本發(fā)明涉及植物多糖提取領域，具體而言，涉及一種高得率的小麥麩皮活性多糖的制備方法。

背景技術：

小麥是世界上最早栽培的農作物之一，屬禾本科單子葉植物綱植物。小麥的穎果是人類食用的主要部分，磨成面粉后可制成饅頭、面條等食物。麩皮在《本草綱目》中記載到“麩乃麥皮也，與浮麥同性，而止汗之功僅次于浮麥，蓋浮麥無肉也”，麩皮還可用于清熱祛痰，軟堅散結以及補虛斂汗。在我國，小麥麩皮年產量高達2000多萬噸，大約占小麥的20％，但85％以上的麥麩作為釀酒、制醋、醬油、飼料生產的廉價原料，很少用于深加工和再利用，經濟效益和社會效益很低。

小麥麩皮中除含有蛋白質、水分、灰分、酚類等化學成分外，其多糖的含量也很高。小麥麩皮中的多糖主要由非淀粉多糖和淀粉多糖組成，非淀粉多糖含量在46％左右，是小麥細胞壁的主要成分。小麥麩皮多糖具有抗衰老、提高免疫力、抗癌、降血脂降血壓等功效。

現(xiàn)有技術中對小麥麩皮多糖提取也進行了一些研究，例如現(xiàn)有技術(CN101705268A)中就公開了一種具有抗腫瘤與免疫調節(jié)活性的小麥麩皮多糖及其提取方法，該專利采用鹽酸和木聚糖酶對小麥麩皮進行處理，并提取得到小麥麩皮多糖。

近年來，提取小麥麩皮多糖常用的技術基本為：水法提取、堿法提取、酸法提取等。這些提取方法本身存在著一些問題，比如：酸堿提取劑在一定程度上會破壞多糖結構，從而影響小麥麩皮多糖的生物活性。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一目的在于提供一種高得率的小麥麩皮活性多糖的制備方法，所述的方法中，以小麥麩皮超微粉為原料，并經纖維素酶提取、醇沉、去淀粉和去蛋白以制得小麥麩皮粗多糖和小麥活性多糖。本發(fā)明方法中不使用對于多糖結構有破壞性的酸堿，因而能夠保持所提取得到的小麥麩皮多糖的生物活性；同時，本發(fā)明方法反應條件溫和，而且整體工藝簡單，是一種實用、高效制備小麥麩皮多糖的方法。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種所述小麥麩皮多糖，其由本發(fā)明方法提取制備得到，具有小麥麩皮多糖純度高且生物活性強等優(yōu)點。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種小麥麩皮多糖提取方法，所述方法包括如下步驟：

(1)將小麥麩皮粉碎后除去雜質，并干燥；然后，將干燥后的小麥麩皮再次粉碎，得到小麥麩皮超微粉；

(2)向小麥麩皮超微粉中加入石油醚，然后加熱攪拌脫脂，并干燥；

(3)將脫脂干燥后的小麥麩皮超微粉中加入蒸餾水，然后加入纖維素酶，并水浴加熱提??；然后，將提取后所得混合溶液加熱滅酶，將滅酶后的混合溶液過濾，并將濾液濃縮；將濃縮后的濾液進行醇沉，并低溫靜置；將低溫靜置后的濾液過濾離心，并將離心所得固體干燥，即得小麥麩皮粗多糖；

(4)將小麥麩皮粗多糖加水溶解，向所得小麥麩皮粗多糖水溶液中加入α-淀粉酶，并充分振蕩；然后，加入Sevage試劑，并在振蕩后靜置分層；待溶液分層后，除去分層后溶液的中層蛋白質層和下層Sevage試劑層，并收集上層溶液；然后，向所收集的上層溶液中再次加入Sevage試劑，并反復處理，直至分層后的溶液中不出現(xiàn)蛋白質層；然后，收集最后一次處理后所得上層溶液，即為小麥麩皮多糖溶液；

