本發(fā)明涉及微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種利用新的微生物菌株，降解被多環(huán)芳烴污染土壤的方法。

背景技術(shù)：

多環(huán)芳烴(Polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)是一類廣泛分布于環(huán)境中的含有兩個(gè)苯環(huán)以上的有毒有害污染物，主要來(lái)源于人類活動(dòng)和能源利用過(guò)程。迄今為止，多環(huán)芳烴仍是數(shù)量最多的一類致癌物，在1000多種致癌物中，PAHs占1/3以上，美國(guó)環(huán)保局已把16種多環(huán)芳烴列入優(yōu)先控制的有毒有機(jī)污染物的黑名單中。石油、煤、木材等的燃燒過(guò)程和石油、石油化工的生產(chǎn)過(guò)程及海上石油開(kāi)發(fā)與石油運(yùn)輸中的溢油等均會(huì)造成環(huán)境中PAHs的污染，這些PAHs通過(guò)廢水灌溉、大氣降塵等多種途徑又進(jìn)一步導(dǎo)致對(duì)土壤的污染。其中，芘(Pyrene，PYR)為四環(huán)多環(huán)芳烴代表物，在土壤中占有較大的比重，具有遺傳毒性，屬于美國(guó)環(huán)保局優(yōu)先控制的多環(huán)芳烴之一。

通過(guò)廢水灌溉、大氣降塵等多種途徑PAHs進(jìn)入土壤，近100-150年來(lái)，由于化石燃料燃燒和工業(yè)的快速發(fā)展，土壤PAHs的濃度在不斷增加。我國(guó)沈撫灌區(qū)、天津污灌區(qū)、長(zhǎng)江三角洲地區(qū)、廣州市郊耕地土壤均有PAHs積累。土壤中的多環(huán)芳烴可以通過(guò)接觸直接進(jìn)入人體，或在一定條件下進(jìn)入大氣、水和生物等其他環(huán)境介質(zhì)，危及人類的健康。因此農(nóng)業(yè)環(huán)境中PAHs的去除是保障人體健康和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展必須解決的問(wèn)題。

生物修復(fù)具有經(jīng)濟(jì)性強(qiáng)、二次污染少，去除效率高等顯著優(yōu)點(diǎn)，是迄今為止處理烴類污染水體和土壤效果最好的一種方法，在解決PAHs污染問(wèn)題上具有廣闊的應(yīng)用前景?；谖覈?guó)土壤PAHs污染現(xiàn)狀和環(huán)保要求，低費(fèi)用、高效率的生物修復(fù)技術(shù)具有很強(qiáng)的工業(yè)可行性，將會(huì)產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。

生物修復(fù)技術(shù)最關(guān)鍵的是尋找具有修復(fù)功能的微生物，即篩選具有降解多環(huán)芳烴的菌株，這將有助于去除環(huán)境中PAHs污染，保障農(nóng)產(chǎn)品安全和人體健康，促進(jìn)我國(guó)經(jīng)濟(jì)和環(huán)境可持續(xù)發(fā)展進(jìn)程。多環(huán)芳烴的微生物降解難易程度取決于化學(xué)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和降解酶的適應(yīng)程度，不同的微生物對(duì)各類多環(huán)芳烴有不同的降解能力。一般說(shuō)來(lái)，PAHs降解性隨苯環(huán)數(shù)量增加而降低。目前，雖已篩選到許多對(duì)低環(huán)數(shù)PAHs的降解菌，如假單胞菌屬(Pseudomonas)、芽胞桿菌屬(Bacillus)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium)、黃桿菌屬(Flavobacteria)、氣單胞菌屬(Aeromonas)、微球桿菌屬(Micrococcus)、紅球菌屬(Rhodococcus)等細(xì)菌；毛霉菌(mucor sp.)、青霉菌(penicillium sp.)、鐮刀菌(fusarium sp.)等真菌；對(duì)于四環(huán)及四環(huán)以上PAHs降解菌有紅球菌(Rhodococcus sp.)、微動(dòng)假單胞菌(Pseudomonas paucimobilis)、惡臭假單孢菌(Pseudomonas putida)和脫氮產(chǎn)堿菌(Alcaligenes denitrificans)，這些菌株具有一定的降解四環(huán)及以上多環(huán)芳烴能力，但未見(jiàn)植生拉烏爾菌(Raoultella planticola)降解多環(huán)芳烴芘的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是，針對(duì)目前對(duì)四環(huán)和四環(huán)以上PAHs的降解菌株資源仍需發(fā)掘的實(shí)際情況，提供一種降解四環(huán)多環(huán)芳烴芘效能較高的新微生物菌株。其次，是提供一套將該菌株應(yīng)用于四環(huán)多環(huán)芳烴芘污染土壤的方法。

