本申請(qǐng)涉及微藻工業(yè)應(yīng)用領(lǐng)域，具體而言，涉及一株新分離的金藻，即poterioochromonasmalhamensiscmbb-01株，及其培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
：金藻亦稱金褐藻，多數(shù)分布在淡水，在海水中也有分布。金藻的細(xì)胞中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)，其中金藻昆布糖是其細(xì)胞的儲(chǔ)能物質(zhì)，它具有廣泛的生物學(xué)活性，對(duì)痛風(fēng)、高血脂、早中期腎衰竭有一定的防治作用。同時(shí)，金藻還是一種很好的魚類餌料，在養(yǎng)殖業(yè)有廣泛的用途。此外，有研究表明金藻能夠有效地吞噬包括銅綠微囊藻在內(nèi)的多種水華藻，因此在水體富營(yíng)養(yǎng)化治理上也有潛在用途。傳統(tǒng)的金藻自養(yǎng)培養(yǎng)方法主要依靠金藻的光合作用，金藻生長(zhǎng)十分緩慢。此外，目前已知的金藻物種和藻株也不適合于大規(guī)模工業(yè)化培養(yǎng)。缺乏易于培養(yǎng)的金藻藻株和相應(yīng)的培養(yǎng)方法是發(fā)展藻類工業(yè)所亟待解決的問題。鑒于金藻在醫(yī)藥、環(huán)保、養(yǎng)殖等領(lǐng)域的巨大經(jīng)濟(jì)價(jià)值，需要一種易于生長(zhǎng)，適用于工業(yè)化培養(yǎng)的金藻，以及培養(yǎng)其的方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明涉及從自然環(huán)境中分離到的一種新的金藻藻株，經(jīng)鑒定分類命名為p.malhamensiscmbb-01株。研究表明該金藻藻株能夠快速生長(zhǎng)，易于大規(guī)模培養(yǎng)。一方面，本發(fā)明涉及一種金藻p.malhamensiscmbb-01株，其以保藏號(hào)cgmccno.11620保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。另一方面，本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)本發(fā)明的金藻的方法，包括將谷物的去麩谷粒作為金藻生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)源加入用于培養(yǎng)金藻的含水的體系中，其中所述谷物選自以下組中的一種或多種：水稻、小麥、小米、黑米、燕麥、蕎麥、薏仁米和高粱，優(yōu)選水稻和小麥。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述方法進(jìn)一步包括在金藻培養(yǎng)體系中加入以下營(yíng)養(yǎng)鹽及維生素：nano3、kh2po4、k2hpo4、維生素b6和維生素b12。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述含水的體系中添加的谷粒的量為1-50g/l，更優(yōu)選5-15g/l，以谷粒的干重計(jì)。在一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)谷物為水稻時(shí)，所添加的量為12.5-50g/l。在一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)谷物為小麥時(shí)，所添加的量為5-10g/l。在一個(gè)實(shí)施方式中，每1l含水的體系中營(yíng)養(yǎng)鹽及維生素的添加量為：nano3:140mg、kh2po4:10mg、k2hpo4:5mg、維生素b6:1μg和維生素b12:1μg。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述培養(yǎng)在20-28℃、優(yōu)選22-25℃的溫度，50-100μmolphotons·m-2·s-1、優(yōu)選50μmolphotons·m-2·s-1的光強(qiáng)度，和6.0-8.5的ph下進(jìn)行。