本發(fā)明涉及一種富集叢枝菌根真菌的方法，具體是一種分層培養(yǎng)富集叢枝菌根真菌孢子的方法，屬于微生物領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

叢枝菌根真菌是土壤中廣泛與植物共生的一類真菌,其種類繁多,現(xiàn)在已經(jīng)被單獨規(guī)劃為球囊菌門。由于其與植物建立互利共生的關(guān)系，人們廣泛研究其互作機理，并收集不同地域的菌種與菌株，以發(fā)現(xiàn)不同特性的菌株或新種。但是，由于野外環(huán)境下該類菌有活性的孢子數(shù)目較少，難以進行分離與鑒定。故此類真菌的富集工作比較困難，傳統(tǒng)的富集方法就是用野外原宿主根際土栽種宿主植物擴繁。但是傳統(tǒng)的方法由于受到植物根系的限制不利于富集到叢枝菌根真菌，更不能同時富集到較多的孢子，所需的孢子只能進行二次富集，所以比較費時費力。目前尚沒有一種簡單實用的既容易富集到叢枝菌根真菌又能獲得大量孢子的方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了克服目前富集叢枝菌根真菌方法所存在的不易富集到大量叢枝菌根真菌孢子的缺陷,公開了一種分層培養(yǎng)富集叢枝菌根真菌孢子的方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

a.首先用粒徑為2mm的下層基質(zhì)填充至培養(yǎng)容器的三分之一至二分之一處,然后再填放1cm厚粒徑為4mm的中層基質(zhì)；

b.再將帶有框架的孔徑為45um的隔離網(wǎng)放置中層基質(zhì)上,其框架的四周與培養(yǎng)容器內(nèi)壁貼合緊實,以使上層根系無法從框架和培養(yǎng)容器的貼合處通過；

c.將采集的新鮮野外宿主根際土與粒徑為2mm的基質(zhì)混合作為上層基質(zhì)填充在隔離網(wǎng)上面,再將無菌的宿主植物植株種植于上層基質(zhì)內(nèi)；

d.將該培養(yǎng)容器放置于容器托盤內(nèi)，培養(yǎng)容器底部設(shè)有排吸水口；

e.在植株種植層對植物澆灌P濃度調(diào)為1/100的Hoagland營養(yǎng)液,每30日澆灌一次,平時澆灌蒸餾水保持植株種植層濕潤；同時在容器托盤內(nèi)每15日澆灌P濃度調(diào)為2倍的Hoagland營養(yǎng)液,這樣容器托盤中的營養(yǎng)液可以通過排吸水口吸入下層基質(zhì),以便讓培養(yǎng)容器內(nèi)的下層基質(zhì)保持高的磷濃度；

f.叢枝菌根真菌的生活史為90日,經(jīng)過120日的培養(yǎng)后讓宿主植株自然干死,然后將植株種植層去掉,利用濕篩傾析法來獲得下層基質(zhì)與中層基質(zhì)中的帶有連孢菌絲的叢枝菌根真菌孢子。

本發(fā)明由于將培養(yǎng)容器分為了三層且中層作為緩沖層,植株種植層澆灌少磷營養(yǎng)液保持植株基本的生長需求,下層基質(zhì)從下面虹吸高磷營養(yǎng)液以維持下層高磷環(huán)境,同時采用中層的大顆粒阻斷最下層到植株種植層的虹吸作用,這樣與植株建立共生關(guān)系的叢枝菌根真菌為了幫宿主獲得磷勢必會進入最下層,并會在宿主植物將死時在下層大量產(chǎn)孢,從而便可在最下層獲得大量的叢枝菌根真菌孢子,以用來單孢擴繁和鑒定。本發(fā)明所需要的材料,以及培養(yǎng)方式在一般的實驗室條件下均可達到,使用簡單,且裝置可重復(fù)利用,可行性高。

附圖說明

附圖是本發(fā)明主視結(jié)構(gòu)剖面示意圖。

附圖標記說明如下：培養(yǎng)容器1，容器托盤2，上層基質(zhì)3，隔離網(wǎng)4，中層基質(zhì)5，下層基質(zhì)6，排吸水口7。

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例及附圖對本發(fā)明做進一步詳細說明，本實施例只是為了解釋本發(fā)明而不是限制本發(fā)明：

a.首先用粒徑為2mm的干凈河沙作為下層基質(zhì)(6)填充至培養(yǎng)容器的三分之一處,然后再填放1cm厚的粒徑為4mm的干凈河沙為中層基質(zhì)(5)；

b.再將帶有框架的孔徑為45um的隔離網(wǎng)(4)放置中層基質(zhì)(5)上,其框架的四周與培養(yǎng)容器(1)內(nèi)壁貼合緊實,以使上層根系無法從框架和培養(yǎng)容器(1)的貼合處通過；

c.將采集的新鮮野外宿主植物的根際土與2mm的干凈河沙混合作為上層基質(zhì)(3)填充在隔離網(wǎng)(4)上面,再將無菌的宿主植物植株種植于上層基質(zhì)(3)內(nèi)；

d.將該培養(yǎng)容器(1)放置于容器托盤(2)內(nèi)，培養(yǎng)容器(1)底部設(shè)有排吸水口(7)；

e.每30日從上層對植株種植層澆灌P濃度調(diào)為1/100的Hoagland營養(yǎng)液,平時澆灌蒸餾水保持植株種植層濕潤，同時在容器托盤(2)內(nèi)每15日添加40ml的P濃度調(diào)為2倍的Hoagland營養(yǎng)液,容器托盤(2)中的營養(yǎng)液可以通過排吸水口(7)吸入下層基質(zhì)(5)；

f.叢枝菌根真菌的生活史為90日,經(jīng)過120日的培養(yǎng)后停止?jié)菜?，讓宿主植株自然干?然后將植株種植層去掉,利用濕篩傾析法來獲得下層基質(zhì)與中層基質(zhì)中的帶有連孢菌絲的叢枝菌根真菌孢子。