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一種γ?谷氨酸轉(zhuǎn)移酶熒光探針及其制備與應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12160941閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種式(Ⅰ)所示γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶熒光探針,

其中R1為H、R2和R3同R1,且R1、R2和R3不同時為H。

2.如權(quán)利要求1所述γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶熒光探針,其特征在于所述熒光探針為下列之一:

3.一種權(quán)利要求1所述γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶熒光探針的制備方法,其特征在于所述方法為:將N-叔丁氧羰基-L-谷氨酸-1-叔丁酯溶于二氯甲烷中,依次加入1-羥基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、三乙胺和式(Ⅱ)所示化合物,室溫下反應(yīng)12小時,將反應(yīng)液分離純化,獲得所述式(Ⅰ)所示γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶熒光探針;

式(Ⅱ)中R1為H或-NH2,R2和R3同R1,且R1、R2和R3不同時為H。

4.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于式(Ⅱ)所示化合物與N-叔丁氧羰基-L-谷氨酸-1-叔丁酯物質(zhì)的量之比均為0.25-0.3:1,所述二氯甲烷體積用量以式(Ⅱ)所示化合物物質(zhì)的量計(jì)為35-40mL/mmol;所述1-羥基苯并三唑與N-叔丁氧羰基-L-谷氨酸-1-叔丁酯物質(zhì)的量之比為0.6:1,1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽與N-叔丁氧羰基-L-谷氨酸-1-叔丁酯物質(zhì)的量之比均為0.6:1,三乙胺與N-叔丁氧羰基-L-谷氨酸-1-叔丁酯物質(zhì)的量之比均為1:1。

5.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于所述反應(yīng)液分離純化方法為:反應(yīng)結(jié)束后,將反應(yīng)液減壓濃縮至無液體流出,獲得濃縮液,將濃縮液以體積比15:1的二氯甲烷和甲醇混合液為展開劑進(jìn)行薄層層析分離,收集Rf值為0.5的目標(biāo)產(chǎn)物;再將目標(biāo)產(chǎn)物加入無水二氯甲烷a中,靜置澄清后加入三氟乙酸,室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h,TLC追蹤,完全反應(yīng)后,旋蒸除盡溶劑和三氟乙酸至無液體流出,加無水二氯甲烷b重復(fù)旋蒸幾次,隨后加入甲醇溶解,滴入乙醚中,析出固體,過濾,濾餅烘干,獲得式(Ⅰ)所示γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶熒光探針;所述無水二氯甲烷a體積用量以目標(biāo)產(chǎn)物質(zhì)量計(jì)為0.16ml/mg,所述三氟乙酸體積用量以目標(biāo)產(chǎn)物質(zhì)量計(jì)為0.08ml/mg。

6.一種權(quán)利要求1所述γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶熒光探針在檢測γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于所述γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶為0~1000U/Lγ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶緩沖溶液。

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