本發(fā)明涉及一種視黃酸類化合物、其制備方法、中間體及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

他扎羅汀(tazarotene)是一種具有rar亞型選擇性的視黃醇類藥物(jamacaddermatol.1997,37,s12.)，主要用于皮膚局部上皮增生(銀屑病、牛皮癬、痤瘡等)的治療。tazarotene是以乙酯的前藥形式存在。該藥物進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)酶代謝得到羧基型活性代謝產(chǎn)物tazarotenicacid，可以高選擇性地與rarβ和rarγ受體作用，對rarβ也有一定作用，但對rxr作用微弱。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的問題是為了克服他扎羅汀對腫瘤細(xì)胞抑制率較差等缺陷，而提供了一種視黃酸類化合物、其制備方法、中間體及應(yīng)用，該化合物對腫瘤細(xì)胞的抑制率較佳。

本發(fā)明提供了一種如式i所示的化合物、其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，

其中，u為cr^9a或n；v為cr^9b或n；x為cr^9c或n；w為cr^9d或n；

所述的u、v、x和w中，r^9a、r^9b、r^9c和r^9d各自獨立地為氫、羥基、硝基、氰基、鹵素(例如氟、氯、溴或碘)、c1-c6的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基)、鹵素取代的c1-c6的烷基(所述的鹵素可為氟、氯、溴或碘；所述的c1-c6的烷基可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基；所述的“鹵素取代的c1-c6的烷基”例如三氟甲基)、c1-c6烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)、-nr¹⁰r¹¹、或-coor¹⁴；

所述的r¹⁰、r¹¹、r¹²、r¹³和r¹⁴獨立地為氫或c1-c6的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基)；

ae、eg和gz之間獨立地為單鍵或雙鍵；當(dāng)a、e、g或z與兩個單鍵連接時，相應(yīng)的a、e、g和z獨立地為：-(cr²r³)-、-c(＝o)-、-(nr⁴)-、-(n→o)-、-o-、-s-、-s(＝o)-或-so2-；當(dāng)a、e、g或z與一個單鍵和一個雙鍵連接時，相應(yīng)的a、e、g和z獨立地為：-(cr⁵)＝或-n＝；

所述的r²、r³、r⁴和r⁵獨立地為氫、羥基、鹵素(例如氟、氯、溴或碘)、c1-c6的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或基)、c2-c6的烯基(例如乙烯基或丙烯基)、鹵素取代的c1-c6的烷基(所述的鹵素可為氟、氯、溴或碘；所述的c1-c6的烷基可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基；所述的“鹵素取代的c1-c6的烷基”例如三氟甲基)、c1-c6的烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)、c1-c6的?；?例如乙?；蚣柞；?、c6-c10的芳基(例如苯基)或“雜原子為氧、硫或氮原子，雜原子數(shù)為1～2個的c3-c6的雜芳基”(例如吡啶基或嘧啶基)；

m為0、1、2或3；

當(dāng)有多個r¹取代時，取代基相同或者不同；r¹為氫、羥基、硝基、氰基、鹵素(例如氟、氯、溴或碘)、c1-c6的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基)、鹵素取代的c1-c6的烷基(所述的鹵素可為氟、氯、溴或碘；所述的c1-c6的烷基可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基；所述的“鹵素取代的c1-c6的烷基”例如三氟甲基)、c1-c6烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)、-nr⁶r⁷或-coor⁸；

所述的r⁶、r⁷和r⁸獨立地為氫或c1-c6的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基)；

y為-cn、-coor¹⁵或-co2nhr¹⁶；

所述的r¹⁵和r¹⁶獨立地為氫、c1-c6的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基)、c2-c6的烯基(例如乙烯基或丙烯基)或c1-c6的?；?例如甲?；蛞阴；?；

所述的化合物i不為

較佳地，所述的a、e、g和z可連接成如下所示的環(huán)：r²、r³和r⁵的定義同前所述。

較佳地，所述的化合物i中，所述的u、v、x和w中至少一個(例如1個、2個、3個或4個)為n。

更佳地，所述的化合物i中，當(dāng)所述的u、v、x和w中有兩個為n時，所述的化合物i可為下述任一化合物：

其中，a、e、g、z、r¹、m、y、r^9a、r^9b、r^9c和r^9d的定義同前所述。

較佳地，所述的化合物a中，當(dāng)y為-coor¹⁵時，所述的r¹⁵為氫或乙基。

較佳地，所述的化合物a中，所述的z為-(cr²r³)-、-s-、-s(＝o)-或-so2-；更佳地，所述的a、e、g和z連接成如下所示的環(huán)：r²和r³的定義同前所述。

更佳地，所述的化合物a中，當(dāng)所述的y為cooh時，所述的z為-s-。

更佳地，所述的化合物a中，當(dāng)所述的y為cooet時，所述的z為-(cr²r³)-、-s(＝o)-或-so2-。

較佳地，所述的化合物b中，當(dāng)所述的y為-coor¹⁵時，所述的r¹⁵為甲基或乙基。

較佳地，所述的化合物b中，所述的z為-(cr²r³)-、-s-或-s(＝o)-；更佳地，所述的a、e、g和z連接成如下所示的環(huán)：r²和r³的定義同前所述。

更佳地，所述的化合物b中，當(dāng)所述的y為coome時，所述的z為-(cr²r³)-，r²和r³的定義同前所述。

更佳地，所述的化合物b中，當(dāng)所述的y為cooet時，所述的z為-(cr²r³)-或-s-，r²和r³的定義同前所述。

更佳地，所述的化合物b中，當(dāng)所述的y為cn時，所述的z為-(cr²r³)-、-s-或-s(＝o)-，r²和r³的定義同前所述。

較佳地，所述的化合物c中，當(dāng)所述的y為-coor¹⁵時，所述的r¹⁵為氫或乙基。

較佳地，所述的化合物c中，所述的z為-(cr²r³)-、-s-或-s(＝o)-；更佳地，所述的a、e、g和z連接成如下所示的環(huán)：r²和r³的定義同前所述。

更佳地，當(dāng)所述的化合物c中，當(dāng)所述的y為cooh時，所述的z為-s-。

更佳地，當(dāng)所述的化合物c中，當(dāng)所述的y為cooet時，所述的z為-(cr²r³)-、-s-或-s(＝o)-，r²和r³的定義同前所述。

較佳地，所述的化合物i中，當(dāng)所述的u、v、x和w中有一個為n時，所述的化合物i可為下述任一化合物：

其中，a、e、g、z、r¹、m、y、r^9a、r^9b、r^9c和r^9d的定義同前所述。

較佳地，所述的化合物d中，當(dāng)所述的y為-coor¹⁵時，所述的r¹⁵為氫或乙基。

較佳地，所述的化合物d中，所述的z為-(cr²r³)-；更佳地，所述的a、e、g和z連接成如下所示的環(huán)：r²和r³的定義同前所述。

較佳地，所述的化合物e中，所述的y為cn。

較佳地，所述的化合物e中，所述的z為-(cr²r³)-；更佳地，所述的a、e、g和z連接成如下所示的環(huán)：r²和r³的定義同前所述。

較佳地，所述的化合物i中，當(dāng)所述的u為cr^9a、v為cr^9b、x為cr^9c、和w為cr^9d時，其結(jié)構(gòu)如化合物f所示：

其中，a、e、g、z、r¹、m、y、r^9a、r^9b、r^9c和r^9d的定義同前所述。

較佳地，所述的化合物f中，所述的r^9a、r^9b、r^9c和r^9d中至少一個(例如1個、2個、3個或4個)不為氫。

較佳地，所述的化合物f中，當(dāng)所述的y為-coor¹⁵時，所述的r¹⁵為氫、甲基或乙基。

較佳地，所述的化合物f中，所述的z為-(cr²r³)-、-s-、-s(＝o)-或-so2-；更佳地，所述的a、e、g和z連接成如下所示的環(huán)：r²、r³和r⁵的定義同前所述。

更佳地，所述的化合物i為下述任一化合物：

本發(fā)明還提供了如式i所示的化合物的制備方法，其包括下述步驟：將化合物ii和iii進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到化合物i即可；

其中，x¹為鹵素(例如氟、氯、溴或碘)。

在所述的化合物i的制備方法中，所述的偶聯(lián)反應(yīng)的條件可為本領(lǐng)域該類偶聯(lián)反應(yīng)常規(guī)的條件，本發(fā)明特別優(yōu)選下述條件：在保護(hù)氣體(例如氬氣)的保護(hù)下，在有機(jī)溶劑(例如dmf)中，在催化劑(例如pd/cu催化劑；所述的“pd/cu催化劑”例如pd(pph3)2cl2和cui)和堿(例如二異丙基胺或三乙胺)存在的條件下，將化合物ii和iii進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到化合物i即可。

所述的化合物i可進(jìn)一步進(jìn)行靈活的官能團(tuán)轉(zhuǎn)化和調(diào)整(包括但不限于酯化、酯基水解、還原、?；?、氧化等化學(xué)操作)，以得到官能團(tuán)不同的化合物i。

較佳地，所述的化合物i的制備方法還可進(jìn)一步包括下述步驟：將化合物iv進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)，得到所述的化合物iii即可；

在所述的化合物iii的制備方法中，所述的脫保護(hù)反應(yīng)的條件可為本領(lǐng)域該類脫保護(hù)反應(yīng)常規(guī)的條件，本發(fā)明特別優(yōu)選下述條件：在有機(jī)溶劑(例如四氫呋喃)中，在堿(例如四正丁基氟化銨)存在的條件下，將化合物iv進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)，得到化合物iii即可。

較佳地，所述的化合物i的制備方法還可進(jìn)一步包括下述步驟：將化合物v和三甲基乙炔基硅烷進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到所述的化合物iv即可；

其中，x²為鹵素(例如溴或碘)。

在所述的化合物i的制備方法中，所述的偶聯(lián)反應(yīng)的條件可為本領(lǐng)域該類偶聯(lián)反應(yīng)常規(guī)的條件，本發(fā)明特別優(yōu)選下述條件：在保護(hù)氣體(例如氬氣)的保護(hù)下，在有機(jī)溶劑(例如dmf)中，在催化劑(例如pd/cu催化劑；所述的“pd/cu催化劑”例如pd(pph3)2cl2和cui)和堿(例如二異丙基胺或三乙胺)存在的條件下，將化合物和三甲基乙炔基硅烷進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到化合物iv即可。

本發(fā)明還提供了如式ii、iii、iv或v所示的化合物，

其中，a、e、g、z、r¹、m、x¹、y、u、v、x和w的定義均如上所述。

本發(fā)明還提供了如式i所示的化合物、其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物用于治療原發(fā)腫瘤。所述的腫瘤包括但不限于黑色素瘤、食道癌、胃癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、腎癌、膽管癌、乳腺癌或前列腺癌。

本發(fā)明還提供了如式i所示的化合物、其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物用于預(yù)防和/或治療轉(zhuǎn)移腫瘤。所述的腫瘤包括但不限于黑色素瘤、食道癌、胃癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、腎癌、膽管癌、乳腺癌、前列腺癌。

本發(fā)明還提供了如式i所示的化合物、其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物用于預(yù)防和/或治療、白血病和/或淋巴癌。

本發(fā)明還提供了如式i所示的化合物、其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物用于動物胎兒發(fā)育、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、視覺、形態(tài)發(fā)生、皮膚老化和控制細(xì)胞分化中的一種或多種。

本發(fā)明還提供了如式i所示的化合物、其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物用于治療銀屑病。

本發(fā)明還提供了如式i所示的化合物、其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物用于治療痤瘡。

本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包含如式i所示的化合物、其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽及可藥用載體。

所述的藥物組合物可以通過口服、注射、局部給藥。所述的藥物組合物通過口服途徑給藥，所述組合物可以但不限于以下形式:片劑、膠囊、混懸劑、溶液劑、乳劑、微球或納米球混懸劑、或控釋性脂囊泡或聚合物囊泡。通過注射給藥，組合物可以為用于輸注或注射的溶液劑或混懸劑。通常，本發(fā)明化合物每天的給藥劑量為約0.01mg/kg-100mg/kg體重，分為1-3劑給予。本發(fā)明化合物系統(tǒng)性使用的濃度通常為相對于組合物重量的0.01％-10％(重量)、優(yōu)選0.01％-1％(重量)。經(jīng)由局部途徑給藥，所述的藥用組合物特別用于治療皮膚和粘膜疾病，并且可以為液體、糊狀或固體形式，特別為軟膏、乳膏、溶液劑、凝膠、噴霧劑、混懸劑、粘貼劑形式。還可以為微球或納米球混懸劑、或者控釋性脂囊泡或聚合物囊泡或者膠凝型或聚合物型貼劑。局部應(yīng)用的化合物的濃度通常是相對于組合物總重量的0.001％-10％(重量)、優(yōu)選0.01％-1％(重量)。

所述的藥用組合物還可以包含惰性添加劑，或者與藥用組合物正相關(guān)的藥效活性成分，或者這些成分的混合物。當(dāng)然，本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員會小心選擇將加入上述組合物中的任選化合物，使得本質(zhì)上屬于本發(fā)明的優(yōu)點不會或者基本不會受到預(yù)定的添加物的負(fù)面影響。

本申請中，所述的“c1-c6的酰基”是指含有1～6個碳原子的烷基?；绾?個碳原子的?；竓c(o)-(即甲酰基)，含2個碳原子的酰基是ch3c(o)-(即乙?；?；還可包括丙酰基、丁?；蛭祯；?/p>

本發(fā)明中，除非另有說明，在本發(fā)明說明書和權(quán)利要求書中出現(xiàn)的以下術(shù)語具有下述含義：

術(shù)語“烷基”是指具有一個到二十個碳原子的飽和的直鏈或支鏈的一價烴基。烷基的實例包括但不僅限于甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丁基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、1-庚基、1-辛基。

術(shù)語“烯基”是指含有指定數(shù)目碳原子和至少一個碳碳雙鍵的直鏈、支鏈或者環(huán)狀非芳香烴基。優(yōu)選存在一個碳碳雙鍵，并且可以存在高達(dá)四個非芳香碳碳雙鍵。由此，“c2～c12烯基”是指具有2～12個碳原子的烯基?！癱2～c6烯基”是指具有2～6個碳原子的烯基，包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基和環(huán)己烯基。

術(shù)語“芳基”(包括單獨使用及包含在其它基團(tuán)中時)是指任何穩(wěn)定的在各環(huán)中可高達(dá)7個原子的單環(huán)或者雙環(huán)碳環(huán)，其中至少一個環(huán)是芳香環(huán)。上述芳基單元的實例包括苯基、萘基、四氫萘基、2,3-二氫化茚基、聯(lián)苯基、菲基、蒽基或者苊基(acenaphthyl)?？梢岳斫猓诜蓟〈嵌h(huán)取代基，且其中一個環(huán)是非芳香環(huán)的情況中，連接是通過芳環(huán)進(jìn)行的。

術(shù)語“芳雜基”或“雜芳基”(包括單獨使用及包含在其它基團(tuán)中時)表示各環(huán)中可高達(dá)7個原子的穩(wěn)定單環(huán)或者二環(huán)，其中至少一個環(huán)是芳香環(huán)并且含有1-4個選自o、n、和s的雜原子。在此定義范圍內(nèi)的雜芳基包括但不限于：吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹喔啉基、吡唑基、吲哚基、苯并三唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、噁唑基、異噁唑基、吲哚基、吡嗪基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、四氫喹啉?！半s芳基”還應(yīng)當(dāng)理解為包括任何含氮雜芳基的n-氧化物衍生物。在其中雜芳基取代基是二環(huán)取代基并且一個環(huán)是非芳香環(huán)或者不包含雜原子的情況下，可以理解，連接分別通過芳環(huán)或者通過在環(huán)上的雜原子進(jìn)行。

術(shù)語“鹵素”包括f、cl、br、i。

術(shù)語“可藥用鹽”指常規(guī)的酸加成鹽或堿加成鹽，其保留化合物i的生物有效性和性質(zhì)，其由適宜的非毒性有機(jī)或無機(jī)酸、或有機(jī)或無機(jī)堿形成。酸加成鹽的例子包括衍生自無機(jī)酸和衍生自有機(jī)酸的那些鹽，所述無機(jī)酸例如氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨基磺酸、亞磷酸、硫磷酸、磷酸和硝酸，所述有機(jī)酸例如甲酸、乙酸、丙酸、對-甲苯磺酸、水楊酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、檸檬酸、馬來酸、乳酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、杏仁酸、蘋果酸、樟腦磺酸等。堿加成鹽的例子包括衍生自銨、鉀、鈉、鈣和季銨氫氧化物(例如氫氧化四甲銨)的鹽。將藥用化合物(即藥物)化學(xué)改性成鹽是藥劑師公知的技術(shù)，用以獲得改善的化合物的物理和化學(xué)穩(wěn)定性、吸濕性、流動性和溶解性。

