本發(fā)明屬于魚類遺傳標(biāo)記篩選與制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種草魚出血病免疫性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記。所述的遺傳標(biāo)記從C7N1基因中得到。本發(fā)明還涉及所述遺傳標(biāo)記在草魚出血病免疫性狀的遺傳標(biāo)記中的關(guān)聯(lián)分析的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

草魚(Ctenopharyngodon idella，英文名grass carp)是我國重要的淡水養(yǎng)殖魚類，其產(chǎn)量約占淡水養(yǎng)殖總產(chǎn)量18％(Rao YL等.2015.Insights into the antiviral immunity against grass carp(Ctenopharyngodon idella)reovirus(GCRV)in grass carp.J Immunol Res,670437)。草魚出血病是草魚魚種階段最為嚴(yán)重的疾病，該病發(fā)病季節(jié)長，流行范圍廣，死亡率高，常給養(yǎng)殖者造成重大的經(jīng)濟(jì)損失，其病原為草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)，該病毒由11個(gè)雙鏈核糖核酸(dsRNA)片段和兩層衣殼蛋白組成。隨著測(cè)序技術(shù)的快速發(fā)展，新的基因及其功能不斷地被挖掘。目前，人、鼠、斑馬魚C7N1基因序列已被報(bào)道(Wan D等.2004.Large-scale cDNA transfection screening for genes related to cancer.Proc Natl Acad Sci USA,101(44):15724-15729)，但缺乏對(duì)其分子結(jié)構(gòu)與功能的研究。

C7N1基因位于草魚的7號(hào)染色體上，編碼蛋白是一種新型蛋白，由993個(gè)氨基酸組成。即使在高等哺乳動(dòng)物中也未見對(duì)其生物學(xué)功能的相關(guān)報(bào)道。對(duì)C7N1進(jìn)行生物信息學(xué)分析，該基因包含3個(gè)外顯子，2個(gè)內(nèi)含子，其氨基酸序列與斑馬魚的同源序列相似度為72％，發(fā)現(xiàn)其在半胱氨酸和蛋氨酸的代謝途徑中發(fā)揮著重要的作用。

目前，草魚免疫相關(guān)基因的克隆及其功能的研究取得了很大的進(jìn)步。在如此豐富的理論研究基礎(chǔ)之上，尋求一種高效、可行的方法來選育抗草魚出血病的品種是必要的。而傳統(tǒng)的育種方法耗時(shí)、耗力，于是基于遺傳標(biāo)記的育種方法逐漸被研究者采用。水產(chǎn)動(dòng)物分子育種技術(shù)經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展，已經(jīng)進(jìn)入基因組時(shí)代，并朝著分子育種的宏偉目標(biāo)邁進(jìn)。隨著眾多經(jīng)濟(jì)生物全基因組測(cè)序的完成，如何從海量的基因序列信息中深入地挖掘有用的生物信息迫在眉睫，進(jìn)而將這些知識(shí)轉(zhuǎn)化成技術(shù)并被運(yùn)用在生產(chǎn)實(shí)踐中。其中，遺傳多態(tài)性鑒定是后基因組時(shí)代研究的一個(gè)重點(diǎn)內(nèi)容。通過關(guān)聯(lián)分析和連鎖分析，將基因結(jié)構(gòu)的變異和表型的變異聯(lián)系起來，尋找經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)的基因和標(biāo)記，從而將其用于分子遺傳育種。在南亞黑鯪上，已經(jīng)有利用微衛(wèi)星標(biāo)記育種方法培育出新品種的報(bào)道，并且該報(bào)道證明分子遺傳育種是一種行之有效的育種方法(Sahu DK等.2013.Identification of reproduction-related genes and SSR-markers through expressed sequence tags analysis of a monsoon breeding carp rohu,Labeo rohita(Hamilton).Gene,524(1):1-14)。2015年1月，童金茍?jiān)凇禨cience China Life Sciences》雜志上對(duì)重要的經(jīng)濟(jì)性狀在魚類分子遺傳育種上的運(yùn)用進(jìn)行了綜述，分析了分子選育的特點(diǎn)，為抗病抗逆品系的選育、疫苗開發(fā)和疾病管理提供了重要基礎(chǔ)(Tong JG等.2015.Genetic and genomic analyses for economically important traits and their applications in molecular breeding of cultured fish.Science China Life Sciences,58(2):178-186)。同時(shí)，比較基因組學(xué)在研究中也被廣泛地采用。草魚，斑馬魚和稀有鮈鯽同屬鯉科魚類，但對(duì)GCRV的感染表現(xiàn)出不同的抗病性，研究發(fā)現(xiàn)草魚在感染GCRV后死亡率為50～90％，而稀有鮈鯽的死亡率可達(dá)100％，斑馬魚不致死。為探索它們的抗病毒免疫機(jī)制提供了方向，其中比較基因組學(xué)更能廣泛地挖掘出這三者在基因水平上的差異，為進(jìn)一步的研究奠定堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

