本發(fā)明涉及化合物，其是合成具有藥理活性的膽汁酸衍生物的中間體。特別地，本發(fā)明涉及在合成奧貝膽酸(obeticholicacid)及其類(lèi)似物時(shí)的中間體。此外，本發(fā)明涉及合成這些中間體的方法，以及由本發(fā)明化合物來(lái)制備奧貝膽酸及奧貝膽酸類(lèi)似物的方法。膽汁酸是在哺乳動(dòng)物膽汁中發(fā)現(xiàn)的類(lèi)固醇酸，并且包括例如膽酸、鵝脫氧膽酸、石膽酸和脫氧膽酸的化合物，它們均發(fā)現(xiàn)于人中。多種膽汁酸是法尼醇x受體(farnesoidxreceptor，fxr)的天然配體，其表達(dá)于哺乳動(dòng)物包括人的肝和腸。膽汁酸是類(lèi)固醇的衍生物并且以相同的方式來(lái)編號(hào)。以下顯示了類(lèi)固醇的通用編號(hào)系統(tǒng)和鵝脫氧膽酸的碳原子的編號(hào)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)fxr的激動(dòng)劑用于治療膽汁郁積性肝障礙，包括原發(fā)性膽汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝炎(參見(jiàn)jonker等人的綜述,journalofsteroidbiochemistry&molecularbiology,2012,130,147-158)。熊脫氧膽酸(udca)，是最初從熊的膽囊中分離的膽汁酸，目前用來(lái)治療膽汁郁積性肝障礙，但是其似乎對(duì)于fxr無(wú)活性。除了它們對(duì)于fxr的作用，膽汁酸及其衍生物也是g蛋白偶聯(lián)受體tgr5的調(diào)節(jié)劑。這是g-蛋白偶聯(lián)受體的視紫質(zhì)樣超家族成員并且在膽汁酸信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)中有重要作用，其補(bǔ)充了fxr的作用。由于fxr和tgr5激動(dòng)劑在治療膽汁郁積性肝障礙中的重要性，已經(jīng)努力來(lái)開(kāi)發(fā)對(duì)于這些受體具有激動(dòng)劑活性的新化合物。一個(gè)特別有活性的化合物是奧貝膽酸，其是fxr及tgr5兩者的有效激動(dòng)劑。奧貝膽酸在wo02/072598和ep1568706中進(jìn)行了描述，此兩者描述了由7-酮基石膽酸(其衍生自膽酸)制備奧貝膽酸的方法。用于制備奧貝膽酸及其衍生物的其它方法在wo2006/122977、us2009/0062256和wo2013/192097中進(jìn)行了描述，并且所有這些方法均由7-酮基石膽酸開(kāi)始。由涉及制備奧貝膽酸的方法的專(zhuān)利公布的數(shù)量可清楚地知道，合成此化合物絕非簡(jiǎn)單，并且事實(shí)上，現(xiàn)今使用的方法由膽酸開(kāi)始，并且具有12個(gè)步驟和僅5-10％的總產(chǎn)率。除了該方法的無(wú)效率和高成本以外，起始材料的成本和可得性也是問(wèn)題。膽酸是現(xiàn)今制備奧貝膽酸的起始材料，其是通常由屠宰的牛和其它動(dòng)物中得到的天然膽汁酸。這意味著膽酸和其它膽汁酸的可得性受限于可屠宰的牛的數(shù)量，再者，膽汁酸的價(jià)格極高。由于膽汁郁積性肝病的發(fā)病率在全世界不斷增加，對(duì)合成的膽汁酸例如奧貝膽酸的需求也很可能會(huì)增加，并且令人懷疑的是是否天然衍生的膽汁酸的供應(yīng)將繼續(xù)足以滿(mǎn)足需求。再者，使用衍生自動(dòng)物的起始材料意味著該材料有被污染的可能性，該傳染物例如病毒，如果不采取措施來(lái)防止，其不僅可能危害工作者，并且可能潛在地污染最終產(chǎn)物。雖然有些患有膽汁郁積性肝病的患者可以用熊脫氧膽酸進(jìn)行治療，但是其也是天然膽汁酸并且同樣面對(duì)有限可得性和高成本的問(wèn)題。在嘗試解決與使用膽汁酸作為起始材料相關(guān)的問(wèn)題時(shí)，本發(fā)明人已經(jīng)設(shè)計(jì)出用于合成的膽汁酸衍生物例如奧貝膽酸的合成方法，其使用植物甾醇作為起始材料。植物甾醇由于成本比膽汁酸顯著更低而廣泛可獲得，并且實(shí)際上是其它方法中常見(jiàn)的廢棄產(chǎn)物。本發(fā)明人已經(jīng)開(kāi)發(fā)出由雙諾可烯醇(bis-norcholenol)(也稱(chēng)為20-羥基甲基孕-4-烯-3-酮)開(kāi)始制備合成的膽汁酸的方法，其通過(guò)新的中間體來(lái)進(jìn)行。因此，在本發(fā)明中，提供了通式(i)化合物：其中：r1是c1-4烷基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵代、or6或nr6r7的取代基取代；其中，r6和r7各自獨(dú)立地選自h或c1-4烷基；r2是h、鹵代或oh或在堿性條件下穩(wěn)定的保護(hù)的oh；y1是鍵或具有1至20個(gè)碳原子并且任選被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)r3取代的亞烷基連接基團(tuán)；r3各自獨(dú)立地是鹵代、or8或nr8r9；其中r8和r9各自獨(dú)立地選自h或c1-4烷基；并且r4是c(o)or10、oc(o)r10、c(o)nr10r11、or10、osi(r13)3、s(o)r10、so2r10、oso2r10、so3r10或oso3r10；其中，r10和r11各自獨(dú)立地是：a.氫或b.c1-20烷基、c2-20鏈烯基、c2-20炔基、-o-c1-20烷基、-o-c2-20鏈烯基或-o-c2-20炔基，其中任一個(gè)任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基取代：鹵代、no2、cn、or19、sr19、so2r19、so3r19或n(r19)2，或6-至14-元芳基或5-至14-元雜芳基，其中二者任一個(gè)任選被下列基團(tuán)取代：c1-6烷基、c1-6鹵代烷基、鹵代、no2、cn、or19、sr19、so2r19、so3r19或n(r19)2；或c.6-至14-元芳基或5-至14-元雜芳基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基取代：c1-6烷基、c1-6鹵代烷基、鹵代、no2、cn、or19、sr19、so2r19、so3r19或n(r19)2；d.聚乙二醇?xì)埢?；r19各自獨(dú)立地選自h、c1-6烷基、c1-6鹵代烷基，或6-至14-元芳基或5-至14-元雜芳基，它們?nèi)芜x被鹵代、c1-6烷基或c1-6鹵代烷基取代；r13各自獨(dú)立地是a.c1-20烷基、c2-20鏈烯基或c2-20炔基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基取代：鹵代、no2、cn、or19、sr19、so2r19、so3r19或n(r19)2，6-至14-元芳基或5-至14-元雜芳基，其中二者任一個(gè)任選被下列基團(tuán)取代：c1-6烷基、c1-6鹵代烷基、鹵代、no2、cn、or19、so2r19、so3r19或n(r19)2；或b.6-至14-元芳基或5-至14-元雜芳基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基取代：c1-6烷基、c1-6鹵代烷基、鹵代、no2、cn、or19、sr19、so2r19、so3r19或n(r19)2；r19各自獨(dú)立地選自h、c1-6烷基或c1-6鹵代烷基；r5b是h或oh或保護(hù)的oh；或其鹽或同位素變體。通式(i)化合物是合成藥物活性化合物例如奧貝膽酸及其衍生物的中間體。在本說(shuō)明書(shū)中，除非上下文中由于表達(dá)語(yǔ)言或必要含義而另外要求，否則“包括”一詞或變化例如“包含”或“含有”以包括在內(nèi)的含義使用，即指明所述特征的存在，但不排除在本發(fā)明的多種實(shí)施方案中其它特征的存在或添加。在本申請(qǐng)中，術(shù)語(yǔ)“c1-20”烷基是指直鏈或分支的具有1至20個(gè)碳原子的完全飽和烴基。該術(shù)語(yǔ)包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基和叔丁基。其它烷基，例如c1-20烷基、c1-6烷基或c1-3烷基如以上定義，但含有不同數(shù)目的碳原子。術(shù)語(yǔ)“c1-6鹵代烷基”是指如上定義的直鏈或分支烷基，其具有1至6個(gè)碳原子并且被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代，至多全鹵素取代。實(shí)例包括三氟甲基、氯乙基和1,1-二氟乙基。術(shù)語(yǔ)“c2-20鏈烯基”是指直鏈或分支的具有2至20個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳-碳雙鍵的烴基。實(shí)例包括乙烯基、丙-1-烯基、己-2-烯基等。術(shù)語(yǔ)“c2-20炔基”是指直鏈或分支的具有2至20個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳-碳三鍵的烴基。實(shí)例包括乙炔基、丙-1-炔基、己-2-炔基等。術(shù)語(yǔ)“亞烷基”是指直鏈或分支的完全飽和的烴鏈。亞烷基的實(shí)例包括-ch2-、-ch2ch2-、ch(ch3)-ch2-、ch2ch(ch3)-、-ch2ch2ch2-、-ch2ch(ch2ch3)-和-ch2ch(ch2ch3)ch2-。術(shù)語(yǔ)“亞鏈烯基”是指直鏈或分支的含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵的烴鏈。亞鏈烯基的實(shí)例包括-ch＝ch-、-ch＝c(ch3)-、-ch2ch＝ch-、-ch＝chch2-、ch2ch2ch＝ch-、ch2ch＝c(ch3)-和-ch2ch＝c(ch2ch3)-。術(shù)語(yǔ)“亞炔基”是指直鏈或分支的含有至少一個(gè)碳-碳三鍵的烴鏈。亞炔基的實(shí)例包括-c≡c-、-ch2c≡c-、-c≡c-ch2-、ch2ch2c≡c-、ch2c≡cch2-和-ch2ch≡c-ch2ch2-。術(shù)語(yǔ)“芳基”和“芳族”是指具有6至14個(gè)環(huán)碳原子(除非另有指明)并且含有至多三個(gè)環(huán)的具有芳族特性的環(huán)基團(tuán)。當(dāng)芳基含有多于一個(gè)環(huán)時(shí)，并非所有的環(huán)在特性上必須為芳族。實(shí)例包括苯基、萘基和蒽基以及部分飽和的系統(tǒng)，例如四氫萘基、茚滿(mǎn)基和茚基。術(shù)語(yǔ)“雜芳基”和“雜芳族”是指環(huán)基團(tuán)，其具有芳族特性，具有5至14個(gè)環(huán)原子(除非另有指明)，其中至少一個(gè)是選自n、o和s的雜原子，并且含有至多三個(gè)環(huán)。當(dāng)雜芳基含有多于一個(gè)環(huán)時(shí)，并非所有的環(huán)在特性上必須為芳族。雜芳基的實(shí)例包括吡啶、嘧啶、吲哚、苯并呋喃、苯并咪唑和吲哚烯(indolene)。