一種防治辣椒枯萎病制劑和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及辣椒枯萎病的防治，具體的說是一株解淀粉芽抱桿菌的制劑及其對辣 椒枯萎病的防治應用。
【背景技術】
[0002] 辣椒枯萎病，又稱辣椒萎黨病，是由半知菌亞口尖抱鑲刀菌（Fusarium 化ysporium)侵染引起的，是一類毀滅性的世界±傳植物病害，其分布廣、危害重，主要危害 辣椒根莖部維管束，病部變褐，最后導致全株性枯萎死亡。該病在國外早有報道，20世紀50 年代在我國由俞大級首次報道。近年來，在全國各地普遍發(fā)生，已成為大棚辣椒栽培中的主 要病害之一，并且越來越重，該病發(fā)病率一般為15%~30%，嚴重時達70%~80%，甚至全 田枯萎死亡，給產(chǎn)量造成了很大損失，成為辣椒生產(chǎn)上的一大障礙因素。多年來，人們嘗試 用曬田和抗病品種等多種不同方法控制枯萎病的發(fā)生及流行，但效果甚微。傳統(tǒng)化學藥劑， 如敵克松、五氯硝基苯、多菌靈等，雖能達到防治該類病害的目的，但同時也帶來了抗藥性 和環(huán)境污染等一系列問題，運不僅影響人類健康，而且嚴重威脅整個生態(tài)系統(tǒng)。±傳病害病 原菌寄生于±壤中，化學農(nóng)藥一般難W從根本上控制其危害。因此，尋找安全有效的防治措 施成為一個亟待解決的問題。生物防治可W克服化學農(nóng)藥所帶來的弊病，具有無毒、無公 害、無污染、不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點，不僅符合人們對綠色食品的需求，而且為農(nóng)業(yè)的可持 續(xù)發(fā)展提供保障，因此，生物防治已成為辣椒枯萎病防治的重要研究領域。在用于植物病害 防治的生防菌中，解淀粉芽抱桿菌(BaciIlus amyIoliquefaciens)的研究很多，不僅有促 生長作用，而且能產(chǎn)生多種抑菌相關的代謝產(chǎn)物，對真菌和細菌都具有強烈的抑制作用，具 有實際應用的潛力。
[0003] 解淀粉芽抱桿菌(BaciIlus amyIoliquefaciens)是芽抱桿菌屬中的一個種，是± 壤和植物微生態(tài)的優(yōu)勢群，也是一種有益微生物。具有較強的次級代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)能力，可 分泌植物生長激素(如嗎I噪乙酸），促進植物生長;可分泌植酸酶和有機酸，降解±壤中植酸 及礦質(zhì)憐;可W產(chǎn)生多種抑菌相關的代謝產(chǎn)物(如蛋白酶，桿菌素、桿菌締、風齊素，大環(huán)內(nèi) 醋等），對真菌和細菌都具有強烈的抑制作用，具有實際應用的潛力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的是提供一種效果特別顯著的防治辣椒枯萎病的制劑和應用。
[0005] 本發(fā)明的技術方案如下：
[0006] 1.-種防治辣椒枯萎病制劑，它的活性成分為一株解淀粉芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No.5722的發(fā)酵液。
[0007] 2.根據(jù)技術方案1所述的一種防治辣椒枯萎病制劑，所述解淀粉芽抱桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No.5722的發(fā)酵液通過W下方法制備得 到：
[000引（1)將所述的解淀粉芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No . 5 7 2 2活化后，按5~10 %接種量，將活化的解淀粉芽抱桿菌（Baci I Ius amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC齡.5722接種到種子培養(yǎng)基，在培養(yǎng)溫度35°(3、轉(zhuǎn)速 120rpm/min條件下，搖床培養(yǎng)36~48h，得到一級種子液，所述種子培養(yǎng)基為液體LB培養(yǎng)基， pH 7.0~7.2;
[0009] (2)按10~12 %接種量，將一級種子液轉(zhuǎn)接到種子罐內(nèi)的二級種子培養(yǎng)基，在28~ 37°C，轉(zhuǎn)速100巧m/min，通氣量為lOOOL/h，罐壓保持在0.02~0.03MPa條件下培養(yǎng)36~48h， 得到二級種子液;所述二級種子培養(yǎng)基由W質(zhì)量分數(shù)計的W下成分組成:淀粉1.5~3%，教 皮粉1~2%，酵母膏0.05~0.3%，蛋白腺0.5~1%，憐礦粉1~2%，MgS〇4 ? 7出0 0.01~ 0.05%，CaCl20.1~0.4%，（NH4)2S040.01~0.04%，余量為水，pH7.0~7.2;
[0010] (3)按10~12%接種量，將二級種子液接種到發(fā)酵罐內(nèi)的發(fā)酵培養(yǎng)基，在28~37 °C，轉(zhuǎn)速100巧m/min，通氣量為lOOOOL/h、罐壓保持在0.02~0.03MPa條件下培養(yǎng)48~72h， 培養(yǎng)后的發(fā)酵液中解淀粉芽抱桿菌（BaciIlus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No. 5722的有效活菌數(shù)刮X l〇Wcfu/ml時，該發(fā)酵液即為所述解淀粉芽抱桿菌(Bacillus 日11171〇119116'日(316113化肥010-1(0〔61〇：齡.5722的發(fā)酵液，所述發(fā)酵培養(yǎng)基與步驟(2)所述 二級種子培養(yǎng)基相同。