(5)將小麥麩皮多糖溶液進行過膜透析，并將透析后所得溶液冷凍干燥，即得到小麥麩皮活性多糖。

可選的，本發(fā)明中，步驟(1)中所述再次粉碎為超微粉碎，并將小麥麩皮粉碎至顆粒為500～2000目。

可選的，本發(fā)明中，步驟(2)中所述小麥麩皮超微粉的質量克數(shù)與所述石油醚的體積毫升數(shù)之比為1：2～6。

可選的，本發(fā)明中，步驟(2)中所述加熱攪拌脫脂是在30～45℃恒溫水浴加熱條件下攪拌脫脂3～5h。

可選的，本發(fā)明中，根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述纖維素酶的質量為小麥麩皮超微粉質量的0.3～0.75％，所述纖維素酶的活力為1500～3000U/g。

可選的，本發(fā)明中，步驟(3)中所述水浴加熱提取為在30～50℃水浴中提取1.5～2h。

可選的，本發(fā)明中，根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述低溫靜置為在0～8℃條件下靜置5～15h。

可選的，本發(fā)明中，步驟(4)中所述α-淀粉酶與小麥麩皮粗多糖水溶液的體積毫升數(shù)比為1：(100～150)。

可選的，本發(fā)明中，所述Sevage試劑的體積與加入α-淀粉酶的小麥麩皮粗多糖水溶液的體積毫升數(shù)比為1：(3～5)。

同時，本發(fā)明還提供了一種小麥麩皮粗多糖和小麥麩皮活性多糖，其由本發(fā)明方法制備得到。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明方法提取操作步驟簡單，而且提取條件溫和，同時無需使用對小麥麩皮多糖具有較大破壞性的酸堿等提取試劑；同時，本發(fā)明方法小麥麩皮多糖得率高，且所制得的小麥麩皮多糖活性好。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術中的技術方案，以下將對實施例或現(xiàn)有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。

圖1為小麥麩皮提取后殘渣的微觀形態(tài)；

圖2為小麥麩皮多糖單糖組分分析圖；其中(a)為單糖標準品分析圖，(b)為小麥麩皮多糖單糖組分分析圖；

圖3為不同濃度小麥麩皮活性多糖對小鼠巨噬細胞細胞毒性及分泌NO影響。

具體實施方式

下面將結合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產品。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選方案中，步驟(1)中所述粉碎為機械粉碎；和/或，步驟(1)中所述干燥為烘干，進一步的，所述烘干是在溫度為30～60℃的烘箱中進行的，并將粉碎后的小麥麩皮烘干至所含水分為1～8％。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選方案中，步驟(2)中所述干燥為在30～60℃烘箱中進行的烘干。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選方案中，步驟(3)中所述脫脂干燥后的小麥麩皮超微粉與蒸餾水的質量克數(shù)比為1：(15～25)；和/或，步驟(3)中所述加熱滅酶具體為：將提取后所得混合溶液在沸水浴(水浴溫度100℃)中加熱5～10min進行滅酶；和/或，步驟(3)中所述醇沉為采用質量濃度為80～90％的無水乙醇進行醇沉；和/或，步驟(3)中所述低溫靜置為在0～8℃條件下靜置8～12h；和/或，步驟(3)中所述干燥為在45～50℃條件下烘干。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選方案中，步驟(4)中所述小麥麩皮粗多糖加水溶解具體為向小麥麩皮粗多糖中加入其質量8～10倍的水，并將小麥麩皮多糖溶解。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選方案中，所述Sevage試劑的體積與加入α-淀粉酶的小麥麩皮粗多糖水溶液的體積毫升數(shù)比可以為1：3、1:4或者1:5。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選方案中，步驟(4)所述Sevage試劑中，三氯甲烷與正丁醇的體積比為4：1；和/或步驟(4)中所述并振蕩后靜置分層具體為：將加入Sevage試劑后得混合溶液置于分液漏斗中，并反復振蕩10～20min，然后靜置分層；和/或步驟(4)中所述反復處理為反復處理4～5次。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選方案中，步驟(5)所述過膜透析具體為：將小麥麩皮多糖溶液裝入透析袋中進行透析，并透析24～48h。

實施例1：

(1)小麥麩皮預處理：將小麥麩皮經機械粉碎后，除去雜質，并將除雜后的小麥麩皮在30℃烘箱內加熱烘干，直至小麥麩皮水分含量為3％以內，然后，將小麥麩皮進一步經超微粉碎機粉碎，至顆粒粒徑為500目，得到小麥麩皮超微粉；

