本發(fā)明屬于動(dòng)物細(xì)胞系領(lǐng)域，特別涉及一種M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型的構(gòu)建方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-associatedMacrophages)是腫瘤微環(huán)境中一類單核巨噬細(xì)胞來(lái)源特殊炎癥細(xì)胞，廣泛存在于膠質(zhì)瘤、乳腺癌等各類實(shí)體腫瘤組織中。作為腫瘤相關(guān)炎癥的主要參與者，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞能調(diào)控增殖、侵襲、血管生成等惡性生物學(xué)行為并產(chǎn)生免疫抑制，對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生重要影響。根據(jù)其特殊膜表面標(biāo)記物的表達(dá)及腫瘤免疫學(xué)功能，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可分為M1和M2兩個(gè)亞型。M1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞高表達(dá)iNOS、MHCII、CD80等膜表面分子，通過(guò)直接吞噬或分泌腫瘤抑制性細(xì)胞因子，發(fā)揮免疫監(jiān)視、腫瘤殺傷的作用；M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞高表達(dá)CD163、Fizz1、Arg1、CD206等膜表面分子，通過(guò)旁分泌腫瘤細(xì)胞所需的生長(zhǎng)因子或趨化因子，發(fā)揮促進(jìn)腫瘤細(xì)胞免疫逃避、維持腫瘤生長(zhǎng)及侵襲轉(zhuǎn)移的作用。此外，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞間常存在密切的相互作用，例如，膠質(zhì)瘤細(xì)胞可通過(guò)分泌POSTN(Periostin,OsteoblastSpecificFactor)募集外周循環(huán)系統(tǒng)的單核細(xì)胞并促進(jìn)其分化為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞則通過(guò)旁分泌途徑，促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的“干性”維持和腫瘤生長(zhǎng)。鑒于M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在促進(jìn)腫瘤惡性生物學(xué)行為及腫瘤演進(jìn)重要功能，以M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞作為免疫治療靶點(diǎn)，或成為治療膠質(zhì)瘤、乳腺癌等多種實(shí)體腫瘤的新策略。由于腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的維持依賴腫瘤體內(nèi)微環(huán)境，難以分離培養(yǎng)，目前尚缺乏針對(duì)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的理想的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。鑒于腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞多來(lái)源于血液中的單核巨噬細(xì)胞，探索體外條件下將單核細(xì)胞誘導(dǎo)為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的新方法，或?yàn)槟[瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用提供有效的解決途徑。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型的構(gòu)建方法及應(yīng)用，本發(fā)明在體外環(huán)境中將永生化的單核細(xì)胞(以U937單核細(xì)胞系為例)在PMA和IL-4、IL-10、TGFβ生長(zhǎng)因子刺激下誘導(dǎo)為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，并以此為基礎(chǔ)，采用腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞體內(nèi)外共培養(yǎng)方法，研究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在腫瘤演進(jìn)中的生物學(xué)功能及靶向治療價(jià)值，為腫瘤免疫基礎(chǔ)研究和基于腫瘤免疫巨噬細(xì)胞的治療手段的研發(fā)提供重要工具和實(shí)驗(yàn)手段。本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型，該細(xì)胞模型為將人單核淋巴細(xì)胞系U937(U937單核細(xì)胞)經(jīng)活化和生長(zhǎng)因子刺激誘導(dǎo)而成。所述活化采用PMA活化。所述生長(zhǎng)因子刺激為IL-4、IL-10和TGF-β序貫刺激。一種M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型的建立方法，有以下步驟：1)PMA活化U937單核細(xì)胞，得到U937源性巨噬細(xì)胞；2)步驟1)所述的U937源性巨噬細(xì)胞，經(jīng)生長(zhǎng)因子刺激后，分選，得到U937源性M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。步驟1)所述活化，其PMA為5nM，活化時(shí)間為48小時(shí)。步驟2)所述生長(zhǎng)因子刺激是IL-4、IL-10和TGF-β生長(zhǎng)因子序貫刺激，時(shí)間為72小時(shí)，所述分選采用CD163抗體流式分選CD163+細(xì)胞。上述M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型在研究M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的基因特征和腫瘤演進(jìn)中的生物學(xué)功能的應(yīng)用。上述M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型在研究M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與各類腫瘤細(xì)胞的相互作用及機(jī)制中的應(yīng)用。上述M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型在研究M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤成瘤的影響及衍生的藥物靶向治療的應(yīng)用。