本發(fā)明專(zhuān)利涉及一種抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑及其制備方法，屬于農(nóng)業(yè)微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
由于香蕉具有速生和生物量高等特點(diǎn)，在生產(chǎn)香蕉的同時(shí)也產(chǎn)生近乎等量的香蕉莖葉副產(chǎn)品，據(jù)估算，每生產(chǎn)1hm2香蕉可產(chǎn)生600-900噸莖稈，其資源非常豐富。而香蕉莖葉做為一種特殊的農(nóng)業(yè)廢棄物，與其它農(nóng)作物秸稈相比，含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，香蕉莖葉中的碳水化合物含量高，另?yè)?jù)報(bào)道，每株香蕉殘存于假莖、葉片、球莖和根系中的氮素平均為57克，磷素為6.6克，鉀素232克，如果平均利用率分別按22%、4%和46.22%計(jì)，莖葉還田的利用率按30%計(jì)，那么每公頃香蕉莖葉還田的氨、磷、鉀含量分別相當(dāng)于1.29噸、0.8噸、0.75噸復(fù)合肥（含量3個(gè)15%）。目前廣東省大部分香蕉種植區(qū)，香蕉莖葉往往被丟棄田頭或河流，不僅造成莖葉中養(yǎng)分資源的浪費(fèi)，而且染病香蕉殘?bào)w中的病菌通過(guò)水系流動(dòng)而更易造成病菌的傳播。由此可見(jiàn)，進(jìn)行香蕉廢棄莖葉資源的再利用研究，有著廣闊的發(fā)展與應(yīng)用空間，對(duì)香蕉產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展也有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。
香蕉莖葉中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，而目前對(duì)香蕉廢棄莖中的利用率極低，主要原因是其體積大，搬移困難，纖維素含量高，難以在短時(shí)間內(nèi)分解，因此大部分作為廢棄物被丟棄，不僅造成極大的資源浪費(fèi)，而且污染環(huán)境，也給隨后的蕉田管理帶來(lái)很多麻煩。
為了不使得香蕉莖葉浪費(fèi)，我國(guó)科研工作者也作了較多的研究，匡石滋等在專(zhuān)利號(hào)2010102334329中公開(kāi)了一種利用香蕉莖葉進(jìn)行生物發(fā)酵制作生物有機(jī)肥的方法：將砍倒的蕉桿軸向剖成兩半，讓其自然干燥5-7天，用粉碎機(jī)或鍘草機(jī)將蕉桿粉碎成長(zhǎng)度為2-3厘米的短節(jié)，加入雞糞與生物發(fā)酵菌劑，混合攪勻，堆砌保持25-30天，進(jìn)行發(fā)酵而成。此方法確實(shí)提升了香蕉莖葉的利用率，但其生產(chǎn)工作量是比較龐大的，香蕉莖葉的運(yùn)輸也要較多的人工；陳仁杰等在專(zhuān)利號(hào)201310609319X中公開(kāi)了一種利用香蕉莖葉制作肉牛生物飼料的方法：其將香蕉莖葉粉碎后，配入輔料后，還要用高壓蒸汽進(jìn)行了滅菌處理，能源消耗較大
韓麗娜等在專(zhuān)利號(hào)201110272946X中公開(kāi)了一種香蕉莖稈有機(jī)肥及其制備方法：主要是將香蕉莖稈作為有機(jī)質(zhì)與糞肥進(jìn)行發(fā)酵的方法。何寒等在專(zhuān)利號(hào)2012100551946中公開(kāi)了一種利用香蕉稈、莖葉制作生物有機(jī)肥的方法：以香蕉稈、莖葉為主工原料，用動(dòng)物糞便、塘泥為了輔料，用多級(jí)擴(kuò)大的EM菌種發(fā)酵而成。這些發(fā)酵方法是傳統(tǒng)的有機(jī)肥的發(fā)酵方法，其發(fā)酵高溫會(huì)抑制或殺滅病原菌的。
但現(xiàn)有的利用香蕉莖葉的方法基本上是異位（不是在原種植地進(jìn)行）處理的，也沒(méi)有從根本上解決其搬移的問(wèn)題，而且在運(yùn)輸過(guò)程中也會(huì)導(dǎo)致一些植株的病原菌（如枯萎?。┑臄U(kuò)散而導(dǎo)致其他種植地病害的發(fā)生。因此，如果要在原位進(jìn)行就地腐熟就一定要解決兩個(gè)問(wèn)題：一是快速將香蕉莖葉中的纖維的降解；二是香蕉莖葉中的病原菌的抑制或殺滅的問(wèn)題。
