本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，具體地，涉及誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化方法及其應(yīng)用，更具體地，涉及誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法、用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的試劑盒和用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
：近年來(lái)由于血液來(lái)源緊張以及輸血相關(guān)疾病的發(fā)生使人們期望尋找更為安全、充足的血液來(lái)源。研究表明干細(xì)胞在體外能夠誘導(dǎo)紅系分化為紅細(xì)胞可作為新的血液來(lái)源。除了成熟紅細(xì)胞外，紅系祖細(xì)胞也可以替代臨床紅細(xì)胞輸注，發(fā)揮其造血支持治療作用，而且紅系祖細(xì)胞能夠在體內(nèi)繼續(xù)增殖，對(duì)于很多需要反復(fù)輸血治療的患者，有望減少輸血次數(shù)以及輸血產(chǎn)生的副作用，從而，紅系祖細(xì)胞為臨床血液供應(yīng)提供新的替代途徑。然而，目前的紅系祖細(xì)胞擴(kuò)增和誘導(dǎo)體系，還存在增殖和誘導(dǎo)紅系分化效率低等問(wèn)題，仍需改進(jìn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法，該方法的擴(kuò)增和誘導(dǎo)紅系分化效率高。因而，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：利用第一培養(yǎng)基對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，以便得到擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞，其中，所述第一培養(yǎng)基為添加了第一添加劑的stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基或scgm無(wú)血清培養(yǎng)基，且所述第一添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、重組人促紅素、白介素-3、白介素-6和fms樣酪氨酸激酶3的至少一種；以及利用第二培養(yǎng)基對(duì)所述擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞進(jìn)行第二培養(yǎng)，以便得到紅系祖細(xì)胞，其中，所述第二培養(yǎng)基為添加了第二添加劑的scgm無(wú)血清培養(yǎng)基，且所述第二添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子1、重組人促紅素、轉(zhuǎn)鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和類脂的至少一種。發(fā)明人驚奇的發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明的方法，采用無(wú)血清培養(yǎng)體系，先利用含有擴(kuò)增因子的第一添加劑進(jìn)行第一培養(yǎng)培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖，再利用含有誘導(dǎo)因子的第二添加劑進(jìn)行第二培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的誘導(dǎo)紅系分化，相對(duì)于用單一的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)紅系分化培養(yǎng)，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)顯著提高，并且誘導(dǎo)紅系分化的效果更好。此外，相對(duì)于stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，scgm無(wú)血清培養(yǎng)基價(jià)格低，進(jìn)而，利用本發(fā)明的方法誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化，成本顯著降低。另外，根據(jù)本發(fā)明上述實(shí)施例的誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法，還可以具有如下附加的技術(shù)特征：根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述第一培養(yǎng)基為添加了第一添加劑的stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在所述第一培養(yǎng)基中，所述重組人干細(xì)胞因子的濃度為40-60ng/ml，優(yōu)選地，為50ng/ml；所述重組人促紅素的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述白介素-3的濃度為15-25ng/ml，優(yōu)選地，為20ng/ml；所述白介素-6的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述fms樣酪氨酸激酶3的濃度為40-60ng/ml，優(yōu)選地，為50ng/ml。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在所述第二培養(yǎng)基中，所述重組人干細(xì)胞因子的濃度為80-120ng/ml，優(yōu)選地，為100ng/ml；所述胰島素樣生長(zhǎng)因子1的濃度為30-50ng/μl，優(yōu)選地，為40ng/μl；所述重組人促紅素的濃度為3-7u/ml，優(yōu)選地，為5u/ml；所述轉(zhuǎn)鉄蛋白的濃度為80-120μg/ml，優(yōu)選地，為100μg/ml；所述地塞米松的濃度為0.8-1.2μm，優(yōu)選地，為1μm；所述谷胺酰胺的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm；所述類脂的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述第一培養(yǎng)的時(shí)間為5-10天，優(yōu)選地，為7天。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述第二培養(yǎng)的時(shí)間為10-21天，優(yōu)選地，為17天。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該試劑盒包括：第一培養(yǎng)基，所述第一培養(yǎng)基用于對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，以便得到擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞；以及第二培養(yǎng)基，所述第二培養(yǎng)基用于對(duì)所述擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞進(jìn)行第二培養(yǎng)，以便得到紅系祖細(xì)胞，其中，所述第一培養(yǎng)基和所述第二培養(yǎng)基是如前述的對(duì)誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法定義的。