術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、氯、溴或碘，并且術(shù)語(yǔ)“鹵代”是指氟、氯、溴或碘基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、氯、溴或碘，并且術(shù)語(yǔ)“鹵代”是指氟、氯、溴或碘基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“保護(hù)的oh”涉及用任何適合的保護(hù)基保護(hù)的oh基團(tuán)。例如，該保護(hù)的oh可以是如上定義的基團(tuán)r4。適合的保護(hù)基包括酯，從而例如當(dāng)r2和/或r5是保護(hù)的oh時(shí)，r2和/或r5可以獨(dú)立地是基團(tuán)oc(o)r14，其中r14是如上定義的基團(tuán)r10。甲硅烷基醚也是適合的，并且在這種情況中，r2和/或r5可以獨(dú)立地是基團(tuán)osi(r16)3，其中r16各自獨(dú)立地是如上定義的基團(tuán)r13。oh的其它適合的保護(hù)基是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的(參見(jiàn)wuts,pgm和greene,tw(2006)“greene’sprotectivegroupsinorganicsynthesis”,第四版,johnwiley&sons,inc.,hoboken,nj,usa)。在堿性條件下穩(wěn)定的保護(hù)基意指該保護(hù)基不能通過(guò)堿處理除去。通式(i)化合物的適合的鹽包括堿加成鹽，例如鈉、鉀、鈣、鋁、鋅、鎂和其它金屬鹽以及膽堿、二乙醇胺、乙醇胺、乙二胺、葡甲胺和其它眾所周知的堿加成鹽，如paulekuhn等人,j.med.chem.2007,50,6665-6672中概括的和/或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。在某些適合的通式(i)化合物中：r1是c1-4烷基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵代、or6或nr6r7的取代基取代；其中，r6和r7各自獨(dú)立地選自h或c1-4烷基；r2是h、鹵代或oh；y1是鍵或具有1至6個(gè)碳原子并且任選被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)r3取代的亞烷基連接基團(tuán)；r3各自獨(dú)立地是鹵代、or8或nr8r9；其中r8和r9各自獨(dú)立地選自h或c1-4烷基；并且r4是c(o)or10、c(o)nr10r11、s(o)r10、so2r10、oso2r10、so3r10或oso3r10；其中r10各自是氫，或c1-6烷基或芐基，其中二者任一個(gè)可以任選被一個(gè)或多個(gè)鹵代取代基取代，并且r11是氫，或c1-6烷基、芐基、-c1-4亞烷基-so3h或-c1-4亞烷基-so3(c1-4烷基)，其中任一個(gè)可以任選被一個(gè)或多個(gè)鹵代取代基取代；r5b是h或oh；或其鹽。在適合的通式(i)化合物中，r1可以是c1-4烷基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵代、or6或nr6r7的取代基取代，其中r6和r7各自獨(dú)立地是h、甲基或乙基，特別是h或甲基。更適合地，r1是未取代的c1-4烷基。在特別適合的化合物中，r1是乙基。在某些通式(i)化合物中，y1是鍵。適合地，在通式(i)化合物中，y1是亞烷基連接基團(tuán)，其具有1至15個(gè)碳原子，更適合地1至12、1至10或1至8個(gè)碳原子，并且任選被一個(gè)或多個(gè)如上定義的基團(tuán)r3取代。典型地，r3各自獨(dú)立地是鹵代、or8或nr8r9；其中r8和r9各自獨(dú)立地選自h、甲基或乙基，特別是h或甲基。在某些適合的化合物中，y1是未取代的亞烷基連接體，其具有1至15個(gè)碳原子，更適合地1至12個(gè)、1至10個(gè)或1至8個(gè)碳原子。在某些適合的通式(i)化合物中，r2是h。在其它適合的通式(i)化合物中，r2是oh。在其它適合的通式(i)化合物中，r2是保護(hù)的oh基團(tuán)。當(dāng)r2是保護(hù)的oh基團(tuán)時(shí)，其是在堿性環(huán)境中穩(wěn)定的基團(tuán)。此類(lèi)基團(tuán)的實(shí)例包括osi(r16)3，其中r16各自獨(dú)立地是如上定義的基團(tuán)r13。在通式化合物中，r4是c(o)or10、oc(o)r10、c(o)nr10r11、or10、osi(r13)3、s(o)r10、so2r10、oso2r10、so3r10或oso3r10。適合地，r4是c(o)or10、or10、so3r10或oso3r10。更適合地，r4是c(o)or10、so3r10或oso3r10。適合地，r10和r11各自獨(dú)立地是：a.氫或b.c1-10烷基、c2-10鏈烯基、c2-10炔基、-o-c1-10烷基、-o-c2-10鏈烯基或-o-c2-10炔基，其中任一個(gè)任選被一個(gè)或多個(gè)如上定義的取代基取代；或c.6-至10-元芳基或5-至10-元雜芳基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)如上定義的取代基取代。d.聚乙二醇?xì)埢?。更適合地，r10和r11各自獨(dú)立地是a.氫或b.c1-10烷基、c2-10鏈烯基、c2-10炔基或-o-c1-10烷基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)如上定義的取代基取代，或c.6-至10-元芳基，其任選被一個(gè)或多個(gè)如上定義的取代基取代。適合地，r13各自獨(dú)立地選自：a.c1-10烷基、c2-10鏈烯基或c2-10炔基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)如上定義的取代基取代；或b.6-至10-元芳基或5-至10-元雜芳基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)如上定義的取代基取代。更適合地，r13各自獨(dú)立地選自：a.c1-10烷基、c2-10鏈烯基或c2-10炔基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)如上定義的取代基取代；或b.6-至10-元芳基，其任選被一個(gè)或多個(gè)如上定義的取代基取代。仍為更適合地，r13各自獨(dú)立地選自c1-10烷基或苯基，其中二者任一個(gè)任選如上所述被取代。r10和r11基團(tuán)的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、鏈烯基氧基和炔基氧基，以及r13基團(tuán)的烷基、鏈烯基和炔基的適合的取代基包括鹵代、no2、cn、or19、sr19、so2r19、so3r19或n(r19)2，或6-至10-元芳基或5-至14-元雜芳基，其中二者任一個(gè)任選被下列基團(tuán)取代：c1-6烷基、c1-6鹵代烷基、鹵代、no2、cn、or19、so2r19、so3r19或n(r19)2；其中，r19如上定義。這些r10、r11和r13基團(tuán)的更適合的取代基包括鹵代、or19、n(r19)2或6-至10-元芳基，其任選如上所述被取代，更適合地任選被下列基團(tuán)取代：鹵代、c1-4烷基、c1-4鹵代烷基、-o-c1-4烷基、-o-c1-4鹵代烷基、-nh(c1-4烷基)或-n(c1-4烷基)2；例如氟、氯、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、氨基、甲基氨基和二甲基氨基。r10、r11和r13基團(tuán)的芳基和雜芳基的適合的取代基包括c1-6烷基、c1-6鹵代烷基、鹵代、no2、cn、or19、sr19或n(r19)2。這些r10、r11和r13基團(tuán)的更適合的取代基包括c1-4烷基、c1-4鹵代烷基、鹵代、or19或n(r19)2；特別是鹵代、c1-4烷基、c1-4鹵代烷基、-o-c1-4烷基、-o-c1-4鹵代烷基、-nh(c1-4烷基)或-n(c1-4烷基)2。r10、r11和r13基團(tuán)的芳基和雜芳基的取代基的特別的實(shí)例包括氟、氯、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、氨基、甲基氨基和二甲基氨基。如上所述，r19各自獨(dú)立地選自h、c1-6烷基、c1-6鹵代烷基，或6-至14-元芳基或5-至14-元雜芳基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)鹵代、c1-6烷基或c1-6鹵代烷基取代基取代。適合地，r19是h、c1-6烷基、c1-6鹵代烷基，或6-至10-元芳基或5-至10-元雜芳基，它們?nèi)芜x被一個(gè)或多個(gè)鹵代、c1-4烷基或c1-4鹵代烷基取代基取代。更適合地，r19是h、c1-6烷基、c1-6鹵代烷基，或苯基，其任選被一個(gè)或多個(gè)鹵代、c1-4烷基或c1-4鹵代烷基取代基取代。r19的特別實(shí)例包括h、甲基、乙基、三氟甲基，或苯基，其任選被一個(gè)或多個(gè)氟、氯、甲基、乙基或三氟甲基取代。在某些適合的通式(i)化合物中，r5b是h。在其它適合的通式(i)化合物中，r5b是oh。在仍有的其它適合的通式(i)化合物中，r5b是保護(hù)的oh基團(tuán)。在仍有的其它適合的通式(i)化合物中，r5b是保護(hù)的oh基團(tuán)。當(dāng)r2是保護(hù)的oh基團(tuán)時(shí)，其是在堿性環(huán)境中穩(wěn)定的基團(tuán)。此類(lèi)基團(tuán)的實(shí)例包括osi(r16r17r18)，其中，r16、r17和r19各自獨(dú)立地如上定義，但更適合地是c1-10烷基或c6-10芳基。適合地在通式(i)化合物中，y1是具有1至6個(gè)碳原子的亞烷基連接基團(tuán)，并且任選被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)r3取代。典型地，r3各自獨(dú)立地是鹵代、or8或nr8r9；其中r8和r9各自獨(dú)立地選自h、甲基或乙基，特別是h或甲基。在某些適合的通式(i)化合物中，獨(dú)立或以任何組合：y1是鍵或具有1至3個(gè)碳原子并且任選被一個(gè)或兩個(gè)r3基團(tuán)取代的亞烷基；r4是c(o)or10、so3r10或oso3r10，其中r10如上定義，但更適合地是h、c1-6烷基或芐基；r5b是h或oh。在某些更適合的化合物中，獨(dú)立或以任何組合：r1是乙基；和/或r2是h；和/或y1是鍵、-ch2-或-ch2ch2-；和/或r4是c(o)or10，其中r10是h、c1-6烷基或芐基；和/或r5b是h。在某些此型式的特別適合的化合物中，r1是乙基和/或r10是c1-6烷基或芐基。本發(fā)明的特別適合的化合物是(6α,5β)-3,7-二氧代-6-乙基-膽烷-24-酸及其c1-6烷基酯和芐基酯以及其鹽，特別是甲基酯和乙基酯。