本發(fā)明分離的金藻藻株易于培養(yǎng)、生長(zhǎng)迅速，且所含的金藻昆布糖含量很高。本發(fā)明所用的培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，培養(yǎng)所用原料價(jià)格便宜，培養(yǎng)成本大幅度降低。同時(shí)，培養(yǎng)體系是建立在無(wú)菌條件下的，非常適合在大規(guī)模體系中推廣利用。附圖說(shuō)明圖1a：本發(fā)明金藻在光學(xué)顯微鏡下照片。圖1b：本發(fā)明金藻在電子掃描顯微鏡下的照片。圖2：本發(fā)明金藻rbcl基因在ncbi數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行blast的結(jié)果。圖3：本發(fā)明金藻18srdna基因在ncbi數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行blast的結(jié)果。圖4：本發(fā)明金藻在使用去麩的水稻粒作為營(yíng)養(yǎng)源的條件下的生長(zhǎng)情況。圖5：本發(fā)明金藻在使用去麩的小麥粒作為營(yíng)養(yǎng)源的條件下的生長(zhǎng)情況。圖6：本發(fā)明金藻在使用去麩的小麥粒、營(yíng)養(yǎng)鹽和維生素作為營(yíng)養(yǎng)源的條件下的生長(zhǎng)情況。圖7：本發(fā)明金藻在不同光照條件下的生長(zhǎng)曲線。具體實(shí)施方式本發(fā)明人從自然環(huán)境中意外地分離到一株新的金藻，即cmbb-01株。形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定顯示其屬于金藻綱(chrysophyceae)中的物種。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)cmbb-01株具有優(yōu)異的生長(zhǎng)性能和很高的金藻昆布糖含量。因此，第一方面，本發(fā)明提供了一種金藻poterioochromonasmalhamensiscmbb-01株，其以保藏號(hào)cgmccno.11620于2015年12月2日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(cgmcc，地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)。本發(fā)明人進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，在含水的體系中，使用去麩的谷粒作為此金藻藻株的營(yíng)養(yǎng)源，可選地輔以適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)鹽及維生素，此金藻藻株可以在短時(shí)間內(nèi)大量生長(zhǎng)，生物量大幅度提高。因此，第二方面，本發(fā)明還提供了一種培養(yǎng)本發(fā)明所分離的金藻藻株的方法，包括將谷物的去麩谷粒作為金藻生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)源加入到用于培養(yǎng)金藻的含水的體系中。術(shù)語(yǔ)“谷物的谷?！敝饕侵负瘫究浦参锏姆N子，例如谷物可以是水稻、小麥、小米、黑米、蕎麥、燕麥、薏仁米和高粱。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明所用的谷物選自以下組中的一種或多種：水稻、小麥、小米、黑米、燕麥、蕎麥、薏仁米和高粱。圖4和圖5分別顯示了金藻在使用去麩的水稻粒和小麥粒作為培養(yǎng)基的條件下的生長(zhǎng)情況。結(jié)果顯示，在使用去麩的水稻粒和小麥粒作為培養(yǎng)基的條件下，本發(fā)明的金藻均可以快速生長(zhǎng)。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明所用的谷物為水稻或小麥，優(yōu)選小麥。術(shù)語(yǔ)“培養(yǎng)金藻的體系”是指培養(yǎng)金藻時(shí)金藻所處的體系。