一方面，本發(fā)明提供一種保存在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC No.M 2016061的植生拉烏爾菌(Raoultella planticola)菌株在降解多環(huán)芳烴芘的用途。

另一方面，本發(fā)明提供一種篩選能夠降解多環(huán)芳烴芘的微生物的方法，該方法包括如下步驟：稱取少量土樣加入到100ml的篩選培養(yǎng)基中,逐漸提高芘濃度,培養(yǎng)21天后，取上清液均勻涂布于降解菌篩選固體培養(yǎng)基上(芘濃度為100mg/L)，將挑取長(zhǎng)勢(shì)旺盛的菌落，分離獲得4株可降解多環(huán)芳烴的菌株；經(jīng)進(jìn)一步復(fù)篩，最終得目標(biāo)菌株P(guān)L7。

本發(fā)明篩選得到的菌株P(guān)L7，利用Biolog(GENⅢ)自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)對(duì)菌株進(jìn)行了94種表型測(cè)試，經(jīng)Biolog讀數(shù)儀分析代謝指紋，菌株可較強(qiáng)利用1種碳源，對(duì)其他70種碳源不能利用或利用能力較弱；菌株對(duì)10種化學(xué)物質(zhì)敏感。

16S rDNA序列分析：以提取到的細(xì)胞總DNA為模板，利用引物:p16S-8:5'-aga gtt tga tcc tgg ctc ag-3'和p16S-1541:5'-aag gag gtg atc cag ccg ca-3'擴(kuò)增菌株的16S rDNA基因，將基因產(chǎn)物同T載體連接，經(jīng)測(cè)序確認(rèn)該片段實(shí)際長(zhǎng)度為1374bp，將該序列(已提交GenBank，GenBank登記號(hào)為KU668567)與GenBank中相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行相似性分析發(fā)現(xiàn)，該菌與植生拉烏爾菌(Raoultella planticola)的同源性最高(homology,99％/1374bps,based on 16S rDNA)。

經(jīng)上述Biolog(GENⅢ)自動(dòng)微生物鑒定結(jié)合分子鑒定，可確認(rèn)該菌株P(guān)L7為植生拉烏爾菌(Raoultella planticola)。

一種利用新菌株植生拉烏爾菌降解土壤中多環(huán)芳烴芘的方法，該方法按以下步驟進(jìn)行：

(1)培養(yǎng)基的配制：蔗糖0.5-8.0g，硫酸銨1.0-5.0g，磷酸二氫鉀1.0-8.0g，七水硫酸鎂0.1-1.0g，氯化鈉0.1-1.0g，酵母粉0.5-5.0g，碳酸鈣0.5-5.0g，用蒸餾水定容至1000mL，調(diào)整pH值4.0-8.0，經(jīng)滅菌后，備用；

(2)菌種的活化培養(yǎng)：采用步驟(1)培養(yǎng)基，將植生拉烏爾菌(Raoultella planticola) 新菌株P(guān)L7(CCTCC No.M 2016061)活化、培養(yǎng)后，得到菌液，備用；

(3)菌種發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟(2)菌液按體積5％接種量接入步驟(1)培養(yǎng)基中；在20℃-40℃，初始pH 4.0-8.0，振蕩條件下培養(yǎng)24h-72h，至菌體對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，進(jìn)行離心分離，得到菌體；

(4)土壤樣品接菌種與降解：將步驟(3)菌體與含多環(huán)芳烴芘的土壤樣品按重量5-50︰100的比例，混合，利用菌體降解4-10d；

(5)土壤樣品中芘含量的分析檢測(cè)：采用高效液相色譜方法對(duì)步驟(4)經(jīng)菌體降解后的土壤樣品進(jìn)行多環(huán)芳烴芘的含量進(jìn)行分析：土壤樣品10.00g加入40.00mL二氯甲烷，40℃以下超聲提取2h，離心，吸取上清液20.00mL入平底燒瓶，旋轉(zhuǎn)蒸干，用2.00mL環(huán)已烷溶解，吸取0.50mL上硅膠柱(2克硅膠，加入15mL正已烷，濕法裝柱)，用正已烷/二氯甲烷混合液(v/v＝1:1)洗脫，棄去第一組分1.00mL，收集第二組分2.00mL，用純氮吹干，乙腈定容，進(jìn)行高效液相色譜分析：色譜柱為PAH專用柱，流動(dòng)相為乙腈：水＝70：30，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量5.0μL，激發(fā)波長(zhǎng)為250nm、發(fā)射波長(zhǎng)為385nm下對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，芘的保留時(shí)間為10.3min，可測(cè)定出樣品中芘的含量,并計(jì)算出菌種對(duì)多環(huán)芳烴芘的降解率。