術(shù)語“可藥用的載體”中的“可藥用”是指對于特定化合物的給藥對象是可藥用的和基本上無毒的。

在不違背本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。

本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：本申請的化合物對腫瘤細(xì)胞的抑制率較佳。

附圖說明

圖1：wyc-103誘導(dǎo)黑色素瘤b16-f1trc細(xì)胞分化與凋亡作用研究

圖2：wyc-209誘導(dǎo)黑色素瘤b16-f1trc細(xì)胞分化與凋亡作用研究

圖3：wyc-209針對肺癌a549腫瘤再生細(xì)胞抑制作用研究，其中，圖3a表示在第0天用wyc-209處理肺癌a549的抑制作用；圖3b表示在第3天用wyc-209處理肺癌a549的抑制作用。

圖4：wyc-209針對乳腺癌mcf-7腫瘤再生細(xì)胞抑制作用研究，其中，圖4a表示在第0天用wyc-209處理乳腺癌mcf-7的抑制作用；圖4b表示在第3天用wyc-209處理乳腺癌mcf-7的抑制作用。

圖5：wyc-209針對黑色素瘤mda-mb-435s腫瘤再生細(xì)胞抑制作用研究，其中，圖5a表示在第0天用wyc-209處理黑色素瘤mda-mb-435s的抑制作用；圖5b表示在第3天用wyc-209處理黑色素瘤mda-mb-435s的抑制作用。

圖6：wyc-209針對卵巢癌a2780腫瘤再生細(xì)胞抑制作用研究，其中，圖6a表示在第0天用wyc-209處理卵巢癌a2780的抑制作用；圖6b表示在第3天用wyc-209處理卵巢癌a2780的抑制作用。

圖7：wyc-209針對胃癌hs-746t腫瘤再生細(xì)胞抑制作用研究，其中，圖7a表示在第0天用wyc-209處理胃癌hs-746t的抑制作用；圖7b表示在第3天用wyc-209處理胃癌hs-746t的抑制作用。

圖8：wyc-209針對乳腺癌mda-mb-231腫瘤再生細(xì)胞抑制作用研究，其中，圖8a表示在第0天用wyc-209處理乳腺癌mda-mb-231的抑制作用；圖8b表示在第3天用wyc-209處理乳腺癌mda-mb-231的抑制作用。

圖9：wyc-331針對卵巢癌a2780和乳腺癌mda-mb-231腫瘤再生細(xì)胞抑制活性研究，其中，圖9a表示在第3天用wyc-331處理卵巢癌a2780的抑制作用；圖9b表示在第3天用wyc-331處理乳腺癌mda-mb-231的抑制作用。

圖10：wyc-209細(xì)胞毒性研究(wyc-209抑制b16生長，但對3t3細(xì)胞無明顯影響)；其中，圖10a表示用10μmwyc-209處理3t3細(xì)胞18小時；圖10b表示不用wyc-209，或用10μmwyc-209處理b16細(xì)胞48小時。

圖11：wyc-331細(xì)胞毒性研究；其中，圖11a表示用1μm、10μmwyc-331處理3t3細(xì)胞24小時；圖11b表示分別用1μm、10μmwyc331處理b16細(xì)胞24小時。

圖12：wyc-103對皮下黑色素瘤抑制，實驗第19天的腫瘤體積。

圖13：wyc-103對皮下黑色素瘤抑制作用及體內(nèi)毒性研究。

圖14：wyc-103對皮下黑色素瘤抑制，實驗第26天的腫瘤體積。

圖15：wyc-103對肺部轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的抑制作用研究；其中，圖15a表示注射3000黑色素瘤再生細(xì)胞，給予wyc103，實驗第29天的肺組織；圖15b表示注射3000黑色素瘤再生細(xì)胞，給予dmso，實驗第29天的肺組織；圖15c表示注射3000黑色素瘤再生細(xì)胞，給予wyc103，實驗第35天的肺組織；圖15d表示注射3000黑色素瘤再生細(xì)胞，給予dmso，實驗第35天的肺組織；圖15e表示給予wyc103，實驗第37天的肺組織；圖15f表示給予dmso，實驗第37天的肺組織。

圖16：wyc-209對肺部轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的抑制作用研究，其中，圖16a表示給予dmso的肺組織；圖16b表示給予1.0μmwyc-209的肺組織；圖16c表示給予10μmwyc-209的肺組織。

圖17：wyc-209a的單晶結(jié)構(gòu)圖。

圖18：wyc-209b的單晶結(jié)構(gòu)圖。

具體實施方式

下面通過實施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。

實施例1：4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)-2-羥基苯甲酸甲酯

將商業(yè)化原料6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(202.8mg,1mmol)和化合物2-羥基-4-碘代苯甲酸甲酯(292.1mg,1mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(14mg,0.02mmol)、cui(7.6mg,0.04mmol)，用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.2ml干燥的ipr2nh，室溫反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1到20:1)得到產(chǎn)物wyc-101(296mg,81％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,1h),7.53(d,1h),7.18-7.20(dd,1h),7.12(d,1h),7.06-7.07(d,1h),7.00-7.02(dd,1h),3.95(s,3h),3.03-3.06(m,2h),1.94-1.97(m,1h),1.34(s,6h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ170.09,161.38,161.12,153.37,142.25,134.10,130.91,130.00,129.85,129.24,126.73,122.45,120.25,117.90,111.95,93.23,88.03,77.48,77.16,76.84,52.52,37.27,32.54,29.99,23.43；esi(+)-ms:353.3[m+1]⁺。

實施例2：4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)-2-羥甲基苯甲酸甲酯

將化合物6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(202.8mg,1mmol)和化合物2-羥甲基-4-碘代苯甲酸甲酯(292mg,1mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(14mg,0.02mmol)、cui(7.6mg,0.04mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.2ml干燥的ipr2nh，室溫反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1到50:1)得到產(chǎn)物wyc-102(300mg,82％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(d,1h),7.53(d,1h),7.18-7.20(dd,1h),7.11-7.13(dd,1h),7.11(d,1h),7.07(d,1h),3.98(s,3h),3.89(s,3h),3.03-3.06(m,1h),1.94-1.97(m,1h),1.34(s,6h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ166.25,159.05,142.07,133.98,133.58,131.89,129.90,129.13,128.85,126.70,123.39,119.42,117.88,114.84,92.50,88.07,77.48,77.16,76.84,56.18,52.18,37.23,33.06,30.06,23.31；esi(+)-ms:367.4[m+1]⁺.

實施例3：4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)-2-羥基苯甲酸乙酯

將化合物6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(202.8mg,1mmol)和化合物2-羥基-4-碘代苯甲酸乙酯(292mg,1mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(14mg,0.02mmol)、cui(7.6mg,0.04mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.2ml干燥的ipr2nh，室溫反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1到50:1)得到產(chǎn)物wyc-103(300mg,82％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(d,1h),7.52(s,1h),7.18-7.20(d,1h),7.12(s,1h),7.06-7.07(s,1h),7.00-7.02(s,1h),4.39-4.44(q,2h),3.04-3.06(t,2h),1.95-1.97(t,2h),1.44(t,3h),1.35(s,6h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ169.97,161.45,142.27,134.07,130.80,130.02,129.91,129.26,126.74,122.37,120.25,117.94,112.22,93.19,88.02,77.48,77.36,77.16,76.84,61.71,37.30,33.12,30.11,29.85,23.37,14.34；esi(+)-ms:367.5[m+1]⁺.

實施例4：4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)-2-羥甲基苯甲酸乙酯

將化合物6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(202.8mg,1mmol)和化合物2-羥甲基-4-碘代苯甲酸乙酯(306mg,1mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(14mg,0.02mmol)、cui(7.6mg,0.04mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.2ml干燥的ipr2nh，室溫反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1到50:1)得到產(chǎn)物wyc-104(293mg,77％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.77(d,j＝7.9hz,1h),7.53(d,j＝1.7hz,1h),7.20(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.14–7.11(m,1h),7.11–7.05(m,2h),4.36(q,j＝7.1hz,2h),3.93(s,3h),3.07–3.04(m,2h),1.95–1.98(m,2h),1.39(t,3h),1.35(s,6h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ165.81,159.12,142.28,133.97,131.77,129.96,129.19,128.70,126.76,123.42,119.93,117.98,114.94,92.39,77.48,77.37,77.16,76.85,61.07,56.25,37.31,33.13,30.14,29.85,23.37,14.46；esi(+)-ms:381.4[m+1]⁺.

實施例5：4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)-2-羥基苯甲酸

將化合物wyc-103(183mg,0.5mmol)溶于5mlthf，滴入0.5mnaoh水溶液1ml，室溫反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后用0.5mhcl中和至ph7，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝10:1到1:1)得到產(chǎn)物wyc-105(144mg,85％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ10.50(s,1h),7.86-7.84(d,1h),7.53(d,1h),7.21-7.19(dd,1h),7.14(d,1h),7.08-7.06(d,1h),7.05-7.04(dd,1h),3.07-3.04(m,1h),1.98-1.95(m,1h),1.35(s,6h)；¹³cnmr(125mhz,cdcl3)δ171.84,161.46,142.17,131.83,130.58,129.91,129.16,126.63,120.24,117.56,110.03,89.85,37.15,32.99,29.97,29.70,23.24；esi(-)-ms:337.1[m-1]^-.

實施例6：4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)-2-羥甲基苯甲酸甲酯

將化合物wyc-104(190mg,0.5mmol)溶于5mlthf，滴入0.5mnaoh水溶液1ml，室溫反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后用0.5mhcl中和至ph7，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝10:1到4:1)得到產(chǎn)物wyc-106(151mg,86％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ10.60(s,1h),8.14(d,j＝7.9hz,1h),7.54(s,1h),7.28(m,2h),7.22(m,1h),7.08(d,j＝7.9hz,1h),4.12(s,3h),3.06(m,2h),1.96(m,2h),1.35(s,6h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ165.02,157.85,142.36,134.56,133.90,130.59,130.00,129.21,126.81,125.42,117.51,116.99,114.42,94.06,87.56,77.48,77.36,77.16,76.84,56.98,37.22,33.12,30.10,29.83,23.37；esi(-)-ms:351.2[m-1]^-.

實施例7：4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)-3-羥基苯甲酸甲酯

將化合物6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(202.8mg,1mmol)和化合物3-羥基-4-碘代苯甲酸甲酯(278.1mg,1mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(14mg,0.02mmol)、cui(7.6mg,0.04mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.2ml干燥的ipr2nh，室溫反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1到10:1)得到產(chǎn)物wyc-107(245mg,71％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.64(d,j＝1.5hz,1h),7.58(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),7.52(d,j＝1.7hz,1h),7.46(d,j＝8.0hz,1h),7.19(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.08(d,j＝8.1hz,1h),6.02(s,1h),3.91(s,3h),3.06–3.04(m,2h),1.94–1.97(m,2h),1.34(s,6h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ166.45,156.21,142.31,134.62,131.53,131.43,129.70,128.97,126.73,121.48,117.03,115.72,114.61,99.27,81.86,77.37,77.05,76.74,52.33,37.06,32.99,29.94,23.24；esi(+)-ms:353.4[m+1]⁺。

實施例8：4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)-3-羥甲基苯甲酸甲酯

將化合物6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(202.8mg,1mmol)和化合物3-羥甲基-4-碘代苯甲酸甲酯(292.1mg,1mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(14mg,0.02mmol)、cui(7.6mg,0.04mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.2ml干燥的ipr2nh，室溫反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1到10:1)得到產(chǎn)物wyc-108(275mg,75％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.61-7.63(d,1h),7.52-7.56(m,3h),7.21-7.23(dd,1h),7.05-7.07(d,1h),3.97(s,3h),3.93(s,3h),3.03-3.06(m,1h),1.94-1.97(m,1h),1.34(s,6h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ166.59,159.56,141.99,133.50,133.19,130.64,129.80,129.14,126.49,121.75,118.27,111.25,96.82,84.38,77.26,77.01,76.76,56.07,52.29,37.24,32.97,29.98,23.22；esi(+)-ms:367.3[m+1]⁺。

實施例9：4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)-3-羥甲基苯甲酸

將化合物wyc-108(190mg,0.5mmol)溶于5mlthf，滴入0.5mnaoh水溶液1ml，室溫反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后用0.5mhcl中和至ph7，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝10:1到2:1)得到產(chǎn)物wyc-110(1541mg,80％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.69(dd,1h),7.61(s,1h),7.58–7.55(m,2h),7.23(dd,1h),7.07(d,1h),3.99(s,3h),3.06–3.04(m,2h),1.97–1.95(m,2h),1.34(s,6h)；esi(+)-ms:339.3[m+1]⁺。

實施例10：2-氰基-5-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶

將商業(yè)化原料4,4-二甲基-6-炔基二氫苯并噻喃(202.8mg,1.0mmol)和2-氰基-5-氯嘧啶(93mg,0.67mmol)加入單口燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(23mg,0.03mmol)、cui(19mg,0.1mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf,0.25ml干燥的et3n，加熱到50度反應(yīng)22h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，分別用飽和氯化銨溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝30:1)得到產(chǎn)物wyc-202(133mg,65％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.89(s,2h),7.55(d,j＝1.6hz,1h),7.21(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.11(d,j＝8.2hz,1h),3.11–3.03(m,2h),2.01–1.93(m,2h),1.35(s,6h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ159.21,142.59,141.79,136.33,130.15,129.31,126.98,122.88,116.13,115.70,101.85,81.24,37.02,33.15,30.02,23.42.esi(+)-ms:306.3[m+1]⁺。

實施例11：2-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-5-甲酸乙酯

將化合物4,4-二甲基-6-炔基二氫苯并噻喃(202.8mg,1.0mmol)和2-氯嘧啶甲酸乙酯(156mg,0.83mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(42mg,0.06mmol)、cui(19mg,0.1mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.3ml干燥的et3n，加熱到80度反應(yīng)22h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝15:1)得到產(chǎn)物wyc-203(257mg,73％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.24(s,2h),7.69(d,j＝1.7hz,1h),7.33(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.09(d,j＝8.2hz,1h),4.45(q,j＝7.1hz,1h),3.11–2.99(m,2h),1.99–1.92(m,2h),1.43(t,j＝7.1hz,3h),1.33(s,6h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.52,158.44,155.85,142.39,136.48,131.36,130.15,126.83,121.88,115.96,92.65,87.97,62.14,37.09,33.14,30.05,23.43,14.38.esi(+)-ms:353.2[m+1]⁺。

實施例12：5-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-2-甲酸甲酯

將化合物wyc-202(50mg,0.164mmol)加入燒瓶中，加入0.5ml水和0.5ml甲醇的naoh(20mg,0.491mmol)溶液，60度下反應(yīng)5h，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用1mol/l的hcl中和至中性；加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝15:1)得到產(chǎn)物wyc-204(39mg,74％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.63(s,2h),7.51(d,j＝0.7hz,1h),7.17(dd,j＝8.1,0.9hz,1h),7.07(d,j＝8.2hz,1h),4.04(s,3h),3.11–2.91(m,2h),2.04–1.90(m,2h),1.34(s,6h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ164.02,161.24,142.32,134.10,129.72,128.97,126.77,117.65,113.33,94.71,81.81,55.37,37.28,33.12,30.11,23.36.esi(+)-ms:339.2[m+1]⁺。

實施例13：5-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-2-甲酸乙酯

將化合物wyc-202(50mg,0.164mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(34mg,0.492mmol),加入5ml乙醇，45度下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝8:1)得到產(chǎn)物wyc-205(36mg,62％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.62(s,2h),7.51(s,1h),7.17(dd,j＝8.1,0.8hz,1h),7.07(d,j＝8.1hz,1h),4.45(q,j＝7.1hz,2h),3.09–3.00(m,2h),2.00–1.92(m,2h),1.45(t,j＝7.1hz,3h),1.34(s,6h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.61,161.23,142.32,134.05,129.72,128.97,126.77,117.71,113.13,94.60,81.91,64.11,37.30,33.13,30.11,23.36,14.55.esi(+)-ms:353.5[m+1]⁺。

