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一種用于水體凈化的復(fù)合微生物菌劑的制備方法與流程

文檔序號(hào):11837447閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于水體凈化的復(fù)合微生物菌劑的制備方法,步驟如下:

(1)菌種活化:

將在4℃溫度下斜面保存的1447酵母菌(CGMCC NO.2.3889)、枸杞酵母菌(CGMCC NO.2.3854)、酒精酵母菌(CGMCC NO.2.3868)、枯草芽孢桿菌(CGMCC NO.1.2172)、巨大芽孢桿菌(CGMCC NO.1.2927)活化,將其分別劃線于相應(yīng)固體培養(yǎng)基上,其中酵母菌于28℃培養(yǎng)2天,細(xì)菌于37℃培養(yǎng)1天;

(2)種子液制備:挑取活化的菌落,分別以1%接種量接種到各自液體培養(yǎng)基中,酵母菌于28℃、180rpm培養(yǎng)2天,細(xì)菌于37℃、220rpm培養(yǎng)1天;

所述種子培養(yǎng)基組成為:

酵母菌培養(yǎng)基為YEPD培養(yǎng)基:蛋白胨20 g/L,酵母膏10 g/L,葡萄糖20 g/L,pH 6.0,121℃滅菌20min;

細(xì)菌培養(yǎng)基為肉湯培養(yǎng)基:蛋白胨10 g/L,牛肉膏5 g/L,NaCl 5 g/L,pH 7.2-7.4,121℃滅菌20min;

(3)菌種篩選

取處于生長至對(duì)數(shù)中期的五種菌體的種子液稀釋后調(diào)整為OD600為0.9,以五種菌體種子液添加量作為影響污水中總磷降解效果的因素,用minitab軟件中的分析因子設(shè)計(jì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,選用實(shí)驗(yàn)次數(shù)為N=20次的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行PB實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),設(shè)計(jì)兩個(gè)空白作為誤差分析項(xiàng),對(duì)于每個(gè)菌體分別選取高水平(1)和低水平(-1),其中高水平的含義為向100mL污水中添加1.5mL種子液,低水平的含義為向100mL污水中添加1mL種子液,以污水中總磷降解率作為響應(yīng)值,單因素T檢驗(yàn)(顯著性差別檢驗(yàn))結(jié)果表明1447酵母菌、枸杞酵母菌、巨大芽孢桿菌的p值小于0.05(置信限度為95%),由此確定1447酵母菌、枸杞酵母菌、巨大芽孢桿菌為影響污水中總磷降解的顯著性菌株;

(4)菌種復(fù)合

選取1447酵母菌、枸杞酵母菌、巨大芽孢桿菌作為降解污水中總磷的顯著性因素進(jìn)行最陡爬坡實(shí)驗(yàn),三株顯著性菌株對(duì)于污水中總磷降解顯示為正效應(yīng),因此對(duì)于1447酵母菌、枸杞酵母菌、巨大芽孢桿菌分別選擇以3mL、2mL、1mL種子液體積作為變化的步長,酒精酵母和枯草芽孢桿菌選擇平均水平1.5mL進(jìn)行最陡爬坡實(shí)驗(yàn)以找出使污水中總磷降解率能夠達(dá)到最佳水平的組合即中心點(diǎn),1447酵母菌11mL、枸杞酵母9mL、酒精酵母1.5mL、巨大芽孢桿菌5mL、枯草芽孢桿菌1.5mL;

運(yùn)用minitab軟件分析程序?qū)?0組實(shí)驗(yàn)的響應(yīng)值進(jìn)行回歸分析;

經(jīng)過回歸方程擬合,因素1447酵母菌、枸杞酵母菌、巨大芽孢桿菌、酒精酵母和枯草芽孢桿菌對(duì)污水中總磷降解率的影響可以用函數(shù)式表示:

Y=93.095+1.082X1+1.668X2+1.15X3-3.288X12-2.419X22-4.824X32+0.719X1X2-2.994X1X3+2.375X2X3;

模型只顯示顯著性因素對(duì)總磷降解率的影響,不考慮非顯著性因素對(duì)于污水中總磷的降解效果,PB實(shí)驗(yàn)已經(jīng)驗(yàn)證顯著性因素;

其中Y代表污水中總磷的降解率;

X1,X2,X3分別代表1447酵母菌種子液體積,枸杞酵母種子液體積,巨大芽孢桿菌種子液體積;

用minitab軟件擬合回歸模型,擬合模型結(jié)果顯示調(diào)整系數(shù)R2=0.9768,說明模型可以解釋實(shí)驗(yàn)所得的污水中總磷降解率的變化,方程擬合較好,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信;

回歸模型分別對(duì)X1,X2,X3進(jìn)行求導(dǎo)解方程,得出實(shí)際所加1447酵母菌、枸杞酵母菌、巨大芽孢桿菌種子液體積分別為11mL、9mL、5mL;

(4)驗(yàn)證試驗(yàn):進(jìn)行驗(yàn)證污水處理實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)得出的總磷降解率的平均值與模型預(yù)測數(shù)值接近,說明模型能夠反應(yīng)出篩選出的菌株對(duì)于污水中總磷降解率的影響,用此方法確定出的最佳菌株組成具有可行性,最終確定用于污水處理的復(fù)合菌株配比為:1447酵母菌11mL、枸杞酵母9mL、酒精酵母1.5mL、巨大芽孢桿菌5mL、枯草芽孢桿菌1.5mL,總磷降解率為93.2%,處理后污水中總磷含量為4.5g/l,達(dá)到污水排放三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法,所述污水處理?xiàng)l件具體為:將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的相應(yīng)菌株的種子液接種到生活污水中,隨后在搖床上以20℃、110rpm的條件進(jìn)行為期4天的凈化處理;取污水于10mL離心管中,于5000rpm、10min進(jìn)行離心處理,取上清液進(jìn)行總磷含量的測定,總磷含量測定采用過硫酸鉀消解法。

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