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的試劑盒，第一培養(yǎng)基具有含擴(kuò)增因子的第一添加劑，該第一培養(yǎng)基對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖，第二培養(yǎng)基具有含誘導(dǎo)因子的第二添加劑，該第二培養(yǎng)基對(duì)擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞進(jìn)行第二培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的誘導(dǎo)和紅系分化，相對(duì)于用單一的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)紅系分化培養(yǎng)，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)顯著提高，并且誘導(dǎo)紅系分化的效果更好。此外，相對(duì)于stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，scgm無(wú)血清培養(yǎng)基價(jià)格低，進(jìn)而，利用本發(fā)明的試劑盒對(duì)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的成本顯著降低。根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明提供了一種用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該系統(tǒng)包括：第一培養(yǎng)裝置，所述第一培養(yǎng)裝置用于利用第一培養(yǎng)基對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，以便得到擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞；以及第二培養(yǎng)裝置，所述第二培養(yǎng)裝置與所述第一培養(yǎng)裝置相連，所述第二培養(yǎng)裝置用于利用第二培養(yǎng)基對(duì)所述擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞進(jìn)行第二培養(yǎng)，以便得到紅系祖細(xì)胞，其中，所述第一培養(yǎng)基和所述第二培養(yǎng)基是如前述的對(duì)誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法定義的。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的系統(tǒng)，第一培養(yǎng)裝置具有含擴(kuò)增因子的第一添加劑，該第一培養(yǎng)裝置對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖，第二培養(yǎng)裝置具有含誘導(dǎo)因子的第二添加劑，該第二培養(yǎng)裝置對(duì)擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞 進(jìn)行第二培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的誘導(dǎo)紅系分化，相對(duì)于用單一的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)紅系分化培養(yǎng)，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)顯著提高，并且誘導(dǎo)紅系分化的效果更好。此外，相對(duì)于stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，scgm無(wú)血清培養(yǎng)基價(jià)格低，進(jìn)而，利用本發(fā)明的系統(tǒng)對(duì)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的成本顯著降低。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過(guò)本發(fā)明的實(shí)踐了解到。附圖說(shuō)明本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對(duì)實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中：圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法的流程示意圖；圖2顯示了僅采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖；圖3顯示了僅采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖；圖4顯示了僅采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖；圖5顯示了僅采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖；圖6顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的對(duì)單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)擴(kuò)增得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖；圖7顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的對(duì)單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)擴(kuò)增得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖；圖8顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的對(duì)單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)擴(kuò)增得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖；圖9顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的對(duì)單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)擴(kuò)增得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖；圖10顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的對(duì)單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)擴(kuò)增得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖；圖11顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的對(duì)單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)擴(kuò)增得到的紅系祖細(xì)胞的表面標(biāo)志表達(dá)情況示意圖。