本發(fā)明涉及一種生物寡肽序列，具體是一種用于診斷NMO患者血液中NMO-IgG種類的寡肽序列。

背景技術(shù)：

視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(NMOSDs)是一種嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，在東亞地區(qū)發(fā)病率遠(yuǎn)高于歐美(1-3)。絕大多數(shù)NMOSD患者血液中能夠檢測到水通道蛋白4(AQP4)的自身抗體(一大類NMO-IgG)，這已經(jīng)成為診斷該疾病的重要標(biāo)志物。雖然AQP4自身抗體產(chǎn)生的原因尚不清楚，但其致病機(jī)制卻已經(jīng)基本明了：該自身抗體穿越血腦屏障后攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞，通過特異性的細(xì)胞毒性作用導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡，繼而引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生脫髓鞘病變(4-6)。在NMOSDs 2015年的診斷標(biāo)準(zhǔn)中已將AQP4自身抗體陽性列為其中一項(xiàng)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，AQP4主要分布在星形膠質(zhì)細(xì)胞的終足上。作為一種膜蛋白，AQP4在細(xì)胞膜外具有3個環(huán)狀結(jié)構(gòu)(Loop)：LoopA、LoopC和LoopE。相比AQP4蛋白位于細(xì)胞膜內(nèi)的其他結(jié)構(gòu)，上訴三種位于細(xì)胞膜外的環(huán)狀結(jié)構(gòu)更容易成為患者體液中AQP4自身抗體的攻擊靶點(diǎn)。根據(jù)在NMO動物模型上的研究發(fā)現(xiàn)，患者血清中針對這三種不同環(huán)狀結(jié)構(gòu)的AQP4自身抗體的細(xì)胞毒性也不同。假如能夠及時區(qū)分AQP4自身抗體陽性的NMO患者體液中所含有的AQP4自身抗體類型，就能夠方便醫(yī)生對癥下藥，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療。

當(dāng)前，對AQP4自身抗體陽性的NMOSD患者的診斷方法主要通過Elisa法和CBA法。這兩種方法檢測的AQP4自身抗體是針對所有種類的AQP4自身抗體，對AQP4自身抗體特定種類則完全沒有區(qū)分度。

目前臨床上存在一個問題，為什么有一些患者血清中AQP4自身抗體濃度很高，但是患者的癥狀卻相對較輕。分析NMO動物模型的行為學(xué)評分及組織學(xué)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，針對細(xì)胞膜外3中Loop的特定AQP4自身抗體的細(xì)胞毒性存在差異，其中針對LoopA和LoopC的特定AQP4自身抗體細(xì)胞毒性較強(qiáng)，針對LoopE的特定AQP4自身抗體細(xì)胞毒性較弱。這就為這個臨床問題提供了一種可能的答案。因此針對LoopE的AQP4自身抗體可作為一種病情較輕的NMO亞型的輔助性診斷標(biāo)志物。及早診斷出患者體內(nèi)特定AQP4自身抗體的類型能夠指導(dǎo)臨床用藥，減輕患者用藥后的副作用，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療的理念。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種用于診斷NMO患者血液中NMO-IgG種類的寡肽序列，該寡肽能夠與相應(yīng)的NMO-IgG結(jié)合，進(jìn)而通過后續(xù)的顯色反應(yīng)檢測出NMO患者血液中該種NMO-IgG的濃度，從而幫助醫(yī)生進(jìn)行診斷，制定后續(xù)治療計劃及預(yù)后判斷，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種用于診斷NMO患者血液中NMO-IgG種類的寡肽序列，寡肽名為LoopE寡肽，氨基酸序列從N端到C端依次為INYTGASMNPARSFGPAVIMGNWENHW。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述氨基酸序列的設(shè)計依據(jù)的是水通道蛋白AQP4位于細(xì)胞膜外的一個環(huán)狀結(jié)構(gòu)，由于所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)位于細(xì)胞膜外，在NMOSD中，所述氨基酸序列為AQP4自身抗體的攻擊靶點(diǎn)之一。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述LoopE寡肽能特異性地與NMO患者體液中相應(yīng)的AQP4自身抗體相結(jié)合，通過后續(xù)的顯色反應(yīng)，用于診斷NMO患者體內(nèi)相應(yīng)AQP4自身抗體的濃度。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的LoopE寡肽能夠與特定的NMO-IgG(特定的AQP4自身抗體)相結(jié)合，進(jìn)而通過后續(xù)的顯色反應(yīng)判斷出NMO患者血液中是否含有該種特定的NMO-IgG，從而幫助醫(yī)生進(jìn)行診斷，制定后續(xù)治療計劃及預(yù)后判斷。

