1.一種從冰菜中篩選耐高鹽固氮菌株的方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)、制備細(xì)菌斜面固體培養(yǎng)基
按以下配方配制固氮培養(yǎng)基,并將配制的固氮培養(yǎng)基的pH值調(diào)整為7.0~7.2,之后,在壓力為0.3Mpa、溫度為115.0℃下對(duì)配制的固氮培養(yǎng)基滅菌25分鐘,得到細(xì)菌斜面固體培養(yǎng)基,所述固氮培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖10.0g、甘露醇3.0g、磷酸二氫鉀0.5g、磷酸氫二鉀0.6g、硫酸鈣0.2g、七水硫酸鎂0.01g、混合溶液10ml、氯化鈉10.0g、瓊脂15.0~20.0g和蒸餾水1000ml;
(2)、制備冰菜植物樣品
a)取新鮮的冰菜樣品,進(jìn)行表面消毒,具體步驟如下:采用75%乙醇處理3~5min,之后用無菌水清洗3~5次,再用0.5%次氯酸鈉處理5min,再使用無菌水清洗3~5次;
b)稱取5g表面消毒后的冰菜樣品,加入滅菌研缽中,并加入10ml無菌生理鹽水,研磨成勻漿溶液A;
c)吸取所述勻漿溶液A 1ml,加入9ml無菌生理鹽水,振蕩1分鐘,得到10-1的稀釋勻漿溶液B;
d)吸取所述稀釋勻漿溶液B 1ml,加入9ml無菌生理鹽水,得到10-2的稀釋勻漿溶液C;
e)吸取所述稀釋勻漿溶液C 1ml,加入9ml無菌生理鹽水,得到10-3的稀釋勻漿溶液D;
f)吸取所述稀釋勻漿溶液D 1ml,加入9ml無菌生理鹽水,得到10-4的稀釋勻漿溶液E;
g)吸取所述稀釋勻漿溶液E 1ml,加入9ml無菌生理鹽水,得到10-5的稀釋勻漿溶液F;
(3)、分別吸取所述稀釋勻漿溶液D、稀釋勻漿溶液E和稀釋勻漿溶液F各0.2ml,加入到所述細(xì)菌斜面固體培養(yǎng)基中進(jìn)行平板涂布培養(yǎng),并在25~28℃下培養(yǎng)4~5天;
(4)、從步驟(3)的培養(yǎng)結(jié)果中挑取菌落,選擇20~200菌落數(shù)的培養(yǎng)皿在所述細(xì)菌斜面固體培養(yǎng)基中進(jìn)行斜面培養(yǎng),并在25~28℃下培養(yǎng)4~5天;
(5)、對(duì)步驟(4)的培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行分離,得到耐高鹽固氮菌株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從冰菜中篩選耐高鹽固氮菌株的方法,其特征在于,進(jìn)一步包括:
(6)、耐高鹽固氮菌株的穩(wěn)定生長
a)制備生長固氮培養(yǎng)基:按以下配方配制生長固氮培養(yǎng)基,并將配制的生長固氮培養(yǎng)基的pH值調(diào)整為7.0~7.2,之后,在壓力為0.3Mpa、溫度為115.0℃下對(duì)配制的生長固氮培養(yǎng)基滅菌25分鐘,所述生長固氮培養(yǎng)基成分為:酵母浸提物0.1g、甘露醇15.0g、磷酸二氫鉀0.2g、磷酸氫二鉀0.6g、硫酸鈣0.2g、七水硫酸鎂0.2g、氯化鈉、混合溶液10ml、瓊脂15.0~20.0g和蒸餾水1000ml,并且,依據(jù)所述氯化鈉的含量分別為10g、12g、15g、18g和21g而配制成多種不同的生長固氮培養(yǎng)基;
b)將所述步驟(5)得到的耐高鹽固氮菌株依次在含有10g、12g、15g、18g和21g氯化鈉的不同生長固氮培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),在每種生長固氮培養(yǎng)基中在25~28℃條件下培養(yǎng)4~5天,最終純化獲得的菌株即為耐高鹽固氮菌株。
3.根權(quán)利要求2所述的從冰菜中篩選耐高鹽固氮菌株的方法,其特征在于,所述固氮培養(yǎng)基和所述生長固氮培養(yǎng)基中的混合溶液的組分都為:鉬酸鈉0.025g、硫酸亞鐵0.001g、鉬酸鈉0.025g、三氯化鐵0.05g、生物素0.05g,硫酸錳0.02g、硫酸銅0.008g,用蒸餾水定容至100ml,并且,定容后要用0.22μm濾膜過濾除菌才得所述混合溶液。
4.一種培養(yǎng)耐高鹽固氮菌株的細(xì)菌斜面固體培養(yǎng)基,其特征在于,按以下配方配制固氮培養(yǎng)基,并將配制的固氮培養(yǎng)基的pH值調(diào)整為7.0~7.2,之后,在壓力為0.3Mpa、溫度為115.0℃下對(duì)配制的固氮培養(yǎng)基滅菌25分鐘,得到細(xì)菌斜面固體培養(yǎng)基,所述固氮培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖10.0g、甘露醇3.0g、磷酸二氫鉀0.5g、磷酸氫二鉀0.6g、硫酸鈣0.2g、七水硫酸鎂0.01g、混合溶液10ml、氯化鈉10.0g、瓊脂15.0~20.0g和蒸餾水1000ml;其中,所述混合溶液的組分為:鉬酸鈉0.025g、硫酸亞鐵0.001g、鉬酸鈉0.025g、三氯化鐵0.05g、生物素0.05g,硫酸錳0.02g、硫酸銅0.008g,用蒸餾水定容至100ml,并且,定容后要用0.22μm濾膜過濾除菌才得所述混合溶液。
5.一種耐高鹽固氮菌株穩(wěn)定生長用生長固氮培養(yǎng)基,其特征在于,按以下配方配制生長固氮培養(yǎng)基,并將配制的生長固氮培養(yǎng)基的pH值調(diào)整為7.0~7.2,之后,在壓力為0.3Mpa、溫度為115.0℃下對(duì)配制的生長固氮培養(yǎng)基滅菌25分鐘,所述生長固氮培養(yǎng)基成分為:酵母浸提物0.1g、甘露醇15.0g、磷酸二氫鉀0.2g、磷酸氫二鉀0.6g、硫酸鈣0.2g、七水硫酸鎂0.2g、氯化鈉10-21g、混合溶液10ml、瓊脂15.0~20.0g和蒸餾水1000ml,其中,所述混合溶液的組分為:鉬酸鈉0.025g、硫酸亞鐵0.001g、鉬酸鈉0.025g、三氯化鐵0.05g、生物素0.05g,硫酸錳0.02g、硫酸銅0.008g,用蒸餾水定容至100ml,并且,定容后要用0.22μm濾膜過濾除菌才得所述混合溶液。