實施例14：2-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-5-甲酸

將化合物wyc-203(50mg,0.142mmol)加入燒瓶中，加入2ml2.0mol/l的naoh溶液中，加入2ml甲醇；45度下反應(yīng)5h，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用1mol/l的hcl中和至弱酸性；加入乙酸乙酯稀釋、萃取，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(二氯甲烷:甲醇＝15:1)得產(chǎn)物wyc-206(41mg,89％)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ9.21(s,2h),7.71(d,j＝1.6hz,1h),7.29(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.11(d,j＝8.2hz,1h),3.14–3.06(m,2h),2.05–1.92(m,2h),1.36(s,6h)；¹³cnmr(101mhz,cd3od)δ167.13,159.54,155.24,143.92,137.92,131.86,130.67,127.84,117.11,111.42,92.11,88.26,49.64,49.43,49.21,49.00,48.79,48.57,48.36,38.12,33.99,30.18,23.98.esi(+)-ms:325.3[m+1]⁺。

實施例15：2-氰基-5-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶

將wyc-202(30mg,0.098mmol)加入燒瓶中，加入2ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入mcpba(24mg,0.098mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝1:2)得產(chǎn)物wyc-207(27mg,86％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.95(s,2h),7.82(d,j＝8.1hz,1h),7.64(d,j＝1.5hz,1h),7.55(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),3.30–3.08(m,2h),2.44(ddd,j＝15.0,10.1,2.0hz,1h),1.93(ddd,j＝15.1,9.2,2.1hz,1h),1.49(s,3h),1.36(s,3h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ159.64,145.41,142.59,131.57,130.38,130.36,124.24,121.99,115.52,99.38,83.14,43.53,34.76,31.38,31.31,29.96.esi(+)-ms:322.3[m+1]⁺。

實施例16：5-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-2-甲酸乙酯

將wyc-205(70mg,0.2mmol)加入燒瓶中，加入3ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入mcpba(49mg,0.2mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝1:2)得產(chǎn)物wyc-208(68mg,93％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.66(s,2h),7.75(d,j＝8.0hz,1h),7.59(s,1h),7.49(d,j＝7.7hz,1h),4.47(q,j＝7.1hz,2h),3.16(dt,j＝20.8,11.7hz,2h),2.46(dd,j＝14.5,10.3hz,1h),1.90(dd,j＝14.6,8.0hz,2h),1.48(s,3h),1.45(t,j＝7.1hz,3h),1.34(s,3h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.95,161.56,145.06,131.11,130.39,129.99,125.91,112.28,93.14,84.74,64.30,43.37,34.61,31.36,31.23,29.76,14.52.esi(+)-ms:369.4[m+1]⁺。

實施例17：2-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-5-甲酸乙酯

將wyc-203(48mg,0.14mmol)加入燒瓶中，加入3ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入mcpba(34mg,0.14mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝1:2)得產(chǎn)物wyc-209(43mg,84％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.29(s,2h),7.82–7.75(m,2h),7.66(d,j＝7.9hz,1h),4.47(q,j＝7.1hz,2h),3.24(t,j＝11.1hz,1h),3.15–3.07(m,1h),2.43(dd,j＝14.0,10.4hz,1h),1.92(dd,j＝14.9,8.8hz,1h),1.47(s,3h),1.44(t,j＝7.2hz,3h),1.34(s,3h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.33,158.54,155.32,145.19,132.61,131.06,130.22,124.22,122.62,89.60,89.35,62.32,34.75,31.36,31.25,29.93,14.39.esi(+)-ms:369.4[m+1]⁺；hrms-esi(m/z)calculatedc20h21n2o3s,369.1273[m+1]⁺,found369.1267.

wyc-209a:2-((4,4-二甲基-1s-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-5-甲酸乙酯

將d-酒石酸二乙酯(82.7mg,0.4mmol)溶于無水ch2cl2(1ml)，16度下快速加入ti(iso-pro)4(0.2mmol,58ul)，攪拌3分鐘，緩慢滴入水(3.6ul，0.2mmol)，繼續(xù)攪拌20分鐘。然后冷卻至-20度，快速加入wyc-203(69mg,0.2mmol)和過氧化氫異丙苯(74ul，0.4mmol)，3小時后停止反應(yīng)。將反應(yīng)液傾入硫酸亞鐵(0.2g)、檸檬酸(67mg)的水、二氧六環(huán)與乙醚(2：1：2)的混合溶液10ml中，攪拌15分鐘。水相用乙醚萃取，合并有機(jī)層用0.5mk2co3洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝1:2)得產(chǎn)物wyc-209a(43mg,84％，ee％＝90％)。再用乙醚重結(jié)晶，得wyc-209a(25mg，ee％＝99％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.29(s,2h),7.82–7.75(m,2h),7.66(d,j＝7.9hz,1h),4.47(q,j＝7.1hz,2h),3.24(t,j＝11.1hz,1h),3.15–3.07(m,1h),2.43(dd,j＝14.0,10.4hz,1h),1.92(dd,j＝14.9,8.8hz,1h),1.47(s,3h),1.44(t,j＝7.2hz,3h),1.34(s,3h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.33,158.54,155.32,145.19,132.61,131.06,130.22,124.22,122.62,89.60,89.35,62.32,34.75,31.36,31.25,29.93,14.39.esi(+)-ms:369.4[m+1]⁺。ee％由手性hplc條件測定，條件如下：agilent1260infinity液相色譜儀，色譜柱luxcellulose-1250*4.6mm，流動相：乙腈/h2o＝80:20，20度，0.7ml/min，保留時間8.592min。

wyc-209b:2-((4,4-二甲基-1r-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-5-甲酸乙酯

將l-酒石酸二乙酯(82.7mg,0.4mmol)溶于無水ch2cl2(1ml)，16度下快速加入ti(iso-pro)4(0.2mmol,58ul)，攪拌3分鐘，緩慢滴入水(3.6ul，0.2mmol)，繼續(xù)攪拌20分鐘。然后冷卻至-20度，快速加入wyc-203(69mg,0.2mmol)和過氧化氫異丙苯(74ul，0.4mmol)，3小時后停止反應(yīng)。將反應(yīng)液傾入硫酸亞鐵(0.2g)、檸檬酸(67mg)的水、二氧六環(huán)與乙醚(2：1：2)的混合溶液10ml中，攪拌15分鐘。水相用乙醚萃取，合并有機(jī)層用0.5mk2co3洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝1:2)得產(chǎn)物wyc-209b(43mg,84％，ee％＝90％)。再用乙醚重結(jié)晶，得wyc-209b(25mg，ee％＝99％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.29(s,2h),7.82–7.75(m,2h),7.66(d,j＝7.9hz,1h),4.47(q,j＝7.1hz,2h),3.24(t,j＝11.1hz,1h),3.15–3.07(m,1h),2.43(dd,j＝14.0,10.4hz,1h),1.92(dd,j＝14.9,8.8hz,1h),1.47(s,3h),1.44(t,j＝7.2hz,3h),1.34(s,3h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.33,158.54,155.32,145.19,132.61,131.06,130.22,124.22,122.62,89.60,89.35,62.32,34.75,31.36,31.25,29.93,14.39.esi(+)-ms:369.4[m+1]⁺。其中，ee％由手性hplc條件測定，條件如下：agilent1260infinity液相色譜儀，色譜柱luxcellulose-1250*4.6mm，流動相：乙腈/h2o＝80:20，20度，0.7ml/min,保留時間9.147min。

wyc-209a和wyc-209b的單晶結(jié)構(gòu)圖分別見圖17和圖18，晶體屬單斜晶系，空間群為p21，晶胞參數(shù)：c＝10.4356(α＝90°，β＝103.010(3)°，γ＝90°，晶胞體積晶胞內(nèi)不對成單位數(shù)z＝4，密度1.314mg/m³。

表1原子坐標(biāo)(x10⁴)和等價的各向同性位置參數(shù)

實施例18：2-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-5-甲酸

將wyc-206(34mg,0.105mmol)加入燒瓶中，加入1.5ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0℃后加入m-cpba(26mg,0.105mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(dcm:meoh＝12:1)得到產(chǎn)物wyc-210(23mg,68％)。¹hnmr(500mhz,pyridine)δ9.66(s,2h),7.99–7.85(m,2h),7.65(d,j＝7.8hz,1h),3.20(t,j＝10.7hz,1h),3.14–3.02(m,1h),2.32(dd,j＝12.9,10.4hz,1h),1.72(dd,j＝13.2,9.4hz,1h),1.25(s,3h),1.18(s,3h).¹³cnmr(126mhz,pyridine)δ166.30,159.03,155.15,145.73,142.20,132.56,130.90,130.31,125.00,124.29,90.65,88.52,43.70,34.73,30.89,30.62,29.97.esi(+)-ms:341.1[m+1]⁺。

實施例19：2-氨基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將化合物6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(405.6mg,2mmol)和化合物2-氨基-4-碘苯甲酸(263mg,1mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(42mg,0.06mmol)、cui(23mg,0.12mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入10ml干燥的dmf、0.2ml干燥的et3n，加熱到75度反應(yīng)12h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝5:1)得產(chǎn)物wyc-212(286mg,85％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.88(d,j＝8.3hz,1h),7.52(d,j＝1.7hz,1h),7.18(dd,j＝8.1,1.8hz,1h),7.06(d,j＝8.1hz,1h),6.84(d,j＝1.3hz,1h),6.81(dd,j＝8.3,1.5hz,1h),3.08–3.02(m,3h),1.99–1.94(m,2h),1.35(s,6h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ165.25,165.23,163.21,161.20,142.29,134.42,133.26,133.25,131.70,131.64,129.97,129.27,126.75,125.15,125.12,117.73,117.05,116.92,116.66,116.47,98.04,98.02,81.71,61.62,37.29,33.13,30.09,23.38,14.42.esi(+)-ms:338.3[m+1]⁺。

實施例20：2-乙酰氨基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將wyc-212(200mg,0.3mmol)加入燒瓶中，加入10mg的dmap，在氬氣保護(hù)下加入5ml干燥的吡啶，冰水浴下冷卻至0度，滴加43μl的乙酰氯，冰水浴下反應(yīng)10min后移至室溫反應(yīng)5h,tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用甲醇淬滅，乙酸乙酯稀釋，1mol/l的鹽酸洗去吡啶，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝20:1)得到產(chǎn)物wyc-213(195mg,87％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.13(d,j＝8.1hz,1h),7.64(d,j＝1.3hz,1h),7.58(dd,j＝8.1,1.5hz,1h),7.55(d,j＝1.7hz,1h),7.21(dd,j＝8.1,1.8hz,1h),7.09(d,j＝8.1hz,1h),3.09–3.03(m,2h),2.47(s,3h),1.99–1.92(m,2h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ160.95,159.37,146.56,142.37,134.76,132.31,131.05,130.06,129.32,128.95,128.49,126.82,117.47,115.64,95.32,87.52,37.23,33.13,30.09,23.39,21.54.esi(+)-ms:380.4[m+1]⁺。

實施例21：6-乙炔基-4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃

將6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(2.03g,10mmol)加入燒瓶中，加入27ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入mcpba(1.73g,10mmol)，冰水浴下反應(yīng)10min后移至室溫反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝3:1)得1-氧代-6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(1.43g,72％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.41(d,j＝8.0hz,1h),7.26(s,1h),7.15(d,j＝8.0hz,1h),2.93–2.74(m,3h),2.14(ddd,j＝14.6,10.5,1.7hz,1h),1.58(ddd,j＝15.0,8.7,1.8hz,1h),1.14(s,3h),1.01(s,3h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ144.82,138.91,131.70,130.53,130.17,125.60,82.69,79.39,43.23,34.47,31.27,31.13,29.67.esi(+)-ms:219.3[m+1]⁺。

實施例22：2-氨基-4-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將化合物1-氧代-6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(263mg,1.0mmol)和化合物2-氨基-4-碘苯甲酸(262mg,1.2mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(42mg,0.06mmol)、cui(23mg,0.0412mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入4ml干燥的dmf、0.2ml干燥的et3n，加熱到70度反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝50:1)得到產(chǎn)物(275mg,78％)。¹hnmr(500mhz,pyridine)δ8.37(d,j＝8.1hz,1h),7.92(d,j＝8.0hz,1h),7.86(s,1h),7.59(s,1h),7.36(s,1h),7.03(d,j＝8.1hz,1h),5.67(s,1h),3.20–3.14(m,1h),3.11–3.05(m,1h),2.38(ddd,j＝14.2,10.3,1.7hz,1h),1.74–1.68(m,1h),1.26(s,3h),1.17(s,3h)；¹³cnmr(126mhz,pyridine)δ171.06,152.34,145.52,140.46,132.80,131.65,130.43,130.20,127.92,126.32,119.79,118.58,112.43,91.82,90.33,55.01,43.59,34.63,30.93,30.63,29.80.esi(+)-ms:354.3[m+1]⁺。

實施例23：2-氨基-4-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸甲酯

將wyc-214(150mg,0.425mmol)加入燒瓶中，加入碳酸鈉(176mg,1.275mmol),在氬氣保護(hù)下加入3ml干燥的dmf和碘甲烷(40μl,0.637mmol),緩慢加熱到100度，反應(yīng)6h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝20:1)得產(chǎn)物wyc-215(143mg,92％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.84(d,j＝8.3hz,1h),7.73(d,j＝8.1hz,1h),7.58(d,j＝1.5hz,1h),7.48(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),6.87(d,j＝1.3hz,1h),6.81(dd,j＝8.3,1.5hz,1h),3.88(s,3h),3.20(ddd,j＝12.9,10.6,2.2hz,1h),3.10(ddd,j＝13.1,8.7,2.3hz,1h),2.46(ddd,j＝14.9,10.5,2.2hz,1h),1.89(ddd,j＝15.1,8.7,2.2hz,3h),1.47(s,3h),1.33(s,3h)；¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ168.19,150.04,144.92,138.59,131.48,131.30,130.34,130.18,128.13,126.44,119.72,119.64,111.06,90.93,90.26,51.84,43.28,34.57,31.36,31.21,29.73.esi(+)-ms:368.4[m+1]⁺。

實施例24：2-氨基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將wyc-212(50mg,0.15mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入2ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加0.15ml的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用2mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝10：1)得產(chǎn)物wyc-216(14mg,25％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.84(d,j＝8.3hz,1h),7.51(d,j＝1.6hz,1h),7.17(dd,j＝8.1,1.7hz,1h),7.06(d,j＝8.1hz,1h),6.83(d,j＝1.3hz,1h),6.79(dd,j＝8.3,1.4hz,1h),4.33(q,j＝7.1hz,2h),3.06–3.03(m,2h),1.97–1.94(m,2h),1.39(t,j＝7.1hz,3h),1.34(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ167.92,150.10,142.22,133.72,131.35,129.95,129.19,129.02,126.70,119.55,119.39,118.23,110.80,91.99,88.37,60.61,37.36,33.12,30.13,23.37,14.50.esi(+)-ms:366.4[m+1]⁺。

實施例25：2-乙酰氨基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將wyc-216(80mg,0.22mmol)加入燒瓶中，加入6mg的dmap，在氬氣保護(hù)下加入2ml干燥的吡啶，冰水浴下冷卻至0度，滴加乙酰氯(31μl,0.44mmol)，冰水浴下反應(yīng)10min后移至室溫反應(yīng)9h,tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用甲醇淬滅，乙酸乙酯稀釋，1mol/l的鹽酸洗去吡啶，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝10:1)得到產(chǎn)物wyc-217(71mg,79％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ11.12(s,1h),8.88(d,j＝1.4hz,1h),7.99(d,j＝8.3hz,1h),7.55(d,j＝1.7hz,1h),7.20(dd,j＝3.6,1.7hz,1h),7.18(dd,j＝3.8,1.7hz,1h),7.06(d,j＝8.1hz,1h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),3.06–3.03(m,2h),2.24(s,3h),1.97–1.94(m,2h),1.42(t,j＝7.1hz,3h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ169.17,168.11,142.25,141.59,133.98,130.81,130.17,130.04,129.24,126.70,125.26,122.97,118.06,114.16,93.43,88.37,61.65,37.36,33.13,30.13,25.68,23.38,14.34.esi(+)-ms:408.4[m+1]⁺。