用于培養(yǎng)金藻的體系包含水，例如天然環(huán)境中的凈水，蒸餾水或自來(lái)水(優(yōu)選經(jīng)過充分暴曬的自來(lái)水)作為培養(yǎng)介質(zhì)。培養(yǎng)金藻的體系可以為具有一定體積的容器，例如培養(yǎng)罐、培養(yǎng)箱等。培養(yǎng)金藻的體系也可以為封閉式水域例如池塘或開放式水域，例如河流。培養(yǎng)金藻的體系的體積可以根據(jù)待培養(yǎng)的金藻的量確定。圖4和圖5還分別示出了金藻在使用不同添加量的去麩的水稻粒和小麥粒下的生長(zhǎng)情況。結(jié)果提示，可以通過優(yōu)化水稻粒和小麥粒添加量來(lái)進(jìn)一步促進(jìn)金藻的生長(zhǎng)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明所用的谷粒添加量為1-50g/l，優(yōu)選12.5-50g/l，更優(yōu)選25-50g/l，或優(yōu)選1-10g/l，更優(yōu)選5-10g/l，以谷粒的干重計(jì)。在一個(gè)實(shí)施方式中，將去麩的小麥粒以5-10g/l的添加量加入到用于培養(yǎng)金藻的含水的體系中。在一個(gè)實(shí)施方式中，將去麩的水稻粒以12.5-50g/l的添加量加入到用于培養(yǎng)金藻的含水的體系中。圖6示出了金藻在小麥粒和小麥粒+營(yíng)養(yǎng)鹽+維生素培養(yǎng)下的生長(zhǎng)情況。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的培養(yǎng)方法進(jìn)一步包括在培養(yǎng)金藻的體系中加入以下營(yíng)養(yǎng)鹽及維生素：nano3、kh2po4、k2hpo4、維生素b6和維生素b12。在一個(gè)實(shí)施方式中，每1l含水的體系中營(yíng)養(yǎng)鹽及維生素的添加量為：nano3:140mg、kh2po4:10mg、k2hpo4:5mg、維生素b6:1μg和維生素b12:1μg。本發(fā)明還研究了光照對(duì)金藻生長(zhǎng)的影響。如圖7所示，即使在沒有光照的條件下，本發(fā)明的金藻藻株也可在小麥粒+營(yíng)養(yǎng)鹽+維生素的培養(yǎng)條件下快速生長(zhǎng)。這表示本發(fā)明的金藻藻株的生長(zhǎng)性能十分優(yōu)異。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的金藻在正常光照條件下培養(yǎng)。在一個(gè)實(shí)施方式中，光照的光強(qiáng)度為50-100μmolphotons·m-2·s-1，優(yōu)選50μmolphotons·m-2·s-1。本發(fā)明的金藻培養(yǎng)方法可以在室外環(huán)境溫度下進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的金藻可以在20-28℃下培養(yǎng)，優(yōu)選22-25℃，更優(yōu)選22±2℃。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的金藻在ph為6.0-8.5的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，優(yōu)選ph為6.0-7.5。實(shí)施例將參考以下實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。然而，提供以下實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，不應(yīng)被理解為是對(duì)本發(fā)明的范圍和精神的限制。實(shí)驗(yàn)材料：金藻p.malhamensiscmbb-01株，由中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所分離獲得，以保藏號(hào)cgmccno.11620保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。實(shí)施例1.金藻cmbb-01株的分離及鑒定1.cmbb-01株的分離與純化包含本發(fā)明藻株藻液來(lái)自自然環(huán)境水體，采用逐級(jí)稀釋法進(jìn)一步分離，獲得純的藻株，對(duì)其編號(hào)命名為cmbb-01株。