本發(fā)明涉及糖化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體說(shuō)是一種唾液酸供體的制備方法。
背景技術(shù)：
人體母乳寡糖HMO是一組在母乳中由不同寡糖組成的復(fù)合糖，其通過(guò)多種直接或間接的方式調(diào)控嬰兒的腸道菌群，其中一種唾液酸化的二唾液酸基乳糖基-N-四糖DSLNT對(duì)幽門(mén)桿菌與胃腸道上皮細(xì)胞的黏附有很好的抑制效果，從而對(duì)預(yù)防嬰幼兒胃腸道疾病扮演著至關(guān)重要的角色。
但是目前DSLNT還不能作為添加劑成為嬰幼兒配方粉的成分，主要原因是其天然原料稀缺，分離技術(shù)難度大，價(jià)格非常昂貴；人工合成DSLNT到目前還處于研發(fā)階段，無(wú)法進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。人工合成DSLNT的關(guān)鍵技術(shù)是在分子結(jié)構(gòu)中高立體選擇性和高收率的引入唾液酸片段；由于唾液酸具有特殊的分子結(jié)構(gòu)，在偶聯(lián)反應(yīng)中活性差、立體選擇性低，副反應(yīng)多，給產(chǎn)品的分離提純帶來(lái)了很大難度，在目前的報(bào)道的各種唾液酸供體合成砌塊中，含有噁唑烷酮結(jié)構(gòu)和金剛烷硫苷離去基團(tuán)的唾液酸表現(xiàn)出優(yōu)良的立體選擇性和反應(yīng)活性，但是目前的方法路線長(zhǎng)，步驟多，副產(chǎn)物多，且不易分離，收率低，并且每一步均需要過(guò)硅膠柱，甚至需要多次過(guò)硅膠柱，提純困難，難以大量制備。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種唾液酸供體的制備方法，該唾液酸供體含有噁唑烷酮結(jié)構(gòu)和金剛烷硫苷離去基團(tuán)，具有高活性、高立體選擇性。
本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
一種唾液酸供體的制備方法，生產(chǎn)路線如下所示：
所述制備方法包括以下步驟：
①將唾液酸加入酸性樹(shù)脂和甲醇1中，攪拌反應(yīng)20~24小時(shí)，抽濾，得到濾液，將所得濾液旋蒸，得到油狀物，將所得油狀物加入有機(jī)溶劑中，攪拌，抽濾，得到濾餅，將所得濾餅溶于甲醇2中，在0~5℃下加入堿性樹(shù)脂，攪拌50~60分鐘，抽濾，濾液旋蒸得到化合物1；
其中唾液酸、酸性樹(shù)脂、甲醇1、有機(jī)溶劑、甲醇2和堿性樹(shù)脂的質(zhì)量體積比為100g：190~210g：2~2.5L：1.5~2L：1.5~2L：45~55g；
所述的有機(jī)溶劑由體積比為3：1二氯甲烷和甲醇組成；
②將步驟①所得化合物1溶于吡啶中，降溫至0~5℃后向其中滴加乙酸酐，滴加完畢，升溫至20~30℃攪拌反應(yīng)20~24小時(shí)，然后在0~5℃下滴加飽和碳酸氫鈉溶液，滴加完畢后向其中加入乙酸乙酯分液，有機(jī)相旋蒸得到油狀粗品，將所得油狀粗品加入甲基叔丁基醚，加熱至40~50℃攪洗，冷卻至20~30℃，抽濾，得到化合物2；
其中步驟①所得化合物1、吡啶、乙酸酐、飽和碳酸氫鈉溶液、乙酸乙酯和甲基叔丁基醚的質(zhì)量體積比為80~90g：450~500ml：230~250ml：280~320ml：450~500ml：450~500ml；
③將步驟②所得化合物2溶于二氯甲烷中，向其中依次加入BF3-Et2O和1-金剛烷硫醇，攪拌反應(yīng)10~15小時(shí)，然后降溫至0~5℃，滴加飽和碳酸氫鈉溶液至pH至8~9，分液，將有機(jī)相旋蒸，得到油狀粗產(chǎn)品；將所得油狀粗產(chǎn)品加入乙醇，升溫至35~45℃然后在攪拌下向其中滴加水，滴加完畢降溫至20~30℃析晶2小時(shí)，抽濾，濾餅用石油醚重結(jié)晶，得到化合物3；
其中步驟②所得化合物2、二氯甲烷、BF3-Et2O、1-金剛烷硫醇、乙醇、水和石油醚的質(zhì)量體積比為75~85g：150~180ml：5~6g：2~3g：180~220ml：140~160ml：240~260ml；
④將步驟③所得化合物3溶于甲醇中，向其中滴加甲磺酸，滴加完畢回流攪拌20~25小時(shí)，然后降溫至0~5℃，滴加三乙胺淬滅反應(yīng)，減壓蒸餾得到化合物4；
其中步驟③所得化合物3、甲醇、甲磺酸和三乙胺的質(zhì)量體積比為55~60g：580~620ml：20~25g：35~40ml；