相關(guān)研究提示我們，可以將基礎(chǔ)理論研究與生產(chǎn)實(shí)際相結(jié)合起來。對(duì)草魚C7N1基因的遺傳多態(tài)性和草魚出血病進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，以期獲得抗病相關(guān)的遺傳標(biāo)記。在此研究中，早期發(fā)展起來的測(cè)序和PCR-RFLP技術(shù)又為遺傳多態(tài)性的研究提供了確切的技術(shù)保障。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，篩選一種草魚出血病免疫性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記。所述的遺傳標(biāo)記從C7N1基因中篩選得到，本發(fā)明找到C7N1基因的一個(gè)SNP，進(jìn)一步，本發(fā)明的遺傳標(biāo)記可以在草魚出血病免疫性狀的遺傳標(biāo)記的關(guān)聯(lián)分析中應(yīng)用。

在本發(fā)明中，申請(qǐng)人對(duì)GCRV感染后的抗性/易感草魚脾臟、頭腎組織和單克隆CIK細(xì)胞進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)C7N1基因的一個(gè)SNP與草魚抗性密切相關(guān)。感染實(shí)驗(yàn)證明：C7N1基因中的堿基突變與草魚出血病顯著相關(guān)。

本發(fā)明借助高通量測(cè)序方法篩選草魚出血病免疫性狀相關(guān)的突變位點(diǎn)，利用PCR擴(kuò)增、Sanger測(cè)序技術(shù)對(duì)候選位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證，利用PCR或PCR-RFLP技術(shù)對(duì)驗(yàn)證后的位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，將分型結(jié)果與自然草魚群體的草魚出血病免疫性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，從而鑒定得到與草魚出血病免疫性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記，為選育抗GCRV感染的草魚品種的輔助選擇提供新的遺傳標(biāo)記。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

申請(qǐng)人通過高通量測(cè)序的方法，鑒定得到草魚C7N1基因在個(gè)體和細(xì)胞水平上存在相同的突變位點(diǎn)，其完整的cDNA序列如SEQ ID NO：1所述。經(jīng)過序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，在該序列編碼區(qū)的2145處存在單個(gè)堿基的替換突變,該突變未產(chǎn)生特殊的酶切多態(tài)性。但此突變?cè)斐闪税被岬母淖?對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所述)，該突變可能影響草魚C7N1基因的功能。通過設(shè)計(jì)的特異性引物擴(kuò)增包含這一個(gè)突變堿基的片段后，測(cè)序證實(shí)了這個(gè)突變位點(diǎn)為：G或者A(其序列見SEQ ID NO：3，該序列是SEQ ID NO：1所述序列突變片段)。另外，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果表明：草魚C7N1基因的兩種類型在抗性和易感草魚群體和CIK細(xì)胞中存在表達(dá)差異(見表1)。申請(qǐng)人為了驗(yàn)證這一差異性，對(duì)感染后抗性和易感的草魚經(jīng)過基因分型和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析證實(shí)該位點(diǎn)突變確實(shí)與抗出血病性狀存在顯著相關(guān)性：抗性群體中基因型為雜合的個(gè)體數(shù)要多于易感群體。由此證明，將該位點(diǎn)作為草魚出血病免疫性狀預(yù)測(cè)和育種的遺傳標(biāo)記是切實(shí)可行的。