實施例26：2-氨基-4-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將化合物2-氨基-4-碘苯甲酸乙酯(262.0mg,1.2mmol)和化合物1-氧代-6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(263.0mg,1mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(42mg,0.06mmol)、cui(23mg,0.12mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入15ml干燥的dmf、0.2ml干燥的et3n，加熱到75度反應(yīng)12h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(dcm:meoh＝40：1)得到產(chǎn)物wyc-218(275mg,78％)。¹hnmr(500mhz,pyridine)δ8.39(d,j＝8.1hz,1h),7.97–7.82(m,2h),7.61(s,1h),7.38(s,1h),7.05(d,j＝8.1hz,1h),3.25–3.01(m,2h),2.40(ddd,j＝14.2,10.3,1.7hz,1h),1.73(ddd,j＝14.8,8.8,1.5hz,1h),1.28(s,3h),1.19(s,3h).¹³cnmr(126mhz,pyridine)δ171.75,153.03,150.76,150.74,150.55,150.53,150.33,150.31,146.21,141.15,133.49,132.34,131.12,130.89,128.61,127.01,120.48,119.27,113.12,92.51,91.02,44.28,35.32,31.62,31.32,30.49.esi(+)-ms:382.4[m+1]⁺。

實施例27：2-甲氨基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸甲酯

將wyc-212(100mg,0.3mmol)加入燒瓶中，加入碳酸鈉(125mg,0.9mmol),在氬氣保護(hù)下加入3ml干燥的dmf和碘甲烷(28μl,0.445mmol),緩慢加熱到100度，反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝20:1)得到產(chǎn)物wyc-219(43mg,39％)和3-69-2-2(45mg,43％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.87(d,j＝8.2hz,1h),7.54(s,1h),7.20(d,j＝8.1hz,1h),7.06(d,j＝8.1hz,1h),6.88(s,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),3.86(s,3h),3.08–3.02(m,2h),2.95(s,3h),1.99–1.94(m,2h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ168.77,151.15,142.24,133.75,131.64,130.02,129.68,129.24,126.71,118.37,118.24,114.31,110.05,92.11,88.89,51.79,37.38,33.14,30.15,23.39.esi(+)-ms:366.2[m+1]⁺。

實施例28：2-氨基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸甲酯

將化合物wyc-212(100mg,0.3mmol)加入燒瓶中，加入碳酸鉀(125mg,0.9mmol),在干燥氬氣保護(hù)下加入干燥的dmf3ml,滴加mei(28μl，0.445mmol)100度下反應(yīng)8h，待原料反應(yīng)完全后，冷卻至室溫，加入乙酸乙酯稀釋，1mol/l的hcl溶液洗滌，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝20:1)得產(chǎn)物wyc-220(45mg,44％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.83(d,j＝8.3hz,1h),7.52(d,j＝1.7hz,1h),7.18(dd,j＝8.1,1.8hz,1h),7.07(d,j＝8.1hz,1h),6.86(d,j＝1.4hz,1h),6.81(dd,j＝8.3,1.5hz,1h),3.88(s,3h),3.08–3.02(m,2h),2.00–1.93(m,2h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ168.25,149.81,142.19,133.74,131.31,129.92,129.16,129.15,126.67,119.74,119.47,118.15,110.58,92.12,88.28,51.75,37.32,33.08,30.09,23.34.esi(+)-ms:352.4[m+1]⁺。

實施例29：2-乙酰氨基-4-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將wyc-214(152mg,0.42mmol)加入燒瓶中，加入10mg的dmap，在氬氣保護(hù)下加入5ml干燥的二氯甲烷，0.212ml的三乙胺，冰水浴下冷卻至0度，滴加乙酰氯(67μl,0.84mmol)，冰水浴下反應(yīng)10min后移至室溫反應(yīng)12h,tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用甲醇淬滅，乙酸乙酯稀釋，1mol/l的鹽酸洗去吡啶，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝1:3)得產(chǎn)物wyc-221(147mg,89％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.12(d,j＝8.3hz,1h),7.63(d,j＝1.3hz,1h),7.57(dd,j＝8.1,1.5hz,1h),7.54(d,j＝1.7hz,1h),7.21(dd,j＝8.1,1.8hz,1h),7.08(d,j＝8.1hz,1h),3.07–3.03(m,2h),2.46(s,3h),1.99–1.94(m,2h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ160.87,159.36,146.58,142.34,134.73,132.26,131.01,130.04,129.30,128.95,128.45,126.80,117.45,115.64,95.28,87.51,37.21,33.11,30.07,23.38,21.54.esi(+)-ms:396.2[m+1]⁺。

實施例30：2-(3-溴苯基)乙醛

將2-(3-溴苯基)乙醇(676μl,5mmol)加入燒瓶中，加入10ml干燥的二氯甲烷，在冰水浴下dmp(2.5g,6mmol),冰水浴下反應(yīng)2h后移至室溫下反應(yīng)0.5h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后冷卻至0度，用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝15:1)得到產(chǎn)物2-(3-溴苯基)乙醛(0.86g,87％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.74(1h,t,j＝2.0),7.46–7.37(2h,m),7.30–7.14(2h,m),3.67(2h,d,j＝2.0).¹³cnmr(75mhz,cdcl3)δ198.9,134.5,133.0,131.0,130.9,128.7,123.3,60.8.esi(+)-ms:199.1[m+1]⁺。

實施例31：4-(3-溴苯基)-2-丁烯酸乙酯

將2-(3-溴苯基)乙醛(400mg,2.02mmol)和ph3pch＝co2et(703mg,2.02mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入10ml干燥的甲苯，加熱到90度反應(yīng)8h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后冷卻至0度，乙酸乙酯稀釋，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝250:1)得到產(chǎn)物4-(3-溴苯基)-2-丁烯酸乙酯(514mg,96％)。e-式：¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.36(d,j＝8.0hz,1h),7.31(s,1h),7.17(t,j＝7.8hz,1h),7.11–6.99(m,2h),5.80(dt,j＝15.6,1.6hz,1h),4.17(q,j＝7.1hz,2h),3.47(dd,j＝6.8,1.0hz,2h),1.27(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ166.29,146.15,140.06,131.88,130.29,129.90,127.53,123.02,122.77,77.41,77.16,76.91,60.44,38.00,14.32.z-式：¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.38(s,1h),7.36–7.33(m,1h),7.16(dd,j＝4.1,1.4hz,2h),6.30(dt,j＝11.4,7.6hz,1h),5.88(dt,j＝11.4,1.7hz,1h),4.22(q,j＝7.1hz,2h),4.00(dd,j＝7.6,1.4hz,2h),1.31(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ166.33,146.76,141.84,131.76,130.25,129.60,127.41,122.74,120.73,60.23,34.73,14.39。

實施例32：4-(3-溴苯基)丁酸乙酯

將4-(3-溴苯基)-2-丁烯酸乙酯(1.05g,3.92mmol)加入燒瓶中，加入(10％wt)干燥pd/c(220mg,0.194mmol),在氬氣保護(hù)下加入20ml的乙酸乙酯，通入氫氣并置換3次氣體，常溫常壓下反應(yīng)24h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝15:1)得到產(chǎn)物4-(3-溴苯基)丁酸乙酯(1.04g,98％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.32(dd,j＝9.5,1.3hz,2h),7.16–7.08(m,2h),4.12(q,j＝7.1hz,2h),2.64–2.59(m,2h),2.30(t,j＝7.4hz,2h),1.96–1.90(m,2h),1.25(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ173.27,143.87,131.59,130.01,129.18,127.22,122.51,60.40,34.82,33.57,26.36,14.33.esi(+)-ms:271.2[m+1]⁺。

實施例33：5-(3-溴苯基)-2-甲基-2-戊醇

將4-(3-溴苯基)丁酸乙酯(0.53g,1.96mmol)加入到燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入15ml的四氫呋喃，冰水浴下冷卻至0度，滴加甲基溴化鎂(2ml,5.89mmol),在0度下反應(yīng)3h，室溫下反應(yīng)1h,tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至0度，用冰水淬滅，乙酸乙酯稀釋，加入1mol/l的鹽酸中和，飽和碳酸鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝15:1)得到產(chǎn)物5-(3-溴苯基)-2-甲基-2-戊醇(466mg,93％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37–7.26(m,2h),7.22–7.10(m,2h),2.62(dt,j＝15.0,7.7hz,2h),1.76–1.64(m,2h),1.56–1.47(m,2h),1.22(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ144.81,131.40,129.84,128.81,127.05,122.33,70.73,43.29,35.95,29.22,26.00.esi(+)-ms:257.1[m+1]⁺。

實施例34：7-溴-4,4-二甲基-3,4二氫萘基-1-(2h)-酮

將5-(3-溴苯基)-2-甲基-2-戊醇(340mg,1.33mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入2ml干燥的二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度，滴加0.2ml的濃硫酸，室溫下反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后，加水稀釋，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，得到白色固體320mg；將320mg固體加入燒瓶中，加入4.3ml的甲苯，然后將71mg的三氧化鉻溶于0.648ml乙酸和0.342ml乙酸酐的混合溶液中，在冰水浴下將三氧化鉻的溶液加入燒瓶中，反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌三次，飽和碳酸鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝10:1)得到產(chǎn)物7-溴-4,4-二甲基-3,4二氫萘基-1-(2h)-酮(268mg,80％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37(dd,j＝8.5,1.6hz,1h),7.33–7.21(m,2h),2.24–2.05(m,2h),1.87–1.77(m,1h),1.58–1.49(m,1h),1.35(s,3h),1.30(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ197.03,151.09,136.63,132.77,130.15,128.04,120.57,36.86,35.04,33.89,29.65.esi(+)-ms:253.1[m+1]⁺。

實施例35：7-溴-4,4-二甲基-1-苯基-1,2,3,4-四氫萘基-1-醇

將7-溴-4,4-二甲基-3,4二氫萘基-1-(2h)-酮(340mg,1.35mmol)加入到燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入3ml的四氫呋喃，冰水浴下冷卻至0度，滴加苯基溴化鎂(2.7ml,2.7mmol),在0度下反應(yīng)0.5h，室溫下反應(yīng)18h,tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至0度，用冰水淬滅，乙酸乙酯稀釋，加入1mol/l的鹽酸中和，飽和碳酸鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1)得到產(chǎn)物7-溴-4,4-二甲基-1-苯基-1,2,3,4-四氫萘基-1-醇(280mg,63％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.39–7.08(m,8h),2.24–2.05(m,2h),1.87–1.77(m,1h),1.58–1.49(m,1h),1.35(s,3h),1.30(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ148.11,145.41,143.32,131.50,131.18,128.46,128.08,127.15,126.59,119.96,75.87,37.69,34.77,34.09,31.56,31.45.esi(+)-ms:331.1[m+1]⁺。

實施例36：6-溴-1,1-二甲基-4-苯基-1,2-二氫萘

將7-溴-4,4-二甲基-1-苯基-1,2,3,4-四氫萘基-1-醇(260mg,0.79mmol)加入到燒瓶中，加入對甲苯磺酸(27mg,0.16mmol)，在氬氣保護(hù)下加入2ml干燥甲苯，75度下反應(yīng)0.5h,tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至室溫，用冰水淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝250:1)得到產(chǎn)物6-溴-1,1-二甲基-4-苯基-1,2-二氫萘(224mg,91％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.44–7.40(m,2h),7.39–7.33(m,4h),7.24(d,j＝8.3hz,1h),7.17(d,j＝2.1hz,1h),6.03(t,j＝4.7hz,1h),2.36(d,j＝4.7hz,2h),1.34(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ145.59,144.16,140.35,138.75,136.15,133.57,131.80,130.41,128.72,128.56,127.87,127.46,127.02,125.79,119.96,63.05,38.87,33.65,28.18.esi(+)-ms:312.1[m+1]⁺。

實施例37：((5,5-二甲基-8-苯基-5,6-二氫萘基-2-)乙炔基)三甲基硅

將化合物6-溴-1,1-二甲基-4-苯基-1,2-二氫萘(310mg,1.0mmol)和化合物三甲基乙炔基硅烷(0.28μl,2mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(21mg,0.03mmol)、cui(11mg,0.06mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入5ml干燥的dmf、0.2ml干燥的et3n，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(石油醚)得到產(chǎn)物((5,5-二甲基-8-苯基-5,6-二氫萘基-2-)乙炔基)三甲基硅(275mg,83％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.44–7.38(m,2h),7.36–7.32(m,4h),7.28(d,j＝7.9hz,10h),7.11(d,j＝1.6hz,1h),5.97(t,j＝4.7hz,1h),2.33(d,j＝4.7hz,2h),1.31(s,6h),0.19(s,9h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ146.01,140.79,139.09,133.98,131.51,129.25,128.83,128.49,127.29,127.27,123.92,120.66,105.45,93.41,38.88,33.90,28.19,0.16.esi(+)-ms:331.2[m+1]⁺。

實施例38：6-乙炔基-1,1-二甲基-4-苯基-1,2-二氫萘

將((5,5-二甲基-8-苯基-5,6-二氫萘基-2-)乙炔基)三甲基硅(300mg,0.91mmol)加入燒瓶中，加入tbaf(30mg,0.115mmol),干燥的四氫呋喃2ml,反應(yīng)4h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝1000:1)得到產(chǎn)物6-乙炔基-1,1-二甲基-4-苯基-1,2-二氫萘(225mg,96.6％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ77.47–77.34(m,7h),77.22(d,j＝1.6hz,1h),76.04(t,j＝4.7hz,1h),72.98(s,1h),72.39(d,j＝4.7hz,2h),71.38(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ146.23,140.58,138.97,134.13,131.41,129.62,128.77,128.49,127.34,127.27,124.04,119.59,83.98,76.59,38.83,33.85,28.18.esi(+)-ms:259.2[m+1]⁺。

實施例39：4-((5,5-二甲基-8-苯基-5,6-二氫萘基-2-)乙炔基)-2-羥基苯甲酸甲酯

將化合物6-乙炔基-1,1-二甲基-4-苯基-1,2-二氫萘(116mg,0.45mmol)和2-羥基-4-碘苯甲酸甲酯(250mμl,0.9mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(9.5mg,0.0135mmol)、cui(5.1mg,0.027mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入3ml干燥的dmf、0.2ml干燥的et3n，75度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝500:1)得到產(chǎn)物wyc-301(155mg,79％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ10.75(s,1h),7.76(d,j＝8.2hz,1h),7.43(dd,j＝7.7,7.1hz,7h),7.37(dd,j＝9.3,3.7hz,4h),7.21(d,j＝1.3hz,1h),7.09(d,j＝1.2hz,1h),6.97(dd,j＝8.2,1.2hz,1h),6.02(t,j＝4.6hz,1h),3.94(s,3h),2.37(d,j＝4.7hz,2h),1.36(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ170.27,161.31,146.42,140.63,138.99,134.24,131.17,130.83,129.82,129.20,128.80,128.54,127.41,127.38,124.18,122.47,120.36,120.07,111.98,92.99,87.93,52.47,38.85,33.94,28.19.esi(+)-ms:409.3[m+1]⁺。

實施例40：4-((5,5-二甲基-8-苯基-5,6-二氫萘基-2-)乙炔基)-2-羥基苯甲酸乙酯

將化合物wyc-301(250mg,0.613mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(125mg,1.83mmol),加入5ml乙醇，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝100:1)得到產(chǎn)物wyc-302(230mg,92％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ10.82(s,1h),7.77(d,j＝8.2hz,1h),7.45–7.39(m,3h),7.38–7.34(m,4h),7.19(d,j＝1.5hz,1h),7.07(d,j＝1.4hz,1h),6.95(dd,j＝8.2,1.5hz,1h),6.01(t,j＝4.7hz,1h),4.40(q,j＝7.1hz,2h),2.37(d,j＝4.7hz,2h),1.41(t,j＝7.1hz,3h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ169.92,161.39,146.40,140.65,139.01,134.25,131.18,130.70,129.83,129.20,128.82,128.55,127.42,127.39,124.19,122.39,120.37,120.11,112.25,92.89,87.99,61.68,38.86,33.96,28.21,14.32.esi(+)-ms:423.4[m+1]⁺。

實施例41：2-氟-4-碘苯甲酸乙酯

將2-氟-4-碘苯甲酸(1.0g,3.76mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入10ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加0.5ml的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉氯化鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝15：1)得到產(chǎn)物2-氟-4-碘苯甲酸乙酯(990mg,90％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.62–7.57(m,1h),7.52(dd,j＝8.3,1.6hz,1h),7.49(dd,j＝9.9,1.5hz,1h),4.36(q,j＝7.1hz,2h),1.36(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.87,163.84,162.18,160.06,133.48,133.45,133.05,133.04,126.54,126.34,118.76,118.68,99.59,99.52,61.59,14.29.esi(+)-ms:294.1[m+1]⁺。

