本發(fā)明涉及離子液體應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種采用低共熔溶劑提取石榴皮中多酚類物質(zhì)的方法。

背景技術(shù)：

離子液體具有蒸汽壓低、不可燃、溶解性和導(dǎo)電性優(yōu)良、電化學(xué)穩(wěn)定窗口寬等獨特的物理化學(xué)性質(zhì)，在分離技術(shù)、生物催化、有機合成和電化學(xué)等領(lǐng)域倍受關(guān)注。然而，離子液體存在合成過程復(fù)雜、提純困難、成本較高等缺點，從而限制了其大規(guī)模工業(yè)化應(yīng)用和發(fā)展。此外，有關(guān)毒理研究表明，吡啶和咪唑類離子液體并非完全“綠色”，其毒性與傳統(tǒng)有機溶劑相當(dāng)，甚至大于傳統(tǒng)有機溶劑。因此，尋找合成簡單、經(jīng)濟且更為綠色的替代溶劑具有十分重要的意義。

2003年，Abbott等首次發(fā)現(xiàn)了一種由季銨鹽和酰胺化合物形成的物理化學(xué)性質(zhì)優(yōu)良的溶劑—低共熔溶劑(Deep Eutectic Solvents)。這種溶劑無毒性，可生物降解，且合成過程原子利用率達100％，是一種新型的綠色溶劑。低共熔溶劑的物理化學(xué)性質(zhì)與離子液體極其相似，因此也有人把它歸為一類新型離子液體或離子液體類似物。目前，低共熔溶劑已引起了世界各國研究者的廣泛重視，并在分離過程、化學(xué)反應(yīng)、功能材料和電化學(xué)等領(lǐng)域顯示出良好的應(yīng)用前景。

另外，現(xiàn)有技術(shù)中石榴加工副產(chǎn)品—石榴皮中含有多酚類物質(zhì)，主要是綠原酸、鞣花酸等等。綠原酸具有抗氧化、抗菌、抗毒，消除自由基、抗衰老、抗骨骼肌肉老化等許多用處；鞣花酸則表現(xiàn)出對化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)癌變及其他多種癌變有明顯的抑制作用，特別是對結(jié)腸癌、食管癌、肝癌、肺癌、舌及皮膚癌等有很好的抑制作用?，F(xiàn)有技術(shù)中石榴皮的提取工藝存在提取不徹底，工藝復(fù)雜等等的缺陷。

因此，亟需提供一種操作簡單、提取徹底的提取石榴皮中多酚類物質(zhì)的方法。目前，國內(nèi)外還未發(fā)現(xiàn)采用低共熔溶劑提取石榴皮中多酚類物質(zhì)的相關(guān)報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種采用合成簡單、溶解性高、安全綠色的低共熔溶劑提取石榴皮中多酚類物質(zhì)的方法，具有操作簡單、提取徹底的優(yōu)點。

本發(fā)明所述的采用低共熔溶劑提取石榴皮中多酚類物質(zhì)的方法，包括以下步驟：

(1)材料準(zhǔn)備：將石榴皮干燥、粉碎、過篩；

(2)超聲加熱提取：將步驟(1)過篩后的石榴皮與低共熔溶劑混合，經(jīng)超聲加熱提取，石榴皮中的多酚類物質(zhì)被提取到低共熔溶劑中，得到含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑；

(3)離心、稀釋、過濾：先將步驟(2)得到的含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑離心后，取離心液，再向離心液中加入乙醇稀釋，最后經(jīng)有機濾膜過濾。