⑤向步驟④所得化合物4中加入碳酸氫鈉，然后向其中加入體積比為1：1的乙腈水溶液，降溫至0~5℃，向其中滴加三光氣的二氯甲烷溶液，并在該溫度下攪拌反應(yīng)2~4小時(shí)，滴加飽和氯化鈉溶液淬滅反應(yīng)，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓蒸餾得到粗產(chǎn)品，將所得粗產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮和甲基叔丁基醚的混合液析晶，得到化合物5；
所述三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.2~0.3mol/L；
其中步驟④所得化合物4、碳酸氫鈉、乙腈水溶液、三光氣的二氯甲烷溶液、飽和氯化鈉溶液、乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉、丙酮和甲基叔丁基醚的混合液的質(zhì)量體積比為55~60g：110~120g：2.5~3L：220~230ml：2.5~3L：4~5L：400~500g：1~2L；
⑥將步驟⑤所得化合物5溶于吡啶中，向其中滴加乙酸酐，攪拌反應(yīng)20~24小時(shí)，減壓蒸餾加入二氯甲烷和N，N-二異丙基乙胺，降溫至0~5℃，向其中滴加乙酰氯，滴加結(jié)束后20~30℃下反應(yīng)1~2小時(shí)，然后降溫至0~5℃，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8~9，分液，將有機(jī)相減壓蒸餾得到油狀產(chǎn)品，將所得油狀產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮水溶液析晶，得到唾液酸供體，其結(jié)構(gòu)式為I；
其中步驟⑤所得化合物5、吡啶、乙酸酐、二氯甲烷、N，N-二異丙基乙胺、乙酰氯和丙酮水溶液的質(zhì)量體積比為20~25g：380~420ml：460~500ml：380~420ml：75~85ml：25~30ml：450~500ml。
優(yōu)選的，酸性樹(shù)脂為Amberlite IR-120H；所述的堿性樹(shù)酯為Amberlite IRA-900。
優(yōu)選的，步驟①中唾液酸、酸性樹(shù)脂、甲醇1、有機(jī)溶劑、甲醇2和堿性樹(shù)脂的質(zhì)量體積比為100g：200g：2L：1.8L：1.8L：50g。
優(yōu)選的，三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.25mol/L。
進(jìn)一步優(yōu)選的，所述制備方法包括以下步驟：
①將唾液酸加入酸性樹(shù)脂和甲醇1中，攪拌反應(yīng)22小時(shí)，抽濾，得到濾液，將所得濾液旋蒸，得到油狀物，將所得油狀物加入有機(jī)溶劑中，攪拌，抽濾，得到濾餅，將所得濾餅溶于甲醇2中，在0℃下加入堿性樹(shù)脂，攪拌55分鐘，抽濾，濾液旋蒸得到化合物1；
其中唾液酸、酸性樹(shù)脂、甲醇1、有機(jī)溶劑、甲醇2和堿性樹(shù)脂的質(zhì)量體積比為100g：200g：2L：1.8L：1.8L：50g；
所述的所述的有機(jī)溶劑由體積比為3：1二氯甲烷和甲醇組成；
②將步驟①所得化合物1溶于吡啶中，降溫至0℃后向其中滴加乙酸酐，滴加完畢，升溫至25℃攪拌反應(yīng)22小時(shí)，然后在0℃下滴加飽和碳酸氫鈉溶液，滴加完畢后向其中加入乙酸乙酯分液，有機(jī)相旋蒸得到油狀粗品，將所得油狀粗品加入甲基叔丁基醚，加熱至45℃攪洗，冷卻至22℃，抽濾，得到化合物2；
其中步驟①所得化合物1、吡啶、乙酸酐、飽和碳酸氫鈉溶液、乙酸乙酯和甲基叔丁基醚的質(zhì)量體積比為85g：480ml：240ml：300ml：480ml：480ml；
③將步驟②所得化合物2溶于二氯甲烷中，向其中依次加入BF3-Et2O和1-金剛烷硫醇，攪拌反應(yīng)12小時(shí)，然后降溫至0℃，滴加飽和碳酸氫鈉溶液至pH至8，分液，將有機(jī)相旋蒸，得到油狀粗產(chǎn)品；將所得油狀粗產(chǎn)品加入乙醇，升溫至40℃然后在攪拌下向其中滴加水，滴加完畢降溫至25℃析晶2小時(shí)，抽濾，濾餅用石油醚重結(jié)晶，得到化合物3；
其中步驟②所得化合物2、二氯甲烷、BF3-Et2O、1-金剛烷硫醇、乙醇、水和石油醚的質(zhì)量體積比為80g：160ml：5.5g：2.5g：200ml：150ml：250ml；
④將步驟③所得化合物3溶于甲醇中，向其中滴加甲磺酸，滴加完畢回流攪拌22小時(shí)，然后降溫至0℃，滴加三乙胺淬滅反應(yīng)，減壓蒸餾得到化合物4；
其中步驟③所得化合物3、甲醇、甲磺酸和三乙胺的質(zhì)量體積比為58g：600ml：22g：38ml；