[0011] 3.技術方案1或2所述的防治辣椒枯萎病制劑在防治辣椒枯萎病上的應用。
[0012] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有W下有益效果：
[0013] 1、本發(fā)明防治辣椒枯萎病制劑同時具有促生長和防病作用，在防治植物真菌病害 的應用方面，能顯著地抑制植物真菌的生長，對辣椒枯萎病菌的防治效果達53.75%~ 68.54%，對枯萎病的防效是預防效果均優(yōu)于治療效果，表明制劑增強了植物抗病能力，細 菌在根系大量繁殖，在一段時間內(nèi)成為根系的優(yōu)勢菌群，抑制和減少了病原微生物的滋生， 起到防病作用，可W作為防治植物真菌病害的微生物制劑。
[0014] 2、本發(fā)明制劑是一種無毒、無污染、無殘留，對人畜安全，對生態(tài)環(huán)境友好的微生 物產(chǎn)品。
[0015] 本發(fā)明所述的解淀粉芽抱桿菌8日(3；[11113日111710119116'日(316]13￥肥010-1(〔于2012年 1月12日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、（簡稱:CGMCC)，保藏號為 CGMCC No.5722,并于2012年1月12日檢測為存活。該普通微生物中屯、地址：中國北京市朝陽 區(qū)北辰西路1號院3號，郵編：100101。
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合實施例進一步說明，各實施例無特殊說明為常規(guī)方法。
[0017] 實施例1解淀粉芽抱桿菌（BaciIlus amyIoliquefaciens)YN20IO-KC的獲得、鑒定 和保臧
[0018] 1、本發(fā)明解淀粉芽抱桿菌YN2010-KC的獲得
[0019] 1.1 材料
[0020] 采自云南農(nóng)業(yè)大學后山農(nóng)場玉米根際周圍的±壤。
[00別]1.2培養(yǎng)基制備
[0022]將LB固體培養(yǎng)基和PSA培養(yǎng)基（馬鈴馨薦糖瓊脂培養(yǎng)基)融化，分別倒入滅菌培養(yǎng) 皿，冷卻，制成LB和PSA平板。
[0023] 1.3分離培養(yǎng)
[0024] 采用稀釋平皿分離法和平板劃線分離，將分離純化所得的一菌株命名為YN2010-KC。
[00巧]2、解淀粉芽抱桿菌YN2010-KC的鑒定
[0026] 2.1、形態(tài)學鑒定
[0027] 取菌株YN20IO-KC在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)，37°C培養(yǎng)36小時，進行形態(tài)觀察鑒定，菌體 為桿狀、端圓，周生鞭毛、具運動性，產(chǎn)生楠圓形芽抱;在LB和PSA平板上菌落圓形、淡茶褐 色、菌落中央顏色略深、隆起、表面干燥有權(quán)皺。與《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》（東秀珠等編 著，科學出版社，2001年）中描述的芽抱桿菌屬形態(tài)特征基本一致，初步判斷菌株YN2010-KC 屬于芽抱桿菌(BaciIlus spp.)。
[002引 2.2、生理生化鑒定
[0029] 菌株革蘭氏染色、芽抱染色、淀粉水解、葡萄糖利用、巧樣酸鹽利用、V-P反應、接觸 酶反應、硝酸鹽還原、明膠液化等均呈陽性。
[0030] 3、解淀粉芽抱桿菌YN2010-KC的保藏
[0031 ]經(jīng)上述鑒定表明所分離獲得的菌株為解淀粉芽抱桿菌（B a C i 1 1 U S amyloliquefaciens)，其代號為YN2010-KC，所述的解淀粉芽抱桿菌Bacillus amyloliquefaciensYN2010-KC于2012年1月12日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中屯、（簡稱:CGMCC)，保藏號為CGMCC No. 5722，并于2012年1月12日檢測為存活。該 普通微生物中屯、地址：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編：100101。
[0032] 實施例2本發(fā)明防治辣椒枯萎病制劑的制備方法，包括W下步驟：
[0033] (1) -級種子液制備
[0034] 將-80。C保存的解淀粉芽抱桿菌（Bacillusamyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No.5722接種在液體LB培養(yǎng)基上，28~37°C培養(yǎng)24-3化，得活化的菌種。按10%接種 量，將活化的所述解淀粉芽抱桿菌（BaciIlus amyIoIiquefaciens)YN20IO-KC CGMCC No . 5722接種到種子培養(yǎng)基，在培養(yǎng)溫度35°C、轉(zhuǎn)速12化pm/min條件下，搖床培養(yǎng)36h，得到 一級種子液，所述種子培養(yǎng)基為液體LB培養(yǎng)基，