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一種魯氏不動(dòng)桿菌的檢測(cè)引物及熒光定量PCR檢測(cè)方法與流程

文檔序號(hào):12346627閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種魯氏不動(dòng)桿菌熒光定量PCR檢測(cè)引物,其特征在于,所述引物的核苷酸序列如下:

AL-F:TTATTTGATCAGGCGCAAAG,

AL-R:CGTTTCTTGCCATCCCATTTA。

2.一種魯氏不動(dòng)桿菌熒光定量PCR檢測(cè)方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)提取待測(cè)樣品中的DNA;

2)以步驟1)中提取的DNA為模板,采用熒光定量PCR方法擴(kuò)增魯氏不動(dòng)桿菌,其中所使用引物為如權(quán)利要求1所述的魯氏不動(dòng)桿菌熒光定量PCR檢測(cè)引物;在55℃退火階段收集熒光值,即Ct樣品值,并在上述擴(kuò)增條件后增加60℃至95℃的融解曲線分析;

3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與檢測(cè)結(jié)果判定:根據(jù)所選用的模式細(xì)菌在其濃度為×102、×103、×104、×105、×106、×107時(shí)對(duì)應(yīng)的Ct標(biāo)準(zhǔn)值,建立魯氏不動(dòng)桿菌的細(xì)菌數(shù)lg標(biāo)準(zhǔn)與Ct標(biāo)準(zhǔn)值的標(biāo)準(zhǔn)曲線,并且將步驟2)所得的待測(cè)樣本Ct樣品值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定樣品中的魯氏不動(dòng)桿菌的數(shù)量。

3.如權(quán)利要求2所述的一種魯氏不動(dòng)桿菌熒光定量PCR檢測(cè)方法,其特征在于,步驟2)中,所述的熒光定量PCR方法中使用的熒光染料為SYBR Green I。

4.如權(quán)利要求3所述的一種魯氏不動(dòng)桿菌熒光定量PCR檢測(cè)方法,其特征在于:步驟3)中,所述的模式細(xì)菌為A.lwoffii ATCC1530,根據(jù)其濃度為2.4×102、2.4×103、2.4×104、2.4×105、2.4×106、2.4×107時(shí)對(duì)應(yīng)的Ct標(biāo)準(zhǔn)值,建立魯氏不動(dòng)桿菌的細(xì)菌數(shù)lg標(biāo)準(zhǔn)與Ct標(biāo)準(zhǔn)值的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=-3.838x+40.93,R2=0.993。

5.如權(quán)利要求1所述的一種魯氏不動(dòng)桿菌熒光定量PCR檢測(cè)引物,以及如權(quán)利要求2-4中任意一項(xiàng)所述的一種魯氏不動(dòng)桿菌熒光定量PCR檢測(cè)方法在檢測(cè)食品魯氏不動(dòng)桿菌方面的應(yīng)用。

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