其中：

步驟(1)中石榴皮粉碎至60～120目。

步驟(2)中，低共熔溶劑的配置方法如下：先將氯化膽堿和乙二醇混合，在無水條件和攪拌下，加熱直至形成均一穩(wěn)定的透明溶液，最后密封保存。

所述的氯化膽堿和乙二醇的摩爾比為1:1～2。

所述的加熱溫度為65～80℃。

步驟(2)中，將步驟(1)過篩后的石榴皮與低共熔溶劑混合后，加入酸性物質(zhì)控制體系的pH值為3.0～3.2，加入表面活性劑后，再進行超聲加熱提取。

本發(fā)明通過添加酸性物質(zhì)控制體系的pH值，不僅增加了低共熔溶劑的表面張力，而且更有利于石榴皮中結(jié)合性多酚類物質(zhì)的釋放。

本發(fā)明通過添加表面活性劑與低共熔溶劑進行復(fù)配，調(diào)控低共熔溶劑的微觀結(jié)構(gòu)，改變低共熔溶劑的密度和黏度，產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，提高多酚類物質(zhì)的溶解性。

所述的酸性物質(zhì)優(yōu)選鹽酸水溶液或乙酸水溶液，濃度為0.8～1.2mol/L。

所述的表面活性劑為吐溫類表面活性劑，表面活性劑與步驟(2)中低共熔溶劑的質(zhì)量體積比例是0.01～0.02g:1mL。

步驟(1)中過篩后的石榴皮與步驟(2)中低共熔溶劑的質(zhì)量體積比例是0.75～1.5g:1mL。

步驟(2)中超聲加熱提取時間為15～25min，超聲加熱提取溫度為50～80℃，超聲功率為90～110W。

步驟(3)中乙醇用量為步驟(2)中低共熔溶劑用量的0.1～0.2倍。

步驟(3)中于10000rpm、4℃條件下，離心8～15min。

步驟(3)中有機濾膜的孔徑為0.22μm，有機濾膜為市售產(chǎn)品，本發(fā)明優(yōu)選尼龍(聚酰胺)微孔濾膜。

本發(fā)明的有益效果如下：

(1)本發(fā)明低共熔溶劑具有制備工藝簡單、成本低、不采用有毒有害溶劑等優(yōu)點，為實際生產(chǎn)和應(yīng)用提供了有利條件；

(2)本發(fā)明采用低共熔溶劑提取石榴皮中多酚類物質(zhì)條件溫和、操作方便、對多酚類物質(zhì)提取徹底；

(3)本發(fā)明使石榴加工副產(chǎn)品石榴皮變廢為寶，對于石榴資源的有效利用及深層次產(chǎn)品加工與開發(fā)具有重要的意義。

附圖說明

圖1是實施例1多酚類標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液的高效液相色譜圖。

圖2是實施例2石榴皮中多酚類物質(zhì)的高效液相色譜圖。

圖3是實施例3石榴皮中多酚類物質(zhì)的高效液相色譜圖。

圖4是實施例4石榴皮中多酚類物質(zhì)的高效液相色譜圖。

圖5是實施例5石榴皮中多酚類物質(zhì)的高效液相色譜圖。

圖6是實施例6石榴皮中多酚類物質(zhì)的高效液相色譜圖。

圖7是實施例7石榴皮中多酚類物質(zhì)的高效液相色譜圖。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步描述。

實施例1

配置氯化膽堿、乙二醇低共熔溶劑：

摩爾比為1:2的氯化膽堿和乙二醇在無水條件和攪拌下，70℃加熱直至形成均一穩(wěn)定的透明溶液，密封保存。

本發(fā)明將低共熔溶劑用于多酚類標(biāo)準(zhǔn)品的處理，并借助于高效液相色譜對多酚類物質(zhì)進行靈敏檢測。具體步驟如下；

(1)稱取一定量的綠原酸、鞣花酸兩種多酚類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品，加入乙醇溶解配成綠原酸、鞣花酸均為2.5×10^-4mol/L的多酚類物質(zhì)的混合溶液；

