本發(fā)明屬于微生物生產(chǎn)脂質(zhì)領(lǐng)域，具體涉及提高產(chǎn)脂微生物生產(chǎn)奇數(shù)碳脂肪酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基及方法。
背景技術(shù)：
：奇數(shù)碳脂肪酸(oddchainfattyacid，ocfa)的功能類似不飽和脂肪酸，有助于提高細胞膜的流動性。在某些細菌中含量較多，但在動物、低等植物中含量不超過1％。奇數(shù)碳脂肪酸代謝后產(chǎn)生糖殘基，因而有更佳的營養(yǎng)效果〔楊渝珍等，奇數(shù)碳中鏈脂肪酸對饑餓大鼠葡萄糖體內(nèi)平衡及儲脂動員的代謝效應，武漢醫(yī)學院學報，1983:29-35；ratsenrichedwithodd-carbonfattyacids:maintenanceofliverglycogenduringstarvation，science，1969，165(3895):811-813〕，不存在不利作用〔張大昕，奇數(shù)碳脂肪酸的代謝與營養(yǎng)，生理科學進展，1979，10(3):250-255〕；此外，含有奇數(shù)碳脂肪酸的甘三酯可以減少膿毒癥及重癥特護治療的繼發(fā)性并發(fā)癥的發(fā)生頻率或減輕炎癥性或縮短病程〔cn200980145702.6〕。奇數(shù)碳脂肪酸的增加也被認為是微生物應對環(huán)境壓力的一種適應機制〔zhul,zhangx,jil,etal.changesoflipidcontentandfattyacidcompositionofschizochytriumlimacinuminresponsetodifferenttemperaturesandsalinities[j].processbiochemistry,2007,42(2):210-214〕。由于奇數(shù)碳脂肪酸在自然界中合成量很少，因而常被額外添加以作為脂肪酸定量分析、脂肪酸攝入量分析的內(nèi)參〔areviewofodd-chainfattyacidmetabolismandtheroleofpantadecanoicacid(c15:0)andheptadecanoicacid(c17:0)inhealthanddisease,molecules,2015,20:2425-2444〕。奇數(shù)碳脂肪酸可通過偶數(shù)碳脂肪酸的α氧化以及脂肪酸合成兩條途徑產(chǎn)生。α氧化一般發(fā)生在脂肪酸β位存在基團修飾的情況下，正常情況下細胞內(nèi)不會大量積累這種脂肪酸。從頭合成途徑一般認為是脂肪酸合成系統(tǒng)采用了丙 酰輔酶a為前體〔horningetal.,fattyacidsynthesisinadiposetissue,thejournalofbiologicalchemistry,1961,236(3):669-672〕，而常規(guī)偶數(shù)碳脂肪酸的合成使用乙酰輔酶a為前體(圖1中的1)。丙酰輔酶a產(chǎn)生的直接途徑是丙酸在硫激酶的作用下形成丙酰輔酶a，硫激酶分為3類，ec6.2.1.1激活乙酸、丙酸，ec6.2.1.2激活4～10個碳原子的脂肪酸，ec6.2.1.3激活12個碳以上的脂肪酸。不過微生物體內(nèi)通常很難積累丙酸，因此ocfa合成的底物少。此外，還有圖1中的2和3兩條途徑可生成丙酰輔酶a。已有研究團隊試圖依此提高起始物來增加ocfa的合成。如cn201280054084.6通過增強丙酰輔酶a的合成來提高ocfa的生產(chǎn)。該文獻通過引入可產(chǎn)生丙酰輔酶a的酶來制備奇數(shù)碳脂肪酸，如天冬氨酸激酶、絲氨酸脫氫酶、絲氨酸激酶、蘇氨酸合酶、蘇氨酸脫氫酶、(r)-檸蘋酸合酶、異丙基蘋果酸異構(gòu)酶、β-異丙基蘋果酸脫氫酶、甲基丙二酰輔酶a變位酶、甲基丙二酰輔酶a羧酶、甲基丙二酰輔酶a羧基轉(zhuǎn)移酶等。經(jīng)過一系列操作，在重組大腸桿菌中合成ocfa達總脂肪酸的82％，不過大腸桿菌不是油脂微生物，因此ocfa的總量只有325mg/l。裂殖壺菌又稱裂壺藻，屬于破囊壺菌科的一類海洋真菌。裂壺菌能夠積累大量活性物質(zhì)，如dha、胡蘿卜素、蝦青素等。采用葡萄糖或甘油做碳源發(fā)酵，細胞干重可達到150克/升，油脂占細胞干重能到70％以上，dha占總脂肪酸35％以上，且主要以甘三酯形式存在，少量以卵磷脂形式存在〔魏萍等，裂殖壺菌發(fā)酵生產(chǎn)dha研究進展,食品工業(yè)科技，2010，20:398-404〕。因為它有很強的脂質(zhì)積累能力和較純的脂肪酸組成，裂壺藻是極佳的脂質(zhì)合成宿主。