上述M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型在促進(jìn)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的應(yīng)用。為了檢測(cè)本專利中構(gòu)建的U937源性腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的生物學(xué)功能及應(yīng)用價(jià)值，申請(qǐng)人采用免疫缺陷小鼠在體原位移植瘤模型(以膠質(zhì)瘤為例，臨床膠質(zhì)瘤樣本中富含腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，且對(duì)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)十分關(guān)鍵)，將U937來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞共注射，觀察U937、THP1來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)和荷瘤鼠生存時(shí)間的影響，模擬M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的體內(nèi)環(huán)境。其有益效果是：1.成功在體外條件下將U937來(lái)源的單核細(xì)胞誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞并鑒定其標(biāo)記物表達(dá)和基因型本發(fā)明采用PMA誘導(dǎo)活化和IL-4、IL-10、TGFβ三種生長(zhǎng)因子的聯(lián)合刺激，使U937來(lái)源的單核細(xì)胞誘導(dǎo)為M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。申請(qǐng)人經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：PCR檢測(cè)結(jié)果表明，誘導(dǎo)后的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞高表達(dá)M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD163、Fizz1、Arg1、CD206，低表達(dá)M1巨噬細(xì)胞標(biāo)記物iNOS、MHC-II；免疫熒光染色鑒定結(jié)果表明，誘導(dǎo)后的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞高表達(dá)M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD163。短串聯(lián)重復(fù)序列(Shorttandemrepeat,STR)測(cè)序比對(duì)結(jié)果提示，M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與U937單核細(xì)胞具有一致的基因表型，表明M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞來(lái)源于U937細(xì)胞，且在模型建立過(guò)程中未發(fā)生基因變異。2.U937來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模擬M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的體內(nèi)環(huán)境。采用免疫缺陷小鼠在體原位移植瘤模型，發(fā)現(xiàn)U937來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞共注射，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)并顯著縮短荷瘤鼠生存期。3.通過(guò)短串聯(lián)重復(fù)序列(Shorttandemrepeat,STR)測(cè)序比對(duì)，明確M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與U937單核細(xì)胞具有一致的基因表型，表明M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞來(lái)源于U937細(xì)胞，且在模型建立過(guò)程中未發(fā)生基因變異。本發(fā)明利用U937來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模擬M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的體內(nèi)環(huán)境，結(jié)果將為研究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的功能和研發(fā)基于腫瘤免疫巨噬細(xì)胞的治療手段提供重要工具和實(shí)驗(yàn)手段。附圖說(shuō)明圖1為U937源性M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)、分選；圖2為qRT-PCR鑒定U937源性M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中M1、M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)；圖3為免疫熒光鑒定U937源性M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD163的表達(dá)，圖中，A為免疫熒光典型圖像；標(biāo)尺＝25ul，B為CD163+細(xì)胞的定量結(jié)果；圖4為U937來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的STR分型圖譜；圖5為M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞共注射的顱內(nèi)原位移植瘤模型，圖中，A為共注射模型構(gòu)建的流程圖，B為IVIS活體動(dòng)物成像檢測(cè)M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促腫瘤生長(zhǎng)的效果，C為M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞共注射對(duì)荷瘤鼠生存期的影響。具體實(shí)施方式以下將參照附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)描述。優(yōu)選實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，所舉實(shí)施例是為了更好地對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)行說(shuō)明，但并不是本發(fā)明的內(nèi)容僅限于所舉實(shí)施例。所以熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)上述