(2)小麥麩皮的脫脂處理：按照小麥麩皮超微粉的質量克數(shù)與石油醚的體積毫升數(shù)之比為1:6的比例，將石油醚加入小麥麩皮超微粉中；然后，將所得混合體系在30℃水浴條件下攪拌4h，進行脫脂，再將脫脂后的小麥麩皮超微粉在40℃烘箱中烘干；

(3)小麥麩皮粗多糖提?。悍Q取脫脂后小麥麩皮超微粉，并按脫脂后的小麥麩皮超微粉與水的質量克數(shù)比為1:15的比例，向小麥麩皮超微粉中加水制成懸浮液；然后，向懸浮液中加入質量為脫脂后小麥麩皮超微粉質量0.3％、且活性為2000U/g的纖維素酶，并在35℃的恒溫水浴鍋中水浴提取1.5h；然后，將所得混合溶液在沸水浴中滅酶3min；然后，將混合溶液在4000rpm離心條件下，離心過濾15min，收集濾液，并將濾液濃縮；向濃縮后的濾液中加入質量濃度為80％乙醇進行醇沉，然后醇沉后的濾液放入4℃冰箱中，并靜置放置8h；然后，將靜置放置后的濾液在離心機轉速為4000rpm條件下，離心處理8min，然后將離心所得固體干燥，即得到實施例1的小麥麩皮粗多糖，經計算，小麥麩皮粗多糖的得率為15.14％；

(4)除淀粉和蛋白：將小麥麩皮粗多糖以10倍質量的蒸餾水溶解，并加入體積為所得小麥麩皮粗多糖水溶液體積1/100的淀粉酶，并充分振蕩，以除去淀粉；然后，向已除去淀粉的溶液中，加入體積為加入淀粉酶后的小麥麩粗糖水溶液體積1/4的Sevage試劑，其中，所述Sevage試劑中三氯甲烷與正丁醇的體積比為4:1；然后，將所得混合體系置于分液漏斗中，并反復振蕩20min，然后靜置；待混合體系分層后，去掉下層的Sevage試劑和中間蛋白質層，并收集上層溶液；然后將上層溶液繼續(xù)加入Sevage試劑，然后反復處理5次，最后一次分層后的溶液中不再出現(xiàn)蛋白質層，收集上層溶液，即為小麥麩皮多糖溶液；

(5)過膜透析：將所得小麥麩皮多糖溶液裝入透析袋進行透析，透析時間為36h，將透析過的多糖溶液進行冷凍干燥即可得到實施例1的小麥麩皮活性多糖。

實驗例1實施例1小麥麩皮粗多糖以及小麥麩皮活性多糖樣品測試

1)依據(jù)苯酚-硫酸法測定小麥麩皮粗多糖中多糖含量：

(1)標準曲線的繪制：準確稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖10mg，用蒸餾水定容至100mL容量瓶得標準液；將標準液稀釋成質量濃度為50、100、150、200、250、300、350mg/mL的溶液，分別吸取稀釋液0.2mL，加入質量分數(shù)5％苯酚0.4mL，混合后迅速加2mL濃硫酸，混合均勻后，室溫放置30min，在490nm波長處測定吸光度，以蒸餾水做空白對照；以多糖濃度為橫坐標(X)，吸光度為縱坐標(Y)，制作標準曲線；

(2)樣品測定：稱取40～50mg實施例1提取的小麥麩皮粗多糖樣品，重蒸水定容至100mL，精密吸取0.2mL按標準曲線方法操作測定吸光度；根據(jù)標準曲線計算多糖濃度，再計算求得樣品中多糖的含量為49.83％；

其中，多糖含量(％)＝(V×C×f/M)×100％

式中：M：稱取的粗多糖質量

V：溶解M定容后的體積

C：根據(jù)標準曲線得出多糖的濃度(μg/mL)

f：f≈0.9，為多糖的校正系數(shù)

2)小麥麩皮粗多糖單糖組分分析：

(1)標準單糖衍生物的制備：精密稱取干燥至恒重的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖10mg于具塞玻璃管中，分別加入鹽酸羥胺10mg，無水吡啶500μL，渦旋混勻于90℃水浴加熱30min；取出后放置冰上迅速冷卻至室溫，加入500μL醋酸酐，于90℃水浴鍋中繼續(xù)反應30min以進行乙?；?。反應完成后，用吹氮儀吹干，加入1mL三氯甲烷復溶；將各標準單糖衍生物混合，取1μL混合液直接進行色譜條件分析，分析圖譜如附圖2(a)所示；