具體實(shí)施方式下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標(biāo)號(hào)表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過(guò)參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。在本發(fā)明的描述中，術(shù)語(yǔ)“縱向”、“橫向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“豎直”、“水平”、“頂”、“底”等指示的方位或位置關(guān)系為基于附圖所示的方位或位置關(guān)系，僅是為了便于描述本發(fā)明而不是要求本發(fā)明必須以特定的方位構(gòu)造和操作，因此不能理 解為對(duì)本發(fā)明的限制。需要說(shuō)明的是，術(shù)語(yǔ)“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對(duì)重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括一個(gè)或者更多個(gè)該特征。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的描述中，除非另有說(shuō)明，“多個(gè)”的含義是兩個(gè)或兩個(gè)以上。誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法。參考圖1，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)該方法進(jìn)行解釋說(shuō)明，該方法包括：s100第一培養(yǎng)根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，利用第一培養(yǎng)基對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，以便得到擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞，其中，所述第一培養(yǎng)基為添加了第一添加劑的stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基或scgm無(wú)血清培養(yǎng)基，且所述第一添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、重組人促紅素、白介素-3、白介素-6和fms樣酪氨酸激酶3的至少一種。由此，利用含有擴(kuò)增因子的第一添加劑進(jìn)行第一培養(yǎng)培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，第一培養(yǎng)基為添加了第一添加劑的stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基。由此，造血干細(xì)胞誘導(dǎo)紅系分化的效果更佳。根據(jù)本發(fā)明的一些具體實(shí)施例，在所述第一培養(yǎng)基中，所述重組人干細(xì)胞因子的濃度為40-60ng/ml，優(yōu)選地，為50ng/ml；所述重組人促紅素的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述白介素-3的濃度為15-25ng/ml，優(yōu)選地，為20ng/ml；所述白介素-6的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述fms樣酪氨酸激酶3的濃度為40-60ng/ml，優(yōu)選地，為50ng/ml。由此，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)高，誘導(dǎo)紅系分化效果好。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，第一培養(yǎng)的時(shí)間為5-10天。由此，培養(yǎng)得到的擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞的活性高。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，第一培養(yǎng)的時(shí)間為7天。由此，處于指數(shù)生長(zhǎng)期的擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞，形態(tài)好，細(xì)胞的活性更高，有利于誘導(dǎo)紅系分化。基于上述描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以了解，第一培養(yǎng)基為添加了第一添加劑的stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基或scgm無(wú)血清培養(yǎng)基，優(yōu)選地，為添加了第一添加劑的stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，其中，第一添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、重組人促紅素、白介素-3、白介素-6和fms樣酪氨酸激酶3的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，在第一培養(yǎng)基中，重組人干細(xì)胞因子的濃度為40-60ng/ml，優(yōu)選地，為50ng/ml；所述重組人促紅素的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述白介素-3的濃度為15-25ng/ml，優(yōu)選地，為20ng/ml；所述白介素-6的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述fms樣酪氨酸激酶3的濃度為40-60ng/ml，優(yōu)選地，為50ng/ml。s200第二培養(yǎng)根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，利用第二培養(yǎng)基對(duì)所述擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞進(jìn)行第二培養(yǎng)，以便得到紅系祖細(xì)胞，其中，所述第二培養(yǎng)基為添加了第二添加劑的scgm無(wú)血清培養(yǎng)基，且 所述第二添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子1、重組人促紅素、轉(zhuǎn)鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和類脂的至少一種。