(2)量取2.0mL步驟(1)中得到的混合溶液，加入2.0mL低共熔溶劑，渦旋振蕩15min，再經(jīng)0.22μm有機濾膜過濾；

(3)將步驟(2)得到的濾液在波長為276nm的條件下進行高效液相紫外檢測，色譜圖見圖1。

實施例2

采用實施例1制備的低共熔溶劑對石榴皮樣品中多酚類物質(zhì)進行提取，然后進行高效液相紫外檢測。具體步驟如下：

(1)材料準(zhǔn)備：將石榴皮干燥、粉碎至60～120目、過篩；

(2)超聲加熱提?。簩⒉襟E(1)過篩后的1.0g石榴皮放于4mL離心管中，加入1mL低共熔溶劑溶解，于65℃，90W功率，超聲加熱22.5min，石榴皮中的多酚類物質(zhì)被提取到低共熔溶劑中，得到含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑；

(3)離心、稀釋、過濾：先將步驟(2)得到的含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑在10000rpm，4℃條件下離心10min，取200μL離心液，再向離心液中加入200μL乙醇稀釋，最后經(jīng)0.22μm的有機濾膜過濾。

將過濾后的濾液在波長為276nm的條件下進行高效液相色譜分離紫外檢測器檢測，色譜圖見圖2。

以石榴皮質(zhì)量g為計算基準(zhǔn)，此條件下提取綠原酸得率為28.249mg/g，鞣花酸得率為10.942mg/g。

實施例3

采用實施例1制備的低共熔溶劑對石榴皮樣品中多酚類物質(zhì)進行提取，然后進行高效液相紫外檢測。具體步驟如下：

(1)材料準(zhǔn)備：將石榴皮干燥、粉碎至60～120目、過篩；

(2)超聲加熱提?。簩⒉襟E(1)過篩后的1.5g石榴皮放于4mL離心管中，加入1mL低共熔溶劑溶解，于80℃，100W功率，超聲加熱15min，石榴皮中的多酚類物質(zhì)被提取到低共熔溶劑中，得到含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑；

(3)離心、稀釋、過濾：先將步驟(2)得到的含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑在10000rpm，4℃條件下離心12min，取200μL離心液，再向離心液中加入200μL乙醇稀釋，最后經(jīng)0.22μm的有機濾膜過濾。

將過濾后的濾液在波長為276nm的條件下進行高效液相紫外檢測，色譜圖見圖3。

以石榴皮質(zhì)量g為計算基準(zhǔn)，此條件下提取綠原酸得率為20.815mg/g，鞣花酸得率為9.854mg/g。

實施例4

采用實施例1制備的低共熔溶劑對石榴皮樣品中多酚類物質(zhì)進行提取，然后進行高效液相紫外檢測。具體步驟如下：

(1)材料準(zhǔn)備：將石榴皮干燥、粉碎至60～120目、過篩；

(2)超聲加熱提?。簩⒉襟E(1)過篩后的1.25g石榴皮放于4mL離心管中，加入1mL低共熔溶劑溶解，于65℃，95W功率，超聲加熱15min，石榴皮中的多酚類物質(zhì)被提取到低共熔溶劑中，得到含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑；

(3)離心、稀釋、過濾：先將步驟(2)得到的含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑在10000rpm，4℃條件下離心15min，取200μL離心液，再向離心液中加入200μL乙醇稀釋，最后經(jīng)0.22μm的有機濾膜過濾。

將過濾后的濾液在波長為276nm的條件下進行高效液相紫外檢測，色譜圖見圖4。

以石榴皮質(zhì)量g為計算基準(zhǔn)，此條件下提取綠原酸得率為24.355mg/g，鞣花酸得率為8.887mg/g。

實施例5

采用實施例1制備的低共熔溶劑對石榴皮樣品中多酚類物質(zhì)進行提取，然后進行高效液相紫外檢測。具體步驟如下：

(1)材料準(zhǔn)備：將石榴皮干燥、粉碎至60～120目、過篩；

(2)超聲加熱提取：將步驟(1)過篩后的1.0g石榴皮放于4mL離心管中，加入1mL低共熔溶劑溶解，加入濃度為1mol/L的鹽酸水溶液控制體系的pH值為3.0，加入表面活性劑0.01g吐溫80，于65℃，90W功率，超聲加熱22.5min，石榴皮中的多酚類物質(zhì)被提取到低共熔溶劑中，得到含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑；