針對(duì)以上問(wèn)題，本發(fā)明采用具有高效降解香蕉莖葉能力的微生物菌株和高效抑制香蕉枯萎病的生物防治菌株制作腐熟劑，該腐熟劑在分解香蕉莖葉的過(guò)程中可以繁殖大量的生物防治菌株，有效的抑制土傳病原菌的萌發(fā)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明公開(kāi)了一種抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑，本腐熟菌劑由具有較強(qiáng)纖維素，木質(zhì)素，半纖維素分解功能的污色原毛平革菌，桔綠木霉，米曲霉，和具有生物防治功能解淀粉芽孢桿菌，普納鏈霉菌復(fù)合發(fā)酵制成。該腐熟菌劑能夠有效地加速還田香蕉莖葉殘?bào)w的腐爛速度，同時(shí)能夠抑制香蕉枯萎病等病原菌的生長(zhǎng)。田間施用該腐熟菌劑后香蕉莖葉殘?bào)w分解速度加快，其中香蕉莖葉殘?bào)w失重率顯著增加、香蕉莖葉殘?bào)w拉力顯著降低；土壤病原菌拮抗芽孢桿菌與放線菌數(shù)量顯著增加，病原性微生物數(shù)量顯著降低。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明公開(kāi)了一種抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑的制備方法，其具體的制備方法，包括以下步驟：
步驟一，復(fù)合曲霉菌粉的制備
A、污色原毛平革菌種子液的制備：取出污色原毛平革菌菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.01億cfu/ml，即為污色原毛平革菌種子液；
B、桔綠木霉種子液的制備：取出桔綠木霉菌菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)6天。在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)4-6天，待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為桔綠木霉種子液；
C、米曲霉種子液的制備：取出米曲霉菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)5天。在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)5-7天，待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為1億cfu/ml，即為米曲霉種子液；
D、混合發(fā)酵：將上述制備的污色原毛平革菌種子液、桔綠木霉種子液與米曲霉種子液以2：1：1的比例混合均勻后，以2%的接種量接種至滅菌的曲霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的曲霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-10cm，控溫28-32℃，濕度保持為60%-75%，發(fā)酵6-10天，檢測(cè)其總孢子含量不低于20億CFU/g，檢測(cè)其污色原毛平革菌孢子含量不低于10億CFU/g，木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活，即LiP酶活不低于200U/ g；錳依賴過(guò)氧化物酶，即MnP酶活不低于500U/ g；纖維素酶含量不低于500IU/ g，木聚糖酶含量不低1000IU/ g，即可低溫風(fēng)干，水分含量低于10%，即得到復(fù)合曲霉菌粉；
其中，所述的PDA固體培養(yǎng)基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；
其中，所述的曲霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基：香蕉莖葉渣85%，棉粕2%，玉米芯8%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。
步驟二、解淀粉芽孢桿菌菌粉的制備
取出解淀粉芽孢桿菌保藏管，用營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時(shí)。在平板下挑取單個(gè)菌落接種至裝有營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，用3000ml無(wú)菌水將三個(gè)茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開(kāi)攪拌120r/min，前10小時(shí)通氣量為200L/min，10小時(shí)后通氣量為320L/min ，30℃培養(yǎng)16-24小時(shí)，待總菌含量不低于20億cfu/ml，即可作為芽孢桿菌液體種子；
發(fā)酵：將上述制備的芽孢桿菌液體種子加至芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，混勻，在淺盤(pán)上發(fā)酵，堆料厚度為5-10cm，控制發(fā)酵溫度為30-40℃，發(fā)酵36-48小時(shí)，待芽孢含量不低于100億cfu/g，即可曬干，待水分含量低于10%，即得到解淀粉芽孢桿菌菌粉；
其中，所述營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂20 g，水1000mL，pH7.2；