通式(i)化合物可以由通式(ii)化合物通過(guò)差向異構(gòu)化來(lái)制備：其中，y1、r1、r2和r4如通式(i)中定義，并且r5是h或oh或保護(hù)的oh。在某些適合的通式(ii)化合物中，r5是h。在其它適合的通式(ii)化合物中，r5是oh。仍在其它適合的通式(ii)化合物中，r5是保護(hù)的oh基團(tuán)。仍在其它適合的通式(i)化合物中，r5是保護(hù)的oh基團(tuán)。當(dāng)r5是保護(hù)的oh基團(tuán)時(shí)，其可以是在堿性環(huán)境中不穩(wěn)定的基團(tuán)，以便用堿處理而將保護(hù)的oh基團(tuán)轉(zhuǎn)化為oh。此類(lèi)基團(tuán)的實(shí)例是本領(lǐng)域眾所周知的并且包括如上定義的基團(tuán)oc(o)r14，其中r14是如上通式(i)中定義的基團(tuán)r10。特別適合的r14基團(tuán)是如上r10中定義的?；蛘撸瑀5可以是在堿性環(huán)境中穩(wěn)定的oh基團(tuán)。此類(lèi)基團(tuán)的實(shí)例包括osi(r16)3，其中r16各自獨(dú)立地是如上定義的基團(tuán)r13。該差向異構(gòu)化反應(yīng)，適合地包括將通式(ii)化合物用堿處理。該通式(ii)化合物可溶解在醇溶劑中，任選與水混合和與堿，例如氫氧化鈉或氫氧化鉀或醇鈉或醇鉀，典型地是乙醇化物接觸。在通式(ii)化合物的情況中，其中r4是c(o)or10，其中r10是c1-6烷基或芐基并且其中使用強(qiáng)堿，例如氫氧化鈉或氫氧化鉀，該差向異構(gòu)化反應(yīng)可通過(guò)水解完成，得到通式(i)化合物，其中r4是c(o)oh。在通式(ii)化合物中，如果r2和/或r5是保護(hù)的oh，例如基團(tuán)oc(o)or14，其中r14如上定義，但特別是c1-6烷基或芐基，其將在差向異構(gòu)化反應(yīng)中除去，得到通式(xxi)化合物，其中r2和/或r5b是oh。其它保護(hù)的oh基團(tuán)，其在堿性條件下穩(wěn)定(例如基團(tuán)osi(r16)3，其中r16各自獨(dú)立地如上定義，但特別是c1-6烷基或苯基)，可以隨后除去，得到通式(i)化合物，其中r5b是oh。該方法特別適合由通式(ii)化合物，其中r4是c(o)or10，其中r10如上定義但特別是h、c1-6烷基或芐基，來(lái)制備通式(i)化合物，其中，r4也是c(o)or10?；蛘?，式(i)化合物可以由其它通式(i)化合物制備。例如，其中r4是c(o)or10的通式(i)化合物可以被轉(zhuǎn)化為其中r4是c(o)nr10r11、s(o)r10、so2r10、oso2r10、so3r10或oso3r10的通式(i)化合物。其中r4是so3r10的通式(i)化合物可以由其中r4是c(o)oh的通式(i)化合物合成，其通過(guò)wo2008/002573、wo2010/014836和wo2014/066819中所教導(dǎo)的方法來(lái)合成。因此，其中r4是c(o)oh的通式(i)化合物可以與c1-6烷酰氯或苯甲酰氯或與c1-6烷酸酐進(jìn)行反應(yīng)而保護(hù)oh基團(tuán)。該保護(hù)的化合物可以接著與還原劑例如氫化物，適合的是氫化鋰鋁或硼氫化鈉進(jìn)行反應(yīng)，以便將羧酸基團(tuán)還原為oh。該醇基團(tuán)可以使用classon等人,j.org.chem.,1988,53,6126-6130中描述的三苯基膦/咪唑/鹵素法被鹵素，例如溴或碘所代替。然后，該鹵化的化合物可以與亞硫酸鈉在醇溶劑中進(jìn)行反應(yīng)而得到含有so3-na+取代基的化合物。其中r4是oso3r10的通式(i)化合物可以通過(guò)將上述保護(hù)的羧酸用氯硫酸還原而得到的醇，在堿例如三乙胺的存在下進(jìn)行反應(yīng)，而得到保護(hù)的三乙基銨鹽。保護(hù)基可以使用上述堿水解而除去。將該羧酸還原后接著是將所產(chǎn)生的醇與氯亞硫酸進(jìn)行反應(yīng)而得到其中r4是oso2r10的通式(i)化合物。其中r4是c(o)nr10r11的通式(i)化合物可以由羧酸通過(guò)與式h-nr10r11的胺在適合溶劑中加熱進(jìn)行反應(yīng)而制備。其中r4是c(o)nr10r11或oso3r10的通式(i)化合物也可以通過(guò)類(lèi)似于festa等人,j.med.chem.,2014,57,8477-8495中描述的方法來(lái)制備。含有其它r4基團(tuán)的通式(i)化合物可以由上述通式(i)化合物通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的方法來(lái)制備。這些方法也形成本發(fā)明的一個(gè)方面。通式(ii)化合物可以通過(guò)將通式(iii)化合物氧化而制備：其中，y1、r1、r2和r4如通式(i)中定義并且r5如通式(ii)中定義。該氧化反應(yīng)可以使用任何適合的方法來(lái)進(jìn)行。一個(gè)適合的方法是dess-martin過(guò)碘烷(1,1,1-三乙酰氧基-1,1-二氫-1,2-苯碘酰)氧化反應(yīng)，其可以在氯化溶劑例如氯仿或二氯甲烷中，在約15至25℃的溫度，適合地在室溫進(jìn)行。替代的氧化方法是使用次氯酸鹽(例如次氯酸鈉)，在酸性條件下(例如由醋酸提供)的氧化反應(yīng)。該反應(yīng)可以在水性溶劑中和在0至15℃進(jìn)行，更通常是在約0至10℃的溫度進(jìn)行。其它氧化方法包括在稀硫酸中使用重鉻酸鈉或更通常是使用三氧化鉻的jones反應(yīng)。已知該方法是對(duì)于膽酸羥基清潔轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酮基衍生物而言是可信的(bortolini等人,j.org.chem.,2002,67,5802)?？蛇x擇的氧化反應(yīng)可以使用tempo((2,2,6,6-四甲基-哌啶-1-基)氧基)或其衍生物來(lái)進(jìn)行。該方法特別適用于由其中r4是c(o)or10的通式(ii)化合物制備其中r4也是c(o)or10的通式(i)化合物，其中r10如上定義，但特別是h、c1-6烷基或芐基。通式(iii)化合物可以通過(guò)將通式(iv)化合物還原而制備：其中r1、r2和r4如通式(i)中定義，r5如通式(ii)中定義；并且y是鍵或具有1至6個(gè)碳原子并且任選被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)r3取代的亞烷基或亞鏈烯基連接基團(tuán)，其中r3如通式(i)中定義。該還原反應(yīng)可以是氫化反應(yīng)，通常是催化氫化反應(yīng)。催化氫化反應(yīng)中適合的催化劑包括鈀/碳、鈀/碳酸鈣、鈀/氧化鋁、鉑/鈀或雷尼鎳催化劑。該反應(yīng)可以在有機(jī)溶劑中進(jìn)行，其可以是醇溶劑，例如甲醇、乙醇或異丙醇；乙酸乙酯；吡啶；乙酸；環(huán)戊基甲基醚(cpme)或n,n-二甲基甲酰胺(dmf)。該有機(jī)溶劑可以任選與共溶劑例如丙酮或水混合，和/或還可以加入堿例如三乙胺。催化劑和溶劑的選擇會(huì)影響所需的通式(iii)產(chǎn)物與其通式(xxx)異構(gòu)物的比例：其也會(huì)影響通式(xxxi)中間體轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的速率：更適合地，使用鈀/碳或鈀/碳酸鈣催化劑。典型地，在催化劑中，鈀以相對(duì)于基質(zhì)重量(其中該基質(zhì)是碳、碳酸鈣等)的5-10重量％的量存在。給予(iii):(xxx)優(yōu)越比例的溶劑包括甲醇、乙醇和dmf，特別是甲醇和dmf。當(dāng)甲醇作為溶劑使用時(shí)，其可以單獨(dú)或在堿例如三乙胺的存在下使用。適合地，使用的三乙胺的量是亞化學(xué)計(jì)量的量，典型地相對(duì)于通式(iv)起始材料的量的0.1至0.5當(dāng)量。在三乙胺的存在下的甲醇給予通式(iii)所需產(chǎn)物與通式(xxx)異構(gòu)體的特別高的比例。以甲醇作為溶劑進(jìn)行的反應(yīng)可以在約-30至25℃的溫度進(jìn)行，并且溫度對(duì)于(iii):(xxx)的比例影響極小。當(dāng)使用dmf作為溶劑時(shí)，其可以與共溶劑例如丙酮、tbme、thf、乙腈或丙酮/水混合。任選地，該溶劑含有堿例如三乙胺，呈亞化學(xué)計(jì)量，典型地相對(duì)于通式(iv)起始材料的量的0.1至0.5當(dāng)量。使用dmf作為溶劑進(jìn)行的反應(yīng)比在甲醇中進(jìn)行的反應(yīng)在溫度方面似乎更敏感，并且(iii):(xxx)的比例隨著溫度升高而降低。適合地，因而該反應(yīng)在-30至0℃、更適合地-20至-10℃的溫度來(lái)進(jìn)行。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)氫壓力對(duì)于選擇性影響很小并且因此氫壓力適合地為約1個(gè)大氣壓。類(lèi)似地，稀釋似乎不會(huì)對(duì)選擇性產(chǎn)生重大影響，并且因此溶劑可以以任何方便的量使用。通式(iv)化合物的氫化作用也將還原任何烯鍵，如果存在時(shí)，在連接體y中。通式(iv)化合物可以由通式(v)化合物通過(guò)用有機(jī)金屬試劑選擇性烷基化而制備：其中r2和r4如通式(i)中定義，r5如通式(ii)中定義并且y如通式(iv)中定義。適合的有機(jī)金屬試劑包括gilman試劑，其通過(guò)將通式(xxiv)的烷基鋰化合物與亞銅(i)鹽，特別是鹵化亞銅(i)例如碘化亞銅(i)反應(yīng)而形成：r1-li(xxiv)其中r1如通式(i)中定義。該反應(yīng)可以在有機(jī)溶劑例如四氫呋喃、其它醚例如乙醚或其混合物中進(jìn)行。或者，該加成可以使用grignard試劑r1mgx來(lái)進(jìn)行，其中r1如通式(i)中定義，并且x是鹵化物，例如乙基溴化鎂，并且該反應(yīng)適合地在鋅(ii)鹽例如氯化鋅和催化量的亞銅(i)或銅(ii)鹽或復(fù)合物，例如氯化亞銅(i)、氯化銅(ii)或乙酰丙酮酸亞銅(i)或乙酰丙酮酸銅(ii)(acac)復(fù)合物存在下進(jìn)行。該反應(yīng)可以在有機(jī)溶劑，例如醚，例如thf、2-甲基thf、甲基叔丁基醚(tbme)、乙醚中進(jìn)行。令人驚奇地，該反應(yīng)溫度并非特別顯著，而在某些情況下，該反應(yīng)可以在降低溫度，例如在約-25至0℃進(jìn)行，其也成功地在高達(dá)約55℃的較高溫度進(jìn)行。由式(ii)化合物制備式(i)化合物的方法是新的并且其本身形成本發(fā)明的一部分。該方法特別適用于由其中r4是c(o)or10的通式(iii)化合物來(lái)制備其中r4也是c(o)or10的通式(ii)化合物，其中r10如上定義，但特別是h、c1-6烷基或芐基。通式(v)化合物可以由式(vi)化合物通過(guò)氧化反應(yīng)，例如使用單過(guò)氧酞酸鹽(mmpp)或3-氯過(guò)氧苯甲酸(mcpba)來(lái)制備：其中，r2和r4如通式(i)中定義，r5如通式(ii)中定義，并且y如通式(iv)中定義。