裂壺藻某些菌也能夠生產(chǎn)奇數(shù)碳脂肪酸。如chang等〔odd-chainpolyunsaturatedfattyacidsinthraustochytrids,phytochemistry,2011,72:1460-1465〕介紹了破囊壺菌科schizochytrium疑似菌積累15.4％的ocfa，thraustochytrium疑似菌積累21％ocfa。如ep0823475a實施例3中，schizochytriumsr21菌奇數(shù)碳脂肪酸含量達到c15:0為10.1％，c17:0為1.8％。如chang等〔fattyacidshiftsandmetabolicactivitychangesofschizochytriumnsp.s31culturedonglycerol,broresourcetechnology2013，142：255-260〕中，裂壺藻atcc20888分批發(fā)酵，在發(fā)酵72h時檢測到最高量的c15:0為9.16％和c17:0為2.91％，但到發(fā) 酵后期時會降到很低水平(c15:01.25％,c17:00.99％)?？梢?，schizochytrium藻發(fā)酵生產(chǎn)奇數(shù)碳脂肪酸，細胞內(nèi)最高含量的報道為15.4％。目前現(xiàn)有的公開中，僅chang等〔fattyacidshiftsandmetabolicactivitychangesofschizochytriumnsp.s31culturedonglycerol,broresourcetechnology2013，142：255-260〕推測過裂壺藻內(nèi)奇數(shù)碳脂肪酸的合成途徑：c15及c17脂肪酸是c12、c14與2-甲基丙酰coa的縮合。裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)脂的報道已經(jīng)很多，但尚未有提及裂壺藻可產(chǎn)生β分枝脂肪酸的報道，因而經(jīng)過α氧化產(chǎn)生10％以上這么多ocfa的可能很低。經(jīng)由丙酰輔酶a的途徑可能是裂壺藻合成大量ocfa的機制，但丙酸一般通過wood-werkman循環(huán)合成，大量的生產(chǎn)僅在丙酸菌厭氧發(fā)酵中才能達成，是較難進行的代謝途徑〔趙樹欣等，固定化丙酸菌發(fā)酵底物的研究，《中國食品添加劑》，2005〕。裂壺藻屬于海洋微藻，如cn201210139766.9所述，裂壺藻在淡水中不能生長。因此培養(yǎng)海洋微藻，如裂壺藻，需要使用天然海水或海鹽(海水晶)或含有近似所需海鹽中氯化鈉含量的復配鹽。但海水或海鹽中含有大量氯離子，氯離子對發(fā)酵罐及其他下游處理設(shè)備有腐蝕作用(例如，可參見cn1416320a)。因此cn1416320a以及wo94/08467、cn201510201809.5使用硫酸鈉替代氯化鈉進行發(fā)酵。而且wo94/08467指出硫酸鈉取代后的復配海鹽能得到更好的生物量和脂質(zhì)生產(chǎn)效果。雖然cn201110111247.7、cn201310021713.1、cn201410377164.6、cn201410086785.9、cn201010561184.x、cn201210139766.9、cn201310683597.x都使用了海水、海鹽(海水晶)或氯化鈉來模擬海洋環(huán)境發(fā)酵裂壺藻，但都未檢測到奇數(shù)碳脂肪酸的產(chǎn)生。同樣地，使用裂壺藻atcc20888的cn1416320a、wo94/08467也未檢測到奇數(shù)碳脂肪酸。因此，本領(lǐng)域仍然需要一種奇數(shù)碳脂肪酸的生產(chǎn)方法。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明第一方面提供生產(chǎn)奇數(shù)碳脂肪酸的方法或提高產(chǎn)脂微生物奇數(shù)碳脂肪酸產(chǎn)率的方法，所述方法包括在含(i)丙酸和/或丙酸鹽，和/或(ii)乳酸 和/或乳酸鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵產(chǎn)脂微生物。在一個或多個實施方案中，所述奇數(shù)碳脂肪酸選自c13:0、c15:0、c17:0和c21:0中的一種或多種。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有丙酸和/或丙酸鹽作為碳源。