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一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體及制備方法和應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):11931472閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體,其特征在于,由以下部分組成:

靶向配體,為DHA;

示蹤基團(tuán),為GFP,其序列見序列表中1;

連接基團(tuán),靶向配體上的羧基與帶有GFP示蹤信號(hào)的腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子氨基酸殘基側(cè)鏈上的氨基相連接;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子序列見序列表中2。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體,其特征在于,腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子C端連接了GGGS-GFP;其中,GGGS為腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與GFP之間的linker序列,GGGS的序列見序列表中3。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體,其特征在于,DHA與腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的摩爾比為100:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體的制備方法,其特征在于,具體包括以下步驟:

步驟1,以EDCI和HOBT為縮合劑活化DHA的羧基;

步驟2,將步驟1活化羧基后的DHA與帶有GFP示蹤信號(hào)的腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子氨基酸殘基側(cè)鏈上的氨基發(fā)生酸胺縮合反應(yīng)后,即得蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體的制備方法,其特征在于,腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的C端連接了GGGS-GFP;其中,GGGS為腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與GFP之間的linker序列,GGGS的氨基酸序列見序列表中3。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體的制備方法,其特征在于,步驟1的具體過程為:

在充滿氬氣的手套箱中,冰浴條件下,以DMF做溶劑溶解DHA,攪拌并向其中分別滴加EDCI和HOBT,滴加完后放置6~12h。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體的制備方法,其特征在于,DHA與EDCI的摩爾比為1~2:1;HOBT與EDCI的摩爾比為1~1.5:1。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體的制備方法,其特征在于,步驟2的具體過程為:

在充滿氬氣的手套箱中,冰浴條件下,取步驟1活化羧基后的DHA,攪拌并向其中滴加帶有GFP示蹤信號(hào)的腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,進(jìn)行酸胺縮合反應(yīng)8-12h,3000rpm離心處理,PBS緩沖液洗滌后,即得轉(zhuǎn)運(yùn)體。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體的制備方法,其特征在于,活化羧基后的DHA與帶有GFP示蹤信號(hào)的腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的摩爾比為100:1。

10.跨血腦屏障蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷治療中應(yīng)用。

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