利用含有誘導(dǎo)因子的第二添加劑進(jìn)行第二培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的誘導(dǎo)紅系分化。此外，相對(duì)于傳統(tǒng)常用的stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，scgm培無(wú)血清養(yǎng)基價(jià)格低，進(jìn)而，利用第二培養(yǎng)基對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)和擴(kuò)增，成本顯著降低。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在所述第二培養(yǎng)基中，所述重組人干細(xì)胞因子的濃度為80-120ng/ml，優(yōu)選地，為100ng/ml；所述胰島素樣生長(zhǎng)因子1的濃度為30-50ng/μl，優(yōu)選地，為40ng/μl；所述重組人促紅素的濃度為3-7u/ml，優(yōu)選地，為5u/ml；所述轉(zhuǎn)鉄蛋白的濃度為80-120μg/ml，優(yōu)選地，為100μg/ml；所述地塞米松的濃度為0.8-1.2μm，優(yōu)選地，為1μm；所述谷胺酰胺的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm；所述類脂的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm。由此，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)高，誘導(dǎo)紅系分化效果好。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述第二培養(yǎng)的時(shí)間為10-21天。由此，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)高，細(xì)胞的活性好。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，所述第二培養(yǎng)的時(shí)間為17天。由此，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)高，細(xì)胞的活性更佳?；谏鲜雒枋?，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以了解，第二培養(yǎng)基為添加了第二添加劑的scgm無(wú)血清培養(yǎng)基，其中，第二添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子1、重組人促紅素、轉(zhuǎn)鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和類脂的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，在第二培養(yǎng)基中，所述重組人干細(xì)胞因子的濃度為80-120ng/ml，優(yōu)選地，為100ng/ml；所述胰島素樣生長(zhǎng)因子1的濃度為30-50ng/μl，優(yōu)選地，為40ng/μl；所述重組人促紅素的濃度為3-7u/ml，優(yōu)選地，為5u/ml；所述轉(zhuǎn)鉄蛋白的濃度為80-120μg/ml，優(yōu)選地，為100μg/ml；所述地塞米松的濃度為0.8-1.2μm，優(yōu)選地，為1μm；所述谷胺酰胺的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm；所述類脂的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm。其中，類脂可以為類脂替代物(chemicallydefinedlipidconcentrate)(gibco，100x)，使用時(shí)終濃度為1x。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法，先利用含有擴(kuò)增因子的第一添加劑進(jìn)行第一培養(yǎng)培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖，再利用含有誘導(dǎo)因子的第二添加劑進(jìn)行第二培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的誘導(dǎo)紅系分化，相對(duì)于用單一的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)紅系分化培養(yǎng)，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)顯著提高，并且誘導(dǎo)紅系分化的效果更好。此外，相對(duì)于stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，scgm無(wú)血清培養(yǎng)基價(jià)格低，進(jìn)而，利用本發(fā)明的方法對(duì)造血干細(xì)胞的擴(kuò)增和紅系分化，成本顯著降低。用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的試劑盒根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該試劑盒包括：第一培養(yǎng)基，所述第一培養(yǎng)基用于對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，以便得到擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞；以及第二培養(yǎng)基，所述第二培養(yǎng)基用于對(duì)所述擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞進(jìn)行第二培養(yǎng)，以便得到紅系祖細(xì)胞，其中，所述第一培養(yǎng)基和所述第二培養(yǎng)基是如前述的對(duì)誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法定義的，具體描述如 下：根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，第一培養(yǎng)基為添加了第一添加劑的stemspan培養(yǎng)基或scgm培養(yǎng)基，優(yōu)選地，為添加了第一添加劑的stemspan培養(yǎng)基，其中，第一添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、重組人促紅素、白介素-3、白介素-6和fms樣酪氨酸激酶3的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，在第一培養(yǎng)基中，重組人干細(xì)胞因子的濃度為40-60ng/ml，優(yōu)選地，為50ng/ml；所述重組人促紅素的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述白介素-3的濃度為15-25ng/ml，優(yōu)選地，為20ng/ml；所述白介素-6的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述fms樣酪氨酸激酶3的濃度為40-60ng/ml，優(yōu)選地，為50ng/ml。