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一種用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型建立與流程

文檔序號:12412555閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型的建立方法,其特征在于,包括如下步驟:

S1. 細胞培養(yǎng);

S2. 對步驟S1的細胞進行不同時間點給藥后收樣;

S3. 對步驟S2收樣得到的細胞進行細胞亞結構提取物的制備;

S4. 對步驟S3得到的提取物進行蛋白定量;

S5. 檢測步驟S3得到的提取物的紫杉醇含量;

S6. 通過分析紫杉醇含量和蛋白定量的比值,篩選出合適的給藥時間及紫杉醇濃度,建立檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型。

2.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S1所述細胞培養(yǎng)為:取對數(shù)生長期細胞接種至細胞培養(yǎng)皿中,連續(xù)培養(yǎng)。

3.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S2是對S1連續(xù)培養(yǎng)過程中的細胞進行不同時間點給藥后收樣處理。

4.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型的建立方法,步驟S3進行細胞亞結構提取物的制備時,根據(jù)細胞膜/細胞器、細胞質、細胞骨架、細胞核的蛋白溶解性不同,從細胞中提取不同細胞蛋白;且細胞貼壁培養(yǎng),在提取細胞不同部分的過程中細胞依舊貼壁,防止提取過程中四部分混合。

5.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S4是利用BCA蛋白定量分析試劑盒對步驟S3得到的提取物進行蛋白定量。

6.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S5是利用UPLC-MS/MS方法檢測步驟S3得到的提取物的紫杉醇含量。

7.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S1所述細胞為非小細胞肺癌A549細胞株。

8.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S6篩選出的合適的給藥時間為:5min、10min、20min、0.5h、1h、1.5h、2h、3h。

9.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測紫杉醇亞細胞分布動力學的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S6篩選出的最適紫杉醇濃度為0.1μg/mL。

10.一種考察某化合物是否能夠影響紫杉醇的細胞藥動學過程的方法,其特征在于,細胞培養(yǎng)后,分別進行兩種給藥方式:(1)0.1μg/mL紫杉醇,(2)0.1μg/mL紫杉醇和10μg/mL某化合物;然后按照不同時間點5min、10min、20min、0.5h、1h、1.5h、2h、3h,同一時間收樣處理,制備細胞亞結構提取物,進行UPLC-MS/MS分析紫杉醇含量,利用0.1μg/mL紫杉醇和10μg/mL某化合物處理后紫杉醇在細胞亞結構提取物中隨時間分布變化圖與單獨給藥0.1μg/mL紫杉醇處理后紫杉醇在細胞亞結構提取物中隨時間分布變化圖相比較,分析紫杉醇在細胞骨架的分布有無提高,即可說明待測某化合物是否可提高紫杉醇在細胞骨架的分布。

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