附圖說明

圖1為運(yùn)用寡肽LoopA后造模的大鼠運(yùn)動功能評分曲線示意圖。

圖2為運(yùn)用寡肽LoopC后造模的大鼠運(yùn)動功能評分曲線示意圖。。

圖3為運(yùn)用本發(fā)明的LoopE寡肽后造模的大鼠運(yùn)動功能評分曲線示意圖。

圖4為運(yùn)用本發(fā)明的LoopE寡肽后造模的大鼠脊髓免疫熒光實(shí)驗(yàn)一圖。

圖5為運(yùn)用本發(fā)明的LoopE寡肽后造模的大鼠脊髓免疫熒光實(shí)驗(yàn)二圖。

圖6為運(yùn)用本發(fā)明的LoopE寡肽后造模的大鼠脊髓免疫熒光實(shí)驗(yàn)三圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明實(shí)施例中，一種用于診斷NMO患者血液中NMO-IgG種類的寡肽序列，多肽名為LoopE，氨基酸序列從N端到C端依次為INYTGASMNPARSFGPAVIMGNWENHW，所述氨基酸序列的設(shè)計依據(jù)的是水通道蛋白AQP4位于細(xì)胞膜外的一個環(huán)狀結(jié)構(gòu)，由于該結(jié)構(gòu)位于細(xì)胞膜外，在NMOSD中，該序列為AQP4自身抗體的攻擊靶點(diǎn)之一，本發(fā)明依據(jù)該環(huán)狀結(jié)構(gòu)的氨基酸序列設(shè)計了LoopE寡肽，能夠特異性地被NMO患者體液中的特定的AQP4自身抗體識別并結(jié)合。

請參閱圖1～3，分別用LoopA、LoopC和LoopE寡肽中和NMOSD患者血清后再造NMO動物模型，Lewis大鼠的癥狀從行為學(xué)上看是各自不同的，這表明NMO患者血清中針對不同Loop的特定AQP4自身抗體的細(xì)胞毒性是不同的。

對比圖1～3三幅NMO大鼠模型行為學(xué)評分可看出，針對LoopE的AQP4自身抗體細(xì)胞毒性最弱，這可能解釋了為什么通過Elisa法、CBA法在有一些患者的體液中檢測出很高的AQP4自身抗體濃度，但是患者的疾病癥狀卻較輕。因此在疾病的初期，通過精準(zhǔn)的診斷判斷出患者血清中AQP4自身抗體的特定類型能夠幫助臨床制定更好的治療方案及作出預(yù)后判斷。

請參閱圖4～6，免疫熒光實(shí)驗(yàn)表明，用LoopE中和NMOSD患者血清后造模組(LoopE處理組)在右側(cè)，相比左側(cè)正常造模組，AQP4、GFAP、MBP、CD45、Ly6的表達(dá)沒有顯著差異，這些均表明針對LoopE的AQP4自身抗體的細(xì)胞毒性較弱，可能并不是患者體內(nèi)導(dǎo)致NMO疾病癥狀的關(guān)鍵自身抗體，AQP4在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中絕大多數(shù)分布在星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞的終足上，GFAP是星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白，MBP是成熟髓鞘的標(biāo)志蛋白，CD45和Ly6是白細(xì)胞的標(biāo)志蛋白。假如臨床能夠及早檢出患者體內(nèi)致病自身抗體的特定種類就能夠?qū)ΠY下藥，減輕藥物副作用的痛苦，節(jié)約開支，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療。

實(shí)施例1

將LoopE固定于一定介質(zhì)上，先對該介質(zhì)進(jìn)行封閉處理，隨后將患者體液通過該介質(zhì)，并孵育一段時間，隨后通過多次洗滌將未結(jié)合的自身抗體去除，后加入結(jié)合過氧化物酶的抗人二抗進(jìn)行再孵育，再加入顯色用酶底物，假如患者體液中含有針對LoopE的AQP4自身抗體，即可以在介質(zhì)上顯色。通過這個方法可以實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的診斷，判斷出患者血清中AQP4自身抗體的特定類型，幫助臨床制定更好的治療方案及作出預(yù)后。

本發(fā)明涉及的寡肽能夠特異性地與患者體液中針對細(xì)胞外特定Loop序列的AQP4自身抗體結(jié)合，通過多次洗滌將不結(jié)合該寡肽自身抗體洗去，加入抗人二抗并顯色，就能夠判斷出該患者體液中是否含有該種特定的AQP4自身抗體，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)診斷，進(jìn)而才能實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療的目的。

對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應(yīng)將權(quán)利要求中的任何附圖標(biāo)記視為限制所涉及的權(quán)利要求。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個實(shí)施方式僅包含一個獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。