(2)小麥麩皮多糖的水解和衍生化：

小麥麩皮多糖的水解：精密稱取實施例1提取的小麥麩皮多糖10mg于具塞玻璃試管中，加入4mol/L三氟乙酸溶液4mL，渦旋混勻；放置100℃水浴鍋水解12h，取出用吹氮儀吹干；

小麥麩皮多糖的衍生化：水解后的小麥麩皮多糖樣品，按照標準單糖衍生化的方法，將小麥麩皮多糖衍生化，取樣1μL樣品進行氣相色譜分析，色譜分析結果如附圖2(b)所示。

3)小麥麩皮活性多糖的細胞活性實驗

將所得小麥麩皮活性多糖用水配制成一系列的濃度，用MTT法檢測細胞毒性；用Griess法檢測在小麥麩皮多糖的刺激下，RAW264.7細胞分泌NO的影響；Western Blot方法研究小麥麩皮多糖對RAW264.7細胞的免疫調節(jié)信號通路研究，實驗結果如圖3所示。

實施例2：

(1)小麥麩皮預處理：將小麥麩皮經機械粉碎后，除去雜質，并將除雜后的小麥麩皮在60℃烘箱內加熱烘干，直至小麥麩皮水分含量為6％以內，然后，將小麥麩皮進一步經超微粉碎機粉碎，至顆粒粒徑為2000目篩，得到小麥麩皮超微粉；

(2)小麥麩皮的脫脂處理：按照小麥麩皮超微粉的質量克數(shù)與石油醚的體積毫升數(shù)之比為1:4的比例，將石油醚加入小麥麩皮超微粉中；然后，將所得混合體系在30℃水浴條件下攪拌4h進行脫脂，再將脫脂后的小麥麩皮超微粉在40℃烘箱中烘干；

(3)小麥麩皮粗多糖提?。悍Q取脫脂后小麥麩皮超微粉，并按脫脂后的小麥麩皮超微粉與水的質量克數(shù)比為1:25的比例，向小麥麩皮超微粉中加水制成懸浮液；然后，向懸浮液中加入質量為脫脂后小麥麩皮超微粉質量0.75％、且活性為2000U/g的纖維素酶，并在48℃的恒溫水浴鍋中水浴提取2h；然后，將所得混合溶液在100℃沸水浴中滅酶10min；然后，將混合溶液在4500rpm離心條件下，離心過濾15min，收集濾液，并將濾液濃縮；向濃縮后的濾液中加入質量濃度為85％乙醇進行醇沉，然后醇沉后的濾液放入4℃冰箱中，并靜置放置12h；然后，將靜置放置后的濾液在離心機轉速為4000rpm條件下，離心處理15min，然后將離心所得固體干燥，即得到實施例2的小麥麩皮粗多糖，經計算多糖得率為13.78％；

(4)除淀粉和蛋白：將小麥麩皮粗多糖以10倍體積的蒸餾水溶解，并加入體積為所得小麥麩皮粗多糖水溶液體積1/100的淀粉酶，并充分振蕩，以除去淀粉；然后，向已除去淀粉的溶液中加入體積為其1/4的Sevage試劑，其中，所述Sevage試劑中三氯甲烷與正丁醇的體積比為4:1；然后，將所得混合體系置于分液漏斗中，并反復振蕩20min，然后靜置；待混合體系分層后，去掉下層的Sevage試劑和中間蛋白質層，并收集上層溶液；然后將上層溶液繼續(xù)加入Sevage試劑，然后反復處理5次，最后一次分層溶液中不再出現(xiàn)蛋白質層，收集上層溶液，即為小麥麩皮多糖溶液；