優(yōu)選的，所述的方法，其中所述培養(yǎng)基為：蔗糖5.0g，硫酸銨2.0g，磷酸二氫鉀8.0g，七水硫酸鎂1.0g，氯化鈉1.0g，酵母粉2.0g，碳酸鈣0.5g，用蒸餾水定容至1000mL，調(diào)整pH為7.0。

優(yōu)選的，所述的方法，其中所述培養(yǎng)條件為：溫度30℃，初始pH為7.0，在攪拌、通風(fēng)、振蕩條件下培養(yǎng)48h。

有益效果

一、本發(fā)明從微生物群中篩選得到可降解多環(huán)芳烴芘的植生拉烏爾菌PL7：CCTCC No.M 2016061，其在適合條件下，能有效降解多環(huán)芳烴芘。該株微生物具有降解多環(huán)芳烴芘的能力，可以用于土壤中多環(huán)芳烴的降解，該株微生物不屬于現(xiàn)己公開(kāi)用于多環(huán)芳烴降解的專利菌種的任何一種。

二、本發(fā)明將植生拉烏爾菌株P(guān)L7用于土壤中多環(huán)芳烴芘的降解實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，該菌可有效降解土壤中的多環(huán)芳烴芘，10天內(nèi)芘最高降解率達(dá)到68.3％(見(jiàn)實(shí)施例3、4、5、6)，因此該菌在降解土壤中多環(huán)芳烴芘的領(lǐng)域具有較廣泛的應(yīng)用前景。

生物樣品材料保藏說(shuō)明

植生拉烏爾菌(Raoultella planticola)菌株P(guān)L7已保存在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC No.M2016061，保藏日期為：2016年1月25日。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明分離的植生拉烏爾菌的16SrDNA基因序列圖。

具體實(shí)施方案

通過(guò)下面實(shí)施例旨在對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，而不是限制本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中采用的：

微生物：為植生拉烏爾菌(Raoultella planticola)PL7CCTCC No.M 2016061；

多環(huán)芳烴芘：美國(guó)SUPELCO公司，純度為92.2％

實(shí)施例1：(新菌株P(guān)L7的篩選)

本發(fā)明從浙江省杭州市某汽車修理站烴類化合物長(zhǎng)期污染的區(qū)域取土壤樣品1份，用于篩選菌種；篩選的具體方法是：稱取20g土樣加入到250ml的篩選培養(yǎng)基中(芘濃度為50mg/L)，30℃振蕩培養(yǎng)，每3天提高芘濃度(濃度為50mg/L)，培養(yǎng)10天后，取上清液稀釋處理后，取各梯度稀釋液100μL，均勻涂布于降解菌篩選固體培養(yǎng)基上(芘濃度為100mg/L)，30℃培養(yǎng)，2天后，將挑取長(zhǎng)勢(shì)旺盛的菌落，進(jìn)一步劃線分離純化，共分離獲得4株可降解多環(huán)芳烴的菌株；經(jīng)進(jìn)一步復(fù)篩，最終得目標(biāo)菌株P(guān)L7。將該4株菌株先分別按5％接種量投入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后，再向培養(yǎng)基中加入終濃度為100mg/L的多環(huán)芳烴芘，并繼續(xù)培養(yǎng)3天后，分別測(cè)定多環(huán)芳烴芘的降解率，從中篩選出降解能力最強(qiáng)的菌株P(guān)L7，作為進(jìn)一步研究的出發(fā)菌株；

所述篩選培養(yǎng)基為：硫酸銨1.0g，磷酸二氫鉀2.0g，七水硫酸鎂0.5g，氯化鈉0.1g，酵母粉0.5g，碳酸鈣0.5g，用蒸餾水定容至1000mL，調(diào)整pH為7.0。

所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：蔗糖8.0g，硫酸銨1.0g，磷酸二氫鉀2.0g，七水硫酸鎂0.5g，氯化鈉0.1g，酵母粉0.5g，碳酸鈣0.5g，用蒸餾水定容至1000mL，調(diào)整pH為7.0。

