1.一種抗菌肽的制備方法,其特征在于,該方法利用枯草芽孢桿菌菌株發(fā)酵制備而成,所述枯草芽孢桿菌菌株為枯草芽孢桿菌YS439,保藏于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心,保藏編號(hào)為 CICC 20445,制備方法具體包括如下步驟:
(1)菌株復(fù)壯,具體為:
如果菌株是以凍干粉形式保存,首先應(yīng)將凍干粉形式菌株接種在斜面培養(yǎng)基上,26℃~35℃條件下培養(yǎng)36~72h進(jìn)行復(fù)壯生長;
所述斜面培養(yǎng)基,以質(zhì)量百分比計(jì),配方為:蛋白胨 0.4~0.8%,牛肉膏 0.2~0.3%,葡萄糖 1~4%,磷酸二氫鉀0.2~0.5%,瓊脂1.5~1.8%,pH=自然;
(2)制備種子液,具體為:
將步驟(1)中復(fù)壯后菌株接種于滅菌后搖瓶培養(yǎng)基中,26℃~35℃、150-230 轉(zhuǎn)/min搖瓶培養(yǎng)16~25h左右;
所述搖瓶培養(yǎng)基,以質(zhì)量百分比計(jì),配方為:
蛋白胨 0.4~0.8%,牛肉膏 0.2~0.3%,葡萄糖 1~4%,磷酸二氫鉀0.2~0.5%,硫酸銨0.2~0.7%,硫酸鎂0.1~0.3%,pH=自然;
(3)制備一級(jí)種子罐培養(yǎng)液,具體為:
將一級(jí)種子罐培養(yǎng)基滅菌后,接種步驟(2)中所制備的種子液,26℃~35℃、180-220 轉(zhuǎn)/min、通風(fēng)量1:0.5~0.7條件下,培養(yǎng)8~15h;
所述一級(jí)種子罐培養(yǎng)基,以質(zhì)量百分比計(jì),配方為:
玉米面3~6%,豆粕4~8%,磷酸二氫鉀0.2~0.5%,葡萄糖1~4%,硫酸銨0.2~0.7%,硫酸鎂0.1~0.3%,pH=自然;
(4)菌株發(fā)酵,具體為:
將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后,以4~8%體積比的接種量,接種步驟(3)中所制備的一級(jí)種子罐培養(yǎng)液,26℃~35℃、罐壓0.05~0.08Mpa、通風(fēng)量1:0.6~0.8條件下,發(fā)酵22~32h;
所述發(fā)酵培養(yǎng)基,配方同一級(jí)種子罐培養(yǎng)基;
(5)發(fā)酵液預(yù)處理,具體為:
將步驟(4)中發(fā)酵結(jié)束后醪液進(jìn)行過濾,并對(duì)濾液進(jìn)行濃縮;
濃縮后濾液加入載體,混合均勻后,使固形物含量控制在30%-40%;
(6)抗菌肽提取與精制,具體為:
將步驟(5)加入載體的濃縮后濾液進(jìn)行噴霧干燥,噴霧干燥時(shí),具體參數(shù)為:
進(jìn)風(fēng)溫度 130℃~160℃,排風(fēng)溫度65℃~75℃,霧化盤轉(zhuǎn)速為3000~4500轉(zhuǎn)/min,進(jìn)料量為500~700kg/h;
干燥后,旋風(fēng)分離收集菌粉,即抗菌肽粉劑。
2.如權(quán)利要求1所述抗菌肽的制備方法,其特征在于,步驟(4)中,發(fā)酵至12~15h時(shí),補(bǔ)加發(fā)酵培養(yǎng)基,補(bǔ)加量為初始發(fā)酵培養(yǎng)基體積的15~20%。
3.如權(quán)利要求1所述抗菌肽的制備方法,其特征在于,步驟(5)中,所述載體為淀粉、麥芽糊精或輔益粉。
4.如權(quán)利要求1所述抗菌肽的制備方法,其特征在于,步驟(5)中,采用超濾機(jī)對(duì)濾液進(jìn)行濃縮,濃縮時(shí),超濾膜截留分子量為3000道爾頓。
5.如權(quán)利要求1所述抗菌肽的制備方法,其特征在于,對(duì)步驟(6)所收集的菌粉進(jìn)一步經(jīng)40~80目篩分機(jī)進(jìn)行篩分獲得細(xì)粉,并對(duì)篩分所得粗料進(jìn)行粉碎,最后將細(xì)粉與粉碎后粗料混合均勻即為抗菌肽成品。