(5)過膜透析：將所得小麥麩皮多糖溶液裝入透析袋進行透析，透析時間為36h，將透析過的多糖溶液進行冷凍干燥即可得到實施例2的小麥麩皮活性多糖。

實驗例2實施例2小麥麩皮粗多糖以及小麥麩皮活性多糖樣品測試

1)依據(jù)苯酚-硫酸法測定小麥麩皮粗多糖含量：

(1)標準曲線的繪制：準確稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖8mg，用蒸餾水定容至100mL容量瓶得標準液；將標準液稀釋成質量濃度為50、100、150、200、250、300、350mg/mL的溶液，分別吸取稀釋液0.2mL，加入質量分數(shù)5％苯酚0.4mL，混合后迅速加2mL濃硫酸，混合均勻后，室溫放30min，在490nm波長處測定吸光度，以蒸餾水做空白對照；以多糖濃度X為橫坐標，吸光度Y為縱坐標，制作標準曲線；

(2)樣品測定：稱取45mg不同提取方法提取的多糖樣品,重蒸水定容至100mL，精密吸取0.2mL按標準曲線方法操作測定吸光度；根據(jù)標準曲線計算多糖濃度，再計算求得樣品中多糖的含量為49.03％；

多糖含量(％)＝(V×C×f/M)×100％

式中，M：稱取的粗多糖質量

V：溶解M定容后的體積

C：根據(jù)標準曲線得出多糖的濃度(μg/mL)

f：f≈0.9為多糖的校正系數(shù)

2)小麥麩皮粗多糖單糖組分分析：

(1)準單糖衍生物的制備：精密稱取干燥至恒重的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖10mg于具塞玻璃管中，分別加入鹽酸羥胺10mg，無水吡啶500μL，渦旋混勻于90℃水浴加熱30min；取出后放置冰上迅速冷卻至室溫，加入500μL醋酸酐，于90℃水浴鍋中繼續(xù)反應30min進行乙?；磻瓿珊笥么档獌x吹干，加入1mL三氯甲烷復溶；將各標準單糖衍生物混合，取2μL混合液直接進行色譜條件分析，結果如圖2(a)所示；

(2)小麥麩皮多糖的水解和衍生化

小麥麩皮多糖的水解：精密稱取實施例2提取的小麥麩皮多糖8mg于具塞玻璃試管中，加入4mol/L三氟乙酸溶液4mL，渦旋混勻；放置100℃水浴鍋水解12h，用氮氣吹干；

小麥麩皮多糖的衍生化：水解后的小麥麩皮多糖樣品，按標準單糖衍生化的方法，將小麥麩皮多糖衍生化，取樣2μL樣品進行氣相色譜分析，結果與實施例1相同。

3)小麥麩皮多糖的細胞活性實驗

將所得小麥麩皮活性多糖用DMSO配制成一系列的濃度，用MTT法檢測細胞毒性；用Griess法檢測在小麥麩皮多糖的刺激下，RAW264.7細胞分泌NO的影響；用Western Blot的方法研究小麥麩皮多糖對RAW264.7細胞的免疫調節(jié)信號通路研究，結果與實施例1相同。

實施例3：

(1)小麥麩皮預處理：將小麥麩皮經機械粉碎后，除去雜質，并將除雜后的小麥麩皮在55℃烘箱內加熱烘干，直至小麥麩皮水分含量為5％以內，然后，將小麥麩皮進一步經超微粉碎機粉碎，至顆粒粒徑為1500目，得到小麥麩皮超微粉；

(2)小麥麩皮的脫脂處理：按照小麥麩皮超微粉的質量克數(shù)與石油醚的體積毫升數(shù)之比為1:4的比例，將石油醚加入小麥麩皮超微粉中；然后，將混合體系在30℃水浴條件下攪拌4h進行脫脂，再將脫脂后的小麥麩皮超微粉在40℃烘箱中烘干；

(3)小麥麩皮粗多糖提?。悍Q取脫脂后小麥麩皮超微粉，并按脫脂后的小麥麩皮超微粉與水的質量克數(shù)比1:23的比例，向小麥麩皮超微粉中加水制成懸浮液；然后，向所得懸浮液中加入脫脂后小麥麩皮超微粉質量0.65％的纖維素酶，并在48℃的恒溫水浴鍋水浴提取2h；然后，將所得混合溶液在100℃沸水浴中滅酶3.5min；然后，將所得溶液在4300rpm離心條件下，離心過濾18min，收集濾液，并將濾液濃縮；向濃縮后的濾液中加入質量濃度為85％乙醇進行醇沉，然后醇沉后的濾液放入4℃冰箱中，并靜置放置12h；然后，將靜置放置后的濾液在離心機轉速為4100rpm條件下，離心處理10min，然后將離心所得固體干燥，即得到實施例3的小麥麩皮粗多糖，經計算粗多糖得率為15.14％；