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中丙酸或丙酸鹽的含量為0.5～3.0wt％，例如0.8～2.5wt％、0.8～2.0wt％。在一個或多個實施方案中，丙酸鹽選自丙酸的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽、銨鹽和銅鹽中的一種或多種的混合物。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有乳酸和/或乳酸鹽作為碳源。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中乳酸或乳酸鹽的含量為0.5～3wt％，例如0.8～2.5wt％、0.8～2.0wt％。在一個或多個實施方案中，乳酸鹽選自乳酸的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽、銨鹽和銅鹽中的一種或多種的混合物。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還含有甘油、果糖、葡萄糖、蔗糖、糖蜜和淀粉中的一種或多種作為碳源，其中，所述(i)丙酸和/或丙酸鹽，和/或(ii)乳酸和/或乳酸鹽占發(fā)酵培養(yǎng)基碳源總量的0.1～100％，優(yōu)選1～100％，更優(yōu)選10～100％，更優(yōu)選20～100％，更優(yōu)選30～100％，更優(yōu)選40～100％，更優(yōu)選50～100％。在一個或多個實施方案中，所述碳源為葡萄糖。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖的含量為0.5～3.0wt％，例如0.8～2.5wt％、0.8～2.0wt％。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源為葡萄糖及丙酸和/或丙酸鹽，其中，葡萄糖與丙酸和/或丙酸鹽的重量比為1：3～3：1。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基還含有甘油。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源為葡萄糖及乳酸和/或乳酸鹽，其中，葡萄糖與乳酸和/或乳酸鹽的重量比為1：3～3：1。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還含有海鹽或其替代物。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中，海鹽或其替代物的濃度為2.5～36g/l，優(yōu)選12～24g/l。在一個或多個實施方案中，海鹽替代物為海水，或含有選自氯化鈉、硫酸鈉、磷酸鈉鹽、磷酸鉀鹽、硫酸鉀、硫酸鎂、氯化鎂、硫酸鉀、氯化鉀、氯化鈣、氯化錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸鈉、硫酸鎳、硫酸亞鐵、氯化鈷的鹽以及選自硫胺素和泛酸鈣的維生素的組合。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨、酵母粉、尿素、硝酸鹽、亞硝酸鹽、大豆蛋白、氨基酸、氨基酸鹽、蛋白質(zhì)、玉米漿、動物性副產(chǎn)品、無機銨鹽和氨水中的一種或多種作為氮源。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨和酵母粉。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基的ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的丙酸或其鹽，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的乳酸或其鹽，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的丙酸或其鹽，0.5～3.0wt％的葡萄糖或甘油，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的乳酸或其鹽，0.5～3.0wt％的葡萄糖或甘油，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，所述產(chǎn)脂微生物是破囊壺菌(thraustochytrid)。在一個或多個實施方案中，所述產(chǎn)脂微生物是裂殖壺菌(schizochytrium)。