為了擴(kuò)增包含該位點(diǎn)的片段，申請(qǐng)人設(shè)計(jì)了如下所示的特異性引物對(duì)：

正向引物：5’-GACTGAGAATGCTGTGAAAGATG-3’，

反向引物：5’-CAATGAGGTGGGATTTTAGTGA-3’。

具體地，本發(fā)明的技術(shù)方案如下所述：

一種草魚出血病免疫性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所述，在該序列的2145處存在一個(gè)堿基的替換突變，即由堿基G轉(zhuǎn)換為堿基A。

序列表SEQ ID NO：1編碼的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示，在所述序列的715處有1個(gè)氨基酸的替換突變。

申請(qǐng)人提供了一種檢測(cè)所述遺傳標(biāo)記的引物對(duì)，該引物對(duì)的序列如下所示：

正向引物：5’-AAGGGCTGCGGATCGGAT-3’

反向引物：5’-CCTGCCTGACAGACATTTATTGC-3’。

申請(qǐng)人提供了一種篩選草魚出血病免疫性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記的方法，所述的方法包括下列步驟：

1)通過草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus，GCRV)感染實(shí)驗(yàn)將自然群體的草魚分為抗性個(gè)體和易感個(gè)體，將草魚CIK細(xì)胞通過流式細(xì)胞術(shù)單細(xì)胞分選結(jié)合GCRV感染試驗(yàn)分為抗性和易感兩類；

2)提取草魚的頭腎、脾臟和單克隆CIK細(xì)胞的RNA，通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序篩選遺傳標(biāo)記；

3)利用混合池測(cè)序來驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組中C7N1基因的拼接結(jié)果，所述的C7N1基因的cDNA序列如SEQ ID NO：1所示；

4)利用PCR結(jié)合3.0％瓊脂糖凝膠電泳的方法對(duì)C7N1基因進(jìn)行分型；

5)利用在線分析軟件SHEsis(http://analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php)進(jìn)行性狀關(guān)聯(lián)分析。

本發(fā)明的草魚出血病免疫性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記可以在草魚出血病免疫性狀檢測(cè)中應(yīng)用。

本發(fā)明的引物對(duì)可以在草魚出血病免疫性狀檢測(cè)中應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明具有的有益效果：

本發(fā)明通過結(jié)合個(gè)體和細(xì)胞水平上的高通量測(cè)序結(jié)果篩選與草魚出血病免疫性狀相關(guān)的突變位點(diǎn)，結(jié)合這些位點(diǎn)再選取有差異表達(dá)的基因做單獨(dú)試驗(yàn)驗(yàn)證而挖掘出與抗病性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記位點(diǎn)，同時(shí)將草魚基因與斑馬魚和稀有鮈鯽的同源基因比對(duì)后分析突變位點(diǎn)在不同物種的堿基類型。這種篩選和傳統(tǒng)的單基因核苷酸多態(tài)位點(diǎn)篩選相比通量高、檢測(cè)準(zhǔn)確、速度快，得到的結(jié)果更可靠。本發(fā)明得到的SNP突變位點(diǎn)為今后的抗草魚出血病育種奠定了理論基礎(chǔ)。

更詳細(xì)的技術(shù)方案請(qǐng)參見說明書的《附圖說明》及《具體實(shí)施方式》中的實(shí)施例。

附圖說明

序列表SEQ ID NO：1是本發(fā)明中C7N1基因完整的cDNA序列(1-2982)，在該序列的2145位堿基處存在一個(gè)SNP位點(diǎn)(2145位堿基處顯示的堿基是突變后的堿基A)。

序列表SEQ ID NO：2是C7N1基因編碼的氨基酸序列。序列長度為993aa(終止密碼子TGA不翻譯為氨基酸)。在該序列的715位存在1個(gè)氨基酸的替換(由Ile替換了Met)。