使用mmpp的反應(yīng)可以在有機(jī)溶劑，例如乙酸乙酯中進(jìn)行，并且如果使用mcpba，則反應(yīng)可以在溶劑，例如二氯甲烷或甲苯中進(jìn)行。適合地，反應(yīng)在溶劑的回流溫度或稍低于溶劑的回流溫度進(jìn)行。通式(vi)化合物可以由通式(vii)化合物通過(guò)與例如氯醌的氧化劑進(jìn)行反應(yīng)而制備：其中，r2和r4如通式(i)中定義，r5如通式(ii)中定義，并且y如通式(iv)中定義。該反應(yīng)可以在酸性條件下，例如在乙酸的存在下，并且在有機(jī)溶劑例如甲苯中進(jìn)行。一些通式(v)、(vi)和(vii)化合物是已知的，并且例如uekawa等人在biosci.biotechnol.biochem.,2004,68,1332-1337中描述了由豆甾醇合成(22e)-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯，接著將其轉(zhuǎn)化為(22e)-3-氧代-4,6,22-膽三烯-24-酸乙酯，其具有下式：然后uekawa等人繼續(xù)描述了將該化合物轉(zhuǎn)化為(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯，即通式(iii)化合物，其中r2和r5是h，y是-ch＝ch-，并且r4是c(o)och2ch3。其它通式(v)、(vi)和(vii)化合物可以通過(guò)類(lèi)似方法由與豆甾醇相似的植物甾醇來(lái)制備。豆甾醇和其它植物甾醇是植物的甾醇并且是易于獲得或可以通過(guò)已知途徑制備的。通式(vii)化合物也可以由通式(viiia)化合物通過(guò)與溴化鋰和堿例如碳酸鋰進(jìn)行反應(yīng)而制備：其中，r2和r4如通式(i)中定義，r5如通式(ii)中定義，并且y如通式(iv)中定義；該反應(yīng)可以在溶劑例如n,n-二甲基甲酰胺(dmf)中并且在約120至180℃的溫度進(jìn)行。通式(viiia)化合物可以通過(guò)將通式(viii)化合物使用例如在乙酸中的溴進(jìn)行溴化而得到：其中，r2和r4如通式(i)中定義，r5如通式(ii)中定義，并且y如通式(iv)中定義。通式(x)化合物可以由通式(xi)化合物通過(guò)氧化反應(yīng)，典型地用基于鉻的氧化劑或用次氯酸鈉而制備：其中，r2和r4如通式(i)中定義，r5如通式(ii)中定義，并且y如通式(iv)中定義。其中r4是c(o)or10(其中r10是c1-6烷基或芐基)的通式(ix)化合物可以由其中r4是c(o)oh的通式(vii)化合物，通過(guò)酯化反應(yīng)，典型地通過(guò)與適合的醇在酸性條件下反應(yīng)而制備。其中r4是c(o)oh并且r5是h的通式(ix)化合物可以由通式(x)化合物通過(guò)與還原劑，典型地是肼，在堿性條件下并且在醇或羥基乙酸溶劑，例如二甘醇中進(jìn)行反應(yīng)而制備：其中r2和y如通式(i)中定義；r4是c(o)or10，其中r10是c1-6烷基或芐基；并且r12是保護(hù)的oh。其中r12是保護(hù)的oh基團(tuán)，其在堿性條件下是穩(wěn)定的，該反應(yīng)之后可以是除去保護(hù)基r12而剩下oh基團(tuán)的反應(yīng)。oh的保護(hù)基討論如上，并且例如r12可以是基團(tuán)c(o)r14，其中r14如上定義，特別地是c1-6烷基或芐基。甲硅烷基醚也是適合的，并且在此情況中，r2和/或r5可以獨(dú)立地是基團(tuán)si(r16)3，其中r16如上定義，但特別是c1-6烷基或苯基。其它適合的oh保護(hù)基是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的(參見(jiàn)wuts,pgm和greene，tw(2006)“greene’sprotectivegroupsinorganicsynthesis”,第四版,johnwiley&sons,inc.,hoboken,nj,usa)。特別適合的r12基團(tuán)包括在堿的存在下不穩(wěn)定的基團(tuán)，因?yàn)檫@去除了對(duì)于除去保護(hù)基的額外步驟的需求。在堿性條件下不穩(wěn)定的基團(tuán)r12的實(shí)例是基團(tuán)c(o)r14，其中r14如上定義，并且特別是c1-6烷基或芐基。或者，該反應(yīng)可以用2個(gè)步驟來(lái)進(jìn)行，以便通式(ix)化合物與通式(xxxii)化合物進(jìn)行反應(yīng)：r20-nh-nh2(xxxii)其中r20是離去基團(tuán)，例如甲苯磺?；蚣谆酋；?；得到通式(xxxiii)化合物：接著是與適合的還原劑進(jìn)行的還原反應(yīng)?？捎糜谠摲磻?yīng)的還原劑的實(shí)例包括氫化物例如硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉、氫化鋰鋁等。通式(x)化合物可以由通式(xi)化合物通過(guò)與氧化劑例如次氯酸鈉進(jìn)行反應(yīng)而制備：其中，r2如通式(i)中定義，并且y如通式(iv)中定義；r4是c(o)or10，其中r10是c1-6烷基或芐基；并且r12如上定義，特別是-c(o)c1-6烷基。該反應(yīng)可在酸性條件，例如在乙酸的存在下，并且在有機(jī)溶劑例如乙酸乙酯中進(jìn)行。通式(xi)化合物可以由通式(xii)化合物通過(guò)與適合引入保護(hù)基r12的試劑進(jìn)行反應(yīng)而制備：其中，r2如通式(i)中定義并且y如通式(iv)中定義；r4是c(o)or10，其中r10是c1-6烷基或芐基。例如當(dāng)r12是c(o)r14時(shí)，通式(xii)化合物可以與羧酸酐或酰基氯，在弱堿例如吡啶的存在下，適合地由4-二甲基氨基吡啶(dmap)催化而進(jìn)行反應(yīng)。該反應(yīng)可以在溶劑例如乙酸乙酯中進(jìn)行。通式(xii)化合物可以通過(guò)將通式(xiii)化合物酯化而制備：其中，r2如通式(i)中定義并且y如通式(iv)中定義；該反應(yīng)可以通過(guò)將通式(xiii)的酸與適合的醇在酸性條件下反應(yīng)而進(jìn)行。通式(xiii)化合物是已知的。例如，通式(xiii)化合物(其中y是-ch2ch2-并且r2是h)是脫氧膽酸，其易于由數(shù)個(gè)來(lái)源獲得。具有不同定義的y和r2的其它膽汁酸可以作為替代的起始材料使用。通式(vii)化合物的替代途徑如方案1所示，其中雄烯二酮被轉(zhuǎn)化為通式(v)化合物，其中r2和r5是h；r4是-c(o)och3并且y是-ch2ch2-或-ch＝ch-。方案1通式(vi)化合物(其中y是亞鏈烯基)的替代途徑是通過(guò)使用烯化反應(yīng)(olefination)，例如通式(xiv)化合物的horner-wadsworth-emmons(hwe)烯化反應(yīng)：其中，r2如通式(i)中定義，并且r5如通式(ii)中定義；使用通式(xv)化合物：其中r10如通式(i)中定義。該反應(yīng)可以在標(biāo)準(zhǔn)hwe條件下進(jìn)行，例如使用堿例如氫化鈉。通式(xv)化合物是易于獲得的或者可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。其它烯化反應(yīng)例如tebbe烯化反應(yīng)、wittig反應(yīng)或julia-kocienski烯化反應(yīng)也將產(chǎn)生通式(iii)化合物，其中y是亞鏈烯基。此類(lèi)烯化反應(yīng)是本領(lǐng)域化學(xué)家熟悉的。通式(xiv)化合物可以通過(guò)將通式(xvi)化合物與臭氧進(jìn)行反應(yīng)而制備其中，r2如通式(i)中定義，r5如通式(ii)中定義，并且r15是c1-6烷基。此類(lèi)型的反應(yīng)的實(shí)例在us2,624,748中給出。通式(xvi)化合物可以通過(guò)將通式(xvii)化合物與酸在溶劑例如甲醇中進(jìn)行反應(yīng)而制備：其中，r2如通式(i)中定義，r5如通式(ii)中定義，并且r15是c1-6烷基。通式(xvii)化合物可以通過(guò)將通式(xviii)化合物使用oppenauer氧化進(jìn)行氧化而制備：其中，r2和r5如通式(i)中定義并且r15是c1-6烷基。將通式(xviii)化合物轉(zhuǎn)化為通式(xvi)化合物的實(shí)例在shepherd等人,j.am.chem.soc.1955,77,1212-1215和goldstein,j.med.chem.1996,39,5092-5099中教導(dǎo)。通式(xvi)化合物的一個(gè)實(shí)例是麥角甾醇，其是真菌性甾醇并且下列方案2顯示了麥角甾醇轉(zhuǎn)化為通式(iv)化合物的方法，其中r2和r5都是h，y是ch＝ch2并且r4是c(o)or10，其中r10是乙基。方案2如同通式(i)化合物，通式(ii)至(xiii)、(viiia)和(xxxiii)化合物，其中r4是c(o)r10、c(o)nr10r11、s(o)r10、so3r10或oso3r10，可以由其中r4是c(o)or10的相應(yīng)化合物，通過(guò)與適合的試劑使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法進(jìn)行反應(yīng)而制備。例如，在wo2008/002573和wo2010/014836中描述的方法或類(lèi)似于在classon等人,j.org.chem.,1988,53,6126-6130和festa等人,j.med.chem.,2014,57,8477-8495中描述的方法。通式(i)化合物是通式(xxi)化合物的合成前體：其中，r1、r4和y1如通式(i)中定義；r2是h、鹵代或oh；并且r5a是h或oh。通式(i)化合物可以如下所述轉(zhuǎn)化為通式(xxi)化合物，其本身是本發(fā)明的一部分。因此，在本發(fā)明的另一方面，提供了制備通式(xxi)化合物的方法，該方法包括：ii.使用適合的還原劑將通式(i)化合物還原，并且其中r2和/或r5b是保護(hù)的oh，將保護(hù)基除去，得到如上定義的通式(xxi)化合物，其中保護(hù)基的除去可以在該還原反應(yīng)之前或之后進(jìn)行；和任選地iii.將通式(xxi)化合物轉(zhuǎn)化為另外的通式(xxi)化合物。通式(xxi)化合物是fxr和tgr5的有效激動(dòng)劑并且包括奧貝膽酸，其是其中r1是乙基，r2和r5a都是h，y1是-ch2ch2-并且r4是c(o)oh的通式(xxi)化合物。在通式(xix)至(xxi)化合物中，y1、r1和r4的更適合的含義如通式(i)中定義。還原劑典型地是氫化物，例如硼氫化鈉，其可以用于溶劑，例如四氫呋喃與水的混合物中。典型地，該反應(yīng)在堿性條件下進(jìn)行，例如在強(qiáng)堿例如氫氧化鈉或氫氧化鉀的存在下并且在約0至110℃的溫度，更通常60至100℃進(jìn)行。其中r4是c(o)oh的通式(xxi)化合物可以通過(guò)將其中r4是c(o)oh的通式(i)化合物還原而制備。