實(shí)施例2：(新菌株P(guān)L7的鑒定)

對(duì)實(shí)施例1篩選得到的菌株P(guān)L7進(jìn)行Biolog(GENⅢ)自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)表型測(cè)試，包括71種碳源利用情況檢測(cè)以及23種化學(xué)敏感性檢測(cè)：將菌株接種于特定的平板培養(yǎng)基，33℃恒溫培養(yǎng)2天，用無(wú)菌棉簽將平板上的菌體洗下，與接種液(IF-A)混合，制成菌懸液，用濁度計(jì)調(diào)整至98％T/IF-A。用8孔電動(dòng)加液器將菌懸液分別加在Biolog GENⅢ微孔鑒定板的各孔中，每孔100μL。將微孔鑒定板放在33℃培養(yǎng)箱中，分別在培養(yǎng)12h、24h、36h后將其置于Biolog讀數(shù)儀上讀取結(jié)果。經(jīng)Biolog讀數(shù)儀分析代謝指紋，菌株可較強(qiáng)利用1種碳源，對(duì)其他70種碳源不能利用或利用能力較弱；菌株對(duì)10種化學(xué)物質(zhì)敏感。Biolog鑒定結(jié)果如表1和表2所示。

按精編分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南方法提取菌株P(guān)L7染色體DNA，以提取到的細(xì)胞總DNA為模板，利用引物16S-8：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG和16S-1541:

表1.菌株對(duì)Biolog GENⅢ板上71種碳源的利用能力

Notes:+,positive；-,negative；B,borderline

AAGGAGGTGATCCAGCCGCA擴(kuò)增菌株的16SrDNA基因，將基因產(chǎn)物同T載體連接后，后委托上海桑尼對(duì)該菌16S rDNA擴(kuò)增及測(cè)序(SEQ NO.1)，得到該菌株的16S rDNA序列后，在NCBI網(wǎng)站上用BLAST檢索GenBank中相關(guān)菌株的16S rRNA基因序列，并進(jìn)行同源性比對(duì)?；谏砩卣骱?6S rDNA序列及系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析等方面的鑒定，確定菌株P(guān)L7為植生拉烏爾菌(Raoultella planticola)，此株菌已于2016年保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC No.M 2016061。

表2.菌株對(duì)Biolog GENⅢ板上23種化學(xué)物質(zhì)的化學(xué)敏感

Notes:+,positive；-,negative；B,borderline

實(shí)施例3：(利用菌株P(guān)L7降解土壤中多環(huán)芳烴芘的方法1)

按以下步驟進(jìn)行：

(1)培養(yǎng)基的配制：蔗糖5.0g，硫酸銨2.0g，磷酸二氫鉀8.0g，七水硫酸鎂1.0g，氯化鈉1.0g，酵母粉2.0g，碳酸鈣0.5g，用蒸餾水定容至1000mL，調(diào)整pH為7.0，經(jīng)滅菌后，備用；

(2)菌種的活化培養(yǎng)：采用步驟(1)培養(yǎng)基，將植生拉烏爾菌(Raoultella planticola)新菌株P(guān)L7CCTCC No.M 2016061活化、培養(yǎng)后，得到菌液，備用；

(3)菌種接種與發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟(2)菌液采用斜面接入步驟(1)培養(yǎng)基中，接種量為5％(v/v)，在30℃，180r/min培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)48h，離心分離獲得菌體；

(4)土壤樣品的接種與降解：將步驟(3)得到的菌體以重量10％的比例加入含有10mg/kg芘(多環(huán)芳烴芘)的土壤樣品中，利用菌體分解10d；另設(shè)含有10mg/kg芘的土壤樣品不接菌體為對(duì)照；

(5)土壤樣品中芘含量的分析檢測(cè)：土壤樣品中芘含量的分析檢測(cè)：土壤樣品10.00g加入40.00mL二氯甲烷，40℃以下超聲提取2h，離心，吸取上清液20.00mL入平底燒瓶，旋轉(zhuǎn)蒸干，用2.00mL環(huán)已烷溶解，吸取0.50mL上硅膠柱(2克硅膠，加入15mL正已烷，濕法裝柱)，用正已烷/二氯甲烷混合液(v/v＝1:1)洗脫，棄去第一組分1.00mL，收集第二組分2.00mL，用純氮吹干，乙腈定容，進(jìn)行高效液相色譜分析：色譜柱為PAH專用柱，流動(dòng)相為乙腈：水＝70：30，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量5.0μL，激發(fā)波長(zhǎng)為250nm、發(fā)射波長(zhǎng)為385nm下對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，芘的保留時(shí)間為10.3min。經(jīng)測(cè)定對(duì)照土壤樣品中芘含量為9.85mg/kg，接種土壤樣品中芘殘留量為3.12mg/kg，按菌種降解率(％)＝(未接種的土壤芘含量-接種土壤芘含量)/未接種的土壤芘含量*100的公式計(jì)算，經(jīng)計(jì)算，確定菌種對(duì)芘降解率為68.3％。