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，第二培養(yǎng)基為添加了第二添加劑的scgm培養(yǎng)基，其中，第二添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子1、重組人促紅素、轉(zhuǎn)鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和類脂的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，在第二培養(yǎng)基中，所述重組人干細(xì)胞因子的濃度為80-120ng/ml，優(yōu)選地，為100ng/ml；所述胰島素樣生長(zhǎng)因子1的濃度為30-50ng/μl，優(yōu)選地，為40ng/μl；所述重組人促紅素的濃度為3-7u/ml，優(yōu)選地，為5u/ml；所述轉(zhuǎn)鉄蛋白的濃度為80-120μg/ml，優(yōu)選地，為100μg/ml；所述地塞米松的濃度為0.8-1.2μm，優(yōu)選地，為1μm；所述谷胺酰胺的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm；所述類脂的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的試劑盒，第一培養(yǎng)基具有含擴(kuò)增因子的第一添加劑，該第一培養(yǎng)基對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖，第二培養(yǎng)基具有含誘導(dǎo)因子的第二添加劑，該第二培養(yǎng)基對(duì)擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞進(jìn)行第二培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的誘導(dǎo)紅系分化，相對(duì)于用單一的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)紅系分化培養(yǎng)，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)顯著提高，并且誘導(dǎo)紅系分化的效果更好。此外，相對(duì)于stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，scgm無(wú)血清培養(yǎng)基價(jià)格低，進(jìn)而，利用本發(fā)明的試劑盒對(duì)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的成本顯著降低。用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的系統(tǒng)根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明提供了一種用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該系統(tǒng)包括：第一培養(yǎng)裝置，所述第一培養(yǎng)裝置用于利用第一培養(yǎng)基對(duì)所述造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，以便得到擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞；以及第二培養(yǎng)裝置，所述第二培養(yǎng)裝置與所述第一培養(yǎng)裝置相連，所述第二培養(yǎng)裝置用于利用第二培養(yǎng)基對(duì)所述擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞進(jìn)行第二培養(yǎng)，以便得到紅系祖細(xì)胞，其中，所述第一培養(yǎng)基和所述第二培養(yǎng)基是如前述的對(duì)誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法定義的，具體描述如下：根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，第一培養(yǎng)基為添加了第一添加劑的stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基或scgm無(wú)血清培養(yǎng)基，優(yōu)選地，為添加了第一添加劑的stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，其中，第一添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、重組人促紅素、白介素-3、白介素-6和fms樣酪氨酸激酶3的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，在第一培養(yǎng)基中，重組人干細(xì)胞因子的濃度為40-60ng/ml， 優(yōu)選地，為50ng/ml；所述重組人促紅素的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述白介素-3的濃度為15-25ng/ml，優(yōu)選地，為20ng/ml；所述白介素-6的濃度為5-15ng/ml，優(yōu)選地，為10ng/ml；所述fms樣酪氨酸激酶3的濃度為40-60ng/ml，優(yōu)選地，為50ng/ml。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，第二培養(yǎng)基為添加了第二添加劑的scgm無(wú)血清培養(yǎng)基，其中，第二添加劑為選自重組人干細(xì)胞因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子1、重組人促紅素、轉(zhuǎn)鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和類脂的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，在第二培養(yǎng)基中，所述重組人干細(xì)胞因子的濃度為80-120ng/ml，優(yōu)選地，為100ng/ml；所述胰島素樣生長(zhǎng)因子1的濃度為30-50ng/μl，優(yōu)選地，為40ng/μl；所述重組人促紅素的濃度為3-7u/ml，優(yōu)選地，為5u/ml；所述轉(zhuǎn)鉄蛋白的濃度為80-120μg/ml，優(yōu)選地，為100μg/ml；所述地塞米松的濃度為0.8-1.2μm，優(yōu)選地，為1μm；所述谷胺酰胺的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm；所述類脂的濃度為1.5-2.5mm，優(yōu)選地，為2mm。