其中，所述液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖8g/L，玉米粉10 g/L， 豆粉10 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.1 g/L，磷酸二氫鉀0.5 g/L，磷酸氫二鈉1.0 g/L，pH7.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；
其中，芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基：香蕉莖葉渣60%，麩皮35%，棉粕2%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。
步驟三，普納鏈霉菌菌粉的制備
取出普納鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為普納鏈霉菌種子液；
發(fā)酵：將上述制備的普納鏈霉菌種子液以5%的接種量接種至滅菌的普納鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與普納鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的普納鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-8cm，控溫28-32℃，前兩天空氣濕度保持為60%-75%，過(guò)后空氣濕度保持為40%-50%，發(fā)酵4-6天，檢測(cè)其孢子含量不低于10億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到普納鏈霉菌菌粉；
其中，所述的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0﹒5克，硫酸鎂：0﹒5克，氯化鈉：0﹒5克，硫酸亞鐵：0﹒01克，瓊脂：20克，蒸餾水補(bǔ)足1000ml ，PH7﹒2～7﹒4；
其中，所述的普納鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基：香蕉莖葉渣80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉10%，麩皮7%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。
步驟四 將復(fù)合曲霉菌粉，解淀粉芽孢桿菌菌粉，普納鏈霉菌菌粉與棉粕粉以1：1：1：1的比例混合均勻，檢測(cè)其污色原毛平革菌孢子含量不低于2億CFU/g，木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活不低于40U/ g；錳依賴過(guò)氧化物酶活不低于100U/ g；纖維素酶含量不低于100IU/ g，木聚糖酶含量不低200IU/ g，解淀粉芽孢含量不低于20億CFU/g，普納鏈霉菌含量不低于2億CFU/g，即可包裝成品。
其中，所述抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑的使用方法為將1-5kg腐熟菌劑稀釋100倍均勻噴施至1畝香蕉莖葉殘?bào)w上即可；另外，也可以將2-10kg腐熟菌劑/每畝，全地均勻撒到香蕉莖葉殘?bào)w上即可。
本發(fā)明的有益效果：
本發(fā)明中含有白腐真菌--污色原毛平革菌，其能產(chǎn)生豐富的木質(zhì)素降解酶（木質(zhì)素過(guò)氧化物酶；錳依賴過(guò)氧化物酶），從而快速降解香蕉莖葉殘?bào)w。本發(fā)明中的腐熟菌劑主要原料就是利用香蕉莖葉殘?bào)w發(fā)酵而成的，所有的菌株已經(jīng)適宜在香蕉莖葉殘?bào)w中快速繁殖生長(zhǎng)，減少了各菌種由于在不同基質(zhì)中而導(dǎo)致的不生長(zhǎng)或繁殖慢的風(fēng)險(xiǎn)；本發(fā)明中的菌種是通過(guò)多年的篩選試驗(yàn)，各種菌種施入香蕉莖葉殘?bào)w中后，首先由污色原毛平革菌，桔綠木霉，米曲霉產(chǎn)生的各類(lèi)纖維素酶，木質(zhì)素酶，葡聚糖酶降解香蕉莖葉殘?bào)w中的纖維素，木質(zhì)素等碳水化合物成為低分子糖類(lèi)，供解淀粉芽孢桿菌，普納鏈霉菌利用生長(zhǎng)，并且產(chǎn)生大量拮抗物質(zhì)，從而抑制或殺滅土壤中尖孢鐮刀菌，并且促進(jìn)有益菌的生長(zhǎng)繁殖。
該腐熟菌劑中的5株菌都能在香蕉莖葉殘?bào)w中共生共存的，能夠有效地加速還田香蕉莖葉殘?bào)w的腐爛速度，同時(shí)能夠抑制香蕉枯萎病等病原菌的生長(zhǎng)。田間施用該腐熟菌劑后香蕉莖葉殘?bào)w分解速度加快，其中香蕉莖葉殘?bào)w失重率顯著增加、香蕉莖葉殘?bào)w拉力顯著降低;土壤病原菌拮抗芽抱桿菌與放線菌數(shù)量顯著增加，病原性微生物數(shù)量顯著降低。