其中r4是c(o)r10、c(o)nr10r11、s(o)r10、so2r10或oso2r10的通式(xxi)化合物可以由相應(yīng)的其中r4是c(o)or10的化合物，通過(guò)與適合的試劑，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法進(jìn)行反應(yīng)而制備。其中r4是so3r10的通式(xxi)化合物可以由其中r4是c(o)oh的通式(xxi)化合物，通過(guò)wo2008/002573、wo2010/014836和wo2014/066819中教導(dǎo)的方法來(lái)合成。因此，其中r4是c(o)oh的通式(xxi)化合物可以與c1-6烷酰氯或苯甲酰氯或與c1-6烷酸酐進(jìn)行反應(yīng)而保護(hù)oh基團(tuán)。然后，該保護(hù)的化合物可以與還原劑例如氫化物，適合地是硼氫化鈉進(jìn)行反應(yīng)以便將羧酸基團(tuán)還原為oh。該醇基團(tuán)可以用鹵素，例如溴或碘代替，使用classon等人,j.org.chem.,1988,53,6126-6130中描述的三苯基膦/咪唑/鹵素方法。然后，該鹵化的化合物可以與亞硫酸鈉在醇溶劑中進(jìn)行反應(yīng)而得到含有so3-na+取代基的化合物。其中r4是oso3r10的通式(xxi)化合物可以通過(guò)將還原保護(hù)的羧酸而得到的醇與氯硫酸在堿例如三乙胺的存在下進(jìn)行反應(yīng)而得到保護(hù)的三乙銨鹽。保護(hù)基可以如上所述用堿水解而除去。將羧酸還原之后，接著將所產(chǎn)生的醇與氯亞硫酸進(jìn)行反應(yīng)而得到其中r4是oso2r10的通式化合物。其中r4是c(o)nr10r11的通式(xxi)化合物可以由羧酸通過(guò)與式h-nr10r11的胺在適合的溶劑中加熱進(jìn)行反應(yīng)而制備。其中r4是c(o)nr10r11或oso3r10的通式(xix)至(xxi)化合物也可以通過(guò)類(lèi)似于festa等人,j.med.chem.,2014,57(20),8477-8495中描述的方法來(lái)制備。這些方法也形成本發(fā)明的一方面。其中r4是c(o)r10的通式(xxi)化合物可以通過(guò)將其中r4是c(o)or10的化合物使用1當(dāng)量的二異丁基氫化鋁(dibal)還原而得到其中r4是c(o)h的醛(參見(jiàn)，例如wo2011/014661)?；蛘?，醛可以通過(guò)將如前所述的其中r4是oh的保護(hù)的化合物氧化而制備。該氧化反應(yīng)可以是swern氧化反應(yīng)，其使用草酰氯和二甲亞砜接著使用三甲胺而進(jìn)行(參見(jiàn)，例如xiang-dongzhou等人,tetrahedron,2002,58,10293-10299)?；蛘撸撗趸磻?yīng)可以使用氧化劑例如吡啶氯鉻酸鹽(pcc)來(lái)進(jìn)行，如carnell等人(j.med.chem.,2007,50,2700-2707)中描述的。其中r4是c(o)r10，其中r10不為氫的通式(i)化合物可以通過(guò)已知方法，例如通過(guò)將其中r4是c(o)h的醛與適合的grignard試劑進(jìn)行反應(yīng)，接著通過(guò)氧化反應(yīng)而得到。此類(lèi)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。本發(fā)明現(xiàn)在將更加詳細(xì)地參照實(shí)施例來(lái)描述。在實(shí)施例中，使用下列縮略語(yǔ)：acoh乙酸cpme環(huán)戊基甲基醚dmfn,n-二甲基甲酰胺etoac乙酸乙酯etoh乙醇ipa異丙醇meoh甲醇net3三乙胺nbuoac乙酸正丁酯tbme叔丁基甲基醚thf四氫呋喃tlc薄層色譜實(shí)施例1至4-(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯由豆甾醇的合成實(shí)施例1-(22e)-3-氧代-4,6,22-膽三烯-24-酸乙酯的合成起始材料(22e)-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯由豆甾醇根據(jù)uekawa等人,biosci,biotechnol,biochem.,2004,68,1332-1337中描述的方法來(lái)制備。將(22e)-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(1.00kg，2.509mol；1當(dāng)量)添加至反應(yīng)容器中，接著在攪拌下將acoh(3體積，3.0l)和甲苯(1體積，1.0l)加入。然后將氯醌(0.68kg，2.766mol；1.1當(dāng)量)加入并且將反應(yīng)混合物加熱至100℃，并且維持在此溫度達(dá)1-2小時(shí)(ipc，通過(guò)tlc在二氧化硅上，洗脫液3:7etoac:庚烷；起始材料：rf0.50，產(chǎn)物：rf0.46；用茴香醛染色可見(jiàn))。然后將混合物在冰/水浴中冷卻至10℃并且將產(chǎn)生的固體過(guò)濾出來(lái)。將濾餅用預(yù)混的3:1acoh:甲苯(4×0.5體積)在5℃±4℃洗滌并且將濾液在高至70℃的真空中濃縮。將殘留物溶解于丙酮(3體積)，然后將3％w/wnaoh水溶液(10體積)在攪拌下滴加，將溫度維持在低于30℃(放熱)。將產(chǎn)生的懸浮液冷卻至10-15℃并且攪拌30分鐘。通過(guò)過(guò)濾收集固體并且將該濾餅用預(yù)混的1:1丙酮:水(1×2體積，然后3×1體積)洗滌。將濾餅(黃褐色固體)在70-75℃真空中干燥，672g(產(chǎn)率68％)。該化合物的特征與文獻(xiàn)中公布的數(shù)據(jù)一致。實(shí)施例2-(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯在回流下將80％mmpp(雙(單過(guò)氧酞酸)鎂六水合物，197.0g，約318.6mmol)以四等份在30分鐘間隔加入至(22e)-3-氧代-4,6,22-膽三烯-24-酸乙酯(58.0g，146.3mmol)的etoac(1.0l)溶液中。將懸浮液在回流下劇烈攪拌5小時(shí)并且在環(huán)境溫度再攪拌16小時(shí)。然后將反應(yīng)加熱至回流并且再攪拌6小時(shí)。將混合物冷卻至約50℃并且將固體過(guò)濾并且用熱etoac(200ml)沖洗。隨后將濾液用20％nahso3水溶液(100ml)，1mnaoh水溶液(100ml、然后200ml)和10％nacl水溶液(250ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并且真空濃縮。將殘留物(黃色固體)在少量體積的etoac中在60℃結(jié)晶出來(lái)而得到灰白色/淡黃色結(jié)晶的環(huán)氧產(chǎn)物(25.7g，產(chǎn)率43％，棱晶)。該化合物的特征與文獻(xiàn)中公布的數(shù)據(jù)一致。實(shí)施例3-(6β,7α,22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯的合成方法1：在氬氣覆蓋下，在冷卻至-78℃的cui(1.40g，7.35mmol)的乙醚(10ml)懸浮液中加入etli(28.8ml，14.4mmol，0.5m在苯/環(huán)己烷中的溶液)。將所形成的白色濃懸浮液溫至0℃，攪拌5分鐘(形成深色溶液)并且冷卻至-78℃。制備(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(1.00g，2.42mmol)的乙醚/thf(24ml，3:1)溶液，并且添加至含有有機(jī)銅酸鹽(organocuprate)的容器中。使用thf(1ml)來(lái)沖洗該含有環(huán)氧化物溶液并且添加有有機(jī)銅酸鹽的容器。將反應(yīng)混合物歷經(jīng)30分鐘溫至-4℃，然后將反應(yīng)通過(guò)tlc(二氧化硅，1:1etoac:庚烷)完成。在約-4℃再攪拌30分鐘后，將飽和nh4cl水溶液加入，并且將該混合物歷經(jīng)30分鐘攪拌。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗并且將水相除去，伴隨著固體材料存在于界面。將有機(jī)相用5wt％nahco3水溶液(2×50ml)和水(1×50ml)洗滌。使用tbme(50ml)來(lái)萃取來(lái)自反應(yīng)物的原始水相和合并的洗滌液。將合并的有機(jī)相濃縮，并且將殘留物通過(guò)色譜，使用二氧化硅(25g)作為固定相(用在庚烷中的0-30％etoac梯度洗脫)純化，得到(6β,7α,22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(0.63g，59％)。1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ＝6.82(1h，dd，j＝15.6，8.9，c22h)，5.75(1h，s，c4h)，5.74(1h，d，j＝15.6，c23h)，4.17(2h，q，j＝7.1，och2ch3)，3.72(1h，brs，c7h)，2.52-2.25(5h，m)，2.05-1.98(2h，m)，1.82-1.10(23h，m)，0.91(3h，t，j＝7.4，ch3)，0.77(3h，s，ch3).13cnmr(100mhz，cdcl3)：δ＝199.2，171.2，167.1，154.5，128.4，119.0，71.9，60.1，55.3，54.9，49.9，44.3，42.7，39.6，39.1，38.3，37.4，35.6，34.0，28.0，26.3，23.6，20.8，19.7，19.2，14.2，12.8，12.0；(ir)vmax(cm-1)：3467，2939，2870，1716，1651，1457，1268，1229，1034；hrms(esi-tof)m/z：(m+h)+c28h43o4計(jì)算值：443.3161；實(shí)測(cè)值：443.3156.mp＝59.4-62.9℃方法2將zncl2(32.84g，240.9mmol)在180℃真空中緩慢攪拌干燥2小時(shí)。將燒瓶在氬氣氣氛下冷卻至室溫，并且將殘留物溶解于thf(520ml)中，并且經(jīng)由導(dǎo)管轉(zhuǎn)移至裝設(shè)有機(jī)械攪拌器和溫度探測(cè)器的三頸反應(yīng)燒瓶中。將該溶液在冰浴中冷卻至0-3℃并且歷經(jīng)20分鐘滴加etmgbr在et2o中的3m溶液(80ml，240.0mmol)，將內(nèi)部溫度維持在低于10℃。在添加約1/3的grignard溶液后觀察到形成白色沉淀(活性鋅酸鹽物質(zhì))。將該混合物在0℃攪拌1.2小時(shí)，然后滴加入環(huán)氧化物(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(43.0g，104.2mmol)的thf(300ml)溶液，將內(nèi)部溫度維持在低于10℃。然后將固體cucl(1.03g，0.104mmol)在劇烈攪拌下分為兩等份加入。10分鐘后，將冷卻浴除去并且繼續(xù)在環(huán)境溫度再攪拌1.2小時(shí)。將反應(yīng)通過(guò)在＜15℃滴加飽和nh4cl水溶液(800ml)并且攪拌0.5小時(shí)而猝滅。