實(shí)施例4：(利用菌株P(guān)L7降解土壤中多環(huán)芳烴芘的方法2)

(1)、培養(yǎng)基的配制：蔗糖1.0g，硫酸銨5.0g，磷酸二氫鉀1.0g，七水硫酸鎂0.1g，氯化鈉0.5g，酵母粉5.0g，碳酸鈣5.0g，用蒸餾水定容至1000mL，調(diào)整pH為8.0，經(jīng)滅菌后，備用；

(2)、菌種的活化培養(yǎng)：同實(shí)施例3；

(3)、菌種接種與發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟(2)菌液采用斜面接入步驟(1)培養(yǎng)基中，接種量為5％(v/v)，在35℃，180r/min培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)24h，離心分離獲得菌體；

(4)、土壤樣品的接種與降解：將步驟(3)得到的菌體以重量20％的比例加入含有10mg/kg芘(多環(huán)芳烴芘)的土壤樣品中，利用菌體分解5d；另設(shè)含有10mg/kg芘的土壤樣品不接菌體為對(duì)照；

(5)、土壤樣品中芘含量的分析檢測(cè)：測(cè)定方法同實(shí)施例3；經(jīng)測(cè)定對(duì)照土壤樣品中芘含量為9.82mg/kg，接菌種土壤樣品中芘殘留量為4.65mg/kg，按菌種降解率(％)＝(未接種的土壤芘含量-接種土壤芘含量)/未接種的土壤芘含量*100的公式計(jì)算，經(jīng)計(jì)算，確定菌種對(duì)芘降解率為55.9％。

實(shí)施例5：(利用菌株P(guān)L7降解土壤中多環(huán)芳烴芘的方法3)

(1)、培養(yǎng)基的配制：蔗糖8.0g，硫酸銨1.0g，磷酸二氫鉀2.0g，七水硫酸鎂0.5g，氯化鈉0.1g，酵母粉0.5g，碳酸鈣0.5g，用蒸餾水定容至1000mL，調(diào)整pH為7.0，經(jīng)滅菌后，備用；

(2)、菌種的活化培養(yǎng)：同實(shí)施例3；

(3)、菌種的發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟(2)菌液按5％接種量(v/v)接入步驟(1)培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)條件25℃，在180r/min下培養(yǎng)72h，至菌體對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，進(jìn)行離心分離，得到菌體；

(4)、土壤樣品接菌種與降解：將步驟(3)得到的菌體按重量5％的比例加入含有10mg/kg芘的土壤樣品中，利用菌體分解3d；另設(shè)含有10mg/kg芘的土壤樣品不接菌體為對(duì)照；

(5)、測(cè)定方法同實(shí)施例3；經(jīng)測(cè)定對(duì)照土壤樣品中芘含量為9.25mg/kg，接種土壤樣品中芘殘留量為5.15mg/kg，按菌種降解率(％)＝(未接種的土壤芘含量-接種土壤芘含量)/未接種的土壤芘含量*100的公式計(jì)算，該菌種對(duì)芘的降解率為44.4％。

實(shí)施例6：(菌株P(guān)L7對(duì)多環(huán)芳烴芘底物濃度為20mg/L降解效果的測(cè)定)

(1)、培養(yǎng)基的配制：培養(yǎng)基配方為：蔗糖5.0g，硫酸銨2.0g，磷酸二氫鉀8.0g，七水硫酸鎂1.0g，氯化鈉1.0g，酵母粉2.0g，碳酸鈣0.5g，用蒸餾水定容至1000mL，調(diào)整pH為7.0，滅菌冷卻至室溫后，備用；

(2)、菌種的活化培養(yǎng)：取100mL上述培養(yǎng)基，平均分裝在2個(gè)250ml三角瓶中，滅菌；分別接入斜面菌種CCTCC No.M 2016061，培養(yǎng)菌體，搖床轉(zhuǎn)速180r/min，在35℃搖床培養(yǎng)24h作為種子液，備用；