實施例42：2-氟-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將化合物6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(275mg,1.36mmol)和2-氟-4-碘苯甲酸乙酯(200mg,0.68mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(28.6mg,0.0408mmol)、cui(15.5mg,0.0816mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入3ml干燥的dmf、0.3ml干燥的et3n，80度下反應(yīng)6h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝200:1)得到產(chǎn)物wyc-303(215mg,86％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.90(t,j＝7.8hz,1h),7.52(d,j＝1.7hz,1h),7.32(dd,j＝8.1,1.4hz,1h),7.28(d,j＝1.4hz,1h),7.25(d,j＝1.4hz,1h),7.19(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.07(d,j＝8.1hz,1h),4.40(q,j＝7.1hz,2h),3.07–3.03(m,2h),1.98–1.94(m,2h),1.40(t,j＝7.1hz,3h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ164.12,164.09,162.75,160.68,142.32,134.45,132.15,132.14,129.98,129.20,127.08,127.05,126.78,119.79,119.60,117.57,93.98,87.00,86.98,61.55,37.25,33.12,30.09,23.37,14.40.esi(+)-ms:369.4[m+1]⁺。

實施例43：2-氟-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將化合物wyc-303(15mg,0.04mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(8.3mg,0.12mmol),加入1ml四氫呋喃，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝1:1)得到產(chǎn)物wyc-304(11mg,80％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.99(t,j＝7.9hz,1h),7.53(d,j＝1.7hz,1h),7.35(dd,j＝8.1,1.5hz,1h),7.30(dd,j＝11.3,1.4hz,1h),7.19(dd,j＝8.1,1.8hz,1h),7.08(d,j＝8.1hz,1h),3.07–3.04(m,3h),1.98–1.95(m,2h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ167.53,163.34,161.26,142.36,134.65,132.80,131.19,131.11,130.04,129.25,127.25,127.22,126.81,119.89,119.70,117.45,116.98,94.69,86.92,37.24,33.14,30.09,23.39.esi(+)-ms:339.3[m+1]⁺。

實施例44：4-((5,5-二甲基-8-苯基-5,6-二氫萘基-2-)乙炔基)-2-氟苯甲酸乙酯

將化合物6-乙炔基-1,1-二甲基-4-苯基-1,2-二氫萘(180mg,0.7mmol)和2-氟-4碘-苯甲酸乙酯(410mg,1.4mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(30mg,0.042mmol)、cui(16.0mg,0.084mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入5ml干燥的dmf、0.5ml干燥的et3n，70度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝200:1)得到產(chǎn)物wyc-305(215mg,72％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.87(t,j＝7.8hz,1h),7.44–7.39(m,7h),7.37(ddd,j＝6.3,3.4,1.5hz,4h),7.29–7.26(m,1h),7.24–7.18(m,2h),6.02(t,j＝4.7hz,1h),4.39(q,j＝7.1hz,2h),2.37(d,j＝4.7hz,2h),1.39(t,j＝7.1hz,3h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ164.12,164.09,162.70,160.63,146.67,140.62,138.95,134.33,132.08,132.07,131.17,129.92,129.84,129.20,128.82,128.57,127.53,127.41,127.17,127.14,124.25,119.91,119.77,119.72,118.51,118.43,93.66,86.96,86.94,61.55,38.84,33.98,28.20,14.39.esi(+)-ms:425.5[m+1]⁺。

實施例45：4-((5,5-二甲基-8-苯基-5,6-二氫萘基-2-)乙炔基)-2-氟苯甲酸

將化合物wyc-305(70mg,0.19mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(26mg,0.38mmol),加入2ml四氫呋喃，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝2:1)得到產(chǎn)物wyc-306(53mg,75％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.95(t,j＝7.9hz,1h),7.44–7.39(m,7h),7.39–7.35(m,4h),7.30(dd,j＝8.2,1.4hz,1h),7.24(d,j＝1.3hz,1h),7.19(d,j＝1.5hz,1h),6.02(t,j＝4.7hz,1h),2.37(d,j＝4.7hz,2h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ167.97,163.32,161.23,146.83,140.60,138.92,134.36,132.74,131.22,129.24,128.83,128.58,127.57,127.43,127.36,127.33,124.29,120.02,119.83,119.64,116.90,94.43,86.86,38.84,34.00,28.20.esi(+)-ms:395.4[m+1]⁺。

實施例46：3-氟-4-碘苯甲酸乙酯

將3-氟-4-碘苯甲酸(0.95g,3.57mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入5ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加0.3ml的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉氯化鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝15：1)得到產(chǎn)物3-氟-4-碘苯甲酸乙酯(920mg,88％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.80(dd,j＝8.2,6.2hz,1h),7.65(dd,j＝8.4,1.8hz,1h),7.53(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),4.36(q,j＝7.1hz,2h),1.37(t,j＝7.2hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ164.99,164.97,162.64,160.67,139.61,139.59,132.94,132.89,126.51,126.48,116.46,116.26,87.88,87.67,61.65,14.33.esi(+)-ms:295.1[m+1]⁺。

實施例47：4-碘-3-硝基苯甲酸乙酯

將4-碘-3-硝基苯甲酸(1.9g,6.48mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入10ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加0.6ml的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)6h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉氯化鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝10：1)得到產(chǎn)物4-碘-3-硝基苯甲酸乙酯(1.88g,90.5％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.39(d,j＝2.0hz,1h),8.10(d,j＝8.2hz,1h),7.85(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),4.39(q,j＝7.1hz,2h),1.39(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ164.03,153.15,142.33,133.47,131.96,125.98,92.02,62.16,14.29.esi(+)-ms:322.1[m+1]⁺。

實施例48：3-氟-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將化合物6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(405.6mg,2mmol)和3-氟-4-碘苯甲酸乙酯(294mg,1.0mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(84mg,0.12mmol)、cui(46.0mg,0.24mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入5ml干燥的dmf、0.5ml干燥的et3n，70度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝500:3)得到產(chǎn)物wyc-307(250mg,68％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.81(dd,j＝8.0,1.3hz,1h),7.76(dd,j＝9.8,1.3hz,1h),7.56(dd,j＝11.1,4.2hz,2h),7.22(dd,j＝8.1,1.6hz,1h),7.08(d,j＝8.1hz,1h),4.39(q,j＝7.1hz,2h),3.05(dd,j＝7.1,5.1hz,2h),1.98–1.94(m,2h),1.40(t,j＝7.1hz,3h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ165.25,165.23,163.21,161.20,142.29,134.42,133.26,133.25,131.70,131.64,129.97,129.27,126.75,125.15,125.12,117.73,117.05,116.92,116.66,116.47,98.04,98.02,81.71,61.62,37.29,33.13,30.09,23.38,14.42.esi(+)-ms:369.3[m+1]⁺。

實施例49：3-硝基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將化合物6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(405.6mg,2mmol)和3-硝基-4-碘苯甲酸乙酯(303mg,1.0mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(84mg,0.12mmol)、cui(46.0mg,0.24mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入5ml干燥的dmf、0.5ml干燥的et3n，70度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝50:1)得到產(chǎn)物wyc-308(384mg,97％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.69(d,j＝1.2hz,1h),8.20(dd,j＝8.1,1.6hz,1h),7.74(d,j＝8.1hz,1h),7.57(s,1h),7.23-7.25(m,1h),7.08(d,j＝8.2hz,1h),4.42(q,j＝7.1hz,2h),3.04(dd,j＝7.2,4.9hz,2h),1.98–1.85(m,2h),1.41(t,j＝7.1hz,3h),1.34(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ164.34,149.33,142.43,135.66,134.63,133.24,130.35,130.30,129.65,126.86,126.01,123.20,117.23,101.65,84.50,62.11,37.16,33.12,30.04,23.43,14.43.esi(+)-ms:396.2[m+1]⁺。

實施例50：3-硝基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將化合物wyc-308(100mg,0.25mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(35mg,0.5mmol),加入2ml乙醇，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(dcm:meoh＝20:1)得到產(chǎn)物wyc-309(83mg,90.4％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.78(s,1h),8.26(d,j＝8.1hz,1h),7.78(d,j＝8.0hz,1h),7.58(s,1h),7.24(s,1h),7.09(d,j＝8.1hz,1h),3.10–3.04(m,2h),2.00–1.93(m,2h),1.36(s,6h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ168.58,149.36,142.46,135.91,134.83,133.69,130.42,129.73,126.89,126.73,124.17,117.12,102.51,84.56,37.14,33.13,30.11,30.04,23.45.esi(+)-ms:3[m+1]⁺。

實施例51：3-氟-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將化合物wyc-307(332mg,0.9mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(83mg,1.2mmol),加入7ml乙醇，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝1:1)得到產(chǎn)物wyc-310(303mg,99％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.85(dd,j＝8.1,1.2hz,1h),7.80(dd,j＝9.7,1.1hz,1h),7.61–7.56(m,1h),7.54(d,j＝1.5hz,1h),7.21(d,j＝8.2hz,1h),7.07(d,j＝8.2hz,1h),3.11–2.99(m,2h),1.99–1.90(m,2h),1.34(s,6h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ169.23,163.46,160.95,142.34,134.64,133.45,130.03,129.32,126.79,125.79,117.62,117.27,117.04,110.16,98.73,81.63,37.28,33.15,30.10,23.40.esi(+)-ms:341.2[m+1]⁺。

實施例52：3-硝基-4-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將wyc-308(100mg,0.25mmol)加入燒瓶中，加入5ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入m-cpba(60mg,0.25mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝3:1)得到產(chǎn)物wyc-311(92mg,88％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.73(d,j＝1.6hz,1h),8.26(dd,j＝8.1,1.7hz,1h),7.80(dd,j＝13.0,8.1hz,2h),7.66(d,j＝1.5hz,1h),7.57(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),4.44(q,j＝7.1hz,2h),3.23(ddd,j＝12.8,10.3,2.3hz,1h),3.12(ddd,j＝13.1,9.1,2.3hz,1h),2.44(ddd,j＝15.1,10.3,2.3hz,1h),1.91(ddd,j＝15.1,9.0,2.3hz,1h),1.48(s,3h),1.43(t,j＝7.1hz,3h),1.35(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ164.10,149.65,145.16,139.98,134.95,133.42,131.67,131.30,130.53,130.26,126.01,125.35,122.13,98.90,86.27,62.24,43.39,34.67,31.36,31.24,29.89,14.40.esi(+)-ms:412.2[m+1]⁺。

實施例53：3-氟-4-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將化合物1-氧代-6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(223mg,1.2mmol)和3-氟-4-碘苯甲酸乙酯(200mg,0.8mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(32mg,0.0459mmol)、cui(17.5mg,0.0918mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入3ml干燥的dmf、0.3ml干燥的et3n，75度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝3:2)得到產(chǎn)物外wyc-312(254mg,82.5％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.84(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),7.81–7.75(m,2h),7.63–7.58(m,2h),7.54(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),4.40(q,j＝7.1hz,2h),3.22(ddd,j＝12.9,10.4,2.3hz,1h),3.11(ddd,j＝13.1,8.9,2.4hz,1h),2.46(ddd,j＝15.1,10.4,2.3hz,1h),1.91(ddd,j＝15.1,8.9,2.3hz,1h),1.49(s,3h),1.41(t,j＝7.1hz,4h),1.35(s,4h).¹³cnmr(126mhz,cdcl33)δ165.04,163.42,161.41,145.01,139.21,133.49,132.58,132.52,132.26,132.18,131.33,130.29,130.27,128.67,128.57,125.87,125.22,125.19,116.78,116.60,116.06,115.93,96.03,96.00,84.16,61.73,43.34,34.62,31.36,31.22,29.81,14.40.esi(+)-ms:385.2[m+1]⁺。

實施例54：2,3-二氟-4-碘苯甲酸乙酯

將2,3-二氟-4-碘苯甲酸(0.5g,1.76mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入4ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加0.3ml的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)6h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉氯化鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝10：1)得到產(chǎn)物2,3-二氟-4-碘苯甲酸乙酯(0.48g,87％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.55(ddd,j＝8.4,5.2,1.8hz,1h),7.44(ddd,j＝8.4,6.3,1.8hz,1h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),1.38(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.13,163.10,163.08,152.43,152.31,150.69,150.56,150.46,150.35,148.56,148.44,133.21,133.17,127.48,127.44,121.24,121.18,88.19,88.01,61.98,14.27.esi(+)-ms:313.1[m+1]⁺。

實施例55：2,3-二氟-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將化合物2,3-二氟-4-碘苯甲酸乙酯(200mg,0.64mmol)和6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(195mg,0.96mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(20mg,0.0288mmol)、cui(11mg,0.0576mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.2ml干燥的et3n，75度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝100:1)得到產(chǎn)物wyc-313(215mg,82％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.65(ddd,j＝8.3,6.5,1.8hz,1h),7.54(d,j＝1.7hz,1h),7.28(ddd,j＝8.0,4.9,1.9hz,1h),7.21(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.08(d,j＝8.2hz,1h),4.41(q,j＝7.1hz,2h),3.07–3.03(m,2h),1.97–1.93(m,2h),1.40(t,j＝7.1hz,3h),1.34(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.34,152.40,152.29,151.69,151.58,150.38,150.27,149.60,149.49,142.32,134.92,129.98,129.27,127.01,126.98,126.76,126.01,125.97,120.13,120.07,118.59,118.51,117.25,99.26,99.23,80.63,80.60,61.87,37.18,33.09,30.02,23.35,14.33.esi(+)-ms:387.2[m+1]⁺。

實施例56：2,3-二氟-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將化合物wyc-313(84mg,0.218mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(44.4mg,0.653mmol),加入2ml乙醇，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝1:1)得到產(chǎn)物wyc-314(68mg,87.5％)。¹hnmr(500mhz,pyridine)δ8.01(t,j＝7.4hz,1h),7.82(s,1h),7.45(t,j＝7.2hz,1h),7.40(d,j＝8.1hz,1h),7.24(d,j＝8.1hz,1h),2.95–2.89(m,2h),1.78–1.71(m,2h),1.19(s,6h).esi(-)-ms:357.2[m-1]^-。

實施例57：2,3-二氟-4-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將wyc-313(90mg,0.233mmol)加入燒瓶中，加入5ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入m-cpba(58mg,0.233mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝3:1)得到產(chǎn)物wyc-315(76mg,78％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.76(d,j＝8.0hz,1h),7.71–7.65(m,1h),7.62(s,1h),7.53(dd,j＝8.0,0.8hz,1h),7.32(dd,j＝10.4,3.9hz,1h),4.41(q,j＝7.1hz,2h),3.26–3.18(m,1h),3.15–3.07(m,1h),2.44(ddd,j＝14.8,10.3,2.0hz,1h),1.90(ddd,j＝15.1,8.9,2.0hz,1h),1.47(s,3h),1.40(t,j＝7.1hz,3h),1.34(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.22,163.20,163.17,152.69,152.58,151.65,151.54,150.66,150.55,149.55,145.10,139.57,131.40,130.30,130.27,127.25,127.22,126.15,126.12,125.41,121.05,120.99,117.60,117.59,117.50,117.48,97.09,97.05,82.93,82.90,62.02,43.34,34.63,31.34,31.21,29.82,14.32.esi(+)-ms:403.1[m+1]⁺。

實施例58：3-乙酰氨基-4-碘苯甲酸甲酯

將化合物3-氨基-4-碘苯甲酸甲酯(1.5g,5.43mmol)加入燒瓶中，加入20ml干燥的二氯甲烷，4.5ml干燥的三乙胺，冰水浴下滴加0.77ml的乙酰氯，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用甲醇淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝10:1)得到產(chǎn)物3-乙酰氨基-4-碘苯甲酸甲酯(1.34g,77.5％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.75(s,1h),7.86(d,j＝8.3hz,1h),7.54–7.39(m,2h),3.90(s,3h),2.25(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ168.29,166.28,138.97,138.54,131.46,126.74,122.89,96.10,52.44,24.78.esi(+)-ms:320.1[m+1]⁺。

