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檢測NOP10基因第2號外顯子突變位點R34W(C100T)序列突變的方法和引物與流程

文檔序號:12346611閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.檢測NOP10基因第2號外顯子突變位點R34W(C100T)序列的引物,其特征在于,包括:擴增NOP10基因第2號外顯子突變位點R34W(C100T)序列的正、反向引物;其堿基序列為:

NOP10-F:TGTAAAACGACGGCCAGTTTGACCATTGCATCTTCTATTTTC

NOP10-R:AACAGCTATGACCATGTCCCTTTATGGGTGATGCCAC。

2.如權利要求1所述的引物,其特征在于,所述引物還包括一對測序引物,測序通用引物為M13,其堿基序列為:

M13-F:TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R:AACAGCTATGACCATG。

3.如權利要求1至2之一所述的引物,其特征在于,所述正、反向引物的使用濃度比為:NOP10-F:NOP10-R=1:1。

4.如權利要求1至2之一所述的引物,其特征在于,所述一對測序引物的使用濃度比為:M13-F:M13-R=1:1。

5.如權利要求1所述的引物,其特征在于,所述正、反向擴增引物的擴增反應條件為:第一階段,95℃預變性10min;第二階段,變性溫度94℃30sec,退火溫度64℃90sec,延伸溫度72℃30sec,循環(huán)16次,每循環(huán)一次,所述退火溫度降低0.5℃;第三階段,變性溫度94℃30sec,退火溫度58℃30sec,延伸溫度72℃30sec,循環(huán)24次;第四階段,72℃10min;第五階段,擴增反應結束,擴增產(chǎn)物在4℃下保存。

6.一種檢測NOP10基因第2號外顯子突變位點R34W(C100T)序列的方法,其包括如下步驟:

(1)提取樣本DNA;

(2)利用一對擴增引物NOP10-F和NOP10-R對(1)中的DNA進行擴增,獲得擴增產(chǎn)物;

(3)利用一對測序引物M13-F和M13-R對(2)中的擴增產(chǎn)物進行測序,獲得所述擴增產(chǎn)物的基因序列;

(4)將(3)中的基因序列與NOP10基因野生型參考序列NOP10-ref進行比較,確定突變位點是否存在,其特征在于,

NOP10-F:TGTAAAACGACGGCCAGTTTGACCATTGCATCTTCTATTTTC

NOP10-R:AACAGCTATGACCATGTCCCTTTATGGGTGATGCCAC

M13-F:TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R:AACAGCTATGACCATG。

7.如權利要求6所述的方法,其特征在于,步驟(2)的擴增反應條件為:第一階段,95℃預變性10min;第二階段,變性溫度94℃30sec,退火溫度64℃90sec,延伸溫度72℃30sec,循環(huán)16次,每循環(huán)一次,所述退火溫度降低0.5℃;第三階段,變性溫度94℃30sec,退火溫度58℃30sec,延伸溫度72℃30sec,循環(huán)24次;第四階段,72℃10min;第五階段,擴增反應結束,擴增產(chǎn)物在4℃下保存。

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