(3)、菌種發(fā)酵培養(yǎng)與多環(huán)芳烴芘降解：取步驟(1)培養(yǎng)基，平均分裝入250mL搖瓶中，每瓶裝入培養(yǎng)液50mL，滅菌；接入步驟(2)種子液，接種量為2.0％(v/v)，進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30℃，搖床轉(zhuǎn)速180r/min；培養(yǎng)2d后，向培養(yǎng)基中添加芘終濃度為20mg/L，繼續(xù)培養(yǎng)4d；另設(shè)含有20mg/L芘的發(fā)酵液不接菌體為對(duì)照；

(4)、發(fā)酵液中多環(huán)芳烴芘濃度的測(cè)定：從步驟(3)搖瓶中分別取20mL發(fā)酵液按以下方法進(jìn)行測(cè)定：12000rpm，離心10min去除細(xì)胞，吸取上清液10.00mL入分液漏斗中，用二氯甲烷30、20和20ml分三次萃取，萃取液合并于平地?zé)恐校?0℃濃縮近干、乙腈定容5ml，再稀釋10倍后進(jìn)行高效液相色譜分析：色譜柱為PAH專用柱，流動(dòng)相為乙腈：水＝70：30，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量5.0μL，激發(fā)波長(zhǎng)為250nm、發(fā)射波長(zhǎng)為385nm下對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，芘的保留時(shí)間為10.3min，測(cè)定液體中芘的濃度，按菌種降解率(％)＝(未接種的土壤芘含量-接種土壤芘含量)/未接種的土壤芘含量*100的公式計(jì)算，經(jīng)測(cè)定未接種發(fā)酵液中芘含量為19.25mg/L，接種發(fā)酵液中芘殘留量為9.01mg/L，經(jīng)計(jì)算，確定菌種對(duì)芘降解率為53.2％。

<110> OrganizationName : 浙江科技學(xué)院

<120> Title : 一種植生拉烏爾菌以及利用該菌降解土壤中芘的方法

<213> OrganismName : 植生拉烏爾菌(Raoultella planticola）

<400> PreSequenceString :

ctcgggtgac gagcggcgga cgggtgagta atgtctggga aactgcctga tggaggggga 60

taactactgg aaacggtagc taataccgca taacgtcgca agaccaaagt gggggacctt 120

cgggcctcat gccatcagat gtgcccagat gggattagct agtaggtggg gtaatggctc 180

acctaggcga cgatccctag ctggtctgag aggatgacca gccacactgg aactgagaca 240

cggtccagac tcctacggga ggcagcagtg gggaatattg cacaatgggc gcaagcctga 300

tgcagccatg ccgcgtgtat gaagaaggcc ttcgggttgt aaagtacttt cagcgaggag 360

gaaggcatta aggttaataa ccttagtgat tgacgttact cgcagaagaa gcaccggcta 420

actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga gggtgcaagc gttaatcgga attactgggc 480

gtaaagcgca cgcaggcggt ctgttaagtc agatgtgaaa tccccgggct caacctggga 540

actgcatttg aaactggcag gcttgagtct tgtagagggg ggtagaattc caggtgtagc 600

ggtgaaatgc gtagagatct ggaggaatac cggtggcgaa ggcggccccc tggacaaaga 660

ctgacgctca ggtgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg 720

ctgtaaacga tgtcgacttg gaggttgttc ccttgaggag tggcttccgg agctaacgcg 780

ttaagtcgac cgcctgggga gtacggccgc aaggttaaaa ctcaaatgaa ttgacggggg 840

cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgatgcaa cgcgaagaac cttacctact 900

cttgacatcc agagaactta gcagagatgc tttggtgcct tcgggaactc tgagacaggt 960

gctgcatggc tgtcgtcagc tcgtgttgtg aaatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc 1020

aacccttatc ctttgttgcc agcgattcgg tcgggaactc aaaggagact gccagtgata 1080

aactggagga aggtggggat gacgtcaagt catcatggcc cttacgagta gggctacaca 1140

cgtgctacaa tggcatatac aaagagaagc gacctcgcga gagcaagcgg acctcataaa 1200

gtatgtcgta gtccggattg gagtctgcaa ctcgactcca tgaagtcgga atcgctagta 1260

atcgtagatc agaatgctac ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac 1320

accatgggag tgggttgcaa aagaagtagg tagcttaacc ttcgggaggg cgct 1374