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的用于誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的系統(tǒng)，第一培養(yǎng)裝置具有含擴(kuò)增因子的第一添加劑，該第一培養(yǎng)裝置對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行第一培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖，第二培養(yǎng)裝置具有含誘導(dǎo)因子的第二添加劑，該第二培養(yǎng)裝置對(duì)擴(kuò)增后的造血干細(xì)胞進(jìn)行第二培養(yǎng)，促進(jìn)造血干細(xì)胞的誘導(dǎo)紅系分化為紅系祖細(xì)胞，相對(duì)于單一的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)紅系分化培養(yǎng)，細(xì)胞的增殖速率顯著提高，并且誘導(dǎo)紅系分化的效果更好。此外，相對(duì)于stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，scgm無(wú)血清培養(yǎng)基價(jià)格低，進(jìn)而，利用本發(fā)明的系統(tǒng)對(duì)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的成本顯著降低。下面參考具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，需要說(shuō)明的是，這些實(shí)施例僅僅是說(shuō)明性的，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方案進(jìn)行解釋。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下面的實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件(例如參考j.薩姆布魯克等著，黃培堂等譯的《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》，第三版，科學(xué)出版社)或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品，例如可以采購(gòu)自gibico公司。對(duì)比例在本對(duì)比例中，僅利用單一的誘導(dǎo)培養(yǎng)基將臍血單個(gè)核細(xì)胞體外進(jìn)行誘導(dǎo)紅系分化培養(yǎng)，得到紅系祖細(xì)胞，具體如下：1、材料臍血單個(gè)核細(xì)胞：將羥乙基淀粉與臍血(該臍血為足月妊娠健康胎兒臍血，來(lái)源于武警總醫(yī)院。)按1：3-1：5的比例混合，沉降紅細(xì)胞20-30min，取上清，離心，將細(xì)胞懸于生理鹽水中，在加入人淋巴細(xì)胞分離液的試管中緩慢加入等體積的細(xì)胞懸液，離心，分離中間白膜層即單個(gè)核細(xì)胞。stemspan誘導(dǎo)培養(yǎng)基：含100ng/mlscf、40ng/uligf-1、5u/mlepo、100ug/ml轉(zhuǎn)鉄蛋 白、1um地塞米松、2mm谷胺酰胺及類脂的stemspan培養(yǎng)基。scgm誘導(dǎo)培養(yǎng)基：含100ng/mlscf、40ng/uligf-1、5u/mlepo、100ug/ml轉(zhuǎn)鉄蛋白、1um地塞米松、2mm谷胺酰胺及類脂的scgm培養(yǎng)基。2、實(shí)驗(yàn)方法將臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分為兩組，即stemspan組和scgm組，分別采用stemspan誘導(dǎo)培養(yǎng)基和scgm誘導(dǎo)培養(yǎng)基，利用t75細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37攝氏度，5％co2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)體積均為20ml，細(xì)胞密度約為4x106/ml。待培養(yǎng)至第14天時(shí)，分別對(duì)細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)檢測(cè)。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別對(duì)兩組細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞存活率和細(xì)胞數(shù)檢測(cè)，以及利用流式細(xì)胞儀測(cè)定經(jīng)體外誘導(dǎo)的細(xì)胞的紅系祖細(xì)胞表面標(biāo)志的表達(dá)情況。其中，體外誘導(dǎo)14天的細(xì)胞存活率和擴(kuò)增倍數(shù)和細(xì)胞表達(dá)檢測(cè)結(jié)果見下表1其中，。細(xì)胞表面標(biāo)志的表達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)：分別取兩組誘導(dǎo)第14天的細(xì)胞離心收集，生理鹽水洗滌后將其分別置于兩管中，分別加入抗人cd71-pe、cd235a-fitc抗體和同型對(duì)照鼠igg1，k-pe、igg2b，k-fitc抗體，4℃，30min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)cd71、cd235a的表達(dá)，具體結(jié)果見圖2-5，其中，圖2和3為利用scgm誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)的檢測(cè)結(jié)果，圖2為陰性對(duì)照；圖4和5為利用stemspan誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)的檢測(cè)結(jié)果，圖4為陰性對(duì)照。表1體外誘導(dǎo)14天紅系祖細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)組別存活率％擴(kuò)增倍數(shù)cd235a+％cd71+/cd235+％stemspan組91.50±1.0810.6817.31±1.4417.30±1.43scgm組93.23±1.36*12.2735.09±2.96**35.04±2.97**其中，*表示具有顯著差異，**表示具有極顯著差異。實(shí)施例11、材料臍血單個(gè)核細(xì)胞：將羥乙基淀粉與臍血(所述臍血為足月妊娠健康胎兒臍血，來(lái)源于武警總醫(yī)院。)按1：3-1：5的比例混合，沉降紅細(xì)胞20-30min，取上清，離心，將細(xì)胞懸于生理鹽水中，在加入人淋巴細(xì)胞分離液的試管中緩慢加入等體積的細(xì)胞懸液，離心，分離中間白膜層即單個(gè)核細(xì)胞。stemspan擴(kuò)增培養(yǎng)基：含50ng/mlscf、10ng/mltpo、20ng/mlil-3、10ng/mlil-6、50ng/mlflt3的stemspan培養(yǎng)基。scgm擴(kuò)增培養(yǎng)基：含50ng/mlscf、10ng/mltpo、20ng/mlil-3、10ng/mlil-6、50ng/mlflt3的scgm培養(yǎng)基。