本發(fā)明第二方面提供一種用于發(fā)酵產(chǎn)脂微生物的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有(i)丙酸和/或丙酸鹽，和/或(ii)乳酸和/或乳酸鹽。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有丙酸和/或丙酸鹽作為碳源。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中丙酸或丙酸鹽的含量為0.5～3.0wt％，例如0.8～2.5wt％、0.8～2.0wt％。在一個或多個實施方案中，丙酸鹽選自丙酸的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽、銨鹽和銅鹽中的一種或多種的混合物。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有乳酸和/或乳酸鹽作為碳源。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中乳酸或乳酸鹽的含量為0.5～3wt％，例如0.8～2.5wt％、0.8～2.0wt％。在一個或多個實施方案中，乳酸鹽選自乳酸的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽、銨鹽和銅鹽中的一種或多種的混合物。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還含有甘油、果糖、葡萄糖、蔗糖、糖蜜和淀粉中的一種或多種作為碳源，其中，所述(i)丙酸和/或丙酸鹽，和/或(ii)乳酸和/或乳酸鹽占發(fā)酵培養(yǎng)基碳源總量的0.1～100％，優(yōu)選1～100％，更優(yōu)選10～100％，更優(yōu)選20～100％，更優(yōu)選30～100％，更優(yōu)選40～100％，更優(yōu)選50～100％。在一個或多個實施方案中，所述碳源為葡萄糖。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖的含量為0.5～3.0wt％，例如0.8～2.5wt％、0.8～2.0wt％。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源為葡萄糖及丙酸和/或丙酸鹽，其中，葡萄糖與丙酸和/或丙酸鹽的重量比為1：3～3：1。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基還含有甘油。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源為葡萄糖及乳酸和/或乳酸鹽，其中，葡萄糖與乳酸和/或乳酸鹽的重量比為1：3～3：1。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還含有海鹽或其替代物。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中，海鹽或其替代物的濃度為2.5～36g/l，優(yōu)選12～24g/l。在一個或多個實施方案中，海鹽替代物為海水，或者含有選自氯化鈉、硫 酸鈉、磷酸鈉鹽、磷酸鉀鹽、硫酸鉀、硫酸鎂、氯化鎂、硫酸鉀、氯化鉀、氯化鈣、氯化錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸鈉、硫酸鎳、硫酸亞鐵、氯化鈷的鹽以及選自硫胺素和泛酸鈣的維生素的組合。在一個或多個實施方案中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨、酵母粉、尿素、硝酸鹽、亞硝酸鹽、大豆蛋白、氨基酸、氨基酸鹽、蛋白質(zhì)、玉米漿、動物性副產(chǎn)品、無機銨鹽和氨水中的一種或多種作為氮源。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨和酵母粉。