⑤向步驟④所得化合物4中加入碳酸氫鈉，然后向其中加入體積比為1：1的乙腈水溶液，降溫至0℃，向其中滴加三光氣的二氯甲烷溶液，并在該溫度下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，滴加飽和氯化鈉溶液淬滅反應(yīng)，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓蒸餾得到粗產(chǎn)品，將所得粗產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮和甲基叔丁基醚的混合液析晶，得到化合物5；
所述三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.25mol/L；
其中步驟④所得化合物4、碳酸氫鈉、乙腈水溶液、三光氣的二氯甲烷溶液、飽和氯化鈉溶液、乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉、丙酮和甲基叔丁基醚的混合液的質(zhì)量體積比為58g：115g：2.8L：225ml：2.8L：4.5L：450g：1.5L；
⑥將步驟⑤所得化合物5溶于吡啶中，向其中滴加乙酸酐，攪拌反應(yīng)22小時(shí)，減壓蒸餾加入二氯甲烷和N，N-二異丙基乙胺，降溫至0℃，向其中滴加乙酰氯，滴加結(jié)束后25℃下反應(yīng)1.5小時(shí)，然后降溫至0℃，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8，分液，將有機(jī)相減壓蒸餾得到油狀產(chǎn)品，將所得油狀產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮水溶液析晶，得到唾液酸供體，其結(jié)構(gòu)式為I；
其中步驟⑤所得化合物5、吡啶、乙酸酐、二氯甲烷、N，N-二異丙基乙胺、乙酰氯和丙酮水溶液的質(zhì)量體積比為22g：400ml：480ml：400ml：80ml：28ml：480ml。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：
本發(fā)明的唾液酸供體的制備方法采用唾液酸為起始原料，經(jīng)過(guò)酸性樹(shù)脂催化進(jìn)行酯化反應(yīng)，用堿性樹(shù)脂除去殘留的原料，然后乙?；瘜?duì)羥基進(jìn)行保護(hù)，然后用1-金剛烷硫醇進(jìn)行糖硫苷化，然后脫羥基和氨基的乙?；Ｗo(hù)基，在碳酸氫鈉的引發(fā)下用三光氣對(duì)5位氨基和4位羥基進(jìn)行保護(hù)，引入噁唑烷酮結(jié)構(gòu)，然后乙?；瘜?duì)羥基和氨基進(jìn)行保護(hù)得到目標(biāo)產(chǎn)物唾液酸供體。
本發(fā)明的制備方法設(shè)計(jì)巧妙，副產(chǎn)物少且容易分離，尤其是第一步用酸性樹(shù)酯進(jìn)行酯化反應(yīng)時(shí)，為了解決原料反應(yīng)不完全的問(wèn)題，舍棄常規(guī)的硅膠柱方法，采用堿性樹(shù)酯吸附除去殘留原料，操作簡(jiǎn)單，酯化產(chǎn)品純度高；第四步直接用甲磺酸和甲醇回流的方法脫去羥基和氨基上的乙酰基，縮短了現(xiàn)有步驟中的對(duì)氨基進(jìn)行Boc保護(hù)、脫乙?；兔揃oc的方法，將現(xiàn)有的三步反應(yīng)減少成一步反應(yīng)，減少了處理流程，減少了副產(chǎn)物的產(chǎn)生，提高了產(chǎn)率；第五步中用三光氣替代現(xiàn)有技術(shù)中的對(duì)硝基氯甲酸苯酯，對(duì)4位上羥基和5位上氨基進(jìn)行保護(hù)，引入噁唑烷酮結(jié)構(gòu)，副產(chǎn)物明顯減少，更容易提純且產(chǎn)率增高；本發(fā)明的每步產(chǎn)率均在85%以上，最高達(dá)到95%，大大節(jié)約了生產(chǎn)成本。
本發(fā)明制備目標(biāo)唾液酸供體的路線中提純工藝只涉及簡(jiǎn)單的攪洗或析晶，不涉及過(guò)硅膠柱等復(fù)雜提純工藝，整個(gè)制備路線操作簡(jiǎn)單，容易提純，適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，降低了目標(biāo)唾液酸供體的合成成本，縮短了合成周期，為研發(fā)人體母乳寡糖提供了便利，也為母乳寡糖的大規(guī)模生產(chǎn)提供了可能。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明的目的是提供一種唾液酸供體的制備方法，該唾液酸供體含有噁唑烷酮結(jié)構(gòu)和金剛烷硫苷離去基團(tuán)，具有高活性、高立體選擇性，通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
一種唾液酸供體的制備方法，生產(chǎn)路線如下所示：
所述制備方法包括以下步驟：
