本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及鹽酸洛非西定的新用途，具體涉及一種鹽酸洛非西定的藥物組合物及其醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：鹽酸洛非西定臨床用于減輕或解除阿片類藥物的戒斷綜合癥。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸洛非西定的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽酸洛非西定和一種天然產(chǎn)物，鹽酸洛非西定和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療便秘。本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種鹽酸洛非西定的藥物組合物，包括鹽酸洛非西定、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將玉竹粉碎，用75～85％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集10～15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)用80％乙醇熱回流提取，合并提取液。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。上述化合物(Ⅰ)在制備治療便秘的藥物中的應(yīng)用。上述鹽酸洛非西定的藥物組合物在制備治療便秘的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的鹽酸洛非西定的藥物組合物中含有鹽酸洛非西定和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸洛非西定、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)大鼠便秘具有治療作用；鹽酸洛非西定和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)大鼠便秘的治療效果進(jìn)一步提高，可開發(fā)成治療便秘的藥物。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。分離方法：(a)將玉竹(2kg)粉碎，用80％乙醇熱回流提取(15L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水飽和的正丁醇(3L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用10％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1(10個(gè)柱體積)、30:1(8個(gè)柱體積)、15:1(10個(gè)柱體積)和5:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1(10個(gè)柱體積)、4:1(8個(gè)柱體積)和2:1(6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集10～15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z237.1769，結(jié)合核磁特征可得分子式為C15H24O2，不飽和度為4。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，CDCl3，500MHz)：H-2α(1.79，m)，H-2β(2.01，m)，H-3α(1.69，m)，H-3α(2.22，m)，H-5(2.24，br，t，J＝7.8Hz)，H-6α(2.16，br，d，J＝12.6Hz)，H-6β(2.26，ddd，J＝12.6，7.8，1.8Hz)，H-8α(1.89，m)，H-8β(1.76，m)，H-9α(2.03，dd，J＝7.5，4.6Hz)，H-9β(2.15，m)，H-12(1.17，s)，H-13(1.24，s)，H-14(1.87，s)，H-15(1.34，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，CDCl3，125MHz)：123.6(C，1-C)，32.2(CH2，2-C)，39.9(CH2，3-C)，93.3(C，4-C)，55.7(CH，5-C)，33.8(CH2，6-C)，94.6(C，7-C)，29.9(CH2，8-C)，34.8(CH2，9-C)，120.8(C，10-C)，74.2(C，11-C)，24.1(CH3，12-C)，25.2(CH3，13-C)，33.7(CH3，14-C)，29.8(CH3，15-C)。紅外光譜(3374cm-1)表明該化合物含有羥基基團(tuán)?；衔锏臍渥V中顯示該化合物有四個(gè)單峰甲基信號(hào)(δH1.17，1.24，1.87和1.34)。該化合物的碳譜顯示15個(gè)碳信號(hào)，其中有一組雙鍵碳信號(hào)，以及三個(gè)連氧碳信號(hào)。綜合高分辨質(zhì)譜以及核磁數(shù)據(jù)，該化合物可能為一個(gè)倍半萜類化合物。查閱文獻(xiàn)可以看出該化合物和已知化合物4α,7α-Epoxyguaiane-10α,11-diol具有相似的結(jié)構(gòu)。比較兩者的核磁數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，新化合物中相較于4α,7α-Epoxyguaiane-10α,11-diol唯一的區(qū)別是多出了一組雙鍵碳信號(hào)。在新化合物的HMBC譜中，H-9/C-10，H-9/C-14以及H-14/C-1的相關(guān)性說明C-10和C-1位之間為雙鍵。因此，該化合物仍然是一個(gè)C-4、C-7位形成氧橋的愈創(chuàng)木烷型倍半萜。ROESY譜中H-5與H-15，H-6β與H-12的相關(guān)性表明H-5和H-15為β構(gòu)型，C-4和C-7的氧橋?yàn)棣翗?gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：實(shí)施例2：藥理作用本實(shí)施例用鹽酸嗎啡制備大鼠便秘模型，探討藥物對(duì)便秘大鼠模型血清及結(jié)腸組織中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)水平影響。1、材料與方法1.1動(dòng)物7周齡SD大鼠60只，SPF級(jí)，雌雄各半，購自北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飼養(yǎng)條件：雌雄分開飼養(yǎng)，每籠6只，室溫(20±2)℃，相對(duì)濕度(60±10)％。所有大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水。1.2試劑與樣品鹽酸洛非西定購自中國藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見實(shí)施例1。NO、SOD、MDA、GSH試劑盒均購自上海榮盛生物制品研究所，鹽酸嗎啡購自東北制藥有限公司，粉末活性炭購自天津藥業(yè)有限公司。