2.cmbb-01株的形態(tài)學(xué)鑒定分別采用光學(xué)顯微鏡(olypus，bx53，400倍)和電子掃描顯微鏡(sem)觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu)特征。如圖1a和1b所示，cmbb-01株的細(xì)胞直徑大小在5-10μm，含兩條大小不等的鞭毛，長(zhǎng)鞭毛長(zhǎng)10-15μm，短鞭毛長(zhǎng)2-3μm，電子掃描顯微鏡可見長(zhǎng)鞭毛有絨毛，絨毛長(zhǎng)1-1.5μm，短鞭毛無(wú)絨毛；cmbb-01株的細(xì)胞包含周生色素體，呈黃色或金褐色。cmbb-01株屬于混合營(yíng)養(yǎng)型，可在無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中通過光合作用自養(yǎng)生長(zhǎng)，利用有機(jī)物進(jìn)行化能異養(yǎng)，也可吞噬小球藻進(jìn)行吞噬營(yíng)養(yǎng)。根據(jù)《中國(guó)淡水藻類》和《原生動(dòng)物》等資料初步鑒定cmbb-01株為金藻門(chrysophyta)色金藻目(chromulinales)錐囊藻科(dinobryonaceae)的物種。3.分子生物學(xué)鑒定提取cmbb-01株的基因組dna，采用兩種不同引物分別擴(kuò)增其18srdna和rbcl基因序列，所用引物序列為：18srdna基因：引物f5’-aacctggttgatcctgccagt-3’(seqidno:1)18srdna基因：引物r5’-tgatccttctgcaggttcacctac-3’(seqidno:2)rbcl基因：引物f5’-cagtagtatggacag-3’(seqidno:3)rbcl基因：引物r5’-ccaactacagttccagc-3’(seqidno:4)擴(kuò)增產(chǎn)物用1％瓊脂糖電泳，試劑盒(omega，usa)回收pcr產(chǎn)物，膠回收產(chǎn)物直接送至公司測(cè)序(上海生工生物工程有限公司)。cmbb-01株18srdna基因序列和rbcl基因序列分別如seqidno:5和seqidno:6所示。圖2和圖3分別顯示上述rbcl基因序列和18srdna基因序列在genbank中比對(duì)的結(jié)果。如圖2和圖3所示，從rbcl基因和18srdna基因比對(duì)結(jié)果可知，cmbb-01株的進(jìn)化距離與p.malhamensis最為接近。綜合形態(tài)學(xué)和分子序列信息，確定cmbb-01株為金藻，命名為p.malhamensiscmbb-01株。實(shí)施例2.不同營(yíng)養(yǎng)源條件下cmbb-01株生長(zhǎng)性能的測(cè)定2.1.采用去麩的水稻粒作為營(yíng)養(yǎng)源采用去麩的水稻粒作為本發(fā)明金藻藻株的營(yíng)養(yǎng)源來(lái)培養(yǎng)金藻。同時(shí)，為了研究不同量的水稻粒對(duì)金藻生長(zhǎng)的影響，在相同培養(yǎng)體系中分別添加不同量的水稻粒，設(shè)置具有五個(gè)不同添加量的水稻粒的組：0.25g/l、2.5g/l、12.5g/l、25g/l和50g/l。每個(gè)組設(shè)置4個(gè)重復(fù)。為保證金藻不完全沉底，每天搖瓶四次。每天定時(shí)采樣，并利用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。每個(gè)樣品統(tǒng)計(jì)2次，取四個(gè)重復(fù)樣品的平均值作為最終值。金藻初始密度為1.78×104個(gè)/ml。培養(yǎng)溫度為(22±2)℃，且光照強(qiáng)度為50μmolphotons·m-2·s-1。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間保持ph在6.0-7.5之間。從圖4可知，本發(fā)明金藻藻株在僅使用去麩的水稻粒培養(yǎng)下即可快速生長(zhǎng)。特別地，當(dāng)水稻粒使用添加量為12.5g/l、25g/l和50g/l時(shí)，金藻密度在培養(yǎng)第2天時(shí)就可以達(dá)到106個(gè)/ml，在第3-4天時(shí)便可以繼續(xù)增加至107個(gè)/ml，且隨后還可緩慢增加。