①將唾液酸加入酸性樹(shù)脂和甲醇1中，攪拌反應(yīng)20~24小時(shí)，抽濾，得到濾液，將所得濾液旋蒸，得到油狀物，將所得油狀物加入有機(jī)溶劑中，攪拌，抽濾，得到濾餅，將所得濾餅溶于甲醇2中，在0~5℃下加入堿性樹(shù)脂，攪拌50~60分鐘，抽濾，濾液旋蒸得到化合物1；
其中唾液酸、酸性樹(shù)脂、甲醇1、有機(jī)溶劑、甲醇2和堿性樹(shù)脂的質(zhì)量體積比為100g：190~210g：2~2.5L：1.5~2L：1.5~2L：45~55g；
所述的有機(jī)溶劑由體積比為3：1二氯甲烷和甲醇組成；
②將步驟①所得化合物1溶于吡啶中，降溫至0~5℃后向其中滴加乙酸酐，滴加完畢，升溫至20~30℃攪拌反應(yīng)20~24小時(shí)，然后在0~5℃下滴加飽和碳酸氫鈉溶液，滴加完畢后向其中加入乙酸乙酯分液，有機(jī)相旋蒸得到油狀粗品，將所得油狀粗品加入甲基叔丁基醚，加熱至40~50℃攪洗，冷卻至20~30℃，抽濾，得到化合物2；
其中步驟①所得化合物1、吡啶、乙酸酐、飽和碳酸氫鈉溶液、乙酸乙酯和甲基叔丁基醚的質(zhì)量體積比為80~90g：450~500ml：230~250ml：280~320ml：450~500ml：450~500ml；
③將步驟②所得化合物2溶于二氯甲烷中，向其中依次加入BF3-Et2O和1-金剛烷硫醇，攪拌反應(yīng)10~15小時(shí)，然后降溫至0~5℃，滴加飽和碳酸氫鈉溶液至pH至8~9，分液，將有機(jī)相旋蒸，得到油狀粗產(chǎn)品；將所得油狀粗產(chǎn)品加入乙醇，升溫至35~45℃然后在攪拌下向其中滴加水，滴加完畢降溫至20~30℃析晶2小時(shí)，抽濾，濾餅用石油醚重結(jié)晶，得到化合物3；
其中步驟②所得化合物2、二氯甲烷、BF3-Et2O、1-金剛烷硫醇、乙醇、水和石油醚的質(zhì)量體積比為75~85g：150~180ml：5~6g：2~3g：180~220ml：140~160ml：240~260ml；
④將步驟③所得化合物3溶于甲醇中，向其中滴加甲磺酸，滴加完畢回流攪拌20~25小時(shí)，然后降溫至0~5℃，滴加三乙胺淬滅反應(yīng)，減壓蒸餾得到化合物4；
其中步驟③所得化合物3、甲醇、甲磺酸和三乙胺的質(zhì)量體積比為55~60g：580~620ml：20~25g：35~40ml；
⑤向步驟④所得化合物4中加入碳酸氫鈉，然后向其中加入體積比為1：1的乙腈水溶液，降溫至0~5℃，向其中滴加三光氣的二氯甲烷溶液，并在該溫度下攪拌反應(yīng)2~4小時(shí)，滴加飽和氯化鈉溶液淬滅反應(yīng)，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓蒸餾得到粗產(chǎn)品，將所得粗產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮和甲基叔丁基醚的混合液析晶，得到化合物5；
所述三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.2~0.3mol/L；
其中步驟④所得化合物4、碳酸氫鈉、乙腈水溶液、三光氣的二氯甲烷溶液、飽和氯化鈉溶液、乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉、丙酮和甲基叔丁基醚的混合液的質(zhì)量體積比為55~60g：110~120g：2.5~3L：220~230ml：2.5~3L：4~5L：400~500g：1~2L；
⑥將步驟⑤所得化合物5溶于吡啶中，向其中滴加乙酸酐，攪拌反應(yīng)20~24小時(shí)，減壓蒸餾加入二氯甲烷和N，N-二異丙基乙胺，降溫至0~5℃，向其中滴加乙酰氯，滴加結(jié)束后20~30℃下反應(yīng)1~2小時(shí)，然后降溫至0~5℃，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8~9，分液，將有機(jī)相減壓蒸餾得到油狀產(chǎn)品，將所得油狀產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮水溶液析晶，得到唾液酸供體，其結(jié)構(gòu)式為I；
其中步驟⑤所得化合物5、吡啶、乙酸酐、二氯甲烷、N，N-二異丙基乙胺、乙酰氯和丙酮水溶液的質(zhì)量體積比為20~25g：380~420ml：460~500ml：380~420ml：75~85ml：25~30ml：450~500ml。
反應(yīng)原理為：
步驟1：用酸性樹(shù)酯催化進(jìn)行酯化反應(yīng)，用堿性樹(shù)酯除去殘留的原料。
步驟2：乙?；瘜?duì)羥基進(jìn)行保護(hù)。
步驟3：用1-金剛烷硫醇進(jìn)行糖硫苷化。
步驟4：脫羥基和氨基的乙酰基保護(hù)基。