(3)離心、稀釋、過濾：先將步驟(2)得到的含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑在10000rpm，4℃條件下離心10min，取200μL離心液，再向離心液中加入200μL乙醇稀釋，最后經(jīng)0.22μm的有機濾膜過濾。

將過濾后的濾液在波長為276nm的條件下進行高效液相色譜分離紫外檢測器檢測，色譜圖見圖5。

以石榴皮質(zhì)量g為計算基準(zhǔn)，此條件下提取綠原酸得率為31.802mg/g，鞣花酸得率為13.251mg/g。

實施例6

采用實施例1制備的低共熔溶劑對石榴皮樣品中多酚類物質(zhì)進行提取，然后進行高效液相紫外檢測。具體步驟如下：

(1)材料準(zhǔn)備：將石榴皮干燥、粉碎至60～120目、過篩；

(2)超聲加熱提?。簩⒉襟E(1)過篩后的1.5g石榴皮放于4mL離心管中，加入1mL低共熔溶劑溶解，加入濃度為1mol/L的鹽酸水溶液控制體系的pH值為3.1，加入表面活性劑0.02g吐溫80，于80℃，100W功率，超聲加熱15min，石榴皮中的多酚類物質(zhì)被提取到低共熔溶劑中，得到含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑；

(3)離心、稀釋、過濾：先將步驟(2)得到的含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑在10000rpm，4℃條件下離心12min，取200μL離心液，再向離心液中加入200μL乙醇稀釋，最后經(jīng)0.22μm的有機濾膜過濾。

將過濾后的濾液在波長為276nm的條件下進行高效液相紫外檢測，色譜圖見圖6。

以石榴皮質(zhì)量g為計算基準(zhǔn)，此條件下提取綠原酸得率為29.517mg/g，鞣花酸得率為12.438mg/g。

實施例7

采用實施例1制備的低共熔溶劑對石榴皮樣品中多酚類物質(zhì)進行提取，然后進行高效液相紫外檢測。具體步驟如下：

(1)材料準(zhǔn)備：將石榴皮干燥、粉碎至60～120目、過篩；

(2)超聲加熱提?。簩⒉襟E(1)過篩后的1.25g石榴皮放于4mL離心管中，加入1mL低共熔溶劑溶解，加入濃度為1.2mol/L的鹽酸水溶液控制體系的pH值為3.2，加入表面活性劑0.01g吐溫80，于65℃，95W功率，超聲加熱15min，石榴皮中的多酚類物質(zhì)被提取到低共熔溶劑中，得到含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑；

(3)離心、稀釋、過濾：先將步驟(2)得到的含有多酚類物質(zhì)的低共熔溶劑在10000rpm，4℃條件下離心15min，取200μL離心液，再向離心液中加入200μL乙醇稀釋，最后經(jīng)0.22μm的有機濾膜過濾。

將過濾后的濾液在波長為276nm的條件下進行高效液相紫外檢測，色譜圖見圖7。

以石榴皮質(zhì)量g為計算基準(zhǔn)，此條件下提取綠原酸得率為36.731mg/g，鞣花酸得率為16.255mg/g。

對比例1

以現(xiàn)有技術(shù)中的方法對石榴皮樣品中多酚類物質(zhì)進行提取，具體步驟如下：

(1)材料準(zhǔn)備：將石榴皮干燥、粉碎至60～120目、過篩；

(2)提取：將步驟(1)過篩后的1.0g石榴皮放于4mL離心管中，加入1mL pH 3.1的60％乙醇溶液，于65℃，95W功率，超聲加熱15min；

(3)離心、稀釋、過濾：先將步驟(2)得到的溶液在10000rpm，4℃條件下離心15min，取200μL離心液，最后經(jīng)0.22μm的有機濾膜過濾。

以石榴皮質(zhì)量g為計算基準(zhǔn)，此條件下提取綠原酸得率為18.431mg/g，鞣花酸得率為7.207mg/g。