在一個或多個實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基的ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的丙酸或其鹽，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的乳酸或其鹽，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的丙酸或其鹽，0.5～3.0wt％的葡萄糖或甘油，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，以發(fā)酵培養(yǎng)基總重計，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的乳酸或其鹽，0.5～3.0wt％的葡萄糖或甘油，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在一個或多個實施方案中，所述產(chǎn)脂微生物是破囊壺菌(thraustochytrid)。在一個或多個實施方案中，所述產(chǎn)脂微生物是裂殖壺菌(schizochytrium)。本發(fā)明還包括丙酸和/或丙酸鹽在生產(chǎn)奇數(shù)碳脂肪酸中的應用，以及乳酸和/或乳酸鹽在生產(chǎn)奇數(shù)碳脂肪酸中的應用。在一個或多個實施方案中，所述應用為在產(chǎn)脂微生物發(fā)酵中的應用。附圖說明圖1顯示脂肪酸合成系統(tǒng)使用丙酰輔酶a為前體來合成奇數(shù)碳脂肪酸，其中1顯示由丙酰輔酶a合成奇數(shù)碳脂肪酸的途徑，2和3分別顯示丙酰輔酶a的兩條合成途徑。具體實施方案本發(fā)明通過優(yōu)化培養(yǎng)的方式提高產(chǎn)脂微生物(尤其是裂壺藻)生產(chǎn)奇數(shù)碳脂肪酸的效果。具體而言，本發(fā)明在產(chǎn)脂微生物的常規(guī)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加丙酸和/或其鹽，和/或乳酸和/或其鹽，作為碳源，可顯著提高產(chǎn)脂微生物發(fā)酵產(chǎn)物中奇數(shù)碳脂肪酸的含量。產(chǎn)脂微生物通常為破囊壺菌(thraustochytrid)，優(yōu)選為裂殖壺菌(schizochytrium)。本文中，奇數(shù)碳脂肪酸主要指c13:0、c15:0、c17:0和c21:0。本文中，奇數(shù)碳脂肪酸含量的提高即可以指單種奇數(shù)碳脂肪酸含量的提高，也可以指脂肪酸中全部奇數(shù)碳脂肪酸的含量提高。適用于本發(fā)明的丙酸鹽可以是丙酸的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽、銨鹽和銅鹽中的一種或多種的混合物，優(yōu)選是鈉鹽和鉀鹽。適用于本發(fā)明的乳酸鹽可以是乳酸的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽、銨鹽和銅鹽中的一種或多種的混合物，優(yōu)選是鈉鹽和鉀鹽。丙酸和/或丙酸鹽、乳酸和/或乳酸鹽可以0.5～3.0wt％的量添加到常規(guī)的用于產(chǎn)脂微生物的發(fā)酵的發(fā)酵培養(yǎng)基中。通常，丙酸和/或丙酸鹽、乳酸和/或乳酸鹽的添加量(以發(fā)酵培養(yǎng)基重量計)為0.5～2.5wt％，例如0.5～2.0wt％、0.5～1.5wt％、0.5～1.0wt％等?？墒褂帽岷?或丙酸鹽、乳酸和/或乳酸鹽來替換常規(guī)發(fā)酵培養(yǎng)基中的一部分或全部碳源。因此，當替換發(fā)酵培養(yǎng)基中的全部碳源時，丙酸和/或丙酸鹽、乳酸和/或乳酸鹽的添加量可達例如1.0～3.0wt％，如1.0～2.0wt％。當替換發(fā)酵培養(yǎng)基中的部分碳源時，丙酸和/或丙酸鹽、乳酸和/或乳酸鹽的添加量可以為0.5～2.0wt％，例如0.5～1.5wt％、0.5～1.0wt％等。發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源可以是本領(lǐng)域周知的用于發(fā)酵產(chǎn)脂微生物所需的碳源，包括但不限于各種碳水化合物，例如甘油、果糖、葡萄糖、蔗糖、糖蜜和 淀粉中的一種或多種的化合物。優(yōu)選的這類碳源是葡萄糖和甘油。發(fā)酵培養(yǎng)基中這類碳源的用量為常規(guī)用量，當如本文所述添加丙酸和/或丙酸鹽、乳酸和/或乳酸鹽時，這類碳源的用量可作相應的減少。在某些實施方案中，丙酸和/或丙酸鹽、乳酸和/或乳酸鹽占發(fā)酵培養(yǎng)基碳源總量的0.1～100％，優(yōu)選1～100％，更優(yōu)選10～100％，更優(yōu)選20～100％，更優(yōu)選30～100％，更優(yōu)選40～100％，更優(yōu)選50～100％。例如，在某些實施方案中，使用葡萄糖與丙酸和/或丙酸鹽作為碳源，兩者的重量比可以在1：3到3：1的范圍內(nèi)?；蛘?