步驟5：在NaHCO3引發(fā)下，用三光氣對(duì)5位氨基和4位羥基進(jìn)行保護(hù)，引入噁唑烷酮結(jié)構(gòu)。
步驟6：乙?；瘜?duì)羥基和氨基進(jìn)行保護(hù)得到目標(biāo)唾液酸供體。
優(yōu)選的，酸性樹(shù)脂為Amberlite IR-120H；所述的堿性樹(shù)酯為Amberlite IRA-900。
優(yōu)選的，步驟①中唾液酸、酸性樹(shù)脂、甲醇1、有機(jī)溶劑、甲醇2和堿性樹(shù)脂的質(zhì)量體積比為100g：200g：2L：1.8L：1.8L：50g。
優(yōu)選的，三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.25mol/L。
進(jìn)一步優(yōu)選的，所述制備方法包括以下步驟：
①將唾液酸加入酸性樹(shù)脂和甲醇1中，攪拌反應(yīng)22小時(shí)，抽濾，得到濾液，將所得濾液旋蒸，得到油狀物，將所得油狀物加入有機(jī)溶劑中，攪拌，抽濾，得到濾餅，將所得濾餅溶于甲醇2中，在0℃下加入堿性樹(shù)脂，攪拌55分鐘，抽濾，濾液旋蒸得到化合物1；
其中唾液酸、酸性樹(shù)脂、甲醇1、有機(jī)溶劑、甲醇2和堿性樹(shù)脂的質(zhì)量體積比為100g：200g：2L：1.8L：1.8L：50g；
所述的所述的有機(jī)溶劑由體積比為3：1二氯甲烷和甲醇組成；
②將步驟①所得化合物1溶于吡啶中，降溫至0℃后向其中滴加乙酸酐，滴加完畢，升溫至25℃攪拌反應(yīng)22小時(shí)，然后在0℃下滴加飽和碳酸氫鈉溶液，滴加完畢后向其中加入乙酸乙酯分液，有機(jī)相旋蒸得到油狀粗品，將所得油狀粗品加入甲基叔丁基醚，加熱至45℃攪洗，冷卻至22℃，抽濾，得到化合物2；
其中步驟①所得化合物1、吡啶、乙酸酐、飽和碳酸氫鈉溶液、乙酸乙酯和甲基叔丁基醚的質(zhì)量體積比為85g：480ml：240ml：300ml：480ml：480ml；
③將步驟②所得化合物2溶于二氯甲烷中，向其中依次加入BF3-Et2O和1-金剛烷硫醇，攪拌反應(yīng)12小時(shí)，然后降溫至0℃，滴加飽和碳酸氫鈉溶液至pH至8，分液，將有機(jī)相旋蒸，得到油狀粗產(chǎn)品；將所得油狀粗產(chǎn)品加入乙醇，升溫至40℃然后在攪拌下向其中滴加水，滴加完畢降溫至25℃析晶2小時(shí)，抽濾，濾餅用石油醚重結(jié)晶，得到化合物3；
其中步驟②所得化合物2、二氯甲烷、BF3-Et2O、1-金剛烷硫醇、乙醇、水和石油醚的質(zhì)量體積比為80g：160ml：5.5g：2.5g：200ml：150ml：250ml；
④將步驟③所得化合物3溶于甲醇中，向其中滴加甲磺酸，滴加完畢回流攪拌22小時(shí)，然后降溫至0℃，滴加三乙胺淬滅反應(yīng)，減壓蒸餾得到化合物4；
其中步驟③所得化合物3、甲醇、甲磺酸和三乙胺的質(zhì)量體積比為58g：600ml：22g：38ml；
⑤向步驟④所得化合物4中加入碳酸氫鈉，然后向其中加入體積比為1：1的乙腈水溶液，降溫至0℃，向其中滴加三光氣的二氯甲烷溶液，并在該溫度下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，滴加飽和氯化鈉溶液淬滅反應(yīng)，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓蒸餾得到粗產(chǎn)品，將所得粗產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮和甲基叔丁基醚的混合液析晶，得到化合物5；
所述三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.25mol/L；
其中步驟④所得化合物4、碳酸氫鈉、乙腈水溶液、三光氣的二氯甲烷溶液、飽和氯化鈉溶液、乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉、丙酮和甲基叔丁基醚的混合液的質(zhì)量體積比為58g：115g：2.8L：225ml：2.8L：4.5L：450g：1.5L；
⑥將步驟⑤所得化合物5溶于吡啶中，向其中滴加乙酸酐，攪拌反應(yīng)22小時(shí)，減壓蒸餾加入二氯甲烷和N，N-二異丙基乙胺，降溫至0℃，向其中滴加乙酰氯，滴加結(jié)束后25℃下反應(yīng)1.5小時(shí)，然后降溫至0℃，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8，分液，將有機(jī)相減壓蒸餾得到油狀產(chǎn)品，將所得油狀產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮水溶液析晶，得到唾液酸供體，其結(jié)構(gòu)式為I；