發(fā)明內(nèi)容對(duì)實(shí)施方案進(jìn)行非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。試劑、儀器和來(lái)源青/鏈霉素混合液美國(guó)Gibco公司RPMI-1640培養(yǎng)基美國(guó)Sigma公司NaHCO3美國(guó)Sigma公司HEPES美國(guó)Sigma公司胎牛血清(FBS)美國(guó)Gibco公司0.22μm微孔濾膜美國(guó)BD公司PMA美國(guó)Sigma公司IL-4、IL-10和TGF1生長(zhǎng)因子美國(guó)Peprotech公司牛血清白蛋白(BSA)美國(guó)Sigma公司PBS美國(guó)Hyclone公司RNAiso日本Takara公司三氯甲烷、異丙醇、乙醇(分析純)成都天華科技股份有限公司DEPC美國(guó)Sigma公司CFX96熒光定量PCR儀美國(guó)Bio-rad公司PCR引物美國(guó)Invitrogen公司4％中性多聚甲醛江蘇碧云天公司10％山羊血清江蘇碧云天公司CD163抗體美國(guó)SantaCruz公司Cy3熒光二抗美國(guó)Invitrogen公司DAPI染液江蘇碧云天公司抗熒光淬滅劑江蘇碧云天公司激光共聚焦顯微鏡德國(guó)Leica公司GenomicDNAextractionminikit美國(guó)QIAGEN公司MicroreaderTM21IDSystem北京閱微基因技術(shù)有限公司ABI3730xl型遺傳分析儀美國(guó)AppliedBiosystems公司NOD/SCID小鼠北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司蛋白微量進(jìn)樣器寧波鎮(zhèn)海三愛(ài)儀器廠Luciferin美國(guó)BioVision公司IVIS活體動(dòng)物成像儀PerkinElmer公司人單核淋巴細(xì)胞系U937購(gòu)買(mǎi)自美國(guó)菌種保藏中心(ATCC)。實(shí)施例1U937細(xì)胞培養(yǎng)及U937源性M2腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)、分選人單核淋巴細(xì)胞系U937，培養(yǎng)于含10％FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基中。每袋RPMI-1640培養(yǎng)基(500ml裝)用去離子水溶解，加入1.7gNaHCO3、1.2gHEPES、5ml青/鏈霉素混合液(100×)，定容至450ml，磁力攪拌15min，調(diào)整pH值至7.3-7.4，得到RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液。然后加入50ml胎牛血清(FBS)，充分混勻，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，即得到含F(xiàn)BS濃度為10％的RPMI-1640培養(yǎng)基，分裝后置于4℃保存。為了誘導(dǎo)U937源性巨噬細(xì)胞，我們將U937細(xì)胞用PMA(5nM)活化48h。PMA溶液配制方法為：取PMA(1g裝)粉末，加入DMSO溶液32.4ml，反復(fù)吹打混勻，即得到濃度為50μM的PMA濃縮液(1：10000使用)，避光置于-20℃保存。細(xì)胞換液后，繼續(xù)用IL-4、IL-10和TGF-β(20ng/ml)的RPMI-1640培養(yǎng)基處理72h。IL-4、IL-10和TGFβ溶液配制方法為：取IL-4、IL-10和TGFβ(50μg裝)，分別加入2.5ml含0.1％BSA的PBS溶液，即得到20μg/ml的濃縮液(1：1000使用)，分裝后置于-20℃保存。經(jīng)PMA和IL-4、IL-10和TGF-β序貫刺激后的U937細(xì)胞，采用CD163抗體流式分選CD163+細(xì)胞。分選方法為：(1)胰酶消化并收集細(xì)胞，離心1000rpm×3min，PBS洗滌3次；(2)細(xì)胞計(jì)數(shù)，用流式細(xì)胞分選用緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106個(gè)/100μl；(3)在100μl細(xì)胞懸液中加入10μlCD163-APC抗體，陰性對(duì)照組加入等量同型對(duì)照IgG，混勻后4℃孵育30min；(4)PBS洗滌3次，BDFACSAriaII流式細(xì)胞儀分選CD163+細(xì)胞，即為U937源性M2腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。如圖1所示。實(shí)施例2qRT-PCR鑒定U937源性M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中M1、M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)2.1細(xì)胞RNA提取及濃度測(cè)定(1)將細(xì)胞用PBS清洗3次，取1×106個(gè)細(xì)胞用1mlRNAiso裂解，置于1.5mlEP管中；(2)每組樣品加入0.2ml三氯甲烷，劇烈振蕩20sec，常溫靜置5min；(3)12000g，4℃離心15min；(4)將已分層的樣本取上層移入新的1.5mlEP管中，加入250μl異丙醇，上下倒轉(zhuǎn)數(shù)次以混勻，冰浴靜置20-30min；(5)12000g，4℃離心15min；(6)棄上清，加1ml75％乙醇，上下倒轉(zhuǎn)數(shù)次以洗滌沉淀物；(7)12000g，4℃離心5min；(8)去除乙醇，打開(kāi)1.5mlEP管管蓋，室溫干燥10min；(9)加入20-50μlDEPC水溶解RNA，置于冰上放置。(10)測(cè)定RNA濃度。RNA濃度＝OD260×稀釋倍數(shù)×0.04μg/μl2.2RT-PCR反應(yīng)采用Takara公司qRT-PCR試劑盒進(jìn)行，操作步驟及條件參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，PCR檢測(cè)在CFX96熒光定量PCR儀上進(jìn)行。GAPDH作為內(nèi)參。所需PCR引物由Invitrogen公司合成，序列引物見(jiàn)表1：表1PCR序列引物GeneForwardprimer(5'to3')Reverseprimer(5'to3')CD163TTTGTCAACTTGAGTCCCTTCACTCCCGCTACACTTGTTTTCACFizz1AGAGTACAGTCCCTCTCCAACCACAGCCATAGCCACAAArg1TGGACAGACTAGGAATTGGCACCAGTCCGTCAACATCAAAACTCD206CGATCCGACCCTTCCTTGACTGTCTCCGCTTCATGCCATTiNOSTTCAGTATCACAACCTCAGCAAGTGGACCTGCAAGTTAAAATCCCMHCIIGAGCAGGTTAAACATGAGTGTCACTCTCCACAACCCCGTAGTGAPDHAAGGTGAAGGTCGGAGTCAACGGGGTCATTGATGGCAACAATA2.3qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果：誘導(dǎo)后的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞高表達(dá)M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD163、Fizz1、Arg1、CD206，低表達(dá)M1巨噬細(xì)胞標(biāo)記物iNOS、MHC-II。