2.2.采用去麩的小麥粒作為營(yíng)養(yǎng)源采用去麩的小麥粒作為本發(fā)明金藻藻株的營(yíng)養(yǎng)源來(lái)培養(yǎng)金藻。同時(shí)，為了研究不同量的小麥粒對(duì)金藻生長(zhǎng)的影響，在相同培養(yǎng)體系中分別添加不同量的小麥粒，設(shè)置具有六個(gè)不同添加量的小麥粒的組：1g/l、2.5g/l、5g/l、10g/l、20g/l和40g/l。其余實(shí)驗(yàn)條件和方法同前述2.1部分。從圖5可知，本發(fā)明金藻藻株在僅使用去麩的小麥粒培養(yǎng)下同樣能夠快速生長(zhǎng)。特別地，在2.5g/l、5g/l和10g/l組中，金藻密度在培養(yǎng)第2天時(shí)就可以達(dá)到106個(gè)/ml，在培養(yǎng)3天時(shí)10g/l組顯示出最高的金藻密度，約107個(gè)/ml，且隨后還可緩慢增加。令人意外地，與添加更多營(yíng)養(yǎng)物可能會(huì)得到更高金藻密度的預(yù)期相反，實(shí)驗(yàn)證實(shí)在培養(yǎng)2天后，在初始高添加量的小麥粒的組中(如20g/l和40g/l組)的金藻密度令人驚奇地低于在初始較低添加量的小麥粒的組中(如1g/l、2.5g/l、5g/l和10g/l組)的金藻密度。2.3.采用去麩的小麥粒+營(yíng)養(yǎng)鹽+維生素作為營(yíng)養(yǎng)源小麥粒+營(yíng)養(yǎng)鹽+維生素培養(yǎng)基通過在每升水中加入140mgnano3、10mgkh2po4、5mgk2hpo4、1μg維生素b6、1μg維生素b12，同時(shí)加入5g小麥制備。金藻初始密度為2.27×104個(gè)/ml。其余實(shí)驗(yàn)條件和方法同前述2.1部分。從圖6可知，對(duì)比采用去麩的小麥粒作為營(yíng)養(yǎng)源和采用去麩的小麥粒+營(yíng)養(yǎng)鹽+維生素作為營(yíng)養(yǎng)源這兩種培養(yǎng)條件，結(jié)果顯示兩種條件下本發(fā)明金藻株的生長(zhǎng)情況類似，營(yíng)養(yǎng)鹽和維生素的添加對(duì)本發(fā)明金藻的生長(zhǎng)僅具有一定的促進(jìn)作用。2.4.采用現(xiàn)有技術(shù)的方法來(lái)培養(yǎng)cmbb-01株cn101353626b公開了一種金藻(即poterioochromonassp.zx1，保藏號(hào)為cgmccno.2262)，以及可以采用水柳、香蒲和蘆葦三種植物的浸提液來(lái)培養(yǎng)金藻的方法。為了進(jìn)一步測(cè)試本發(fā)明的金藻藻株的生長(zhǎng)性能，采用上述文獻(xiàn)中公開的方法對(duì)本發(fā)明的金藻進(jìn)行培養(yǎng)，并隨后對(duì)以下參數(shù)進(jìn)行測(cè)試：金藻的最大生長(zhǎng)速率、能達(dá)到的最大的金藻密度和達(dá)到最大金藻密度所需要的時(shí)間。實(shí)驗(yàn)組1采用上述實(shí)施例2.3部分的小麥粒、營(yíng)養(yǎng)鹽和維生素作為培養(yǎng)基成分來(lái)培養(yǎng)本發(fā)明的金藻。實(shí)驗(yàn)組2采用水柳、香蒲和蘆葦三種植物的浸提液來(lái)培養(yǎng)本發(fā)明的金藻。培養(yǎng)開始時(shí)各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的金藻的初始密度保持相同。其余實(shí)驗(yàn)條件和方法同前述2.1部分。測(cè)試結(jié)果如下：表1本發(fā)明與現(xiàn)有培養(yǎng)技術(shù)的比較項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)組1實(shí)驗(yàn)組2最大生長(zhǎng)速率(d-1)1.720.92最大生物量(個(gè)/ml)2×1072×106到達(dá)最大生物量所需要的時(shí)間3-4天4-5天從表1中實(shí)驗(yàn)組2的數(shù)據(jù)可知，即使采用不同培養(yǎng)方法，本發(fā)明所分離的金藻藻株仍舊能夠在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到很高的生長(zhǎng)密度(數(shù)量級(jí)達(dá)到106個(gè)/ml)，這提示本發(fā)明的金藻藻株具有優(yōu)異的生長(zhǎng)性能。