其中步驟⑤所得化合物5、吡啶、乙酸酐、二氯甲烷、N，N-二異丙基乙胺、乙酰氯和丙酮水溶液的質(zhì)量體積比為22g：400ml：480ml：400ml：80ml：28ml：480ml。
以下結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
本發(fā)明的酸性樹(shù)脂和堿性樹(shù)脂均可在市面上購(gòu)買，以下實(shí)施例采用的酸性樹(shù)脂型號(hào)為Amberlite IR-120H型樹(shù)脂，堿性樹(shù)脂型號(hào)為Amberlite IRA-900。
實(shí)施例1
一種唾液酸供體的制備方法，包括以下步驟：
①將500g唾液酸加入950g酸性樹(shù)脂和10L甲醇1中，攪拌反應(yīng)20小時(shí)，抽濾，得到濾液，將所得濾液旋蒸，得到油狀物，將所得油狀物加入7.5L有機(jī)溶劑中，攪拌，抽濾，得到濾餅，將所得濾餅溶于7.5L甲醇2中，在0℃下加入225g堿性樹(shù)脂，攪拌50分鐘，抽濾，濾液旋蒸得到481g化合物1，產(chǎn)率為92%；
所述的所述的有機(jī)溶劑由體積比為3：1二氯甲烷和甲醇組成；
②取400g步驟①所得化合物1溶于2.25L吡啶中，降溫至0℃后向其中滴加1.15L乙酸酐，滴加完畢，升溫至20℃攪拌反應(yīng)20小時(shí)，然后在0℃下滴加1.4L飽和碳酸氫鈉溶液，滴加完畢后向其中加入2.25L乙酸乙酯分液，有機(jī)相旋蒸得到油狀粗品，將所得油狀粗品加入2.25L甲基叔丁基醚，加熱至40℃攪洗，冷卻至20℃，抽濾，得到627g化合物2，產(chǎn)率為95%；
③取375g步驟②所得化合物2溶于750ml二氯甲烷中，向其中依次加入25gBF3-Et2O和10g1-金剛烷硫醇，攪拌反應(yīng)10小時(shí)，然后降溫至0℃，滴加飽和碳酸氫鈉溶液至pH至8，分液，將有機(jī)相旋蒸，得到油狀粗產(chǎn)品；將所得油狀粗產(chǎn)品加入900ml乙醇，升溫至35℃然后在攪拌下向其中滴加700ml水，滴加完畢降溫至20℃析晶2小時(shí)，抽濾，濾餅用1.2L石油醚重結(jié)晶，得到400g化合物3，產(chǎn)率85%；
④取275g步驟③所得化合物3溶于2.9L甲醇中，向其中滴加100g甲磺酸，滴加完畢回流攪拌20小時(shí)，然后降溫至0℃，滴加175ml三乙胺淬滅反應(yīng)，減壓蒸餾得到化合物4；
⑤取275g步驟④所得化合物4中加入550g碳酸氫鈉，然后向其中加入體積比為1：1的乙腈水溶液12.5L，降溫至0℃，向其中滴加三光氣的二氯甲烷溶液1.1L，并在該溫度下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，滴加飽和氯化鈉溶液12.5L淬滅反應(yīng)，加入20L乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用2kg無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓蒸餾得到粗產(chǎn)品，將所得粗產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮和甲基叔丁基醚的混合液5L析晶，得到171g化合物5，收率為85%；
所述三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.2mol/L；
⑥取100g步驟⑤所得化合物5溶于1.9L吡啶中，向其中滴加2.3L乙酸酐，攪拌反應(yīng)20小時(shí)，減壓蒸餾加入1.9L二氯甲烷和375mlN，N-二異丙基乙胺，降溫至0℃，向其中滴加125ml乙酰氯，滴加結(jié)束后20℃下反應(yīng)1小時(shí)，然后降溫至0℃，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8，分液，將有機(jī)相減壓蒸餾得到油狀產(chǎn)品，將所得油狀產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮水溶液2.25L析晶，得到24g唾液酸供體，其結(jié)構(gòu)式為I，產(chǎn)率為88%。
實(shí)施例2
一種唾液酸供體制備方法，包括以下步驟：
①將500g唾液酸加入1.05kg酸性樹(shù)脂和12.5L甲醇1中，攪拌反應(yīng)24小時(shí)，抽濾，得到濾液，將所得濾液旋蒸，得到油狀物，將所得油狀物加入10L有機(jī)溶劑中，攪拌，抽濾，得到濾餅，將所得濾餅溶于10L甲醇2中，在5℃下加入275g堿性樹(shù)脂，攪拌60分鐘，抽濾，濾液旋蒸得到486g化合物1，產(chǎn)率93%；
所述的有機(jī)溶劑由體積比為3：1二氯甲烷和甲醇組成；