如圖2所示。實(shí)施例3免疫熒光染色檢測(cè)U937源性M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與對(duì)照U937單核細(xì)胞間M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD163的表達(dá)差異3.1實(shí)驗(yàn)方法：(1)收集U937源性M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與對(duì)照U937單核細(xì)胞，置于離心管中，離心1000rpm×3min，PBS洗滌1次；(2)用4％中性多聚甲醛(PH＝7.4)固定20min；離心1000rpm×3min，PBS洗滌1次；(3)加入100ulPBS重懸細(xì)胞，采用涂片法將細(xì)胞涂在多聚賴氨酸包被的防脫片上；(4)用PBS水化切片，5min×3次；(5)用10％山羊血清封閉切片，室溫孵育30min；(6)一抗孵育：加入稀釋后的CD163一抗，4℃孵育過(guò)夜；(7)次日，用PBS漂洗切片，5min×3次；(8)二抗孵育：加入稀釋后的Cy3熒光二抗，室溫孵育2h；(9)用PBS漂洗切片，5min×3次；(10)DAPI染液室溫孵育10min；(11)用PBS漂洗切片，5min×5次；(12)用抗熒光淬滅劑封片，置于濕盒內(nèi)4℃避光保存；(13)激光共聚焦顯微鏡或熒光顯微鏡觀察、采集圖像。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果：免疫熒光檢測(cè)結(jié)果表明，誘導(dǎo)后的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞高表達(dá)M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD163。如圖3所示。實(shí)施例4細(xì)胞STR檢驗(yàn)4.1實(shí)驗(yàn)方法：取U937來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，用GenomicDNAextractionminikit(QIAGEN公司)提取DNA，采用MicroreaderTM21IDSystem(北京閱微基因技術(shù)有限公司)擴(kuò)增20個(gè)STR位點(diǎn)和性別鑒定位點(diǎn)，使用ABI3730xl型遺傳分析儀(AppliedBiosystems公司)進(jìn)行PCR產(chǎn)物檢測(cè)，使用GeneMapper3.2軟件(AppliedBiosystems)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，并與ATCC數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)。4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果：通過(guò)短串聯(lián)重復(fù)序列(Shorttandemrepeat,STR)測(cè)序比對(duì)，明確M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與ATCC數(shù)據(jù)庫(kù)中的U937單核細(xì)胞的STR數(shù)據(jù)匹配率為100％(表2、圖4)，具有一致的基因表型，表明M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞來(lái)源于U937細(xì)胞，且在模型建立過(guò)程中未發(fā)生基因變異。實(shí)施例5移植瘤成瘤實(shí)驗(yàn)及活體動(dòng)物成像采用免疫缺陷小鼠在體原位移植瘤模型，將U937來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞共注射，觀察U937、THP1來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)和荷瘤鼠生存時(shí)間的影響。5.1實(shí)驗(yàn)方法：5.1.1構(gòu)建M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞共注射的顱內(nèi)原位移植瘤模型：收集M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)；取4-6周齡雄性NOD/SCID小鼠(購(gòu)自第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，采用標(biāo)準(zhǔn)無(wú)菌條件飼養(yǎng)于該中心)，用戊巴比妥鈉麻醉劑麻醉，用蛋白微量進(jìn)樣器將5μl細(xì)胞懸液注射入小鼠顱內(nèi)，進(jìn)針位點(diǎn)在小鼠前正中線與外眥連線交接點(diǎn)后右側(cè)旁開(kāi)0.5cm處，進(jìn)針深度為0.5cm。惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞組注射細(xì)胞量為：5×103個(gè)/只(每組各8只小鼠)；共注射組為：惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞5×103個(gè)+M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞2×104個(gè)(每組各8只小鼠)。5.1.2分析M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)和荷瘤鼠生存時(shí)間的影響：于移植瘤構(gòu)建的第11天、第18天，每只小鼠腹腔注射200μlLuciferin底物，10分鐘后，用IVIS活體動(dòng)物成像儀檢測(cè)各組小鼠的成瘤大小。待各組小鼠自然死亡后，分析各組小鼠生存期。5.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果：采用免疫缺陷小鼠在體原位移植瘤模型，發(fā)現(xiàn)U937來(lái)源的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞共注射，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)并顯著縮短荷瘤鼠生存期。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3