而且，相比于上述文獻(xiàn)的方法，采用水稻粒、小麥粒以及小麥粒+營(yíng)養(yǎng)鹽+維生素作為營(yíng)養(yǎng)源來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)本發(fā)明的金藻藻株的方法更加簡(jiǎn)便，培養(yǎng)成本大幅度降低。上述結(jié)果均表明，本發(fā)明所分離的新的金藻藻株具有很好的生長(zhǎng)性能，可實(shí)現(xiàn)短時(shí)間內(nèi)大量的增殖。而且，培養(yǎng)此藻株的工藝十分簡(jiǎn)單，無(wú)需嚴(yán)格的培養(yǎng)條件，所需原料來(lái)源廣泛且價(jià)格低廉。這些都使得本發(fā)明的金藻藻株能夠適用于大規(guī)模培養(yǎng)應(yīng)用。實(shí)施例3.光照對(duì)cmbb-01株生長(zhǎng)的影響為研究光照對(duì)本發(fā)明金藻生長(zhǎng)的影響，在培養(yǎng)本發(fā)明金藻時(shí)設(shè)置光照組1(50μmolphotons·m-2·s-1)、光照組2(100μmolphotons·m-2·s-1)和完全黑暗組(0μmolphotons·m-2·s-1)。每組均采用上述實(shí)施例2.3部分的小麥粒+營(yíng)養(yǎng)鹽+維生素作為營(yíng)養(yǎng)源。其余實(shí)驗(yàn)條件和方法同前述2.1部分。如圖7所示，即使在沒有光照的條件下，本發(fā)明的金藻藻株通過采用小麥粒+營(yíng)養(yǎng)鹽+維生素作為營(yíng)養(yǎng)源，其在培養(yǎng)3天時(shí)密度也可達(dá)到106個(gè)/ml。這提示本發(fā)明的金藻藻株的生長(zhǎng)性能十分優(yōu)異。從培養(yǎng)2天時(shí)起，在有光的條件下，金藻密度更是會(huì)不斷增加。令人意外地，對(duì)于此金藻藻株，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)光強(qiáng)從50μmolphotons·m-2·s-1增加至100μmolphotons·m-2·s-1時(shí)，其生長(zhǎng)效率并未出現(xiàn)顯著變化。實(shí)施例4.cmbb-01株中金藻昆布糖提取及含量測(cè)定將按照實(shí)施例2.3培養(yǎng)收獲的藻液通過過濾除雜去除其中所含的雜質(zhì)，獲得純凈的cmbb-01株的收獲液放置在冷凍干燥機(jī)中干燥4-5天，取干燥后的藻粉1g置于200ml燒杯中，加100ml蒸餾水溶解，90℃水浴1h，5000g離心20min，用多層紗布濾過上清液，并將上清液通過濾紙抽濾。在過濾得到的上清液中加入4倍體積95％乙醇，沉淀多糖，離心(5000g，20min)收集沉淀。將沉淀物在烘箱中干燥(75℃，24h)，獲得的海腥味白色塊狀物即為粗金藻昆布糖干品，計(jì)算金藻昆布糖得率。昆布多糖得率(％)＝[粗多糖干品質(zhì)量(g)/藻粉質(zhì)量(g)]×100％通過計(jì)算可知，cmbb-01株中昆布多糖含量高達(dá)24.8％，明顯高于其他金藻或海帶中昆布多糖含量，與真眼點(diǎn)藻中昆布多糖含量相當(dāng)。表2cmbb-01株與其他藻類中昆布多糖含量比較物種昆布多糖收率參見cmbb-01株24.8％球等鞭金藻7％-22.1％浦寅芳等，食品科技,2012(7):186-190.真眼點(diǎn)藻13.01％-24.88％韓娟，暨南大學(xué),2013.海帶1％-18.31％康琰琰等，食品研究與開發(fā),2006,27(1):59-62.盡管已用于解釋說(shuō)明的目的公開了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可理解，可做出各種改變、增添和替換，而不脫離如后附權(quán)利要求所公開的本發(fā)明的范圍和精神。當(dāng)前第1頁(yè)12