，以發(fā)酵培養(yǎng)基的總重計，葡萄糖的含量為0.5～2.0wt％，如0.5～1.5wt％，丙酸和/或丙酸鹽的含量為0.5～2.0wt％，如0.5～1.5wt％。在某些實施方案中，葡萄糖的含量為1wt％，而丙酸和/或丙酸鹽的含量為1wt％。在某些實施方案中，使用葡萄糖與乳酸和/或乳酸鹽作為碳源，兩者的重量比可以在1：3到3：1的范圍內(nèi)。或者，以發(fā)酵培養(yǎng)基的總重計，葡萄糖的含量為0.5～2.0wt％，如0.5～1.5wt％，乳酸和/或乳酸鹽的含量為0.5～2.0wt％，如0.5～1.5wt％。在某些實施方案中，葡萄糖的含量為1wt％，而乳酸和/或乳酸鹽的含量為1wt％。通常，當產(chǎn)脂微生物為海洋微生物時，發(fā)酵培養(yǎng)基中還含有海鹽或其替代物，用以提供海鹽微生物生長所需的滲透壓和微量元素。海鹽替代物為海水，或者含選自氯化鈉、硫酸鈉、磷酸鈉鹽、磷酸鉀鹽、硫酸鉀、硫酸鎂、氯化鎂、硫酸鉀、氯化鉀、氯化鈣、氯化錳、硫酸鋅、硫酸銅、鉬酸鈉、硫酸鎳、硫酸亞鐵、氯化鈷的鹽以及硫胺素、泛酸鈣的維生素的組合(即本領(lǐng)域周知的“復配海鹽”)。本領(lǐng)域周知，裂壺藻可以忍受一定范圍的鹽度變化，因此，本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基的鹽度范圍可以是wo94/08467所公開的低鹽培養(yǎng)條件到該藻天然生存的海洋環(huán)境鹽度。在某些實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基中海鹽的含量范圍可以為2.5～36g/l，例如12～24g/l、15～20g/l。當使用海水或復配海鹽時，可對海水和復配海鹽的量做適當調(diào)整，以將其所含的對應于海鹽的成分的含量控制在上述范圍之內(nèi)。換言之，本文中所用的“2.5～36g/l的海鹽替代物”指的是海水或復配海鹽中對應于海鹽的成分的濃度。發(fā)酵培養(yǎng)基中還可含有氮源。所用氮源包括但不限于蛋白胨、酵母粉、尿素、硝酸鹽、亞硝酸鹽、大豆蛋白、氨基酸、氨基酸鹽、蛋白質(zhì)、玉米漿、動物性副產(chǎn)品、無機銨鹽、氨水等。優(yōu)選的，使用蛋白胨和酵母粉。發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源的含量為產(chǎn)脂微生物發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源的常規(guī)含量。例如，氮源的總含量占發(fā)酵培養(yǎng)基重量的1～5wt％，如1～3wt％等。在某些實施方案中，使用1.0～3.0wt％的蛋白胨和1.0～3.0wt％的酵母粉作為發(fā)酵培養(yǎng)基中的氮源。發(fā)酵培養(yǎng)基的ph通常在6.5～7.0的范圍內(nèi)，優(yōu)選6.8±0.1。雖然本發(fā)明使用乳酸或丙酸作為碳源，在配置培養(yǎng)基時，可使用其它的酸或堿來調(diào)節(jié)ph。因此，在某些實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的丙酸或其鹽，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在其它實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的乳酸或其鹽，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在其它實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的丙酸或其鹽，0.5～3.0wt％的葡萄糖或甘油，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在其它實施方案中，發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的乳酸或其鹽，0.5～3.0wt％的葡萄糖或甘油，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。在某些實施方案中，本發(fā)明涉及提高c13:0、c15:0和c21:0的產(chǎn)率的方法，該方法包括使用本文所述的含丙酸和/或丙酸鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)脂微生物。