1.3大鼠分組及模型制備大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、鹽酸洛非西定組(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1)、鹽酸洛非西定與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1鹽酸洛非西定+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后，除正常組每天皮下注射3.0mg/kg蒸餾水外，其余組每天皮下注射鹽酸嗎啡3.0mg/kg，連續(xù)注射40d，1次/d，制作大鼠便秘模型。造模成功后，正常組、模型組蒸餾水10mL/kg灌胃，鹽酸洛非西定組、化合物(Ⅰ)組、鹽酸洛非西定與化合物(Ⅰ)組合物組按上述劑量灌胃給藥。1.4血清NO、MDA、SOD、GSH水平檢測大鼠灌胃4周，禁食不禁水12h，乙醚麻醉，毛細(xì)玻璃管從眼底靜脈叢采血，分離血清，4℃保存。根據(jù)試劑盒說明書方法，對(duì)大鼠血清中NO、MDA、SOD、GSH水平進(jìn)行測定。1.5結(jié)腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平檢測處死大鼠后，解剖分離出大腸，生理鹽水沖洗干凈，稱取結(jié)腸組織0.3g，以生理鹽水研磨成10％的勻漿液。離心后提取上清液，-20℃保存。根據(jù)試劑盒說明書中的方法對(duì)大鼠結(jié)腸組織勻漿液中NO、MDA、SOD、GSH水平進(jìn)行測定。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1對(duì)便秘模型大鼠血清NO、MDA、SOD、GSH水平的影響與正常組相比，模型組大鼠血清中NO、MDA水平均上升，SOD、GSH水平均下降(P＜0.05)，表明大鼠便秘模型造模成功。與模型組相比，鹽酸洛非西定組和化合物(Ⅰ)組NO、MDA水平降低，SOD、GSH水平升高(P＜0.05)，鹽酸洛非西定與化合物(Ⅰ)組合物組NO、MDA水平顯著降低(P＜0.01)，SOD、GSH水平顯著升高(P＜0.01)。見表1。表1各組大鼠血清NO、MDA、SOD、GSH水平比較(μmol/L)組別NOSODMDAGSH正常對(duì)照組12.67±3.944.12±0.982.66±0.7512.69±2.15模型對(duì)照組20.69±5.972.69±0.844.49±0.855.67±1.06鹽酸洛非西定組16.68±7.613.16±0.753.07±0.879.68±2.11化合物(Ⅰ)組16.34±5.813.64±0.842.95±0.999.96±2.10鹽酸洛非西定與化合物(Ⅰ)組合物組13.36±7.514.18±0.942.56±0.7812.04±3.012.2對(duì)便秘模型大鼠結(jié)腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平的影響與正常組相比，模型組血清中NO、MDA水平上升，SOD、GSH水平下降(P＜0.05)。與模型組相比，鹽酸洛非西定組和化合物(Ⅰ)組NO、MDA水平降低，SOD、GSH水平升高(P＜0.05)，鹽酸洛非西定與化合物(Ⅰ)組合物組NO、MDA水平顯著降低，SOD、GSH水平顯著升高(P＜0.01)。結(jié)果見表2。表2對(duì)便秘模型大鼠結(jié)腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平的影響(μmol/L)組別NOSODMDAGSH正常對(duì)照組3.18±0.842.17±0.411.68±0.5110.65±1.67模型對(duì)照組5.63±0.740.89±0.153.03±0.785.92±1.06鹽酸洛非西定組4.04±0.881.48±0.432.65±0.477.96±2.67化合物(Ⅰ)組3.96±0.711.62±0.272.06±0.597.63±1.61鹽酸洛非西定與化合物(Ⅰ)組合物組2.77±0.462.23±0.411.58±0.4810.81±2.68便秘是臨床上以排便次數(shù)減少、排便困難、糞便過硬等為主要表現(xiàn)的一種常見慢性消化道癥狀。由于硬糞的長期滯留和刺激，結(jié)腸黏膜常有不同程度的炎性改變，從而引發(fā)一系列的氧自由基反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)；便秘引起的炎癥反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生大量的氧自由基，從而導(dǎo)致細(xì)胞膜不飽和脂肪酸脂質(zhì)過氧化程度的加重。NO是一種由血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的新型信號(hào)分子，有強(qiáng)烈擴(kuò)張血管的作用，從而廣泛參與機(jī)體生理病理機(jī)能的調(diào)節(jié)。過高的NO水平會(huì)使腸管平滑肌松弛，大腸傳導(dǎo)減慢，從而引起腸道運(yùn)動(dòng)的異常，引起便秘。NO在生成時(shí)產(chǎn)生了大量的氧自由基，這些自由基使脂質(zhì)氧化，并影響線粒體電子傳遞功能，造成組織細(xì)胞損傷。調(diào)節(jié)NO在體內(nèi)的濃度從而恢復(fù)大腸生理機(jī)能和傳導(dǎo)功能，對(duì)肛腸疾病的治療具有重要的臨床意義。NO在體內(nèi)可分解為羥自由基和NO2-自由基。這兩種自由基具有很強(qiáng)的氧化性，可加劇SOD、GSH的分子結(jié)構(gòu)損傷，促使其合成和再生減少，顯著減弱了SOD、GSH等抗氧化酶清除自由基的能力，從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生更大的細(xì)胞毒性。SOD、GSH能有效地清除細(xì)胞代謝過程中產(chǎn)生的氧自由基，終止自由基連鎖反應(yīng)。SOD活性隨著機(jī)體的老化而降低，故測定該酶活性可作為檢測機(jī)體抗氧化能力和衰老的一個(gè)定量指標(biāo)。機(jī)體內(nèi)另一類具有清除氧自由基抗衰老作用的酶系是GSH，它對(duì)防止機(jī)體內(nèi)氧自由基引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)特別重要。SOD、GSH等酶系在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮協(xié)同作用，具有減輕和阻斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、保護(hù)機(jī)體免受各類氧自由基的侵害、延緩衰老等作用，是評(píng)價(jià)細(xì)胞受損與否的重要指標(biāo)。所以，測定SOD、GSH等酶系是衡量藥物抗氧化作用的重要方法之一。本實(shí)驗(yàn)便秘模型組大鼠血清與結(jié)腸組織中NO、MDA水平高于正常組，SOD、GSH水平低于正常組，表明過氧化反應(yīng)是便秘產(chǎn)生的重要機(jī)制之一。結(jié)果表明，鹽酸洛非西定、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)大鼠便秘具有治療作用；鹽酸洛非西定和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)大鼠便秘的治療效果進(jìn)一步提高，可開發(fā)成治療便秘的藥物。上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3