本發(fā)明產(chǎn)品與市場(chǎng)產(chǎn)品比較具有以下優(yōu)點(diǎn)：施用后土壤中尖孢鐮刀菌數(shù)量只有施用常規(guī)市售腐熟劑處理的10%-20%。施用該腐熟劑后，土壤中抑制尖孢鐮刀菌的芽孢桿菌數(shù)量較施用常規(guī)腐熟劑處理增加1000-10000倍；土壤中抑制尖孢鐮刀菌的放線菌數(shù)量較施用常規(guī)腐熟劑處理增加了100-1000倍。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟菌劑，其特征在于，所述抑制枯萎病的香蕉莖葉殘?bào)w腐熟劑主要由以下幾種菌：污色原毛平革菌，桔綠木霉，米曲霉，解淀粉芽孢桿菌，普納鏈霉菌發(fā)酵制成；其具體的制備方法，包括以下步驟：
步驟一，復(fù)合曲霉菌粉的制備
A、污色原毛平革菌種子液的制備：取出污色原毛平革菌菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)7天，在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.01億cfu/ml，即為污色原毛平革菌種子液；
B、桔綠木霉種子液的制備：取出桔綠木霉菌菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)6天，在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)4-6天，待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為桔綠木霉種子液；
C、米曲霉種子液的制備：取出米曲霉菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)5天，在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)5-7天，待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為1億cfu/ml，即為米曲霉種子液；
D、混合發(fā)酵：將上述制備的污色原毛平革菌種子液、桔綠木霉種子液與米曲霉種子液以2：1：1的比例混合均勻后，以2%的接種量接種至滅菌的曲霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的曲霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-10cm，控溫28-32℃，濕度保持為60%-75%，發(fā)酵8天，檢測(cè)其總孢子含量為30億CFU/g，檢測(cè)其污色原毛平革菌孢子含量為13億CFU/g，木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活，即LiP酶活為265U/ g；錳依賴過(guò)氧化物酶，即MnP酶活為621U/ g；纖維素酶含量為788IU/ g，木聚糖酶含量為1508IU/ g，即可低溫風(fēng)干，水分含量低于10%，即得到復(fù)合曲霉菌粉；
其中，所述的PDA固體培養(yǎng)基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；
其中，所述的曲霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基：香蕉莖葉渣85%，棉粕2%，玉米芯8%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。
步驟二、解淀粉芽孢桿菌菌粉的制備
取出解淀粉芽孢桿菌保藏管，用營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時(shí)，在平板下挑取單個(gè)菌落接種至裝有營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，用3000ml無(wú)菌水將三個(gè)茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開(kāi)攪拌120r/min，前10小時(shí)通氣量為200L/min，10小時(shí)后通氣量為320L/min ，30℃培養(yǎng)16-24小時(shí)，待總菌含量不低于20億cfu/ml，即可作為芽孢桿菌液體種子；
發(fā)酵：將上述制備的芽孢桿菌液體種子加至芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，混勻，在淺盤(pán)上發(fā)酵，堆料厚度為5-10cm，控制發(fā)酵溫度為30-40℃，發(fā)酵44小時(shí)，檢測(cè)芽孢含量為150億cfu/g，即可曬干，待水分含量低于10%，即得到解淀粉芽孢桿菌菌粉；
其中，所述營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂20 g，水1000mL，pH7.2；