②取450g步驟①所得化合物1溶于2.5L吡啶中，降溫至5℃后向其中滴加1.25L乙酸酐，滴加完畢，升溫至30℃攪拌反應(yīng)24小時(shí)，然后在5℃下滴加飽和碳酸氫鈉溶液1.6L，滴加完畢后向其中加入2.5L乙酸乙酯分液，有機(jī)相旋蒸得到油狀粗品，將所得油狀粗品加入2.5L甲基叔丁基醚，加熱至50℃攪洗，冷卻至30℃，抽濾，得到601g化合物2，產(chǎn)率為93%；
③取425g步驟②所得化合物2溶于900ml二氯甲烷中，向其中依次加入30gBF3-Et2O和15g1-金剛烷硫醇，攪拌反應(yīng)15小時(shí)，然后降溫至5℃，滴加飽和碳酸氫鈉溶液至pH至9，分液，將有機(jī)相旋蒸，得到油狀粗產(chǎn)品；將所得油狀粗產(chǎn)品加入1.1L乙醇，升溫至45℃然后在攪拌下向其中滴加640ml水，滴加完畢降溫至30℃析晶2小時(shí)，抽濾，濾餅用1.3L石油醚重結(jié)晶，得到445g化合物3，收率為87%；
④取300g步驟③所得化合物3溶于3.1L甲醇中，向其中滴加125g甲磺酸，滴加完畢回流攪拌25小時(shí)，然后降溫至5℃，滴加200ml三乙胺淬滅反應(yīng)，減壓蒸餾得到化合物4；
⑤取300g步驟④所得化合物4中加入600g碳酸氫鈉，然后向其中加入體積比為1：1的乙腈水溶液15L，降溫至5℃，向其中滴加三光氣的二氯甲烷溶液1.15L，并在該溫度下攪拌反應(yīng)4小時(shí)，滴加飽和氯化鈉溶液15L淬滅反應(yīng)，加入乙酸乙酯25L萃取，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉2.5kg干燥，抽濾，濾液減壓蒸餾得到粗產(chǎn)品，將所得粗產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮和甲基叔丁基醚的混合液10L析晶，得到193g化合物5，收率為88%；
所述三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.3mol/L；
⑥取125g步驟⑤所得化合物5溶于2.1L吡啶中，向其中滴加2.5L乙酸酐，攪拌反應(yīng)24小時(shí)，減壓蒸餾加入2.1L二氯甲烷和425mlN，N-二異丙基乙胺，降溫至5℃，向其中滴加150ml乙酰氯，滴加結(jié)束后30℃下反應(yīng)2小時(shí)，然后降溫至5℃，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9，分液，將有機(jī)相減壓蒸餾得到油狀產(chǎn)品，將所得油狀產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮水溶液2.5L析晶，得到154g唾液酸供體，其結(jié)構(gòu)式為I，產(chǎn)率為90%。
實(shí)施例3
一種唾液酸供體制備方法，包括以下步驟：
①將500g唾液酸加入1kg酸性樹(shù)脂和11L甲醇1中，攪拌反應(yīng)21小時(shí)，抽濾，得到濾液，將所得濾液旋蒸，得到油狀物，將所得油狀物加入9L有機(jī)溶劑中，攪拌，抽濾，得到濾餅，將所得濾餅溶于8L甲醇2中，在2℃下加入堿性樹(shù)脂，攪拌55分鐘，抽濾，濾液旋蒸得到481g化合物1，產(chǎn)率92%；
所述的有機(jī)溶劑由體積比為3：1二氯甲烷和甲醇組成；
②取420g步驟①所得化合物1溶于2.4L吡啶中，降溫至4℃后向其中滴加1.2L乙酸酐，滴加完畢，升溫至24℃攪拌反應(yīng)21小時(shí)，然后在2℃下滴加飽和碳酸氫鈉溶液1.5L，滴加完畢后向其中加入2.4L乙酸乙酯分液，有機(jī)相旋蒸得到油狀粗品，將所得油狀粗品加入2.4L甲基叔丁基醚，加熱至44℃攪洗，冷卻至22℃，抽濾，得到589g化合物2，產(chǎn)率為85%；
③將400g步驟②所得化合物2溶于800ml二氯甲烷中，向其中依次加入26.5gBF3-Et2O和14g1-金剛烷硫醇，攪拌反應(yīng)11小時(shí)，然后降溫至2℃，滴加飽和碳酸氫鈉溶液至pH至8.5，分液，將有機(jī)相旋蒸，得到油狀粗產(chǎn)品；將所得油狀粗產(chǎn)品加入乙1L醇，升溫至38℃然后在攪拌下向其中滴加水，滴加完畢降溫至22℃析晶2小時(shí)，抽濾，濾餅用石油醚重結(jié)晶，得到423.6g化合物3，產(chǎn)率為88%；
④取295.5g步驟③所得化合物3溶于3L甲醇中，向其中滴加121.5g甲磺酸，滴加完畢回流攪拌21小時(shí)，然后降溫至2℃，滴加195ml三乙胺淬滅反應(yīng)，減壓蒸餾得到化合物4；