序列表SEQ ID NO：3是本發(fā)明中對(duì)這個(gè)SNP的C7N1基因突變進(jìn)行基因分型設(shè)計(jì)引物所擴(kuò)增出的目的片段(117bp)，所述的突變存在于該片段的第28位堿基處(即：G-A突變)。(第28位堿基處顯示的堿基是突變后的堿基A)

序列表SEQ ID NO：4和5是檢測(cè)本發(fā)明遺傳標(biāo)記的引物對(duì)的序列。如下所示：

正向引物：5’-AAGGGCTGCGGATCGGAT-3’

反向引物：5’-CCTGCCTGACAGACATTTATTGC-3’。

圖1：本發(fā)明的總體技術(shù)流程示意圖。

圖2：草魚CIK細(xì)胞抗性與易感的病變示意圖。附圖標(biāo)記說明：C1為對(duì)照組，R2為抗性細(xì)胞，S3為易感細(xì)胞；A,B,C,D,E,F,G,H分別表示細(xì)胞的感染時(shí)間為0h,6h,12h,24h,48h,72h,96h,120h。

圖3：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序策略示意圖。附圖標(biāo)記說明：采用雙尾測(cè)序法分別對(duì)組織和細(xì)胞的RNA進(jìn)行測(cè)序并拼接組裝。

圖4：DNA提取的瓊脂糖電泳圖。附圖標(biāo)記說明：圖中1泳道：DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)(Maker4)；2-6泳道：提取的組織DNA。

圖5：PCR擴(kuò)增包含突變位點(diǎn)片段的瓊脂糖電泳圖。附圖標(biāo)記說明：圖中1泳道：DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)(Maker 1)；2-9泳道：擴(kuò)增的目的片段。

圖6：用特異性引物擴(kuò)增包含單個(gè)堿基突變片段酶切后不同基因型電泳圖。附圖標(biāo)記說明：圖中1泳道：M，DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)(Maker 1)；2泳道：AB，雜合型個(gè)體；3泳道：AA，純合型個(gè)體；4泳道：GG，純合型個(gè)體。

圖7：草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)感染后三種基因型比率統(tǒng)計(jì)的柱形圖。附圖標(biāo)記說明：“*”代表差異顯著。

圖8：本發(fā)明中C7N1基因的cDNA序列。該序列的2145位堿基處的R為等位基因突變(A/G)(以下劃線表示)。

圖9：本發(fā)明中C7N1基因編碼的氨基酸序列(終止密碼子TGA不翻譯氨基酸)。在該序列的715位存在1個(gè)氨基酸的替換，以I及下劃線表示。

圖10：本發(fā)明中對(duì)SNP的基因突變進(jìn)行基因分型設(shè)計(jì)引物所擴(kuò)增出的目的片段117bp，所示序列的28位堿基處的R為等位基因突變(A/G)以下劃線表示。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：草魚脾臟、頭腎和單克隆CIK細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

(1)感染試驗(yàn)

本實(shí)施例所用的水族箱用0.05％的高錳酸鉀溶液浸泡24小時(shí)后清洗干凈，并注入清水，安裝好充氧泵、加熱棒，將溫度設(shè)置為28℃-30℃、開啟充氧泵后準(zhǔn)備暫養(yǎng)試驗(yàn)用草魚。在草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus，GCRV)感染之前將草魚隨機(jī)分為五組(60尾/組)暫養(yǎng)于準(zhǔn)備好的水族箱中，每天定點(diǎn)、定時(shí)、定量投喂兩次適口顆粒飼料，并及時(shí)清理殘餌和代謝廢物。約一星期，待魚群日常生理活動(dòng)正常后準(zhǔn)備病毒感染試驗(yàn)。GCRV-097毒株原液由中國科學(xué)院水生生物研究所惠贈(zèng)。感染所用病毒懸液為本申請(qǐng)人的實(shí)驗(yàn)室感染試驗(yàn)后收集并保存于-80℃，經(jīng)活化后的懸液。在病毒注射前，向病毒懸液中加入青霉素和鏈霉素各100IU/mL病毒懸液，防止注射期間的細(xì)菌感染。選取四組草魚為感染組，另外一組為對(duì)照組。于感染組草魚的腹腔和背鰭肌肉小心注射劑量為0.1mL/g體重的GCRV-097病毒懸液，對(duì)照組注射相同劑量的生理鹽水。