例如，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的丙酸或其鹽，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0；或者含有0.5～3.0wt％的丙酸或其鹽，0.5～3.0wt％的葡萄糖或甘油，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。優(yōu)選地，所述產(chǎn)脂微生物是裂壺藻。在某些實施方案中，本發(fā)明涉及提高c17:0的產(chǎn)率的方法，所述方法包括 使用本文所述的含乳酸和/或乳酸鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)脂微生物。例如，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有0.5～3.0wt％的乳酸或其鹽，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0；或者含有0.5～3.0wt％的乳酸或其鹽，0.5～3.0wt％的葡萄糖或甘油，1.0～3.0wt％的蛋白胨，1.0～3.0wt％的酵母粉，和任選的2.5～36g/l、優(yōu)選12～24g/l的海鹽或其替代物，ph為6.5～7.0。優(yōu)選地，所述產(chǎn)脂微生物是裂壺藻。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及使用本文所述的各含乳酸和/或乳酸鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)脂微生物的方法。本發(fā)明還包括丙酸和/或丙酸鹽在生產(chǎn)奇數(shù)碳脂肪酸或提高奇數(shù)碳脂肪酸產(chǎn)量中的應用，以及乳酸和/或乳酸鹽在生產(chǎn)奇數(shù)碳脂肪酸或提高奇數(shù)碳脂肪酸產(chǎn)量中的應用。所述應用優(yōu)選為在本文所述的產(chǎn)脂微生物發(fā)酵中的應用。本發(fā)明當然也包括(i)丙酸和/或丙酸鹽，和/或(ii)乳酸和/或乳酸鹽在制備產(chǎn)脂微生物發(fā)酵培養(yǎng)基中的應用。適用于本發(fā)明的發(fā)酵條件，如溫度、壓力、時間等均為本領(lǐng)域用于發(fā)酵所述產(chǎn)脂微生物的常規(guī)發(fā)酵溫度、壓力和時間。作為一個例子，本發(fā)明在發(fā)酵裂壺藻時，發(fā)酵溫度為室溫(23～30℃)，發(fā)酵壓力為常壓，發(fā)酵時間為1～10天。在本發(fā)明的具體實施例中，本發(fā)明以裂殖壺菌為生產(chǎn)菌株，以本領(lǐng)域研究者熟知的方法進行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)。所用培養(yǎng)基采用葡萄糖或甘油，額外添加丙酸鹽或乳酸鹽為碳源，以蛋白胨、酵母粉為氮源，以海鹽提供海藻生長所需的滲透壓和微量元素，顯著提高了裂壺藻奇數(shù)碳脂肪酸合成的能力，比現(xiàn)有公開的水平增加至少一倍。采用的方法為發(fā)酵優(yōu)化，比轉(zhuǎn)基因改造方法更安全、簡單。本發(fā)明達到的奇數(shù)碳脂肪酸的含量可以比現(xiàn)有公開的含量增加110％，比相同菌株的含量提高150％。下文將以具體實施例的方式闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅僅是闡述性的，并非限制本發(fā)明。實施例中所采用到的方法和試劑，除非另有說明，否則為本領(lǐng)域常規(guī)的方法和試劑。若非特別說明，均購自上海生工，海鹽購自天津中鹽海洋生物科學有限公司。對比例1chang等〔fattyacidshiftsandmetabolicactivitychangesofschizochytriumnsp.s31culturedonglycerol,broresourcetechnology2013，142：255-260〕使用甘油、酵母粉和硫酸鈉復配海鹽培養(yǎng)atcc20888，在發(fā)酵罐中使用擋板三角瓶培養(yǎng)裂壺藻atcc20888，培養(yǎng)基為100g/l的葡萄糖或甘油，40g/l酵母粉，1g/l硫酸銨，1g/l磷酸二氫鉀，12g/l硫酸鈉，3g/l硫酸鎂，5g/l硫酸鉀，1g/l氯化鉀，0.02g/l氯化鈣，0.0052g/l氯化錳，0.0052g/l硫酸鋅，0.0008g/l硫酸銅，0.000016g/l鉬酸鈉，0.008g/l硫酸鎳，0.01g/l硫酸亞鐵，0.000066g/l氯化鈷，0.00076g/l硫胺素，0.0012g/l，0.0256g/l泛酸鈣，ph6.5-7.5，28℃，在250rpm下?lián)u床培養(yǎng)64h。