將混合物過(guò)濾并且將固體用tbme(150ml)沖洗。將各相分離并且將水相用tbme2×250ml萃取。將合并的有機(jī)萃取物用10％nacl水溶液(2×200ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并且真空濃縮，得到43.7g呈黃色泡沫狀的粗制(6β，7α，22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4，22-膽二烯-24-酸乙酯。方法3在zncl2的thf溶液(0.5m，8.7ml，4.85mmol，0.9當(dāng)量)中加入無(wú)水thf(8.0ml)，然后將內(nèi)容物冷卻至-25℃。歷經(jīng)30分鐘，將etmgbr的tbme溶液(1.0m，8.7ml，8.70mmol，1.8當(dāng)量)加入并且將混合物在-25℃攪拌45分鐘。將固體cucl(24mg，0.49mmol，0.05當(dāng)量)一次性加入，并且歷經(jīng)30分鐘，滴加(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(2.0g，4.85mmol)的thf(8.0ml)溶液。在加入(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯期間半途將剩余的固體cucl(24mg，0.49mmol，0.05當(dāng)量)加入。將反應(yīng)在-25℃攪拌1小時(shí)，(tlc1:1庚烷:etoac，通過(guò)uv可見(jiàn)并且使用鈰鉬酸銨染色展開(kāi))，然后歷經(jīng)10分鐘將另外的在tbme中的etmgbr(1.0m，2.9ml，2.91mmol，0.6當(dāng)量)加入。將反應(yīng)在-25℃攪拌0.5小時(shí)，然后通過(guò)添加飽和nh4cl水溶液(5ml)猝滅，將溫度維持在低于-5℃。將無(wú)機(jī)鹽過(guò)濾出來(lái)，用tbme沖洗并且將濾液相分離。將水層用tbme萃取，然后將合并的有機(jī)萃取物用飽和nh4cl水溶液(3×5ml)和10％鹽水(3×6ml)洗滌。將有機(jī)相在40℃真空濃縮，得到呈黃色泡沫狀的粗制(6β,7α,22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(1.91g)。方法4在zncl2的thf溶液(0.5m，8.7ml，4.85mmol，0.9當(dāng)量)中加入無(wú)水thf(8.0ml)，然后將內(nèi)容物加熱至40℃。歷經(jīng)30分鐘，將etmgbr的tbme溶液(1.0m，8.7ml，8.70mmol，1.8當(dāng)量)加入并且將混合物在40℃攪拌45分鐘。將固體cucl(24mg，0.49mmol，0.05當(dāng)量)一次性加入，并且歷經(jīng)30分鐘，滴加(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(2.0g，4.85mmol)的thf(8.0ml)溶液。在加入(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯期間半途將剩余的固體cucl(24mg，0.49mmol，0.05當(dāng)量)加入。將反應(yīng)在40℃攪拌1小時(shí)(tlc1:1庚烷:etoac，通過(guò)uv可見(jiàn)并且使用鈰鉬酸銨染色展開(kāi))，然后通過(guò)滴加飽和nh4cl水溶液(5ml)猝滅。將無(wú)機(jī)鹽過(guò)濾出來(lái)，用tbme沖洗并且將濾液相分離。將水層用tbme萃取，然后將合并的有機(jī)萃取物用飽和nh4cl水溶液(3×5ml)和10％鹽水(3×6ml)洗滌。將有機(jī)相在40℃真空濃縮，得到呈黃色泡沫狀的粗制(6β,7α,22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(2.08g)。方法5在zncl2的thf溶液(0.5m，8.7ml，4.85mmol，0.9當(dāng)量)中加入無(wú)水thf(8.0ml)，然后將內(nèi)容物冷卻至-15℃。歷經(jīng)30分鐘，將etmgbr的thf溶液(1.0m，8.7ml，8.70mmol，1.8當(dāng)量)加入，并且將該混合物在-15℃攪拌45分鐘。將固體cucl(24mg，0.49mmol，0.05當(dāng)量)一次性加入，并且歷經(jīng)30分鐘，滴加(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(2.0g，4.85mmol)的thf(8.0ml)溶液。在加入(6α,7α,22e)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯期間半途將剩余的固體cucl(24mg，0.49mmol，0.05當(dāng)量)加入。將反應(yīng)在-15℃攪拌1小時(shí)，(tlc1:1庚烷:etoac，通過(guò)uv可見(jiàn)并且使用鈰鉬酸銨染色展開(kāi))，然后將額外的在thf中的etmgbr(1.0m，4.35ml，4.36mmol，0.9當(dāng)量)歷經(jīng)15分鐘加入，然后通過(guò)滴加飽和nh4cl水溶液(5ml)猝滅。將無(wú)機(jī)鹽過(guò)濾出來(lái)，用tbme沖洗并且將濾液相分離。將水相用tbme萃取，然后將合并的有機(jī)萃取物用飽和nh4cl水溶液(3×5ml)和10％鹽水(3×6ml)洗滌。將有機(jī)相在40℃真空濃縮，得到呈黃色泡沫狀的粗制(6β,7α,22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(1.94g)。實(shí)施例4-(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯的合成方法1在10wt.％pd/c(50％濕，20mg，8.6mol％)的dmf(2ml)懸浮液中加入(6β,7α,22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(50mg，0.11mmol)的dmf(3ml)溶液，并且將反應(yīng)混合物冷卻至0℃。將燒瓶抽空，然后在劇烈攪拌下充入氫氣三次。3小時(shí)后，將該燒瓶抽空，然后充入氬氣，并且將混合物通過(guò)注射式過(guò)濾器過(guò)濾。將該混合物在tbme(30ml)和h2o(20ml)之間分配。將有機(jī)相干燥(na2so4)并且真空濃縮。該粗產(chǎn)物(50mg)為(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯的5β與5α異構(gòu)體的14:1混合物(通過(guò)1hnmr分析)，產(chǎn)率92％。1hnmr(700mhz，cdcl3)：δ＝4.12(2h，q，j＝7.1，och2ch3)，3.71(1h，brs，c7h)，3.34(1h，dd，j＝15.5，13.6，c4h)，2.39-2.32(2h，m)，2.24-2.20(1h，m)，2.14-2.09(2h，m)，2.03-1.91(4h，m)，1.83-1.79(2h，m)，1.68-1.63(2h，m)，1.58(1h，s)，1.55-1.12(19h，m)，1.04(3h，s)，0.95-0.93(6h，m)，0.88(1h，j＝7.0)，0.71(3h，s).13cnmr(100mhz，cdcl3)：δ＝213.5，174.2，72.1，60.2，55.9，50.2，49.8，47.0，46.7，42.7，39.5，37.7，36.3，36.0，35.7，35.3，34.2，31.3，31.0，28.1，27.7，24.4，23.8，20.8，18.3，14.2，13.9，11.8.(ir)vmax(cm-1)：3514，2939，2870，1710，1462，1377，1159，1099，1032；hrms(esi-tof)m/z：(m-h2o+h)+c28h45o3計(jì)算值：429.3369；實(shí)測(cè)值：429.3363.方法2將(6β,7α,22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(20.0g)溶解于dmf(400ml)中并且在氬氣下添加至固體10wt.％pd/c(50％濕，10.0g)中。將混合物在冰-鹽浴中冷卻至約-15℃，并且將燒瓶抽空，然后在劇烈攪拌下充入氫氣三次。將該混合物在氫氣氣氛下攪拌6小時(shí)，然后將燒瓶抽空，充入氬氣并且通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾。將催化劑用400ml的tbme沖洗。將濾液用10％nacl水溶液(400ml)洗滌并且將水相用tbme(400ml)萃取。將合并的有機(jī)相用10％nacl水溶液(3×200ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并且真空濃縮，得到呈淡黃色油狀物的粗制(6β，5β，7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯(20.0g，約28∶1的5hβ∶5hα比例)。方法3將10％pd/c在氬氣氣氛下添加至不銹鋼夾套式反應(yīng)容器中；將dmf(20ml)加入，接著加入來(lái)自實(shí)施例3的粗制(6β，7α，22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4，22-膽二烯-24-酸乙酯(大約72.6mmol)的dmf(130ml)溶液。將反應(yīng)混合物在劇烈攪拌(1200rpm)下冷卻至-25℃(歷經(jīng)大約40分鐘)。將反應(yīng)容器抽空，并且充入氫氣(10-12巴)三次。將混合物在氫氣氣氛下(10-12巴)攪拌16小時(shí)。將該容器抽空，吹入氬氣并且在攪拌下溫至20℃。反應(yīng)混合物的tlc(1∶1庚烷：etoac，使用鈰鉬酸銨或香草醛浸液展開(kāi)，rf值：起始材料＝0.42，產(chǎn)物＝0.67)顯示起始材料完全消耗。將該懸浮液用ch3cn(120ml)和h2o(30ml)稀釋?zhuān)⑶覍⒃搼腋∫和ㄟ^(guò)雙層gfa濾紙過(guò)濾，并且將濾餅用ch3cn(60ml)沖洗。該混合物未經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步驟中。該混合物含有大約5％的5h-α異構(gòu)體。最優(yōu)化此實(shí)施例的氫化反應(yīng)通過(guò)下面所示的中間體來(lái)進(jìn)行并且生成所需的5hβ化合物和其5hα異構(gòu)體兩者。進(jìn)行溶劑和催化劑篩選，以確定形成最大產(chǎn)率和5hβ異構(gòu)體與5hα異構(gòu)體為最大比例時(shí)的反應(yīng)條件。該溶劑篩選使用10wt.％pd/c催化劑來(lái)進(jìn)行并且該反應(yīng)在室溫和氫氣氣氛壓力下進(jìn)行。該反應(yīng)在meoh中在net3的存在下進(jìn)行時(shí)比在純meoh中進(jìn)行時(shí)更具有選擇性，而添加10％的h2o時(shí)，降低了5βh的選擇性。