其中，所述液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖8g/L，玉米粉10 g/L， 豆粉10 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.1 g/L，磷酸二氫鉀0.5 g/L，磷酸氫二鈉1.0 g/L，pH7.0；
其中，芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基：香蕉莖葉渣60%，麩皮35%，棉粕2%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。
步驟三，普納鏈霉菌菌粉的制備
取出普納鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)7天，在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為普納鏈霉菌種子液；
發(fā)酵：將上述制備的普納鏈霉菌種子液以5%的接種量接種至滅菌的普納鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與普納鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的普納鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-8cm，控溫28-32℃，前兩天空氣濕度保持為60%-75%，過(guò)后空氣濕度保持為40%-50%，發(fā)酵5天，檢測(cè)其孢子含量為18億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到普納鏈霉菌菌粉；
其中，所述的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0﹒5克，硫酸鎂：0﹒5克，氯化鈉：0﹒5克，硫酸亞鐵：0﹒01克，瓊脂：20克，蒸餾水補(bǔ)足1000ml ，PH7﹒2～7﹒4；
其中，所述的普納鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基：香蕉莖葉渣80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉10%，麩皮7%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。
步驟四 將復(fù)合曲霉菌粉、解淀粉芽孢桿菌菌粉、普納鏈霉菌菌粉與棉粕粉以1：1：1：1的比例混合均勻，檢測(cè)其污色原毛平革菌孢子含量為3億CFU/g，木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活不低于55U/ g；錳依賴過(guò)氧化物酶活不低于120U/ g；纖維素酶含量不低于150IU/ g，木聚糖酶含量不低310IU/ g，解淀粉芽孢含量不低于31億CFU/g，普納鏈霉菌含量不低于3億CFU/g，即可包裝成品。
實(shí)施例2
腐熟菌劑應(yīng)用試驗(yàn)腐熟菌劑加速香蕉莖葉殘?bào)w腐熟和抑制枯萎菌病害效果驗(yàn)證:
試驗(yàn)基地：徐聞縣龍?zhí)伶?zhèn)某大型種植戶；
設(shè)置如下處理:處理1.對(duì)照，土壤不施用任何腐熟劑，用等量的清水噴施在粉碎的香蕉莖葉殘?bào)w；處理2.施用市場(chǎng)上銷(xiāo)售腐熟劑5kg/畝，稀釋100倍噴施在粉碎的香蕉莖葉殘?bào)w；處理3.施用本發(fā)明腐熟劑2kg/畝，稀釋100倍噴施在粉碎的香蕉莖葉殘?bào)w。每處理小區(qū)面積10畝。實(shí)驗(yàn)測(cè)定香蕉莖葉拉力變化與失重率的變化，土壤尖孢鐮刀菌(容易引起香蕉枯萎病)數(shù)量，土壤中抑制尖孢鐮刀菌的芽孢桿菌數(shù)量。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第15天、35天和60天，相較于對(duì)照處理，施用本發(fā)明腐熟菌劑的處理香蕉莖葉拉力顯著降低；而且施用本發(fā)明腐熟菌劑處理的香蕉莖葉拉力比市售腐熟劑處理香蕉莖葉的拉力降低25% -56%。香蕉莖葉的失重率測(cè)定顯示，施用本發(fā)明腐熟菌劑處理的香蕉莖葉失重率顯著高于對(duì)照處理，香蕉莖葉失重率增加2. 1-3. 2倍；本發(fā)明處理香蕉莖葉失重率也高于市售腐熟劑處理的香蕉莖葉。試驗(yàn)結(jié)束后土壤微生物測(cè)定顯示，施用本發(fā)明處理土壤中尖孢鐮刀菌數(shù)量顯著地低于對(duì)照處理，不到對(duì)照處理的1%；本發(fā)明處理土壤尖孢鐮刀菌數(shù)量也顯著地低于市售腐熟劑處理，只有對(duì)照處理的10%，市售秸稈腐熟劑對(duì)土壤病原性真菌沒(méi)有很好的抑制效果。土壤中可以抑制病原菌的芽孢桿菌數(shù)量測(cè)定顯示，市售秸稈腐熟劑處理和對(duì)照處理沒(méi)有顯著差別，但是本發(fā)明處理土壤抑制病原菌的芽孢桿菌數(shù)量比對(duì)照處理高約1000-10000倍。土壤中抑制尖孢鐮刀菌的放線菌數(shù)量較施用常規(guī)腐熟劑處理增加了100-1000倍。