本發(fā)明涉及一種稻綠核菌，尤其是一種高產(chǎn)五種稻曲病菌毒素及其產(chǎn)毒方法方法。
背景技術(shù)：
稻曲病菌毒素對人、畜具有毒害作用。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，ustiloxins能夠抑制細胞微管蛋白的聚合，使細胞骨架的形成受到干擾，并可抑制細胞有絲分裂的發(fā)生，導(dǎo)致動物內(nèi)臟發(fā)生病變(lietal，2008；koisoetal，1994)。nakamura等(1993)曾報道受ustiloxins污染的飼料能引起動物嚴重的腎臟疾病；而koiso等(1994)也發(fā)現(xiàn)小鼠離體肝細胞和腎管狀細胞會隨ustiloxina處理而急劇壞死，同時具有與秋水仙素類似的性質(zhì)，可抑制細胞的有絲分裂或引起有絲分裂反常，因此可將這一特性應(yīng)用于腫瘤細胞的控制，是具有潛在發(fā)展遠景的抗腫瘤藥物。
同樣，植物也會受稻曲病菌毒素的毒害作用。稻曲球浸出液無論是否煮熟均對水稻、小麥、玉米種子萌發(fā)及生長具有明顯的抑制作用(田鴻等，2000)；李燕等(2012)也在研究中發(fā)現(xiàn)粗毒素對小麥胚根生長抑制率可達到50％以上。hamed等(2014)利用稻曲球提取液考察對浮萍植物生長的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)葉片呈現(xiàn)生長下降，出現(xiàn)壞死斑、葉片淺褐色甚至死亡。
目前從稻曲球的水提取液中分析測出6種結(jié)構(gòu)相似的稻曲病菌毒素命名為：ustiloxina、ustiloxinb、ustiloxinc、ustiloxind、ustiloxine和ustiloxinf；并且除由于在稻曲球中含量較少不易獲得的ustiloxine外，其他5種毒素的分子式以及結(jié)構(gòu)式均通過x-射線結(jié)晶學及氨基酸分析等技術(shù)得到確定。koiso等于1992-1998年首次成功從稻曲球中分離純化出5種單一稻曲病菌毒素，由于采用的分離源為稻曲球，雜菌及其他雜質(zhì)較多，因此，他們所采用的分離方法過程復(fù)雜、費時費力，分離純化效率低，不利于大批量分離純化，從而使稻曲病菌毒素的廣泛研究受到限制限制。目前，國內(nèi)只有ustiloxina有純品(祭芳等，2012)。由于從稻曲球中分離5種純品的難度比較大，目前的研究多是利用提取的粗毒素(尤其是應(yīng)用在稻曲病菌毒素對植物的毒害研究中)進行的，市場上并沒有稻曲病菌毒素的標準品(純品)出售。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于，提供一種可以產(chǎn)五種稻曲病菌毒素的高產(chǎn)五種稻曲病菌毒素及其產(chǎn)毒方法方法。
本發(fā)明解決技術(shù)問題的技術(shù)方案為：一種高產(chǎn)五種稻曲病菌毒素的稻綠核菌，保藏號為cctccno：m2016229。
本發(fā)明解決技術(shù)問題的進一步技術(shù)方案為：一種高產(chǎn)五種稻曲病菌毒素的稻綠核菌的產(chǎn)毒方法，其方法如下：大米培養(yǎng)基：大米于旋風研磨儀中粉碎，稱取30g米粉于250ml錐形瓶中，于121℃下高溫壓濕熱滅菌20min，在無菌條件下，分別加入0-30ml無菌水，搖勻后采用孢子懸浮液接種(孢子數(shù)量為1×106個/瓶)，28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15d；
毒素提?。喝∨囵B(yǎng)15d的大米培養(yǎng)基，按米粉∶水＝1∶5的比例進行提取毒素。
上述菌株的稻綠核菌可以高產(chǎn)五種毒素，該稻曲病菌(稻綠核菌)yy7850(ustilaginoideavirens(cke.)tak.yy7850)已于2016年4月26日送交湖北省武漢市武漢大學內(nèi)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)保藏，其保藏號為cctccno：m2016229，并且能提取五種高產(chǎn)毒素。
附圖說明
圖1為5種稻曲病菌所產(chǎn)毒素含量的測定結(jié)果。
具體實施方式
本發(fā)明一種高產(chǎn)五種稻曲病菌毒素的稻綠核菌，保藏號為cctccno：m2016229。一種高產(chǎn)五種稻曲病菌毒素的稻綠核菌的產(chǎn)毒方法，其方法如下：大米培養(yǎng)基：大米于旋風研磨儀中粉碎，稱取30g米粉于250ml錐形瓶中，于121℃下高溫壓濕熱滅菌20min。在無菌條件下，分別加入0、15和30ml無菌水，搖勻后采用孢子懸浮液接種(孢子數(shù)量為1×106個/瓶)，28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15d；毒素提?。喝∨囵B(yǎng)15d的大米培養(yǎng)基，按米粉∶水＝1∶5的比例進行提取毒素。
取培養(yǎng)15d的大米培養(yǎng)基，按米粉∶水＝1∶5的比例進行提取毒素，提取凈化后的毒素利用tsqquantumaccessmax三重四極桿質(zhì)譜儀進行檢測，檢測結(jié)果如圖1所示。
由圖1可以看出，大米培養(yǎng)基中水分含量對稻曲病菌產(chǎn)毒效果的影響很大，其中，效果最好的2號培養(yǎng)基，即30g米粉中加入15ml無菌水，5種毒素(a-d，f)均有檢出，且不管是單一毒素含量還是5種毒素總含量均遠高于其他兩種培養(yǎng)基配比。利用本實驗室分離純化到的5種稻曲病菌毒素純品進行定量分析發(fā)現(xiàn)，5種稻曲病菌均有檢出，且含量均較高，總含量為134290.1ng/g。產(chǎn)毒的含量很高。
本發(fā)明利用分離到的高效產(chǎn)毒稻綠核菌菌株分離獲得5種毒素的純品，打破了國內(nèi)只有稻曲病菌毒素a的局面，為安全、高效、大規(guī)模的在實驗室提取純化稻曲病菌5種毒素提供了非常寶貴的菌種資源。從長遠來看，由于我們獲得了高產(chǎn)5種毒素的純菌株，在此基礎(chǔ)上分離獲得了5種毒素的純品，與以往用ustiloxina的粗提液進行各種研究不同，以往的研究由于粗提液成分比較復(fù)雜，所得結(jié)果不能準確反映真實情況，而用從高產(chǎn)毒菌株中提取的5種毒素純品進行各項研究(農(nóng)業(yè)上：毒素產(chǎn)生、代謝機制等；醫(yī)學上：各種動物實驗、藥物開發(fā)等)，所得實驗結(jié)果更加全面、準確、可靠。可見，該菌株具有廣闊的應(yīng)用前景。就國內(nèi)來看，本專利第一次通過培養(yǎng)分離到的高產(chǎn)毒菌株進而獲得5種毒素純品，該菌株乃至毒素純品應(yīng)用潛力很大。
顯然，上述實施例僅僅是為了清楚的說明所做的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。