草魚CIK細(xì)胞系來自中國典型培養(yǎng)物保藏中心(英文簡(jiǎn)稱CCTCC，中國.武漢.武漢大學(xué))，草魚CIK細(xì)胞系的培養(yǎng)溫度為28℃，CO₂濃度為5％，10％胎牛血清，培養(yǎng)基為DMEM(購自Gibico公司，美國)。通過流式細(xì)胞儀(BD FACSAriaTMIII Cell Sorter，美國)進(jìn)行單細(xì)胞分選培養(yǎng)，GCRV感染，從而篩選出抗性CIK細(xì)胞與易感的CIK細(xì)胞。

(2)取樣

GCRV-097病毒注射結(jié)束后，每3小時(shí)觀察一次水族箱中魚體的活動(dòng)狀況，及時(shí)收集24小時(shí)至48小時(shí)之間出現(xiàn)草魚出血病癥狀的將死草魚(即易感草魚)并作好樣品編號(hào)與記錄。在冰上取下病魚的脾臟、頭腎放入1.5mL含有800μL冰Trizol試劑(購自寶生物大連有限公司)的無菌離心管中，小心研磨，待無明顯塊狀組織后放入-80℃冰箱中保存；另一部分直接放入空的無菌1.5mL離心管中于-80℃冰箱中保存。感染試驗(yàn)7天之后存活的草魚被認(rèn)為是抗性個(gè)體，按以上的方法取脾臟、頭腎樣品保存。

根據(jù)單克隆CIK細(xì)胞對(duì)GCRV的反應(yīng)篩選出抗性與易感細(xì)胞，分別收集對(duì)應(yīng)的未感染細(xì)胞按以上方法進(jìn)行保存。

(3)提取脾臟、頭腎和單克隆CIK細(xì)胞總RNA

采用Trizol法提取總RNA(按照Trizol試劑說明書進(jìn)行操作)。具體操作方法如下(所用微量移液器的槍頭均已用DEPC水處理過)：

1)取草魚脾臟、頭腎樣品和單克隆CIK細(xì)胞樣品分別置于裝有800μL Trizol試劑的1.5mL離心管(DEPC水處理過的)中；

2)充分研磨后，置冰保存?zhèn)溆?或置于-80℃長期保存?zhèn)溆?；

3)每管加160μL氯仿，蓋緊上蓋，劇烈振搖15s，室溫放置3min；

4)4℃、12000rpm離心15min；

5)備1.5mL離心管(DEPC水處理過的)，將步驟4)中無色上層水相分別轉(zhuǎn)至其中，加400μL異丙醇，輕緩混勻，室溫放置10min；

6)4℃、12000rpm離心10min；

7)吸棄上清，加800μL 75％乙醇(DEPC水處理過的)，輕彈管壁漂洗5s；

8)4℃、7500rpm離心5min；

9)吸棄上清，風(fēng)干10min；

10)加100μL ddH₂O(DEPC處理過的)，58℃水浴10min，立即放入-80℃保存。

(4)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

將提取好的脾臟、頭腎和單克隆CIK細(xì)胞RNA用干冰分別寄送到上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司和廣州基迪奧生物科技有限公司利用Illumila的Miseq和HiSeq2500平臺(tái)測(cè)序并進(jìn)行序列拼接、差異表達(dá)、聚類等基本分析。測(cè)序策略見圖3。C7N1基因在脾臟、頭腎和單克隆CIK細(xì)胞中的表達(dá)量見表1。

表1 C7N1在轉(zhuǎn)錄組的表達(dá)量(FPKM值)

(5)生物信息學(xué)分析

將測(cè)序得到的個(gè)體與細(xì)胞水平上的抗性與易感相關(guān)的SNP位點(diǎn)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)只有一個(gè)突變位點(diǎn)同時(shí)存在于個(gè)體和細(xì)胞水平上，且與抗病性相關(guān)。再通過比對(duì)分析斑馬魚和稀有鮈鯽同源基因上該位點(diǎn)的堿基類型，結(jié)果見表2。