stemspan誘導(dǎo)培養(yǎng)基：含100ng/mlscf、40ng/μligf-1、5u/mlepo、100μg/ml轉(zhuǎn)鉄蛋白、1μm地塞米松、2mm谷胺酰胺及類脂的stemspan培養(yǎng)基。scgm誘導(dǎo)培養(yǎng)基：含100ng/mlscf、40ng/μligf-1、5u/mlepo、100μg/ml轉(zhuǎn)鉄蛋白、1μm地塞米松、2mm谷胺酰胺及類脂的scgm培養(yǎng)基。2、實(shí)驗(yàn)方法臍血單個(gè)核細(xì)胞平均分為3組，分別為stem+stem組、stem+scgm組和scgm+scgm組，其中，stem+stem組采用stemspan擴(kuò)增培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，采用stemspan誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，stem+scgm組采用stemspan擴(kuò)增培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，采用scgm誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，scgm+scgm組采用scgm擴(kuò)增培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，采用scgm誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。臍血單個(gè)核細(xì)胞體外擴(kuò)增7天，然后離心，去上清，將細(xì)胞接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中再誘導(dǎo)培養(yǎng)14天，21天檢測(cè)細(xì)胞存活率、擴(kuò)增倍數(shù)、cd235a、cd71/cd235a的表達(dá)。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果誘導(dǎo)14天細(xì)胞的生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果如表2和圖6-11所示，stem+scgm組和scgm+scgm組細(xì)胞存活率、擴(kuò)增倍數(shù)均高于stem+stem組。與stem+stem組和scgm+scgm組相比，stem+scgm組cd235a+表達(dá)差別非常顯著(p<0.01)，cd71+/cd235+表達(dá)差別顯著(p<0.05)。而stem+scgm組與scgm+scgm組相比，存活率無(wú)顯著差別，(p>0.05)。stem+stem組與scgm+scgm組相比，cd71+/cd235+、cd235a+表達(dá)均無(wú)顯著差別(p>0.05)。具體結(jié)果見圖6-11，其中，圖6和7為stem+stem組的檢測(cè)結(jié)果，圖6為陰性對(duì)照；圖8和9為stem+scgm組的檢測(cè)結(jié)果，圖8為陰性對(duì)照；圖10和11為scgm+scgm組的檢測(cè)結(jié)果，圖10為陰性對(duì)照。誘導(dǎo)21天細(xì)胞的生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果如表3所示。與stem+stem組相比，細(xì)胞存活率、cd235a+、cd71+/cd235+表達(dá)差別顯著(p<0.05)。與體外造血干細(xì)胞擴(kuò)增7天，紅系誘導(dǎo)14天相比，體外擴(kuò)增7d，紅系誘導(dǎo)21天，細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、紅系表達(dá)均明顯增加。但存活率有所降低。表2體外擴(kuò)增7天后誘導(dǎo)14天細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)組別存活率％擴(kuò)增倍數(shù)cd235a+％cd71+/cd235+％stem+stem組62.65±3.75151.1388.60±0.2887.80±0.28stem+scgm組86.45±0.64*46592.20±0.42**90.95±0.49*scgm+scgm組85.55±0.64*610.6989.45±0.2186.95±0.21表3體外擴(kuò)增7天后誘導(dǎo)21天細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)組別存活率％擴(kuò)增倍數(shù)cd235a+％cd71+/cd235+％stem+stem組51.76±0.45252.7296.15±0.0791.55±0.49stem+scgm組80.35±0.64*1195.5698.55±0.07*96.45±0.07*scgm+scgm組80.00±1.70*1283.0498.50±0.28*96.05±0.07*其中，*表示具有顯著差異。綜上所述，本實(shí)施例分別采用擴(kuò)增培養(yǎng)基和誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)單個(gè)核細(xì)胞分兩個(gè)階段進(jìn)行培 養(yǎng)，即擴(kuò)增培養(yǎng)和誘導(dǎo)培養(yǎng)，與對(duì)比例僅采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)相比，在細(xì)胞存活率無(wú)明顯變化的情況下，擴(kuò)增倍數(shù)增加了幾十倍，cd71+/cd235+、cd235a+表達(dá)也提高了近一倍，尤其是stem+scgm組和scgm+scgm組效果更佳。結(jié)果表明，相對(duì)于對(duì)比例傳統(tǒng)的用單一的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)紅系分化培養(yǎng)，本實(shí)施的對(duì)誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的方法，細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)顯著提高，并且誘導(dǎo)紅系分化的效果更好。此外，相對(duì)于stemspan無(wú)血清培養(yǎng)基，scgm無(wú)血清培養(yǎng)基價(jià)格低，進(jìn)而，利用本實(shí)施例的方法對(duì)造血干祖細(xì)胞增殖和紅系分化的成本顯著降低。在本說(shuō)明書的描述中，參考術(shù)語(yǔ)“一個(gè)實(shí)施例”、“一些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施例或示例中。在本說(shuō)明書中，對(duì)上述術(shù)語(yǔ)的示意性表述不一定指的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任何的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解：在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求及其等同物限定。當(dāng)前第1頁(yè)12