實施例59：3-乙酰氨基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸甲酯

將化合物3-乙酰氨基-4-碘苯甲酸甲酯(319mg,1mmol)和6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(304mg,1.5mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(47mg,0.0675mmol)、cui(26mg,0.135mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入5ml干燥的dmf、0.3ml干燥的et3n，70度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝10:1)得到產(chǎn)物wyc-316(298mg,76％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.00(s,1h),7.97(s,1h),7.74(dd,j＝8.1,1.2hz,1h),7.57–7.50(m,2h),7.18(dd,j＝8.1,1.7hz,1h),7.10(d,j＝8.1hz,1h),3.91(s,3h),3.10–3.02(m,2h),2.26(s,3h),1.98–1.93(m,2h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ168.23,166.55,142.53,138.77,135.02,131.51,130.80,129.71,128.90,126.92,124.65,120.35,117.03,110.11,99.62,83.25,52.42,37.09,33.11,30.02,25.03,23.36.esi(+)-ms:394.2[m+1]⁺。

實施例60：3-乙酰氨基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將化合物wyc-316(56mg,0.142mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(29mg,0.426mmol),加入2ml乙醇，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝20:1)得到產(chǎn)物wyc-317(48mg,83％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.00(s,1h),7.97(s,1h),7.75(d,j＝8.0hz,1h),7.53(d,j＝7.2hz,2h),7.18(dd,j＝8.1,1.3hz,1h),7.10(d,j＝8.1hz,1h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),3.09–3.02(m,2h),2.26(s,3h),1.98–1.94(m,2h),1.39(t,j＝7.1hz,3h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ168.22,166.08,142.53,138.76,135.00,131.47,131.21,129.72,128.91,126.93,124.64,120.38,117.07,110.12,99.54,83.31,61.39,37.11,33.12,30.04,25.03,23.36,14.44.esi(+)-ms:408.2[m+1]⁺。

實施例61：3-乙酰氨基-4-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將wyc-317(86mg,0.211mmol)加入燒瓶中，加入2ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入m-cpba(37mg,0.211mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝1:1)得到產(chǎn)物wyc-318(80mg,98.6％)。¹hnmr(500mhz,cdcl33)δ8.98(s,1h),7.93(s,1h),7.78(d,j＝8.0hz,2h),7.61(d,j＝1.3hz,1h),7.57(d,j＝8.1hz,1h),7.50(dd,j＝8.0,1.3hz,1h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),3.24(dd,j＝17.2,6.3hz,1h),3.17–3.09(m,1h),2.45(ddd,j＝14.8,10.3,1.9hz,1h),2.27(s,3h),1.91(ddd,j＝15.1,8.9,2.0hz,1h),1.48(s,3h),1.39(t,j＝7.1hz,3h),1.35(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ168.29,165.92,145.31,139.07,131.97,131.91,131.19,130.44,129.98,125.33,124.80,124.76,120.86,115.83,97.48,85.94,61.51,43.40,34.66,31.36,31.27,29.79,14.43.esi(+)-ms:424.1[m+1]⁺。

實施例62：3-乙酰氨基-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將化合物wyc-316(63mg,0.16mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(14mg,0.2mmol),加入2ml四氫呋喃，0.2ml的水，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝1：4)得到產(chǎn)物wyc-319(34mg,56％)。esi(+)-ms:380.2[m+1]⁺。

實施例63：5-溴噠嗪-2-甲酸乙酯

將5-溴噠嗪-2-甲酸(1.0g,5mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入5ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加0.3ml的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)6h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉氯化鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝50:1)得到產(chǎn)物5-溴噠嗪-2-甲酸乙酯(0.42g,37％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.01(d,j＝1.3hz,1h),8.76(d,j＝1.3hz,1h),4.47(q,j＝7.1hz,2h),1.41(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.39,147.30,146.31,144.65,141.89,62.67,14.30.esi(+)-ms:231.2[m+1]⁺。

實施例64：2-((4,4-二甲基-1,1-二氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)嘧啶-5-甲酸乙酯

將wyc-209(1.1g,3mmol)加入燒瓶中，加入20ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入mcpba(0.663g,3.6mmol)，冰水浴下反應(yīng)10min后移至室溫反應(yīng)3h后移至室溫下反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝1:5)得到產(chǎn)物wyc-320(0.99g,89％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.29(s,2h),7.94(d,j＝8.2hz,1h),7.76(d,j＝1.3hz,1h),7.68(dd,j＝8.2,1.5hz,1h),4.47(q,j＝7.1hz,2h),3.46–3.37(m,2h),2.45–2.39(m,2h),1.44(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.22,158.51,155.10,145.17,138.59,132.27,131.31,125.41,124.24,122.74,89.85,88.71,62.32,47.06,35.49,34.47,30.71,14.35.esi(+)-ms:385.4[m+1]⁺。

實施例65：3-乙酰氨基-4-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸甲酯

將wyc-316(107mg,0.272mmol)加入燒瓶中，加入3.5ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入m-cpba(67.3mg,0.272mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝1:1)得到產(chǎn)物wyc-321(84mg,78％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.97(s,1h),7.96(s,1h),7.80–7.72(m,2h),7.60(d,j＝1.4hz,1h),7.56(d,j＝8.1hz,1h),7.49(dd,j＝8.0,1.3hz,1h),3.90(s,3h),3.14(ddt,j＝12.9,8.9,6.4hz,2h),2.45(ddd,j＝14.8,10.3,1.7hz,1h),2.26(s,3h),1.90(ddd,j＝15.0,8.9,1.9hz,1h),1.47(s,3h),1.34(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ168.28,166.37,145.28,139.65,139.09,131.94,131.52,131.18,130.41,129.95,125.29,124.74,120.91,115.97,97.52,85.89,52.49,43.37,34.63,31.32,31.25,29.76,24.99.esi(+)-ms:410.3[m+1]⁺。

實施例66：5-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)吡嗪-2-甲酸乙酯

將化合物5-溴噠嗪-2-甲酸乙酯(600mg,2.61mmol)和6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(635mg,3.13mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(66mg,0.094mmol)、cui(36mg,0.188mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入6ml干燥的dmf、0.4ml干燥的et3n，80度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝50:1)得到產(chǎn)物wyc-322(656mg,71.5％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.20(d,j＝1.4hz,1h),8.76(d,j＝1.4hz,1h),7.58(d,j＝1.7hz,1h),7.23(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.04(d,j＝8.2hz,1h),4.46(q,j＝7.1hz,2h),3.02–2.97(m,2h),1.92–1.87(m,2h),1.41(t,j＝7.1hz,3h),1.29(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.65,146.68,145.70,143.08,142.31,140.30,136.14,130.54,129.51,126.74,116.00,97.55,85.68,62.37,36.91,32.99,29.89,23.27,14.31.esi(+)-ms:353.5[m+1]⁺。

實施例67：5-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)吡嗪-2-甲酸

將化合物wyc-322(50mg,0.14mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(29mg,0.426mmol),加入2ml乙醇，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(dcm：meoh＝15:1)得到產(chǎn)物wyc-323(43mg,95％)。¹hnmr(500mhz,pyridine)δ9.65(s,1h),9.05(s,1h),7.84(d,j＝1.4hz,1h),7.41(dd,j＝8.1,1.4hz,1h),7.23(d,j＝8.1hz,1h),2.98–2.88(m,2h),1.81–1.72(m,2h),1.19(s,6h).¹³cnmr(126mhz,pyridine)δ166.73,147.26,146.43,143.36,142.96,142.56,136.52,130.88,129.89,127.24,116.79,96.42,86.89,36.94,33.05,29.59,23.30.esi(+)-ms:325.2[m+1]⁺。

實施例68：5-((4,4-二甲基-1-氧代二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)吡嗪-2-甲酸乙酯

將wyc-322(100mg,0.284mmol)加入燒瓶中，加入3.5ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入m-cpba(49mg,0.284mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝1:2)得到產(chǎn)物wyc-324(78mg,75％)。¹hnmr(500mhz,cdcl33)δ9.29(d,j＝1.4hz,1h),8.87(d,j＝1.4hz,1h),7.80(d,j＝8.1hz,1h),7.71(d,j＝1.5hz,1h),7.61(dd,j＝8.1,1.6hz,1h),4.52(q,j＝7.1hz,2h),3.29–3.06(m,2h),2.43(ddd,j＝15.1,10.2,2.3hz,1h),1.91(ddd,j＝15.1,9.2,2.3hz,1h),1.47(dd,j＝8.8,5.5hz,6h),1.34(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ163.62,147.07,145.93,145.25,142.41,141.29,140.60,132.05,130.63,130.25,124.32,94.92,87.36,62.70,43.44,34.73,31.35,31.25,29.91,14.41.esi(+)-ms:396.2[m+1]⁺。

實施例69：2-氯-4-碘苯甲酸乙酯

將2-氯-4-碘苯甲酸(1.0g,3.55mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入7ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加0.4ml的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)5h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉氯化鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝7:1)得到產(chǎn)物2-氯-4-碘苯甲酸乙酯(0.98g,89％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.82(d,j＝1.6hz,1h),7.65(dd,j＝8.2,1.6hz,1h),7.52(d,j＝8.2hz,1h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),1.39(t,j＝7.2hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ165.22,139.57,135.95,134.63,132.47,129.91,98.35,61.87,14.32.esi(+)-ms:311.3[m+1]⁺

實施例70：2-氯-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將化合物2-氯-4-碘苯甲酸乙酯(310mg,1mmol)和6-乙炔基-4,4-二甲基苯并噻喃(244mg,1.2mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(28mg,0.04mmol)、cui(11.4mg,0.06mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入3ml干燥的dmf、0.3ml干燥的et3n，80度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝50:1)得到產(chǎn)物wyc-325(365mg,95％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.81(d,j＝8.1hz,1h),7.59(d,j＝1.5hz,1h),7.52(d,j＝1.7hz,1h),7.42(dd,j＝8.1,1.5hz,1h),7.18(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.07(d,j＝8.1hz,1h),4.40(q,j＝7.1hz,2h),3.06–3.02(m,2h),1.97–1.93(m,2h),1.40(t,j＝7.1hz,3h),1.34(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ165.27,142.26,134.37,133.89,133.65,131.41,129.92,129.38,129.30,129.14,128.27,126.72,117.56,93.73,86.76,61.71,37.21,33.06,30.04,23.32,14.33.esi(+)-ms:385.2[m+1]⁺。

實施例71：2-氯-4-((4,4-二甲基二氫-1-氧代苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將wyc-325(100mg,0.26mmol)加入燒瓶中，加入3ml干燥二氯甲烷，冰水浴下冷卻至0度后加入m-cpba(60mg,0.26mmol)，冰水浴下反應(yīng)1h后移至室溫下反應(yīng)2h，tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用硫代硫酸鈉溶液淬滅，乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝1:3)得到產(chǎn)物wyc-326(86mg,83％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝8.1hz,1h),7.71(d,j＝8.1hz,1h),7.59(d,j＝1.5hz,1h),7.57(d,j＝1.5hz,1h),7.46(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),7.42(dd,j＝8.1,1.6hz,1h),4.36(q,j＝7.1hz,2h),3.17(ddd,j＝12.7,10.5,2.1hz,1h),3.06(ddd,j＝13.1,8.8,2.2hz,1h),2.41(ddd,j＝14.9,10.4,2.1hz,1h),1.85(ddd,j＝15.1,8.8,2.2hz,1h),1.43(s,3h),1.36(t,j＝7.1hz,3h),1.30(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ165.05,144.93,138.96,133.81,133.81,131.36,131.23,130.19,130.08,130.05,129.58,127.12,125.66,91.67,89.03,61.74,43.16,34.45,31.20,31.06,29.59,14.22.esi(+)-ms:401.2[m+1]⁺。

實施例72：2-氯-4-((4,4-二甲基二氫苯并噻喃-6-)乙炔基)苯甲酸

將化合物wyc-325(100mg,0.26mmol)加入燒瓶中，加入乙醇鈉(29mg,0.426mmol),加入2ml乙醇，室溫下反應(yīng)過夜，tlc跟蹤。待原料反應(yīng)完全后用酸性樹脂中和至中性，過濾，濾液加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe：ea＝1:2)得到產(chǎn)物wyc-327(89mg,94％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.98(d,j＝8.1hz,1h),7.61(s,1h),7.52(d,j＝1.6hz,1h),7.44(d,j＝7.9hz,1h),7.18(dd,j＝8.2,1.6hz,1h),7.07(d,j＝8.1hz,1h),3.07–3.04(m,2h),1.98–1.94(m,2h),1.35(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ170.29,142.32,134.90,134.53,134.00,132.52,130.02,129.51,129.36,129.25,127.76,126.79,117.54,94.44,86.79,37.25,33.12,30.09,23.39.esi(+)-ms:355.2[m+1]⁺。

實施例73：2-氰基-5-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)嘧啶

將化合物6-乙炔基-1,1,4,4-四甲基-1,2,3,4-四氫萘(50mg,0.235mmol)和2-氰基-5-溴嘧啶(49.9mg,0.271mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(14mg,0.02mmol)、cui(5.6mg,0.03mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.14ml干燥的et3n，加熱到70℃反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用飽和碳酸氫銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝10:0to10:1)得到產(chǎn)物wyc-329(75mg,77％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.90(s,2h),7.52(d,j＝1.4hz,1h),7.38–7.29(m,2h),1.70(s,4h),1.31(s,6h),1.29(s,6h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ159.24,147.92,145.68,141.75,130.54,129.00,127.11,122.82,117.86,115.58,101.75,80.64,77.35,77.04,76.72,34.78,34.73,34.59,34.31,31.77,31.64.esi(+)-ms:338.4[m+1]+.esi(+)-ms:3[m+1]⁺

實施例74：2-氨基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)苯甲酸

將6-乙炔基-1,1,4,4-四甲基-1,2,3,4-四氫萘(100mg,0.47mmol)和2-氨基-4-碘苯甲酸(141.8mg,0.54mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(28mg,0.04mmol)、cui(11.2mg,0.059mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.28ml干燥的et3n，加熱到50度反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝50:1到10:1)得到產(chǎn)物wyc-330(97mg,60％)。¹hnmr(400mhz,meod)δ7.81(s,1h),7.46(s,1h),7.33(d,j＝8.2hz,1h),7.24(d,j＝8.2hz,1h),6.88(s,1h),6.68(s,1h),1.72(s,4h),1.30(s,6h),1.29(s,6h).esi(+)-ms:348.3[m+1]⁺.

實施例75：2-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)嘧啶-5-甲酸乙酯

將6-乙炔基-1,1,4,4-四甲基-1,2,3,4-四氫萘(50mg,0.235mmol)和2-氯嘧啶-4-甲酸乙酯(50.3mg,0.27mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(14mg,0.02mmol)、cui(5.6mg,0.03mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入1ml干燥的dmf、0.14ml干燥的et3n，加熱到70℃反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1到50:1)得到產(chǎn)物wyc-331(67.2mg,79％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.26(s,2h),7.67(d,j＝1.7hz,1h),7.45(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.33(d,j＝8.2hz,1h),4.46(q,j＝7.1hz,2h),1.69(s,4h),1.44(t,j＝7.1hz,3h),1.29(s,6h),1.28(s,6h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ163.42,158.33,155.80,148.01,145.46,131.77,129.86,126.94,121.83,117.66,92.54,87.31,62.02,34.81,34.77,34.58,34.31,31.72,31.60.esi(+)-ms:363.3[m+1]⁺。

實施例76：3-羥基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)苯甲酸甲酯

將6-乙炔基-1,1,4,4-四甲基-1,2,3,4-四氫萘(120mg,0.566mmol)和3-羥基-4-碘苯甲酸甲酯(180.7mg,0.65mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(33.7mg,0.048mmol)、cui(13.5mg,0.072mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入3ml干燥的dmf、0.338ml干燥的et3n，70度下反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝50:1到10:1)得到產(chǎn)物wyc-332(118mg,58％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.23(s,1h),7.95(dd,j＝8.2,1.4hz,1h),7.85(d,j＝1.9hz,1h),7.63(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.58(d,j＝8.1hz,1h),7.41(d,j＝8.3hz,1h),7.01(d,j＝0.8hz,1h),3.96(s,3h),1.74(s,4h),1.38(s,6h),1.33(d,j＝4.9hz,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ167.34,159.55,154.18,146.62,145.60,133.81,127.20,127.09,125.67,124.35,123.49,122.72,120.13,112.70,100.54,77.25,76.99,76.74,52.10,35.01,34.90,34.43,34.42,31.84,31.72.esi(+)-ms:363.2[m+1]⁺.

