本發(fā)明屬于生物工程
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種微波輔助制備淡水魚骨蛋白多肽的方法。
背景技術(shù)：
：我國疆域廣闊，擁有熱帶、亞熱帶、溫帶、亞溫帶等多種氣候區(qū)域，江河湖泊、水庫的淡水資源眾多，淡水魚類分布極為豐富。改革開放以來，漁業(yè)科技工作者在多級政府的支持下，大力培育優(yōu)良品種，并積極引進國外優(yōu)良品種，取得很好的成果，大力繁殖優(yōu)良品種魚苗，實施人工養(yǎng)殖與自然水體流放相結(jié)合，淡水魚產(chǎn)量自1980年至1990年增長近4倍，1990年全國淡水魚總產(chǎn)量達1237萬噸，其中人工養(yǎng)殖為466萬噸，占總產(chǎn)量的36％，位居世界首位。經(jīng)過25年的發(fā)展，到2015年全國淡水魚產(chǎn)量2900萬余噸，其中人工養(yǎng)殖淡水魚達1200萬噸，但淡水魚深加工所占比例較低，淡水魚深加工企業(yè)的下腳料除魚皮和魚鱗用于制備膠原蛋白或進一步制備膠原蛋白低聚肽外，其它的下腳料，如魚頭、魚骨、魚鰭等基本上用于制備魚粉飼料，沒有得到充分利用，魚血更是沒有收集利用，在眾多的餐飲企業(yè)和居民的淡水魚消費中，魚骨、魚鰭、魚血等均作垃圾處理，既污染環(huán)境又浪費資源。通常，魚骨占魚體重量的8-15％，魚鰭占5-8％，魚血占5％，其中魚骨中含骨油0.7-1％，膠原蛋白8-11％。因此，研究一種將魚骨中蛋白質(zhì)酶解成具有生物活性的肽類物質(zhì)的方法，既可變廢為寶，又能為優(yōu)質(zhì)食品、醫(yī)藥、保健品行業(yè)提供豐富肽類物質(zhì)，造福人類。公開于該
背景技術(shù)：
部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當被視為承認或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種微波輔助與膜過濾制備淡水魚鰭蛋白低聚肽的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種微波輔助制備淡水魚骨蛋白多肽的方法，包括如下步驟：(1)先將淡水魚骨粉碎40-60目，按固液比1：6加入自來水，充分混合后，加入稀堿液調(diào)pH值至8.5-9.0，高壓煮90min，溫度110-120℃，得到改性淡水魚骨分離蛋白溶液；(2)將改性淡水魚骨分離蛋白溶液降溫至33-38℃，先用400目濾布在三足離心機中過濾，收集濾液，調(diào)pH值至9.0，加入底物質(zhì)量4％的堿性蛋白酶，微波提取15-20min，讓pH值自然下降至8.5以下，再加入底物質(zhì)量3％的胰蛋白酶，微波提取15-20min，當pH值降至7.2時，酶解中止；(3)繼續(xù)使用微波裝置升溫至85-90℃，保持時間達到8-10min，滅酶活完成，得到滅酶水解溶液；(4)將滅酶水解溶液降溫至33-38℃，加入0.01％殼聚糖醋酸溶液調(diào)PH值至4.8-5.0，經(jīng)適當沉淀后用三足離心機過濾，再用微濾陶瓷膜過濾，再經(jīng)超濾膜纖維膜過濾，所得濾液即為淡水魚骨蛋白多肽溶液；(5)將所得的淡水魚骨蛋白多肽溶液進行低溫濃縮50-60℃真空干燥，即得淡水魚骨蛋白多肽產(chǎn)品。作為優(yōu)選，步驟(1)中所述的稀堿液為NaOH溶液，其加入量可使料液的pH值調(diào)至8.5-9.0。作為優(yōu)選，步驟(2)中的酶解溫度為55-60℃。作為優(yōu)選，步驟(2)中所述的堿性蛋白酶為Novo蛋白酶或Carsberg蛋白酶。作為優(yōu)選，步驟(2)、(3)中所述的微波裝置的頻率為2450mHZ，功率為20KW。作為優(yōu)選，步驟(4)中0.01％殼聚糖醋酸溶液是用15％醋酸溶液溶解殼聚糖得到的。作為優(yōu)選，步驟(4)中所述的三足離心機的過濾布為400目。作為優(yōu)選，步驟(4)中所述的微濾陶瓷膜為能截留30000-50000分子量的陶瓷膜；所述的超濾纖維膜為能截留10000分子量的纖維膜。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：1.