèi)，37℃，孵育1h。在反應(yīng)板中，每孔加入10μl 30％(W/V)三氯乙酸，在孵育箱內(nèi)65℃孵育15分鐘。將反應(yīng)板在離心機(jī)上4700RPM離心，室溫，5分鐘。用排槍從反應(yīng)板中轉(zhuǎn)移40μl上清液到對(duì)應(yīng)96孔測(cè)試板(Corning，#3599)中。每孔加入40μl 2％(W/V)的4-(二甲基氨基)苯甲醛/冰醋酸溶液，在振蕩器上最大速度，混勻1分鐘。在室溫孵育2分鐘后，在Synergy HT Reader上讀取480nm處的吸光值。
本發(fā)明中化合物對(duì)人源TDO蛋白酶抑制活性通過(guò)以上的試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得的IC50值見(jiàn)表2。
表2本發(fā)明中化合物對(duì)人源TDO蛋白酶活性抑制IC50
結(jié)論：本發(fā)明化合物對(duì)人源TDO蛋白酶活性較弱的抑制作用，是選擇性IDO抑制劑。
測(cè)試?yán)?、本發(fā)明化合物對(duì)HeLa細(xì)胞內(nèi)IDO蛋白酶抑制活性的測(cè)定
HeLa細(xì)胞內(nèi)IDO蛋白酶活性通過(guò)以下的方法進(jìn)行測(cè)試。
該方法用來(lái)測(cè)定本發(fā)明中的化合物對(duì)HeLa細(xì)胞內(nèi)IDO蛋白酶活性的抑制作用。(注：HeLa細(xì)胞株在干擾素伽馬(INF-γ)的誘導(dǎo)下表達(dá)吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO))
一、實(shí)驗(yàn)材料及儀器
1、酶標(biāo)儀(Synergy HT,BIOTEK)
2、色氨酸(T0254-5G,Sigma-Aldrich)
3、4-(二甲基氨基)苯甲醛(D2004-25G,Sigma-Aldrich)
4、三氯乙酸(T9159-100G,Sigma-Aldrich)
5、HeLa細(xì)胞株(CCL-2,ATCC)
二、實(shí)驗(yàn)步驟
用新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基制取HeLa細(xì)胞懸液，以10000個(gè)細(xì)胞/孔加入100μl培養(yǎng)體系的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，5％二氧化碳37℃培養(yǎng)24小時(shí)。去除上清，先每孔加入90μl無(wú)血清DMEM高糖培養(yǎng)基；然后每孔分別加入10μl配制在含INF-γ和色氨酸的培養(yǎng)基中的化合物(其終濃度為：10000，1000，100，10，1，0.1nM)，48小時(shí)5％二氧化碳37℃培養(yǎng)取出96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中上清80μl至96孔圓底板中，每孔加入16μl 30％(W/V)三氯乙酸每孔，在孵育箱內(nèi)65℃孵育25分鐘。將反應(yīng)板在離心機(jī)上4700RPM離心，5分鐘。用排槍從反應(yīng)板中轉(zhuǎn)移50μl上清液到96孔平底透明板中，然后每孔加入50μl 2％(W/V)的4-(二甲基氨基)苯甲醛/冰醋酸溶液，在振蕩器上混勻1分鐘。在室溫孵育2分鐘后，在Synergy HT Reader上讀取480nm處的吸光值。
本發(fā)明中化合物對(duì)HeLa細(xì)胞內(nèi)IDO蛋白酶抑制活性通過(guò)以上的試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得的IC50值見(jiàn)表3。
表3本發(fā)明中化合物對(duì)HeLa細(xì)胞內(nèi)IDO蛋白酶活性抑制IC50
結(jié)論：本發(fā)明化合物對(duì)HeLa細(xì)胞內(nèi)IDO蛋白酶活性具有明顯的抑制作用。