實施例77：2-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)-5-氰基吡啶

將6-乙炔基-1,1,4,4-四甲基-1,2,3,4-四氫萘(60mg,0.283mmol)和2-氯-5-氰基吡啶(59.5mg,0.325mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(16.8mg,0.024mmol)、cui(6.8mg,0.036mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.17ml干燥的et3n，70℃反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝100:1到20:1)得到產(chǎn)物wyc-333(59mg,67％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.86(dd,j＝2.1,0.8hz,1h),7.93(dd,j＝8.2,2.2hz,1h),7.60(dd,j＝8.2,0.8hz,1h),7.58(d,j＝1.7hz,1h),7.36(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.32(d,j＝8.2hz,1h),1.69(s,4h),1.29(s,6h),1.29(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ152.56,147.56,147.09,145.45,139.13,130.99,129.26,126.92,126.59,118.07,116.52,107.95,95.22,86.91,77.25,76.99,76.74,34.81,34.76,34.52,34.28,31.73,31.61.esi(+)-ms:315.6[m+1]⁺。

實施例78：5-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)嘧啶-2-甲酸乙酯

將化合物wyc-329(15mg，0.0475mmol)溶于2ml乙醇中，加入乙醇鈉(9.7mg，0.143mmol)，室溫攪拌過夜，反應(yīng)結(jié)束后用1mol/l的hcl中和至弱酸性；加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝1000:1到20:1)得到產(chǎn)物wyc-334(15mg,88％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.63(s,2h),7.47(d,j＝1.2hz,1h),7.33–7.24(m,2h),4.45(q,j＝7.1hz,2h),1.69(s,4h),1.45(t,j＝7.1hz,3h),1.30(s,6h),1.28(s,6h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ163.53,161.19,146.22,145.28,129.93,128.61,126.82,119.29,113.07,94.57,81.42,77.35,77.04,76.72,63.94,34.91,34.85,34.41,34.25,31.77,31.68,14.42.esi(+)-ms:362.3[m+1]⁺。

實施例79：2-羥基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)苯甲酸甲酯

將6-乙炔基-1,1,4,4-四甲基-1,2,3,4-四氫萘(50mg,0.205mmol)和化合物c(75.3mg,0.271mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(14mg,0.02mmol)、cui(5.6mg,0.03mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.14ml干燥的et3n，加熱到70度反應(yīng)8h,tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用飽和碳酸氫銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe)得到產(chǎn)物(45.2mg,61％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.76(s,1h),7.80(d,j＝8.2hz,1h),7.48(s,1h),7.29(d,j＝0.8hz,2h),7.13(d,j＝1.4hz,1h),7.03(dd,j＝8.2,1.5hz,1h),3.96(s,3h),1.69(s,4h),1.30(s,6h),1.28(s,6h).esi(+)-ms:363.3[m+1]⁺.

實施例80：2-羥基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)苯甲酸

將前步產(chǎn)物(30mg,0.082mmol)加入燒瓶中，加入2ml2.0mol/l的naoh溶液中，加入2ml甲醇；55℃反應(yīng)過夜。待原料反應(yīng)完全后用1mol/l的hcl中和至ph為5～6；加入乙酸乙酯稀釋、萃取，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝100:0to10:1)得到產(chǎn)物wyc-335(26.3mg,93％)。¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.80(d,j＝8.1hz,1h),7.53(d,j＝1.6hz,1h),7.39(d,j＝8.2hz,1h),7.31(dd,j＝8.2,1.6hz,1h),7.12–7.04(m,2h),1.65(s,4h),1.26(s,6h),1.25(s,6h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ171.27,160.85,146.07,145.05,130.58,129.74,129.16,128.67,126.98,122.01,119.29,118.76,92.56,87.48,40.12,39.91,39.70,39.49,39.29,39.08,38.87,34.36,34.25,34.08,33.89,31.39,31.32.esi(-)-ms:347.3[m-1]^-。

實施例81：2-乙酰氨基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)苯甲酸

將wyc-330(52mg,0.15mmol)加入燒瓶中，加入1mg的dmap，在氬氣保護(hù)下加入3ml干燥的吡啶，冰水浴下冷卻至0度，滴加7.8μl的乙酰氯，冰水浴下反應(yīng)5min后移至室溫反應(yīng)5h,tlc跟蹤。待反應(yīng)結(jié)束后用甲醇淬滅，乙酸乙酯稀釋，1mol/l的鹽酸洗去吡啶，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝20:1)得到產(chǎn)物wyc-336(39.5mg,85％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.13(d,j＝8.1hz,1h),7.66(d,j＝1.2hz,1h),7.60(dd,j＝8.1,1.5hz,1h),7.51(s,1h),7.32(d,j＝1.0hz,2h),2.47(s,3h),1.69(d,j＝5.7hz,4h),1.31(s,6h),1.29(s,6h).esi(-)-ms:388.4[m-1]^-。

實施例82：5-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)吡啶-2-甲酸甲酯

將6-乙炔基-1,1,4,4-四甲基-1,2,3,4-四氫萘(60mg,0.283mmol)和5-溴-吡啶-2-甲酸甲酯(70mg,0.325mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(16.8mg,0.024mmol)、cui(6.8mg,0.036mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.17ml干燥的et3n，70℃反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝100:1到20:1)得到產(chǎn)物(68.7mg,70％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.85(dd,j＝2.0,0.7hz,1h),8.12(dd,j＝8.1,0.7hz,1h),7.94(dd,j＝8.1,2.1hz,1h),7.51(s,1h),7.32(d,j＝1.0hz,2h),4.02(d,j＝4.5hz,3h),1.69(d,j＝5.5hz,4h),1.31(s,6h),1.29(s,6h).esi(+)-ms:348.2[m+1]⁺。

實施例83：5-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)吡啶-2-甲酸

將上步產(chǎn)物(50mg,0.143mmol)加入燒瓶中，加入2ml2.0mol/l的naoh溶液中，加入2ml甲醇；55℃下反應(yīng)過夜。待原料反應(yīng)完全后用1mol/l的hcl中和至ph為5～6；加入乙酸乙酯稀釋、萃取，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝20:1到5:1)得到產(chǎn)物wyc-337(42.2mg,88％)。¹hnmr(400mhz,meod)δ8.67(s,1h),8.00(d,j＝7.9hz,1h),7.94(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),7.52(d,j＝1.6hz,1h),7.36(d,j＝8.2hz,1h),7.30(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),1.73(s,4h),1.31(s,6h),1.29(s,6h).esi(+)-ms:334.4[m+1]⁺。

實施例84：5-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)嘧啶-2-甲酸乙酯甲酯

將化合物wyc-329(15mg，0.0475mmol)溶于2ml甲醇中，加入甲醇鈉(7.7mg，0.143mmol)，室溫攪拌過夜，反應(yīng)結(jié)束后用1mol/l的hcl中和至弱酸性；加入乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1到20:1)得到產(chǎn)物wyc-338(14.9mg,90％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.64(s,2h),7.47(d,j＝1.2hz,1h),7.34–7.27(m,2h),4.05(s,3h),1.69(s,4h),1.30(s,6h),1.28(s,6h).esi(+)-ms:348.4[m+1]⁺。

實施例85：2-羥基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將wyc-335(15mg,0.043mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入0.8ml無水乙醇，冰水浴至0℃，滴加3μl的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝100:1到10:1)得到產(chǎn)物wyc-339(14mg,87％)。esi(+)-ms:377.3[m+1]⁺.

實施例86：3-羥基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)苯甲酸乙酯

將化合物wyc-332(50mg,0.143mmol)加入燒瓶中，加入2ml2.0mol/l的naoh溶液中，加入2ml甲醇；55度下反應(yīng)過夜。待原料反應(yīng)完全后用1mol/l的hcl中和至ph為5～6；加入乙酸乙酯稀釋、萃取，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝20:1到5:1)得到羧酸產(chǎn)物(47mg,87％)。將該產(chǎn)物(25mg,0.072mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入1.5ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加5μl的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝50:1到10:1)得到產(chǎn)物wyc-340(24mg,90％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.24(s,1h),7.95(dd,j＝8.2,1.4hz,1h),7.84(d,j＝1.9hz,1h),7.63(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.58(d,j＝8.2hz,1h),7.41(d,j＝8.3hz,1h),7.01(d,j＝0.8hz,1h),4.42(q,j＝7.1hz,2h),1.73(s,4h),1.43(t,j＝7.1hz,3h),1.37(s,6h),1.32(s,6h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ166.91,159.50,154.23,146.62,145.62,133.74,127.23,127.15,126.07,124.37,123.49,122.73,120.12,112.68,100.57,60.95,35.03,34.92,34.44,31.86,31.74；esi(+)-ms:377.4[m+1]⁺。

實施例87：5-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)吡啶-2-甲酸乙酯

將wyc-337(25mg,0.075mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入1.5ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加5μl的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝50:1到10:1)得到產(chǎn)物wyc-341(24mg,90％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.85(dd,j＝2.0,0.6hz,1h),8.11(dd,j＝8.1,0.7hz,1h),7.92(dd,j＝8.1,2.1hz,1h),7.50(t,j＝1.2,1h),7.34(d,j＝2.5hz,1h),7.26(dd,j＝8.4,2.1hz,3h),4.49(q,j＝7.2hz,2h),1.69(s,4h),1.45(t,j＝6.8hz,3h),1.30(s,6h),1.28(s,6h).esi(+)-ms:362.7[m+1]⁺。

實施例88：5-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)噠嗪-2-羧酸甲酯

將6-乙炔基-1,1,4,4-四甲基-1,2,3,4-四氫萘(60mg,0.283mmol)和2-氯噠嗪-4-甲酸甲酯(56mg,0.325mmol)加入燒瓶中，加入pd(pph3)2cl2(16.8mg,0.024mmol)、cui(6.8mg,0.036mmol),用氬氣保護(hù)并置換3次氣體以排除氧氣，用注射器加入2ml干燥的dmf、0.17ml干燥的et3n，70℃反應(yīng)8h，tlc跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和氯化銨溶液淬滅，加入乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨洗滌，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝100:1到20:1)得到產(chǎn)物(55mg,56％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.28(d,j＝1.4hz,1h),8.83(d,j＝1.4hz,1h),7.61(d,j＝1.7hz,1h),7.40(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.34(d,j＝8.2hz,1h),4.06(s,3h),1.70(s,4h),1.30(s,6h),1.29(s,6h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ164.18,147.91,146.83,145.74,145.57,143.39,140.07,131.12,129.38,127.01,117.83,97.82,85.11,77.34,77.23,77.02,76.70,53.19,34.80,34.76,34.58,34.31,31.75,31.62.esi(+)-ms:349.2[m+1]⁺.

實施例89：5-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫萘基-2-)乙炔基)吡嗪-2-甲酸乙酯

將上步產(chǎn)物(35mg,0.1mmol)加入燒瓶中，加入1.5ml2.0mol/l的naoh溶液中，加入1.5ml甲醇；55℃下反應(yīng)過夜。待原料反應(yīng)完全后用1mol/l的hcl中和至ph為5～6；加入乙酸乙酯稀釋、萃取，飽和氯化鈉洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:ea＝20:1到5:1)得到羧酸產(chǎn)物(28.3mg,85％)。將該產(chǎn)物(25mg,0.075mmol)加入燒瓶中，在氬氣保護(hù)下加入1.5ml無水乙醇，冰水浴至0度，滴加5μl的濃硫酸，滴加完畢后升溫回流反應(yīng)4h，tlc跟蹤。待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，用1mol/l的氫氧化鈉中和硫酸至中性，飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾、旋干，快速柱層析(pe:etoac＝50:1到10:1)得到產(chǎn)物wyc-342(20mg,75％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.26(d,j＝1.4hz,1h),8.82(d,j＝1.4hz,1h),7.60(d,j＝1.6hz,1h),7.38(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.32(d,j＝8.2hz,1h),4.51(q,j＝7.1hz,2h),1.68(s,4h),1.45(t,j＝7.1hz,3h),1.29(s,6h),1.27(s,6h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ163.72,147.84,146.83,145.72,145.53,143.21,140.41,131.09,129.37,127.00,117.87,97.61,85.15,77.38,77.07,76.75,62.42,34.81,34.76,34.56,34.30,31.75,31.62.esi(+)-ms:363.6[m+1]⁺。

效果實施例1、黑色素瘤再生細(xì)胞(trcs)體外生長抑制活性研究

采用3d纖維蛋白膠培養(yǎng)基(90-pa)孵育黑色素瘤b16-f1細(xì)胞5天，篩選得到所需黑色素瘤腫瘤再生細(xì)胞(nat.mater.2012,11,734)。隨后采用膠原酶和中性蛋白酶ii對培養(yǎng)基分別進(jìn)行處理，游離出黑色素瘤腫瘤再生細(xì)胞，將所得再生細(xì)胞移取至新制備培養(yǎng)基中重懸，并保持單細(xì)胞狀態(tài)。將黑色素瘤b16-f1再生細(xì)胞接種于3d纖維蛋白膠培養(yǎng)基(90-pa)孵育5天，以0.1％dmso為陰性對照組，以他扎羅汀(tazarotene)、貝沙羅汀(bexarotene)分別為陽性對照藥物，按照10μm濃度加入藥物，孵育5天，觀察測量計算腫瘤克隆體大小，并計算每種藥物對于黑色素瘤b16-f1腫瘤再生細(xì)胞的抑制率。本發(fā)明包含化合物針對黑色素瘤b16-f1再生細(xì)胞抑制活性測試結(jié)果如下表2所示。

表2：黑色素瘤b16-f1再生細(xì)胞抑制活性測試結(jié)果

針對黑色素瘤腫瘤b16-f1再生細(xì)胞抑制率測試表明，在10μm濃度下，大部分化合物都表現(xiàn)出明顯的腫瘤生長抑制活性，例如化合物wyc-103(86.8％)、wyc-207(92.5％)、wyc-209(98.8％)、wyc-209a(98.9％)、wyc-209b(98.7％)、wyc-212(93.2％)、wyc-217(90.3％)、wyc-218(90.4％)、wyc-329(94.5％)、wyc-331(96.0％)等，所對應(yīng)腫瘤克隆體基本沒用生長或生長非常緩慢。其結(jié)果不僅與陰性對照組形成鮮明對比，同時也都達(dá)到或超越了陽性藥tazarotene(67.6％)、bexarotene(63.3％)對腫瘤克隆體生長的抑制活性。

隨后對在初篩中表現(xiàn)出明顯腫瘤克隆增長抑制活性的化合物進(jìn)行腫瘤生長抑制的量效作用曲線研究。經(jīng)對等梯度給藥的腫瘤克隆體進(jìn)行固定、dapi細(xì)胞核染色與體積測量、抑制率計算和量效曲線回歸，確定其中活性較好的化合物wyc-103、wyc-209、wyc-320、wyc-329、wyc-331的ic50如下表3所示。

表3：部分化合物針對黑色素瘤b16-f1再生細(xì)胞抑制ic50列表

其中，化合物wyc-103與wyc-209針對黑色素瘤腫瘤b16-f1再生細(xì)胞抑制及誘導(dǎo)分化作用參見電鏡照片(圖1、圖2)，圖1和圖2中，以dapi染色顯示細(xì)胞存活情況，以pi染色顯示細(xì)胞凋亡情況，merge顯示dapi和pi染色圖片疊加情況。

2、化合物wyc-209對多種腫瘤再生細(xì)胞生長抑制活性研究

以上多種化合物在對黑色素瘤b16-f1腫瘤再生細(xì)胞增殖方面表現(xiàn)出很好的抑制活性，其中wyc-209抑制活性尤其卓越。因此我們對該化合物針對其他6種人類腫瘤再生細(xì)胞生長抑制活性開展了進(jìn)一步研究，其中包括肺癌細(xì)胞a549、乳腺癌細(xì)胞mcf-7、黑色素瘤細(xì)胞mda-mb-435s、卵巢癌細(xì)胞a2780、胃癌細(xì)胞hs-746t、乳腺癌細(xì)胞mda-mb-231。

采用3d纖維蛋白膠培養(yǎng)基(90-pa)分別孵育上述人腫瘤細(xì)胞5天，篩選得到所需腫瘤再生細(xì)胞。隨后采用膠原酶和中性蛋白酶ii對培養(yǎng)基分別進(jìn)行處理，游離出腫瘤再生細(xì)胞，隨后將所得再生細(xì)胞移取至新制備培養(yǎng)基中重懸，并保持單細(xì)胞狀態(tài)。將單個腫瘤再生細(xì)胞接種于3d纖維蛋白膠培養(yǎng)基(90-pa)孵育5天，以0.1％dmso為陰性對照組(圖3-圖8中為dmso組)，以無藥物添加為空白組(圖3-圖8中為none組)，分別采用0天起給藥和3天起給藥開展研究，觀察測量計算腫瘤克隆體積。