在dmf中反應(yīng)提供最佳的β:α比例。在吡啶中反應(yīng)時(shí)，形成所需產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化差，主要以起始材料和中間體存在于混合物中。溶劑5hβ:α比例ameoh4:1bmeoh:h2o2:1cmeoh:net37:1detoh3:1eipa2:1fetoac2:1g吡啶2:1hacoh1:1icpme1:1jdmf9:1在dmf和meoh中的反應(yīng)在一定溫度范圍試驗(yàn)。對(duì)于在dmf中進(jìn)行的反應(yīng)，溫度對(duì)于選擇性有實(shí)質(zhì)性的影響(選擇性隨著溫度升高而降低)，而在meoh中的反應(yīng)觀察到差別很小。在dmf和meoh中的反應(yīng)在商購(gòu)可獲得的5和10wt.％pd催化劑的范圍在碳、碳酸鈣、硫酸鋇和氧化鋁支持物上試驗(yàn)。該反應(yīng)在10倍體積的溶劑中在-15℃在氫氣氣氛壓力下進(jìn)行。在dmf中進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，壓力對(duì)于選擇性的影響比溫度小。稀釋對(duì)選擇性的影響可以忽略。實(shí)施例5至14-(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯由脫氧膽酸的合成實(shí)施例5-(3α,5β)-3-乙酰氧基-12-氧代-膽烷-24-酸甲酯的合成在脫氧膽酸(500g，1.27mol)的meoh(1.5l)溶液中加入h2so4(0.68ml，12.7mmol)并且將反應(yīng)加熱至64℃直到完成為止。將反應(yīng)冷卻至55℃并且將吡啶(2.06ml，25.4mmol)加入。將meoh(800ml)通過(guò)蒸餾除去并且將反應(yīng)冷卻至50℃。將etoac(500ml)加入并且繼續(xù)蒸餾。重復(fù)共蒸發(fā)直到meoh含量<0.5％。將反應(yīng)冷卻至40℃并且將etoac(1.0l)加入，接著加入吡啶(134ml，1.65mol)和dmap(1.1g，8.89mmol)。滴加乙酸酐(150ml，1.58mmol)，并且將反應(yīng)容器在40℃攪拌直到完成為止。將反應(yīng)冷卻至22℃并且將2mh2so4水溶液(1500ml)加入而將溫度維持在低于25℃。將水相除去并且將有機(jī)相用水(1.2l)、飽和nahco3水溶液(1.2l×2)和水(1.2l)洗滌。將acoh(1.0l)添加至有機(jī)層，接著加入nabr(6.6g，63.5mmol)。滴加16.4％naocl水溶液(958ml，2.54mol)并且維持反應(yīng)溫度低于25℃。將反應(yīng)攪拌直到完成為止，然后冷卻至10℃并且攪拌90分鐘。將產(chǎn)生的固體通過(guò)過(guò)濾收集，用水(3×500ml)洗滌并且將濾餅在40℃真空干燥。將固體由meoh(10體積)中結(jié)晶出來(lái)，得到呈灰白色固體的(3α,5β)-3-乙酰氧基-12-氧代-膽烷-24-酸甲酯(268g)。實(shí)施例6-(3α,5β)-3-乙酰氧基-膽烷-24-酸甲酯的合成將(3α,5β)-3-乙酰氧基-12-氧代-膽烷-24-酸甲酯(268g，0.6mol)在氬氣下添加至反應(yīng)容器中，接著加入acoh(1.8l)。然后將甲苯磺酰肼(190g，1.02mol)加入而將反應(yīng)溫度維持在25℃。將反應(yīng)攪拌直到完成為止，然后將nabh4(113.5g，3.00mol)分批加入而將溫度維持在低于25℃。將反應(yīng)混合物攪拌直到完成為止，然后通過(guò)滴加水(1.34l)猝滅而將溫度維持在低于25℃。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，將產(chǎn)生的固體通過(guò)過(guò)濾收集，用水(3×270ml)洗滌并且將該固體在40℃真空干燥。將該固體由meoh(3體積)中結(jié)晶出來(lái)，得到呈灰白色固體的(3α,5β)-3-乙酰氧基-膽烷-24-酸甲酯(214.5g)。實(shí)施例7-(3α,5β)-3-羥基-膽烷-24-酸(石膽酸)的合成在(3α,5β)-3-乙酰氧基-膽烷-24-酸甲酯(214.5g，0.50mol)的ipa(536ml)溶液中加入水(536ml)和50％w/wnaoh(99g，1.24mol)。將反應(yīng)加熱至50℃并且攪拌直到完成為止。將2mh2so4在劇烈攪拌下緩慢加入直至達(dá)到ph2-3，然后將反應(yīng)冷卻至20℃。通過(guò)過(guò)濾收集所產(chǎn)生的固體，用水(3×215ml)洗滌，并且將產(chǎn)生的固體在40℃真空干燥，得到(3α,5β)-3-羥基-膽烷-24-酸(176.53g)。實(shí)施例8-(5β)-3-氧代膽烷-24-酸乙酯的合成在(3α,5β)-3-羥基-膽烷-24-酸(10g，26.5mmol)的etoh(50ml)溶液中加入h2so496％(14μl，0.27mmol)，然后將反應(yīng)混合物加熱至回流達(dá)16小時(shí)。然后將吡啶加入，將混合物攪拌30分鐘并且在40℃真空濃縮。將殘留物溶解于etoac(30ml)和acoh(10ml)中，然后將nabr(136mg，1.33mmol)加入。將溶液冷卻至5℃并且滴加naocl9％(27ml，39.8mmol)而將溫度維持在低于10℃。將生成的懸浮液溫至環(huán)境溫度并且攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃達(dá)10分鐘，通過(guò)過(guò)濾收集固體并且用水(3×3體積)洗滌。將產(chǎn)生的固體在40℃真空干燥，得到(5β)-3-氧代膽烷-24-酸乙酯(7.83g)。實(shí)施例9-(4α,5β)-3-氧代-4-溴-膽烷-24-酸乙酯的合成歷經(jīng)15分鐘在(5β)-3-氧代膽烷-24-酸乙酯(8.0g，19.9mmol)的acoh(84ml)溶液中滴加在acoh中的br2(16ml，21.9mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘，然后用etoac(250ml)稀釋?zhuān)盟?2×200ml)洗滌并且在40℃真空濃縮。將粗制材料通過(guò)柱色譜純化(30％庚烷:etoac)并且在40℃真空濃縮，得到呈蒼白色的結(jié)晶固體(4α,5β)-3-氧代-4-溴-膽烷-24-酸乙酯(7.49g)。實(shí)施例10-(5β)-3-氧代-4-膽烯-24-酸乙酯的合成在(4α，5β)-3-氧代-4-溴-膽烷-24-酸乙酯(4.0g，8.33mmol)的dmf(40ml)溶液中加入li2co3(4.0g，1質(zhì)量當(dāng)量)和libr(2.0g，0.5質(zhì)量當(dāng)量)。將混合物加熱至150℃達(dá)2小時(shí)，然后冷卻至環(huán)境溫度并且倒至水和冰(200g，50體積)和acoh(8ml)的混合物上。將產(chǎn)生的懸浮液攪拌15分鐘，通過(guò)過(guò)濾收集固體，然后通過(guò)柱色譜純化(30％庚烷:etoac)，得到呈蒼白色結(jié)晶固體3-氧代-4-膽烯-24-酸乙酯(1.68g)。實(shí)施例11-3-氧代-4,6-膽二烯-24-酸乙酯的合成將3-氧代-4-膽烯-24-酸乙酯(2.23g，5.57mmol)添加至反應(yīng)容器中，接著加入acoh(6.7ml)和甲苯(2.23ml)。將氯醌(1.5g，6.13mmol)加入并且將反應(yīng)混合物加熱至100℃達(dá)2小時(shí)(ipc，通過(guò)tlc，3:7etoac:庚烷；以茴香醛染色而可見(jiàn))。將反應(yīng)混合物冷卻至10℃達(dá)10分鐘，并且將產(chǎn)生的固體通過(guò)過(guò)濾除去。將濾餅用dcm(9體積)洗滌，然后將產(chǎn)生的濾液在40℃真空濃縮。將殘留物溶解于丙酮(9體積)中，然后滴加3％w/wnaoh水溶液(27體積)而將溫度維持在低于30℃。將產(chǎn)生的混合物在冰浴中冷卻10分鐘，并且通過(guò)過(guò)濾收集該固體。將濾餅用水(2×9體積)和丙酮:水2:1(4體積)洗滌。通過(guò)柱色譜純化(0-30％庚烷:etoac)，得到呈蒼白色的結(jié)晶固體3-氧代-4,6-膽二烯-24-酸乙酯(1.45g)。實(shí)施例12-(6α,7α)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4-膽-烯-24-酸乙酯的合成將3-氧代-4,6-膽二烯-24-酸乙酯(1.37g，4.27mmol)添加至反應(yīng)容器中，接著在攪拌下加入bht(23mg，0.13mmol)、etoac(11ml)和水(3.4ml)。將該溶液加熱至80℃，然后歷經(jīng)15分鐘滴加mcpba70％(1.5g，7.51mmol)的etoac(7.5ml)溶液。將反應(yīng)混合物在70℃攪拌2小時(shí)(ipc，通過(guò)tlc，3:7etoac:庚烷；以茴香醛染色而可見(jiàn))，冷卻至環(huán)境溫度，然后用1mnaoh水溶液(2×20ml)洗滌，接著用10％nas2o3水溶液:2％nahco3(3×20ml)洗滌。將有機(jī)相經(jīng)na2so4干燥并且在40℃真空濃縮。將粗制固體在60℃由etoac(3體積)中結(jié)晶出來(lái)，得到灰白色固體，將其在40℃真空干燥，得到(6α,7α)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4-膽-烯-24-酸乙酯(0.90g)。實(shí)施例13-(6β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4-膽烯-24-酸乙酯的合成將zncl2(600mg，4.25mmol)添加至反應(yīng)容器中，并且在180℃真空干燥1小時(shí)。將反應(yīng)容器冷卻至環(huán)境溫度，將thf(15ml)加入并且將反應(yīng)容器中的內(nèi)容物冷卻至3℃。將3metmgbr的et2o溶液(1.5ml，4.25mmol)歷經(jīng)40分鐘添加至反應(yīng)容器中，將溫度維持在低于5℃。然后將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。將在thf(6ml)中的(6α,7α)-6,7-環(huán)氧基-3-氧代-4-膽-烯-24-酸乙酯(0.80g，1.93mmol)歷經(jīng)40分鐘添加至反應(yīng)容器中，將溫度維持在低于5℃。將cucl(20mg，0.19mmol)一次性加入，并且將反應(yīng)在環(huán)境溫度攪拌16小時(shí)(ipc，通過(guò)tlc，3:7etoac:庚烷；以茴香醛染色而可見(jiàn))。將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻，并且滴加飽和nh4cl水溶液，將溫度維持在低于10℃。將反應(yīng)混合物過(guò)濾并且將濾餅用tbme(12.5體積)洗滌。將濾液的有機(jī)相分離，并且將水相用tbme(2×12.5體積)萃取。