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一種抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑及其制備方法與流程

文檔序號(hào):12457070閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑,其特征在于,所述抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑主要由以下幾種菌:污色原毛平革菌,桔綠木霉,米曲霉,解淀粉芽孢桿菌,普納鏈霉菌發(fā)酵制成;其具體的制備方法,包括以下步驟:

步驟一,復(fù)合曲霉菌粉的制備

A、污色原毛平革菌種子液的制備:取出污色原毛平革菌菌種保藏管,用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)7天,在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天,待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶,產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫,調(diào)節(jié)孢子濃度為0.01億cfu/ml,即為污色原毛平革菌種子液;

B、桔綠木霉種子液的制備:取出桔綠木霉菌菌種保藏管,用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)6天,在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)4-6天,待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶,產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫,調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml,即為桔綠木霉種子液;

C、米曲霉種子液的制備:取出米曲霉菌種保藏管,用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)5天,在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)5-7天,待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶,產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫,調(diào)節(jié)孢子濃度為1億cfu/ml,即為米曲霉種子液;

D、混合發(fā)酵:將上述制備的污色原毛平革菌種子液、桔綠木霉種子液與米曲霉種子液以2:1:1的比例混合均勻后,以2%的接種量接種至滅菌的曲霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基上,菌種與固體培養(yǎng)基混合均勻后,將接好種的曲霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上,物料高度為5-10cm,控溫28-32℃,濕度保持為60%-75%,發(fā)酵6-10天,檢測(cè)其總孢子含量不低于20億CFU/g,檢測(cè)其污色原毛平革菌孢子含量不低于10億CFU/g,木質(zhì)素過氧化物酶活,即LiP酶活不低于200U/ g;錳依賴過氧化物酶,即MnP酶活不低于500U/ g;纖維素酶含量不低于500IU/ g,木聚糖酶含量不低1000IU/ g,即可低溫風(fēng)干,水分含量低于10%,即得到復(fù)合曲霉菌粉;

其中,所述的PDA固體培養(yǎng)基:土豆200g,蔗糖20g,水1000mL,瓊脂20g;

其中,所述的曲霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基:香蕉莖葉渣85%,棉粕2%,玉米芯8%,石粉1%,粗玉米皮2%,尿素0.4%,磷酸氫二鉀0.4%,硫酸鎂0.05%,培養(yǎng)基含水量50%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;

步驟二、解淀粉芽孢桿菌菌粉的制備

取出解淀粉芽孢桿菌保藏管,用營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)48小時(shí),在平板下挑取單個(gè)菌落接種至裝有營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基,在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),用3000ml無(wú)菌水將三個(gè)茄子瓶中的菌苔洗脫,接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中,開攪拌120r/min,前10小時(shí)通氣量為200L/min,10小時(shí)后通氣量為320L/min ,30℃培養(yǎng)16-24小時(shí),待總菌含量不低于20億cfu/ml,即可作為芽孢桿菌液體種子;

發(fā)酵:將上述制備的芽孢桿菌液體種子加至芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基中,混勻,在淺盤上發(fā)酵,堆料厚度為5-10cm,控制發(fā)酵溫度為30-40℃,發(fā)酵36-48小時(shí),待芽孢含量不低于100億cfu/g,即可曬干,待水分含量低于10%,即得到解淀粉芽孢桿菌菌粉;

其中,所述營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基:蛋白胨5g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂20 g,水1000mL,pH7.2;

其中,所述液體種子培養(yǎng)基:葡萄糖8g/L,玉米粉10 g/L, 豆粉10 g/L,硫酸鎂0.2 g/L,硫酸錳0.1 g/L,磷酸二氫鉀0.5 g/L,磷酸氫二鈉1.0 g/L,pH7.0;

其中,芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基:香蕉莖葉渣60%,麩皮35%,棉粕2%,石粉1%,粗玉米皮2%,尿素0.4%,磷酸氫二鉀0.4%,硫酸鎂0.05%,培養(yǎng)基含水量50%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;

步驟三,普納鏈霉菌菌粉的制備

取出普納鏈霉菌菌種保藏管,用高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)7天,在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天,待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶,產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫,調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml,即為普納鏈霉菌種子液;

發(fā)酵:將上述制備的普納鏈霉菌種子液以5%的接種量接種至滅菌的普納鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上,菌種與普納鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后,將接好種的普納鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上,物料高度為5-8cm,控溫28-32℃,前兩天空氣濕度保持為60%-75%,過后空氣濕度保持為40%-50%,發(fā)酵4-6天,檢測(cè)其孢子含量不低于10億CFU/g,即可低溫風(fēng)干,即得到普納鏈霉菌菌粉;

其中,所述的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基:硝酸鉀:1克,可溶性淀粉:20克,磷酸氫二鉀:0.5克,硫酸鎂:0.5克,氯化鈉:0.5克,硫酸亞鐵:0.01克,瓊脂:20克,蒸餾水補(bǔ)足1000ml ,PH7.2~7.4;

其中,所述的普納鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基:香蕉莖葉渣80%,棉粕2%,玉米粉1%,石粉10%,麩皮7%,硫酸錳0.004%,磷酸氫二鉀0.1%,硫酸鎂0.05%,固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;

步驟四 將復(fù)合曲霉菌粉、解淀粉芽孢桿菌菌粉、普納鏈霉菌菌粉與棉粕粉以1:1:1:1的比例混合均勻,檢測(cè)其污色原毛平革菌孢子含量不低于2億CFU/g,木質(zhì)素過氧化物酶活不低于40U/ g;錳依賴過氧化物酶活不低于100U/ g;纖維素酶含量不低于100IU/ g,木聚糖酶含量不低200IU/ g,解淀粉芽孢含量不低于20億CFU/g,普納鏈霉菌含量不低于2億CFU/g,即可包裝成品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑,其特征在于,所述抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑的使用方法為將1-5kg腐熟菌劑稀釋100倍均勻噴施至1畝香蕉莖葉殘?bào)w上即可。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑,其特征在于,所述抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑的使用方法為每畝將2-10kg腐熟菌劑全地均勻撒到香蕉莖葉殘?bào)w上即可。

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