1.一種同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于,包括如下步驟:
S1,將藍(lán)藻進(jìn)行破壁以產(chǎn)生藻液,將所述藻液進(jìn)行固液分離,所得液體即為藻膽蛋白粗提液;
S2,向所述藻膽蛋白粗提液中加入適量硫酸銨,混勻并靜置后離心,獲得上清液;
S3,向步驟S2中獲得的上清液中追加適量硫酸銨,混勻并靜置后離心,獲得沉淀;
S4,將步驟S3中獲得的沉淀用磷酸鹽緩沖液溶解,并用磷酸鹽緩沖液作為透析液將溶解后的溶液透析脫鹽,脫鹽后的溶液再離心棄去變性蛋白以獲得透析后的藻膽蛋白溶液;
S5,將步驟S4中透析后的藻膽蛋白溶液,過(guò)平衡好的纖維素層析柱,并依次用含不同離子強(qiáng)度的洗脫液洗脫,分別收集洗脫的組分,檢測(cè)組分中藻藍(lán)蛋白和別藻藍(lán)蛋白的純度和濃度,將主要富含藻藍(lán)蛋白和別藻藍(lán)蛋白的組分用磷酸鹽緩沖液作為透析液進(jìn)行透析脫鹽以獲得含藻藍(lán)蛋白和別藻藍(lán)蛋白的混合液;
S6,將步驟S5中獲得的混合液過(guò)平衡好的羥基磷灰石層析柱,并依次用含不同離子強(qiáng)度的洗脫液洗脫,分別收集洗脫的組分,以獲得了試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白和試劑級(jí)的別藻藍(lán)蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S1的具體操作為:將-20℃條件下冷凍保存的新鮮藍(lán)藻在25-35℃下融化,再放入-20℃條件下冷凍,重復(fù)此步驟至少2次,以實(shí)現(xiàn)藍(lán)藻細(xì)胞的破壁;將藍(lán)藻破壁后的溶液用多層紗布粗過(guò)濾,去除藻渣,再離心后去渣即可獲得藻膽蛋白粗提液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S2中硫酸銨添加量為1.0~1.4mol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S3中追加硫酸銨使其物質(zhì)的量濃度達(dá)到1.6~2.2mol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S4中磷酸鹽緩沖液的濃度為0.01mol/L,pH為6.5,選用截留量為100KDa的透析袋進(jìn)行透析脫鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S5中采用0.02mol/L、pH=6.5、3~5倍柱體積的磷酸鹽緩沖液平衡纖維素層析柱,平衡后,將透析后的藻膽蛋白溶液上樣,上樣量為柱床體積的1/3~2/3。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S5中用分別含0.1、0.3、1.5mol/L氯化鈉的0.02mol/L、pH=6.5的磷酸鹽緩沖液洗脫,洗脫線(xiàn)速度為200~300cm/h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S6中采用0.01mol/L、pH=7.0、3~5倍柱體積的磷酸鹽緩沖液平衡羥基磷灰石層析柱,平衡后,將步驟S5中獲得的混合液上樣,上樣量為柱床體積的1/3~2/3。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或8所述的同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S6中采用含有0.1mol/L氯化鈉的磷酸鹽緩沖液洗脫,磷酸鹽緩沖液的濃度梯度分別為0.02、0.05、0.1mol/L,pH=7.0,洗脫線(xiàn)速度為200~300cm/h。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離純化試劑級(jí)的藻藍(lán)蛋白與別藻藍(lán)蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S2、步驟S3中的離心操作均在4℃下進(jìn)行。