培養(yǎng)結(jié)束后，室溫下4000rpm離心5min收集細胞，將菌體在60℃烘箱中烘干至恒重并計算生物量干重。干菌體在研磨中磨成粉，使用文獻〔蔣霞敏，鄭亦周，14種微藻總脂含量和脂肪酸組成研究，《水生生物學報》，2003，27(3):243-247〕公開的方法提取總脂質(zhì)、甲酯化及氣相色譜分析。發(fā)酵后菌體脂肪酸合成情況見下表1。表1從表1可以看出，裂壺藻atcc20888中，僅發(fā)現(xiàn)奇數(shù)碳脂肪酸(c15，c17)兩種，未發(fā)現(xiàn)c21或c23碳脂肪酸。以甘油為碳源，搖瓶發(fā)酵，奇數(shù)碳脂肪酸產(chǎn)率最高僅為0.16g/l，葡萄糖為碳源，奇數(shù)碳脂肪酸的最高產(chǎn)率僅為0.02g/l。推測聚酮合成酶系統(tǒng)(pks系統(tǒng))僅利用乙酰輔酶a作為起始單位，不會合成奇數(shù)碳脂肪酸。因此奇數(shù)碳脂肪酸的合成僅與脂肪酸合成酶系統(tǒng)(fas系統(tǒng))有關(guān)。實施例1丙酰輔酶a可能是奇數(shù)碳脂肪酸合成的直接前體，而丙酸是丙酰輔酶a的前體。本實施例向裂壺藻(atcc20888)培養(yǎng)基中添加丙酸，進行裂壺藻的高供氧發(fā)酵。在2％丙酸，2％蛋白胨、1％酵母粉，18g/l海鹽，ph6.8。培養(yǎng)條件為50ml培養(yǎng)液裝入250ml擋板三角瓶中，在28℃250rpm搖床培養(yǎng)5天。根據(jù)對比例1所述的方法提取脂質(zhì)并進行氣相色譜分析，結(jié)果如下表2所示。表2從上表可以看出，單獨使用丙酸作為碳源，奇數(shù)碳脂肪酸在胞內(nèi)的含量達到總脂肪酸含量的38％，顯著高于使用葡萄糖時的0.09％或使用甘油時的0.72％。實施例2本實施例使用丙酸鹽與葡萄糖作為碳源進行發(fā)酵。碳源為葡萄糖+丙酸鈉(1％+1％)混合碳源、其余組分為1％酵母粉、2％蛋白胨、18g/l海鹽，ph6.8。擋板三角瓶，裝液量50ml/250ml。28℃搖床200rpm培養(yǎng)5天。培養(yǎng)后，根據(jù)對比例1所述方法提取菌體脂質(zhì)，分析脂肪酸組成并與前期實驗進行對比，結(jié)果如下表3所示。表3脂肪酸(％)葡萄糖(1％)+丙酸鈉(1％)丙酸鈉(2％)c13:07.968.245c14:012.4986.915c15:021.17419.973c16:013.85613.591c17:04.264.417c18:015.16725.568c18:116.77615.581c21:08.315.71dpa00dha00oddfa41.70438.345dcw2.72.1由表3可以看出，使用復合碳源培養(yǎng)，奇數(shù)碳脂肪酸的總含量有所增加。實施例3本實施例采用乳酸(羥基丙酸)為碳源。使用葡萄糖+乳酸鈉(1％+1％)混合碳源、僅乳酸鈉碳源(2％)兩種碳源培養(yǎng)，其余組分為1％酵母粉、2％蛋白胨、18g/l人造海鹽，ph6.8。擋板三角瓶，裝液量50ml/250ml。28℃搖床200rpm培養(yǎng)5天。培養(yǎng)后，根據(jù)對比例1所述方法提取菌體脂質(zhì)，分析脂肪酸組成并與前期實驗對比，結(jié)果如下表5所示。表4脂肪酸(％)葡+乳葡+丙乳丙c13:00.8887.962.748.245c14:00.65712.4983.3936.915c15:012.24321.17414.18519.973c16:011.41113.85610.22913.591c17:010.0054.2612.1924.417c18:03.36115.1676.13625.568c18:18.33116.7766.61515.581c21:00.3788.312.2445.71dpa11.16109.1450dha34.937032.1120oddfa23.52441.70432.3738.345干重7.82.74.52.1根據(jù)表4的結(jié)果，采用單乳酸鹽碳源的發(fā)酵，生物量(干重)跟丙酸碳源的培養(yǎng)相比，有了100％的提高而且其奇數(shù)碳脂肪酸的含量達到32％，遠高于對比例1或公開文獻披露的含量。而且其dha的含量保持在較高的水平。以乳酸鹽、葡萄糖混合發(fā)酵，雖然奇數(shù)碳脂肪酸的含量低于僅使用乳酸或丙酸，但依然遠高于現(xiàn)有文獻公開的最高含量。當前第1頁12