(4)除淀粉和蛋白：將小麥麩皮粗多糖以10倍體積的蒸餾水溶解，并加入體積為所得小麥麩皮多糖水溶液體積1/100的淀粉酶，并充分振蕩，以除去淀粉；然后，向已除去淀粉的溶液中加入體積為其1/4的Sevage試劑，其中，所述Sevage試劑中三氯甲烷與正丁醇的體積比為4:1；然后，將所得混合體系置于分液漏斗中，并反復振蕩20min，然后靜置；待混合體系分層后，去掉下層的Sevage試劑和中間蛋白質層，并收集上層溶液；然后將上層溶液繼續(xù)加入Sevage試劑，然后反復處理6次，最后一次分層溶液中不再出現(xiàn)蛋白質層，收集上層溶液，即為小麥麩皮多糖溶液；

(5)過膜透析：將所得小麥麩皮多糖溶液裝入透析袋進行透析，透析時間為48h，將透析過的多糖溶液進行冷凍干燥即可得到實施例3的小麥麩皮活性多糖。

實驗例3實施例3小麥麩皮粗多糖以及小麥麩皮活性多糖樣品測試

1)依據(jù)苯酚-硫酸法測定小麥麩皮粗多糖含量：

(1)標準曲線的繪制：準確稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖9mg，用蒸餾水定容至100mL容量瓶得標準液；將標準液稀釋成質量濃度為50、100、150、200、250、300、350mg/mL的溶液，分別吸取稀釋液0.2mL，加入質量分數(shù)5％苯酚0.4mL，混合后迅速加2mL濃硫酸，混合均勻后，室溫放置30min，在490nm波長處測定吸光度，以蒸餾水做空白對照；以多糖濃度X為橫坐標，吸光度Y為縱坐標，制作標準曲線；

(2)樣品測定：稱取48mg實施例3提取的多糖樣品，重蒸水定容至100mL，精密吸取0.2mL按標準曲線方法操作測定吸光度；根據(jù)標準曲線計算多糖濃度，再計算求得樣品中多糖的含量為49.53％；

多糖含量(％)＝(V×C×f/M)×100％

式中：M：稱取的粗多糖質量

V：溶解M定容后的體積

C：根據(jù)標準曲線得出多糖的濃度(μg/mL)

f：f≈0.9為多糖的校正系數(shù)

2)小麥麩皮粗多糖單糖組分分析：

(1)標準單糖衍生物的制備：精密稱取干燥至恒重的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖10mg于具塞玻璃管中，分別加入鹽酸羥胺10mg，無水吡啶500μL，渦旋混勻于90℃水浴加熱30min；取出后放置冰上迅速冷卻至室溫，加入500μL醋酸酐，于90℃水浴鍋中繼續(xù)反應30min進行乙?；?，反應完成后用吹氮儀吹干，加入1mL三氯甲烷復溶；將各標準單糖衍生物混合，取1.5μL混合液直接進行色譜條件分析，結果如圖2(a)所示。

(2)小麥麩皮多糖的水解和衍生化

小麥麩皮多糖的水解：精密稱取不同提取方法提取的小麥麩皮多糖9.5mg于具塞玻璃試管中，加入4mol/L三氟乙酸溶液3.5mL，渦旋混勻；放置100℃水浴鍋水解11h，取出用吹氮儀吹干；

小麥麩皮多糖的衍生化：水解后的小麥麩皮多糖樣品，按照標準單糖衍生化的方法，將小麥麩皮多糖衍生化，取樣1.5μL樣品進行氣相色譜分析，結果與實驗例1相同。

3)小麥麩皮多糖的生理活性實驗

將所得小麥麩皮活性多糖用水配制成一系列的濃度，用MTT法檢測細胞毒性；用Griess法檢測在小麥麩皮多糖的刺激下，小鼠巨噬細胞分泌NO的影響；用Western Blot的方法研究小麥麩皮多糖對小鼠巨噬細胞的免疫調節(jié)信號通路研究，結果與實驗例1結果相同。

盡管已用具體實施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應意識到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內的所有這些變化和修改。