本發(fā)明的方法改進淡水魚骨蛋白的酶解工藝與技術(shù)，解決淡水魚骨蛋白不易被動物消化吸收問題，通過釆用微波輔助酶解技術(shù)制備具有生物活性的寡肽，不僅提高淡水魚骨蛋白的消化吸收率，而且擴大淡水魚骨蛋白應(yīng)用領(lǐng)域，使從單純養(yǎng)魚拓展到畜禽飼料、飼料添加劑到人類食品、醫(yī)藥、保健品等多種行業(yè)和領(lǐng)域，無疑對延長養(yǎng)魚產(chǎn)業(yè)鏈，全面提高養(yǎng)魚產(chǎn)業(yè)綜合效益，實現(xiàn)農(nóng)業(yè)增效農(nóng)民增收農(nóng)村繁榮，對推動－帶一路建設(shè)有重大意義。2.本發(fā)明微波輔助與膜過濾制備淡水魚骨多肽的方法具有收率高、純度高、溶劑消耗少、成本低和易于工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)點。3.本發(fā)明整個工藝流程短、時間短，能耗低、污染少、不使用有毒試劑、無污染物排放，達到清潔生產(chǎn)目標。附圖說明圖1為本發(fā)明微波輔助與膜過濾制備淡水魚骨蛋白多肽的工藝流程圖。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步詳細的闡述，但本發(fā)明的實施方式并不局限于實施例表示的范圍。這些實施例僅用于說明本發(fā)明，而非用于限制本發(fā)明的范圍。此外，在閱讀本發(fā)明的內(nèi)容后，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種修改，這些等價變化同樣落于本發(fā)明所附權(quán)利要求書所限定的范圍。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1：一種微波輔助制備淡水魚骨蛋白多肽的方法，包括如下步驟：(1)先將淡水魚骨粉碎40目，按固液比1：6加入自來水，充分混合后，加入稀堿液調(diào)pH值至8.5，高壓煮90min，溫度110℃，得到改性淡水魚骨分離蛋白溶液；所述的稀堿液為NaOH溶液，其加入量可使料液的pH值調(diào)至8.5；(2)將改性淡水魚骨分離蛋白溶液降溫至33℃，先用400目濾布在三足離心機中過濾，收集濾液，調(diào)pH值至9.0，加入底物質(zhì)量4％的堿性蛋白酶，微波提取15min，讓pH值自然下降至8.5以下，再加入底物質(zhì)量3％的胰蛋白酶，微波提取15min，當pH值降至7.2時，酶解中止；酶解溫度為55℃；所述的堿性蛋白酶為Novo蛋白酶或Carsberg蛋白酶；所述的微波裝置的頻率為2450mHZ，功率為20KW；(3)繼續(xù)使用微波裝置升溫至85℃，保持時間達到8min，滅酶活完成，得到滅酶水解溶液；所述的微波裝置的頻率為2450mHZ，功率為20KW；(4)將滅酶水解溶液降溫至33℃，加入0.01％殼聚糖醋酸溶液調(diào)PH值至4.8，經(jīng)適當沉淀后用三足離心機過濾，再用微濾陶瓷膜過濾，再經(jīng)超濾膜纖維膜過濾，所得濾液即為淡水魚骨蛋白多肽溶液；0.01％殼聚糖醋酸溶液是用15％醋酸溶液溶解殼聚糖得到的；所述的三足離心機的過濾布為400目；所述的微濾陶瓷膜為能截留30000分子量的陶瓷膜；所述的超濾纖維膜為能截留10000分子量的纖維膜；(5)將所得的淡水魚骨蛋白多肽溶液進行低溫濃縮50℃真空干燥，即得淡水魚骨蛋白多肽產(chǎn)品。實施例2：一種微波輔助制備淡水魚骨蛋白多肽的方法，包括如下步驟：(1)先將淡水魚骨粉碎60目，按固液比1：6加入自來水，充分混合后，加入稀堿液調(diào)pH值至9.0，高壓煮90min，溫度120℃，得到改性淡水魚骨分離蛋白溶液；所述的稀堿液為NaOH溶液，其加入量可使料液的pH值調(diào)至9.0；(2)將改性淡水魚骨分離蛋白溶液降溫至38℃，先用400目濾布在三足離心機中過濾，收集濾液，調(diào)pH值至9.0，加入底物質(zhì)量4％的堿性蛋白酶，微波提取20min，讓pH值自然下降至8.5以下，再加入底物質(zhì)量3％的胰蛋白酶，微波提取20min，當pH值降至7.2時，酶解中止；酶解溫度為60℃；所述的堿性蛋白酶為Novo蛋白酶或Carsberg蛋白酶；所述的微波裝置