將合并的有機(jī)相用5％nacl(3×12.5體積)洗滌并且在40℃真空濃縮。實(shí)施例14-(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯的合成在氬氣氣氛下，將10％pd/c(70mg)添加至反應(yīng)容器中，接著加入在dmf(14.6ml)中的來(lái)自實(shí)施例13的粗制材料。將混合物冷卻至-10℃并且將反應(yīng)容器抽空，然后在劇烈攪拌下充入氫氣三次。將混合物在氫氣氣氛中攪拌24小時(shí)，將溫度維持在-10℃(ipc，通過(guò)tlc，洗脫液1:1etoac:庚烷；以茴香醛染色而可見(jiàn))，然后將燒瓶抽空，充入氬氣，并且通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，并且用dmf(7ml)沖洗。將10％pd/c(70mg)在氬氣氣氛下再加入反應(yīng)容器中，接著加入dmf反應(yīng)混合物。將混合物冷卻至大約-10℃，并且將反應(yīng)容器抽空，然后在劇烈攪拌下充入氫氣三次。將混合物在-10℃在氫氣氣氛下攪拌24小時(shí)(ipc，通過(guò)tlc，1:1etoac:庚烷；以茴香醛染色而可見(jiàn))，然后將燒瓶抽空，充入氬氣并且通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，并且用tbme(62.5體積，50ml)洗滌。將濾液用10％nacl水溶液(4×25體積)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并且在40℃真空濃縮。通過(guò)柱色譜純化(sio2，0-30％庚烷:etoac)，得到(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯(0.17g)。該產(chǎn)物與由植物來(lái)源獲得的材料(6β,7α,22e)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-4,22-膽二烯-24-酸乙酯(參見(jiàn)實(shí)施例4)相同。實(shí)施例15至17-(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯向(3α,5β,6α,7α)-6-乙基-3,7-二羥基-膽烷-24-酸的轉(zhuǎn)化實(shí)施例15-(6β,5β)-3,7-二氧代-6-乙基-膽烷-24-酸乙酯的合成方法1將由cro3(1.10g，11mmol)在h2so4(1.4ml)中制備并且加入水成為5ml的瓊斯試劑(jones’sreagent)溶液滴加至(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯(0.18g，0.40mmol)的丙酮(10ml)溶液中，直到呈現(xiàn)橙色為止。將反應(yīng)混合物用ipa(1ml)猝滅，通過(guò)0.45μm尼龍注射器過(guò)濾器過(guò)濾，并且將該過(guò)濾器用丙酮(10ml)洗滌。將合并的濾液和洗液濃縮，將殘留物溶解于etoac(20ml)并且用水(2×10ml)洗滌。將水相用etoac(20ml)萃取，將合并的etoac相濃縮，并且將殘留物溶解并且由甲苯(20ml)然后由丙酮(20ml)中濃縮出來(lái)，得到含有(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3,7-二氧代-膽烷-24-酸乙酯(185mg)的澄清油狀物。1hnmr(700mhz，cdcl3)：δ＝4.12(2h，q，j＝7.1)，2.42(1h，t，j＝11.4)，2.38-2.17(6h，m)，2.09-1.74(9h，m)，1.68-1.11(17h，m)，0.93(3h，d，j＝6.5)，0.85(3h，t，j＝7.4)，0.72(3h，s).13cnmr(100mhz，cdcl3)：δ＝214.5，211.4，174.0，60.1，57.1，55.1，50.3，48.4，47.3，44.9，43.6，43.1，39.2，35.8，35.2(×2)，34.9，31.3，30.9，28.1，24.6，23.7，23.4，21.7，18.3，14.2，12.6，12.2.(ir)vmax(cm-1)：2950，2872，1709，1461，1377，1304，1250，1177，1097，1034；hrms(esi-tof)m/z：(m+h)+c28h45o4計(jì)算值：445.3318；實(shí)測(cè)值：445.3312；方法2于0℃在(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯(41.0g粗制物質(zhì))在無(wú)水ch2cl2(600ml)中的溶液中歷經(jīng)20分鐘分批加入固體dmp(34.0g，80.2mmol)(放熱)。將該混合物在0-5℃攪拌2小時(shí)，然后加入另一部分dmp(4.0g，9.4mmol)，并且將反應(yīng)在0-5℃攪拌1小時(shí)。將混合物通過(guò)gfa過(guò)濾器過(guò)濾，并且將該固體用ch2cl2(50ml)沖洗，將濾液與10％na2s2o3水溶液和2％nahco3水溶液(100ml)劇烈攪拌20分鐘。將各相分離并且將水相用ch2cl2(2×100ml)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用1mnaoh(100ml)洗滌。將混合物用ch2cl2(300ml)稀釋并且將各相分離。將有機(jī)層減壓濃縮并且將殘留物(渾濁棕色油狀物)溶解于tbme(600ml)中，并且用1mnaoh(100ml)和nacl(3×100ml)洗滌。將有機(jī)相真空濃縮，得到暗黃色流動(dòng)油狀物，粗制質(zhì)量38.1g，將該油狀物溶解于etoh(400ml)中并且在50℃與活性炭(10g)一起攪拌，然后將混合物過(guò)濾，將炭用etoh(200ml)沖洗，并且將濾液真空濃縮，得到呈黃色油狀物的(6β,5β)-3,7-二氧代-6-乙基-膽烷-24-酸乙酯(35.9g)。方法3將(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯(218mmol)在dmf(450ml)、ch3cn(540ml)和h2o(90ml)中的溶液添加至2l容器中并且冷卻至9℃，然后將acoh(180ml)加入，接著加入nabr(4.1g)。歷經(jīng)1.5小時(shí)滴加次氯酸鈉(～10.5％w/v，450ml)溶液，將內(nèi)部溫度維持在5-6℃，然后將混合物在7℃攪拌5小時(shí)。反應(yīng)混合物的tlc顯示起始材料完全消耗(ipc，通過(guò)tlc，洗脫液etoac/庚烷3∶7，(6β,5β,7α)-6-乙基-7-羥基-3-氧代-膽烷-24-酸乙酯的rf＝0.34；(6β,5β)-3,7-二氧代-6-乙基-膽烷-24-酸乙酯的rf＝0.45)。將10％w/vna2so3水溶液(360ml)在劇烈攪拌下滴加，維持內(nèi)部溫度在8-10℃，然后滴加h2o(270ml)，并且將混合物在5℃攪拌16小時(shí)。將固體過(guò)濾出來(lái)并且用h2o(720ml)洗滌。然后將固體溶解于tbme(1.1l)中并且隨后用nahco3水溶液(300ml)和10％鹽水(300ml)洗滌。然后將有機(jī)相在40℃與活性炭(10g)攪拌20分鐘，用無(wú)水mgso4(5g)處理并且通過(guò)gfa濾紙過(guò)濾，將濾餅用tbme(50ml)沖洗，并且將濾液真空濃縮，得到在靜置時(shí)固化的呈淡棕色油狀物的(6β,5β)-3,7-二氧代-6-乙基-膽烷-24-酸乙酯(82.7g)。實(shí)施例16-(6α,5β)-3,7-二氧代-6-乙基-膽烷-24-酸的合成在500ml燒瓶中加入0.5體積的0.5mnaoh(9ml)，接著加入來(lái)自實(shí)施例15的(6β,5β)-3,7-二氧代-6-乙基-膽烷-24-酸乙酯(18.00g，1當(dāng)量)，然后加入ipa(180ml，10體積)(最初加入naoh避免可能的c3-縮酮形成)。將該混合物溫至60±2℃，并且維持直至得到溶液(10-15分鐘)。將剩余的0.5mnaoh溶液(171ml，9.5體積)歷經(jīng)20分鐘加入，然后將反應(yīng)在60±2℃再攪拌3.5小時(shí)。將ipa在60℃真空中除去，然后加入2mhcl(8ml)使成為ph9。將etoac(90ml，5體積)加入，接著加入2mhcl(54ml)成為ph1。劇烈混合后接著相分離。將水相用額外的etoac(90ml，5體積)反萃取，然后將合并的有機(jī)相用水(54ml，3體積)洗滌，接著用三批10％nacl水溶液(3×54ml，3×3體積)洗滌。將有機(jī)相用活性炭(100目粉末，3.37g，～0.20質(zhì)量當(dāng)量)處理12分鐘，然后通過(guò)gf/b過(guò)濾。在50℃真空濃縮，以定量產(chǎn)率得到呈淡黃色泡沫狀的(6α,5β)-3,7-二氧代-6-乙基-膽烷-24-酸。1hnmr(700mhz，cdcl3)：δ＝2.74(1h，dd，j＝12.8，5.4)，2.47(1h，t，j＝12.5)，2.43-0.90(32h，m)，0.81(3h，t，j＝7.4)，0.70(3h，s).13cnmr(100mhz，cdcl3)：δ＝212.1，210.6，179.4，54.9，52.4，52.3，50.0，48.9，43.7，42.7，38.9，38.3，36.7，36.0，35.5，35.2，30.9，30.7，28.2，24.6，22.9，22.3，18.6，18.3，12.1，11.8.(ir)vmax(cm-1)：2939，2873，1706，1458，1382，1284.8.hrms(esi-tof)m/z：(m+h)+c26h41o4計(jì)算值：417.3005；實(shí)測(cè)值：417.2997；mp＝71.2-75.9℃實(shí)施例17-(3α,5β,6α,7α)-6-乙基-3,7-二羥基-膽烷-24-酸的合成在90℃在粗制(6α,5β)-6-乙基-3,7-二氧代-膽烷-24-酸(21.7g粗制物質(zhì))在h2o(260ml)和50％naoh(15.2ml)中的溶液中滴加nabh4(4.4g，116.3mmol)在naoh水溶液(由25ml的h2o和0.8ml50％naoh來(lái)制備)中的溶液。將混合物加熱至回流并且攪拌3小時(shí)。然后將混合物冷卻至60℃，并且在劇烈攪拌下滴加2m的hcl溶液(200ml)。接著將nbuoac(100ml)添加至反應(yīng)燒瓶中，并且將混合物再攪拌20分鐘。將各相分離并且將水相(ph＝1/2)用nbuoac(100ml)萃取。將合并的有機(jī)相用2mhcl(50ml)和10％nacl水溶液(100ml)洗滌。將有機(jī)溶劑在70-80℃減壓蒸餾出來(lái)。將殘留物(稠油狀物)在70℃溶解于nbuoac(60ml)中，并且逐步冷卻至室溫，然后在6℃儲(chǔ)存2小時(shí)。將固體通過(guò)過(guò)濾收集，用冷nbuoac(20ml)沖洗，然后在70℃真空干燥5小時(shí)，得到呈白色固體的(3α,5β,6α,7α)-6-乙基-3,7-二羥基-膽烷-24-酸(8.2g)。當(dāng)前第1頁(yè)12