表2突變位點(diǎn)在草魚、稀有鮈鯽和斑馬魚中的堿基類型

實(shí)施例2：C7N1基因驗(yàn)證及關(guān)聯(lián)分析

(1)草魚脾臟組織的DNA提取

采用常規(guī)氯仿法提取基因組DNA。具體操作方法如下：

1)取0.05g組織(綠豆大小)放1.5mL EP管中，加200μL組織提取液，充分研碎。再加400μL組織提取液和60μL的1mg/mL的蛋白酶K，放55℃水浴(約3h)或者37℃過夜，消化至液體澄清；

2)加600μL Tris-飽和酚，充分混合10min，12,000rpm離心10min；

3)轉(zhuǎn)移上清液于新EP管，加500μL氯仿抽提，充分混合10min，12,000rpm離心10min；

4)移取上清于新EP管，加2倍體積的冰乙醇(-20℃)，于-20℃沉淀DNA至少30min，隨后12,000rpm離心5min；

5)棄上清，用70％乙醇洗1-2次，室溫下風(fēng)干；

6)加50μL三蒸水溶解DNA，-20℃保存?zhèn)溆?。提取DNA結(jié)束后，取2μL提取的DNA用1％瓊脂糖凝膠(含0.01％的核酸染料Gelview)進(jìn)行電泳檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果見圖4。

(2)引物設(shè)計(jì)

針對(duì)單個(gè)堿基的替換，利用Primer Premier 5軟件設(shè)計(jì)了一對(duì)引物，用于基因型檢測(cè)，所述的引物由武漢擎科創(chuàng)新生物科技有限公司合成。所述的引物對(duì)的DNA序列如下所示：

正向引物：5’-GACTGAGAATGCTGTGAAAGATG-3’

反向引物：5’-CAATGAGGTGGGATTTTAGTGA-3’。

(2)PCR擴(kuò)增

將合成的引物用ddH₂O稀釋至10μM濃度。PCR反應(yīng)體系總體積為20μL：Mix10μL，正向引物0.6μL，反向引物0.6μL，cDNA 1μL，雙蒸水7.8μL。擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性1min、94℃變性30s、57℃退火30s、72℃延伸30s、35個(gè)循環(huán)、72℃再延伸5min。取5μL PCR產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖5。

(3)PCR-電泳分型

將感染試驗(yàn)獲得的26條易感草魚和30條抗性草魚，經(jīng)過DNA提取和PCR擴(kuò)增后用3.0％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)分型。分型示例電泳圖見圖6。分型后使用在線分析軟件SHEsis(http://analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php)(Shi YY和He L.2005.SHEsis,a powerful software platform for analyses of linkage disequilibrium,haplotype construction,and genetic association at polymorphism loci.Cell Res,15(2):97-8)分析，結(jié)果見表3。

表3草魚C7N1基因分型統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表3說明：表3中的AA基因型和BB基因型代表純合子，AB基因型代表雜合子；“*”表示差異顯著。

由表1可知，該C7N1基因轉(zhuǎn)錄本在抗性個(gè)體和細(xì)胞中的表達(dá)量低于易感個(gè)體和細(xì)胞。由表3和圖7可知，AB基因型個(gè)體中的抗性個(gè)體數(shù)多于易感個(gè)體數(shù)；BB基因型個(gè)體中的抗性個(gè)體數(shù)少于易感個(gè)體數(shù)(P<0.05)。同樣，A等位基因中抗性個(gè)體數(shù)多于易感個(gè)體數(shù)，B等位基因中抗性個(gè)體數(shù)少于易感個(gè)體數(shù)。因此可以得知，這個(gè)SNP位點(diǎn)對(duì)應(yīng)所編碼的氨基酸即“M/I”對(duì)C7N1功能的發(fā)揮起著重要作用。因此選擇雜合型對(duì)草魚出血病免疫性狀選擇是有利的。