1.一種抗CD47和EGFR的雙功能蛋白Bi-SP,其特征在于,所述雙功能蛋白包含抗EGFR側(cè)的重鏈、抗EGFR側(cè)的輕鏈以及抗CD47側(cè)的Fc融合蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙功能蛋白Bi-SP,其特征在于,所述雙功能蛋白包含SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16及SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列。
3.權(quán)利要求1或2所述雙功能蛋白的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:
S1、構(gòu)建分別含有SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.17所示的核苷酸序列的載體,并將其共轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng),篩選穩(wěn)定表達(dá)雙功能蛋白的細(xì)胞克??;
S2、對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行分離純化,得到雙功能蛋白Bi-SP。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述載體為真核表達(dá)載體pcDNA3.1。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述宿主細(xì)胞為CHO-K1細(xì)胞。
6.根據(jù)權(quán)利要求3~5任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,用含600μg/mL G418和250μg/mL Zeocin的選擇培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定表達(dá)雙功能蛋白的細(xì)胞克隆。
7.一種宿主細(xì)胞,其特征在于,同時(shí)表達(dá)SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16及SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列。
8.一種載體組合,其特征在于,包括分別含有SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.17所示的核苷酸序列的載體。
9.含有權(quán)利要求1或2所述的雙功能蛋白Bi-SP的組合物。
10.權(quán)利要求1或2所述的雙功能蛋白Bi-SP在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。