的頻率為2450mHZ，功率為20KW；(3)繼續(xù)使用微波裝置升溫至90℃，保持時間達到10min，滅酶活完成，得到滅酶水解溶液；所述的微波裝置的頻率為2450mHZ，功率為20KW；(4)將滅酶水解溶液降溫至38℃，加入0.01％殼聚糖醋酸溶液調(diào)PH值至5.0，經(jīng)適當沉淀后用三足離心機過濾，再用微濾陶瓷膜過濾，再經(jīng)超濾膜纖維膜過濾，所得濾液即為淡水魚骨蛋白多肽溶液；0.01％殼聚糖醋酸溶液是用15％醋酸溶液溶解殼聚糖得到的；所述的三足離心機的過濾布為400目；所述的微濾陶瓷膜為能截留50000分子量的陶瓷膜；所述的超濾纖維膜為能截留10000分子量的纖維膜；(5)將所得的淡水魚骨蛋白多肽溶液進行低溫濃縮60℃真空干燥，即得淡水魚骨蛋白多肽產(chǎn)品。實施例3：一種微波輔助制備淡水魚骨蛋白多肽的方法，包括如下步驟：(1)先將淡水魚骨粉碎50目，按固液比1：6加入自來水，充分混合后，加入稀堿液調(diào)pH值至8.8，高壓煮90min，溫度115℃，得到改性淡水魚骨分離蛋白溶液；所述的稀堿液為NaOH溶液，其加入量可使料液的pH值調(diào)至8.8；(2)將改性淡水魚骨分離蛋白溶液降溫至35℃，先用400目濾布在三足離心機中過濾，收集濾液，調(diào)pH值至9.0，加入底物質(zhì)量4％的堿性蛋白酶，微波提取18min，讓pH值自然下降至8.5以下，再加入底物質(zhì)量3％的胰蛋白酶，微波提取18min，當pH值降至7.2時，酶解中止；酶解溫度為58℃；所述的堿性蛋白酶為Novo蛋白酶或Carsberg蛋白酶；所述的微波裝置的頻率為2450mHZ，功率為20KW；(3)繼續(xù)使用微波裝置升溫至88℃，保持時間達到9min，滅酶活完成，得到滅酶水解溶液；所述的微波裝置的頻率為2450mHZ，功率為20KW；(4)將滅酶水解溶液降溫至35℃，加入0.01％殼聚糖醋酸溶液調(diào)PH值至4.9，經(jīng)適當沉淀后用三足離心機過濾，再用微濾陶瓷膜過濾，再經(jīng)超濾膜纖維膜過濾，所得濾液即為淡水魚骨蛋白多肽溶液；0.01％殼聚糖醋酸溶液是用15％醋酸溶液溶解殼聚糖得到的；所述的三足離心機的過濾布為400目；所述的微濾陶瓷膜為能截留40000分子量的陶瓷膜；所述的超濾纖維膜為能截留10000分子量的纖維膜；(5)將所得的淡水魚骨蛋白多肽溶液進行低溫濃縮55℃真空干燥，即得淡水魚骨蛋白多肽產(chǎn)品。對照：參照申請?zhí)枮?01510162420.4專利中的方法。一種鲯鰍魚角料膠原蛋白的提取方法，其特征在于，提取步驟如下：a、鲯鰍魚中魚皮、魚骨及魚鰭為原料，將原料采用專用設(shè)備粉碎；對粉碎后的原料兌水，使之變成漿液；b、對漿液內(nèi)加入酸性物料實施酸解；兌入粉碎原料中的水與粉碎原料的比例為3-8：1；c、對酸解后的漿液實施超聲波處理；超聲波處理的時間為2h；浸提的時間為4h；d、漿液經(jīng)過超聲波處理后實施浸提；酸性物料為檸檬酸；e、過濾；過濾采用過濾器，將漿液中的上層油脂層和沉淀物質(zhì)實施過濾，形成含膠原蛋白的酸溶液；f、脫鹽：是將含膠原蛋白的酸溶液，分別通過陶瓷膜過濾器和納濾膜脫鹽；g、冷凍，冷凍溫度為零下30℃；h、干燥，干燥的溫度為8-15℃。表1本發(fā)明提取方法的有益效果組別酶解時間(h)轉(zhuǎn)化率(％)實施例10.581.20實施例20.683.4實施例30.6585.2對照660.3從表1可知，與對照方法相比，本發(fā)明的提取方法釆用微波輔助與膜過濾技術(shù)，不需溶劑，酸堿用量少，酶解時間短，轉(zhuǎn)化率高，具有良好的市場前景。前述對本發(fā)明的具體示例性實施方案的描述是為了說明和例證的目的。這些描述并非想將本發(fā)明限定為所公開的精確形式，并且很顯然，根據(jù)上述教導(dǎo)，可以進行很多改變和變化。對示例性實施例進行選擇和描述的目的在于解釋本發(fā)明的特定原理及其實際應(yīng)用，從而使得本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)并利用本發(fā)明的各種不同的示例性實施方案以及各種不同的選擇和改變。本發(fā)明的范圍意在由權(quán)利要求書及其等同形式所限定。當前第1頁1 2 3