⑤取步驟④所得化合物4中加入574.3g碳酸氫鈉，然后向其中加入體積比為1：1的乙腈水溶液15L，降溫至0~5℃，向其中滴加三光氣的二氯甲烷溶液1.14L，并在該溫度下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，滴加飽和氯化鈉溶液14L淬滅反應(yīng)，加入24L乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用2.4kg無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓蒸餾得到粗產(chǎn)品，將所得粗產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮和甲基叔丁基醚7L的混合液析晶，得到179g化合物5，收率85%；
所述三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.24mol/L；
⑥將106g步驟⑤所得化合物5溶于2L吡啶中，向其中滴加2.4L乙酸酐，攪拌反應(yīng)21小時(shí)，減壓蒸餾加入2L二氯甲烷和400mlN，N-二異丙基乙胺，降溫至2℃，向其中滴加乙酰氯，滴加結(jié)束后22℃下反應(yīng)1.5小時(shí)，然后降溫至3℃，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.5，分液，將有機(jī)相減壓蒸餾得到油狀產(chǎn)品，將所得油狀產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮水溶液2.3L析晶，得到126g唾液酸供體，其結(jié)構(gòu)式為I，收率87%。
實(shí)施例4
一種唾液酸供體的制備方法包括以下步驟：
①將100g唾液酸加入200g酸性樹(shù)脂和2L甲醇1中，攪拌反應(yīng)22小時(shí)，抽濾，得到濾液，將所得濾液旋蒸，得到油狀物，將所得油狀物加入1.8L有機(jī)溶劑中，攪拌，抽濾，得到濾餅，將所得濾餅溶于1.8L甲醇2中，在0℃下加入50g堿性樹(shù)脂，攪拌55分鐘，抽濾，濾液旋蒸得到99.3g化合物1，收率95%；
所述的所述的有機(jī)溶劑由體積比為3：1二氯甲烷和甲醇組成；
②將85g步驟①所得化合物1溶于480ml吡啶中，降溫至0℃后向其中滴加240ml乙酸酐，滴加完畢，升溫至25℃攪拌反應(yīng)22小時(shí)，然后在0℃下滴加300ml飽和碳酸氫鈉溶液，滴加完畢后向其中加入480ml乙酸乙酯分液，有機(jī)相旋蒸得到油狀粗品，將所得油狀粗品加入480ml甲基叔丁基醚，加熱至45℃攪洗，冷卻至22℃，抽濾，得到126.2g化合物2，產(chǎn)率90%；
③將80g步驟②所得化合物2溶于160ml二氯甲烷中，向其中依次加入5.5gBF3-Et2O和2.5g1-金剛烷硫醇，攪拌反應(yīng)12小時(shí)，然后降溫至0℃，滴加200ml飽和碳酸氫鈉溶液至pH至8，分液，將有機(jī)相旋蒸，得到油狀粗產(chǎn)品；將所得油狀粗產(chǎn)品加入150ml乙醇，升溫至40℃然后在攪拌下向其中滴加250ml水，滴加完畢降溫至25℃析晶2小時(shí)，抽濾，濾餅用石油醚重結(jié)晶，得到85.7g化合物3，產(chǎn)率89%；
④將58g步驟③所得化合物3溶于600ml甲醇中，向其中滴加22g甲磺酸，滴加完畢回流攪拌22小時(shí)，然后降溫至0℃，滴加38ml三乙胺淬滅反應(yīng)，減壓蒸餾得到化合物4；
⑤向58g步驟④所得化合物4中加入115g碳酸氫鈉，然后向其中加入體積比為1：1的乙腈水溶液2.8L，降溫至0℃，向其中滴加三光氣的二氯甲烷溶液225ml，并在該溫度下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，滴加飽和氯化鈉溶液2.8L淬滅反應(yīng)，加入乙酸乙酯4.5L萃取，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉450g干燥，抽濾，濾液減壓蒸餾得到粗產(chǎn)品，將所得粗產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮和甲基叔丁基醚的混合液1.5L析晶，得到35.77g化合物5，產(chǎn)率85%；
所述三光氣的二氯甲烷溶液的濃度為0.25mol/L；
⑥將22g步驟⑤所得化合物5溶于400ml吡啶中，向其中滴加480ml乙酸酐，攪拌反應(yīng)22小時(shí)，減壓蒸餾加入400ml二氯甲烷和80mlN，N-二異丙基乙胺，降溫至0℃，向其中滴加28ml乙酰氯，滴加結(jié)束后25℃下反應(yīng)1.5小時(shí)，然后降溫至0℃，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8，分液，將有機(jī)相減壓蒸餾得到油狀產(chǎn)品，將所得油狀產(chǎn)品用體積比1：1的丙酮水溶液480ml析晶，得到27.6g唾液酸供體，收率92%，其結(jié)構(gòu)式為I。