研究結(jié)果顯示，與空白對照組相比化合物wyc-209在1.0μm即可有效抑制各種腫瘤再生細(xì)胞的增殖，極大阻滯了腫瘤克隆體的體積增長，腫瘤克隆體的體積僅為空白組25-30％(圖3-圖8，圖3-圖8涉及到的drug9#表示wyc-209)。而當(dāng)wyc-209濃度提高到10μm時，即可在較高水平抑制以上6種腫瘤再生細(xì)胞的增殖，腫瘤克隆體的體積甚至小于空白組體積的10％。尤其對于hs-746t，采用化合物wyc-209甚至可逆轉(zhuǎn)腫瘤克隆的生長趨勢。

3、化合物wyc-331對多種腫瘤再生細(xì)胞生長抑制活性研究

化合物wyc-331在對黑色素瘤b16-f1腫瘤再生細(xì)胞增殖方面表現(xiàn)出良好抑制活性，接下來我們對該化合物針對卵巢癌a2780和乳腺癌mda-mb-231腫瘤再生細(xì)胞的抑制活性進(jìn)行了研究。

采用3d纖維蛋白膠培養(yǎng)基(90-pa)分別孵育上述人腫瘤細(xì)胞5天，篩選得到所需腫瘤再生細(xì)胞。隨后采用膠原酶和中性蛋白酶ii對培養(yǎng)基分別進(jìn)行處理，游離出腫瘤再生細(xì)胞，隨后將所得再生細(xì)胞移取至新制備培養(yǎng)基中重懸，并保持單細(xì)胞狀態(tài)。將單個腫瘤再生細(xì)胞接種于3d纖維蛋白膠培養(yǎng)基(90-pa)孵育5天，以0.1％dmso為陰性對照組(圖9中為dmso組)，，以無藥物添加為空白組(圖9中為none組)，第3天起分別按照0.1μm、1.0μm和10μm濃度給藥，觀察測量計算腫瘤克隆體積。

研究結(jié)果顯示，與空白對照組相比，化合物wyc-331在10μm濃度下可以接近完全抑制卵巢癌a2780腫瘤再生細(xì)胞和乳腺癌mda-mb-231腫瘤再生細(xì)胞的增殖，均極大阻滯了腫瘤克隆體的體積增長，腫瘤克隆體的體積僅為空白組10-15％。對于mda-mb-231腫瘤再生細(xì)胞，采用化合物wyc-331甚至逆轉(zhuǎn)了腫瘤克隆的生長趨勢(圖9，其中#31表示wyc-331)。同時，細(xì)胞染色研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)wyc-331抑制的腫瘤克隆仍保持存活，僅極少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞凋亡。

4、化合物wyc-209和wyc-331的毒性研究

我們以小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3t3細(xì)胞系和黑色素瘤細(xì)胞b16-f1為模型，分別對化合物wyc-209和wyc-331進(jìn)行了的體外毒性研究。實驗選取在10μm濃度條件下，比較化合物wyc-209和wyc-331對于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3t3和黑色素瘤細(xì)胞b16-f1增殖的影響。研究結(jié)果表明，化合物wyc-209不影響小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3t3的增殖，也不誘導(dǎo)該類細(xì)胞凋亡；同時化合物wyc-209可明顯阻滯黑色素瘤細(xì)胞克隆體的生長，并在6-48小時表現(xiàn)出明顯細(xì)胞凋亡。該實驗顯示化合物wyc-209對于黑色素瘤腫瘤再生細(xì)胞有一定的特異性，對普通細(xì)胞影響微弱，具有較小的細(xì)胞毒性(圖10)。

在相同條件下，化合物wyc-331強(qiáng)烈抑制黑色素瘤細(xì)胞b16-f1的增殖，但同時對小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3t3和黑色素瘤細(xì)胞b16-f1都沒有表現(xiàn)出明顯的誘導(dǎo)凋亡作用。這顯示化合物wyc-331也對黑色素瘤再生細(xì)胞有一定選擇性，同時也沒有觀察到明顯的細(xì)胞毒性，但作用機(jī)制可能與化合物wyc-209有一定差異(圖11)。

5、化合物wyc-103對皮下移植黑色素瘤抑制活性的研究

我們以免疫活性小鼠(c57bl/6,雌性，6-8周)為基體，建立了黑色素瘤b16-f1的皮下植入模型，對化合物wyc-103體內(nèi)原位腫瘤的抑制活性進(jìn)行研究。首先采用3d纖維蛋白膠培養(yǎng)基(90-pa)孵育b16-f1細(xì)胞5天，篩選得到所需腫瘤再生細(xì)胞，隨后采用膠原酶和中性蛋白酶ii對培養(yǎng)基分別進(jìn)行處理，游離出腫瘤再生細(xì)胞，隨后將所得再生細(xì)胞移取至新制備培養(yǎng)基中并保持單細(xì)胞重懸狀態(tài)。

選取6只免疫活性小鼠并隨機(jī)分為給藥組和dmso陰性對照組兩個研究組，經(jīng)皮下注射分別注入30,000黑色素瘤再生細(xì)胞建立皮下植入黑色素瘤模型。隨后按照小鼠體重與血液體積，采用尾靜脈注射方式給藥。自第0天起，給藥組按照10μm血藥濃度每2天藥物wyc-103一次，正常飼養(yǎng)觀察小鼠生存情況，結(jié)果如下。經(jīng)19天實驗，給藥組皮下黑色素瘤體積明顯小于dmso對照組，經(jīng)統(tǒng)計分析可知給藥組腫瘤體積僅為對照組50％(圖12)。

為進(jìn)一步證實化合物wyc-103對于黑色素瘤b16-f1的皮下植入腫瘤的抑制作用，我們重復(fù)了該實驗。本次實驗則選取18只免疫活性小鼠(c57bl/6,雌性,6-8周)并隨機(jī)分為給藥組、陽性對照組(bms-453為陽性藥)和dmso陰性對照組三個研究組，經(jīng)皮下注射分別注入30,000黑色素瘤再生細(xì)胞建立黑色素瘤皮下植入模型。隨后按照小鼠體重與血液體積，采用尾靜脈注射方式給藥。自第0天起，給藥組按照10μm血藥濃度每2天注射藥物wyc-103一次；陽性對照組以bms-453(wyc-114)為陽性藥以相同方式給藥；陰性對照組則以相同方式注射0.1％dmso一次。

至實驗開始第20天，陽性藥物對照組小鼠全部死亡。至實驗開始第26天，給藥組和陰性對照組各50％小鼠死亡。經(jīng)統(tǒng)計此時給藥組小鼠腫瘤體積僅為陰性對照組50％，給藥組小鼠的皮下移植腫瘤生長均得到明顯抑制。而對小鼠體重研究顯示，給藥組小鼠的體重均穩(wěn)定、均衡，沒有觀察到明顯毒副作用(圖13，其中，drug3#表示wyc-103，drug14#表示bms-453)。陽性藥物對照組小鼠體重明顯減輕，顯示其存在較大個體毒副作用；而陰性對照組小鼠由于腫瘤體積巨大，體重上升明顯(圖14)。對各組小鼠進(jìn)一步解剖實驗顯示，陽性對照組死亡小鼠腹腔內(nèi)出現(xiàn)大量泡沫狀非正常結(jié)構(gòu)，可能是導(dǎo)致該組小鼠死亡的原因。而給藥組與陰性對照組小鼠腹腔內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)異常。該實驗顯示在皮下原位黑色素瘤抑制的藥效及整體毒副作用方面，wyc-103均大大優(yōu)于bms-453。

6、化合物wyc-103抑制黑色素瘤向肺部轉(zhuǎn)移的活性研究

為研究化合物wyc-103是否可以抑制黑色素瘤向肺部轉(zhuǎn)移從而阻止繼發(fā)性腫瘤發(fā)生，我們建立了小鼠黑色素瘤肺癌轉(zhuǎn)移模型。首先，隨機(jī)選取12只具有正常免疫功能的小鼠(c57bl/6,雌性,6-8周)為基體，經(jīng)尾靜脈注射3000黑色素瘤再生細(xì)胞進(jìn)入小鼠體內(nèi)建立肺癌轉(zhuǎn)移模型。將模型小鼠隨機(jī)分為給藥組和陰性對照組兩組，按照小鼠體重與血液體積，采用尾靜脈注射方式，將化合物wyc-103(給藥物)和dmso(陰性對照組)按照10μm血藥濃度及0.1％數(shù)量分別每兩天注射一次。

至實驗第29天，陰性對照組出現(xiàn)第1只病鼠死亡，為方便對比同時殺死1只給藥組小鼠，經(jīng)解剖可知，陰性對照組小鼠出現(xiàn)明顯的黑色素瘤肺部轉(zhuǎn)移腫瘤組織，而給藥組小鼠肺部組織一切正常。至實驗第35天，陰性對照組出現(xiàn)第2只病鼠死亡，陰性對照組小鼠出現(xiàn)大量黑色素瘤肺部轉(zhuǎn)移腫瘤組織，而對應(yīng)給藥組小鼠肺部組織一切正常。至實驗第37天，陰性對照組出現(xiàn)3只病鼠死亡，至此陰性對照組僅剩余1只小鼠，因此殺死兩組所有小鼠，并進(jìn)行解剖對比。經(jīng)解剖可知，3只陰性對照組小鼠出現(xiàn)嚴(yán)重黑色素瘤肺部轉(zhuǎn)移腫瘤組織，而給藥組小鼠肺部組織均一切正常。

經(jīng)實驗統(tǒng)計，陰性對照組6只小鼠中5只出現(xiàn)了明顯黑色素瘤肺部轉(zhuǎn)移腫瘤組織且全部病亡，剩余1只健康存活；而給藥組6只小鼠肺部組織均健康完整，且無任何黑色素瘤轉(zhuǎn)移侵入跡象，以100％的有效率阻止了轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的發(fā)生。同時經(jīng)統(tǒng)計分析，給藥組小鼠肺部平均重量僅為陰性對照組1/3(圖15，圖15e和15f中“+”表示有轉(zhuǎn)移，“-”表示沒有轉(zhuǎn)移)。

該實驗顯示，化合物wyc-103在10μm血藥濃度下能夠有效阻止黑色素瘤再生細(xì)胞向肺部轉(zhuǎn)移形成繼發(fā)性肺部腫瘤，而且在整個實驗過程中wyc-103都沒有表現(xiàn)出明顯毒副作用，很有希望進(jìn)一步用于人類轉(zhuǎn)移性癌癥的預(yù)防和治療。

7、化合物wyc-209抑制黑色素瘤向肺部轉(zhuǎn)移的活性研究

為研究化合物wyc-209是否可以抑制黑色素瘤向肺部轉(zhuǎn)移從而阻止繼發(fā)性腫瘤發(fā)生，我們開展了該項實驗。首先采用3d纖維蛋白膠培養(yǎng)基(90-pa)孵育b16-f1細(xì)胞5天，篩選得到所需腫瘤再生細(xì)胞，隨后采用膠原酶和中性蛋白酶ii對培養(yǎng)基分別進(jìn)行處理，游離出腫瘤再生細(xì)胞，將所得再生細(xì)胞移取至新制備培養(yǎng)基中并保持單細(xì)胞重懸狀態(tài)。隨后以免疫活性小鼠(c57bl/6,雌性,6-8周)為基體，隨機(jī)選取24只免疫活性小鼠，分為低劑量給藥組(1.0μm)、高劑量給藥組(10μm)和dmso陰性對照組三個研究組，每組各8只小鼠。經(jīng)尾靜脈注射30000黑色素瘤再生細(xì)胞(化合物wyc-103所用動物模型的十倍)進(jìn)入小鼠體內(nèi)，建立黑色素瘤b16-f1向肺部轉(zhuǎn)移模型。隨后按照小鼠體重與血液體積，采用尾靜脈注射方式給藥。自第5天起，給藥組分別按照1.0μm和10μm血藥濃度每2天靜脈注射藥物wyc-209一次，dmso組則以相同方式給予0.1％dmso作為陰性對照，此時各組小鼠體重?zé)o明顯差異。正常飼養(yǎng)觀察統(tǒng)計結(jié)果。

至實驗第23天，dmso組出現(xiàn)1只小鼠死亡(其肺組織圖見圖16a第8號圖)。至第30天將剩余全部小鼠殺死，dmso組8只小鼠中的6只小鼠肺部出現(xiàn)明顯黑色素瘤轉(zhuǎn)移組織，肝臟及胃臟未發(fā)現(xiàn)異常(具體見圖16a第1～7號圖)。同期(第29日夜)，1.0μm給藥組出現(xiàn)1只小鼠死亡(肺組織圖片見圖16b第8號圖)；1.0μm給藥組8只小鼠中的4只小鼠肺部出現(xiàn)黑色素瘤轉(zhuǎn)移組織，肝臟及胃臟未發(fā)現(xiàn)異常(圖16b第1～7號圖為實驗30天的肺組織圖)。同期，10μm給藥組8只小鼠中僅1只小鼠肺部出現(xiàn)黑色素瘤轉(zhuǎn)移組織，肝臟及胃臟未發(fā)現(xiàn)異常。即至第30天，dmso組6只小鼠(75％)罹患肺部轉(zhuǎn)移黑色素瘤，1.0μm給藥組4只小鼠(50％)罹患肺部轉(zhuǎn)移黑色素瘤，而10μm給藥組僅1只小鼠(12.5％)罹患肺部轉(zhuǎn)移黑色素瘤(具體見圖16c，其中，第1～5號圖為實驗30天的肺組織圖，第6～8號圖分別表示實驗29、24、20的肺組織圖)。各組小鼠肺部組織重量同樣出現(xiàn)明顯統(tǒng)計學(xué)差異，dmso組>1.0μm給藥組>10μm給藥組(圖16中“+”表示有轉(zhuǎn)移，“-”表示沒有轉(zhuǎn)移)。

該實驗顯示，化合物wyc-209在1.0μm血藥濃度下即可50％有效阻止黑色素瘤再生細(xì)胞向肺部轉(zhuǎn)移形成繼發(fā)性肺部腫瘤，在10.0μm血藥濃度下則可以87.5％的有效率阻止黑色素瘤再生細(xì)胞向肺部轉(zhuǎn)移形成繼發(fā)性肺部腫瘤。對照dmso組75％的肺部轉(zhuǎn)移黑色素瘤致死率，wyc-209在免疫功能完全的小鼠體內(nèi)試驗中表現(xiàn)出了強(qiáng)大的繼發(fā)性腫瘤抑制乃至治愈活性。同時，在整個實驗過程中wyc-209都沒有表現(xiàn)出明顯毒副作用，很有希望進(jìn)一步用于人類多種原發(fā)或轉(zhuǎn)移性癌癥的預(yù)防和治療。

總之，通過以上體外活性實驗研究實施例表明，化合物wyc-103、wyc-209和wyc-331等的對黑色素瘤再生細(xì)胞都有很強(qiáng)的抑制作用，對黑色素再生細(xì)胞抑制活性ic50分別達(dá)到了0.45μm、0.25μm和0.017μm。wyc-209對于肺癌細(xì)胞a549、乳腺癌細(xì)胞mcf-7、黑色素瘤細(xì)胞mda-mb-435s、卵巢癌細(xì)胞a2780、胃癌細(xì)胞hs-746t、乳腺癌細(xì)胞mda-mb-231等腫瘤再生細(xì)胞都有強(qiáng)烈抑制作用。

體內(nèi)活性實驗研究實施例證實，wyc-103對于小鼠皮下移植黑色素瘤具有強(qiáng)烈的抑制作用，與空白組對照，在10μm工作濃度條件下，瘤株體積僅為空白對照組50％。在10μm工作濃度條件下，wyc-103和wyc-209分別以100％和87％的有效率抑制了黑色素瘤再生細(xì)胞向肺部轉(zhuǎn)移，為人類腫瘤的轉(zhuǎn)移預(yù)防和治療帶來全新治療方案。

體外實驗實施例還證實，wyc-209和wyc-331對3t3細(xì)胞克隆體的生長沒有影響，也不能誘導(dǎo)3t3細(xì)胞凋亡。同時，wyc-103和wyc-209的體內(nèi)外活性研究實施例證實這些化合物具有很高的安全性。通過以上生物學(xué)研究實施例可知，本專利涉及化合物為白血病、淋巴癌、原發(fā)實體瘤和轉(zhuǎn)移性腫瘤的預(yù)防和治療提供了新的可能。