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利用枯草芽孢桿菌高效表達(dá)PI?PLC基因的方法與流程

文檔序號(hào):12577449閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種利用枯草芽孢桿菌高效表達(dá)磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C(PI-PLC)基因的方法,所述方法包括:將SEQ ID No:1所示序列與pBE980a質(zhì)粒連接,構(gòu)建得到重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌EPI400中,篩選陽性克隆轉(zhuǎn)化至枯草芽孢桿菌中,獲得重組基因工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),于培養(yǎng)液中獲得轉(zhuǎn)化后的磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C。

2.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于所述方法如下:

(1)表達(dá)載體構(gòu)建:以SEQ ID No:2所示PI-PLC基因?yàn)槟0?,以P1/P2為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增:

引物P1:5’-GCCAAGCTTGCGTCAAGCGTGAAC GAACTGGAAAATTGG-3’;

引物P2:5’-GCCGGATCCTTACCCATCCGACGCGTGCCGGATTTTTCTGTT-3’;

(2)步驟(1)酶切、回收的目的基因與pBE980a質(zhì)粒連接,得到重組表達(dá)載體pBE980a PI-PLC;

(3)重組表達(dá)載體pBE980a PI-PLC轉(zhuǎn)入大腸桿菌EPI400感受態(tài)細(xì)胞,篩選獲得陽性克??;

(4)步驟(3)陽性克隆電轉(zhuǎn)化至枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞,篩選陽性克隆,獲得重組基因工程菌;

(5)重組基因工程菌在含有10ug/ml卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h以上,于培養(yǎng)基上清液獲得PI-PLC。

3.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌WB600或枯草芽孢桿菌WB800。

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