本發(fā)明涉及組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置，特別是一種利于細(xì)胞在培養(yǎng)環(huán)境下，能夠在三維空間自由正常生長的組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置。

背景技術(shù)：

組織細(xì)胞培養(yǎng)是一種在藥物開發(fā)、細(xì)胞生物學(xué)、毒理學(xué)、生物工程以及組織工程領(lǐng)域中非常有用并且被廣泛使用的技術(shù)。組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置一般包括培養(yǎng)容器（如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)罐等），培養(yǎng)時，培養(yǎng)容器中加培養(yǎng)基，培養(yǎng)基可以是液態(tài)（即培養(yǎng)液）或固態(tài)，當(dāng)細(xì)胞為懸浮型細(xì)胞時，一般只需培養(yǎng)基，但當(dāng)細(xì)胞為貼附型細(xì)胞時，若培養(yǎng)容器中只有培養(yǎng)基，細(xì)胞就只能貼容器壁培養(yǎng)，在常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)中，在培養(yǎng)容器中加入了細(xì)胞培養(yǎng)平板，如2，4，6，24，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，細(xì)胞培養(yǎng)在細(xì)胞培養(yǎng)平板上進(jìn)行，但細(xì)胞在容器壁或培養(yǎng)平板上培養(yǎng)與細(xì)胞在體內(nèi)的生長方式并不相仿，在真實(shí)的活體內(nèi)，組織細(xì)胞均在三維空間環(huán)境中生長，因此在目前二維平面的細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞時，受平面生長環(huán)境的限制，細(xì)胞的活性、形貌和生長狀態(tài)等與體內(nèi)環(huán)境下相比有很大改變，且細(xì)胞易暴露于培養(yǎng)液流體剪切力下，會對細(xì)胞造成損傷，因此，進(jìn)行三維細(xì)胞培養(yǎng)具有重要的意義，三維細(xì)胞培養(yǎng)比二維培養(yǎng)能更接近地模擬體內(nèi)的情況，具有比二維培養(yǎng)的顯著優(yōu)勢，特別是對動物細(xì)胞更有意義，因?yàn)榇蠖鄶?shù)動物細(xì)胞貼壁生長。

為進(jìn)行三維細(xì)胞培養(yǎng)，研究人員設(shè)計(jì)了一些裝置：

CN101245313A公開了“三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件、其制造方法、成套用具及用途”。它介紹了一種三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件，它由非降解性的無細(xì)胞毒性的聚合物材料制成，該插入件具有確定的和規(guī)則的三維多孔結(jié)構(gòu)，并且其由單個多孔片層構(gòu)件構(gòu)成或由多個多孔片層構(gòu)件固定在一起，該種多孔的三維結(jié)構(gòu)使細(xì)胞可以同時貼附于該三維結(jié)構(gòu)的外表面和內(nèi)表面，其100%聯(lián)通的多孔的結(jié)構(gòu)能夠允許營養(yǎng)物和代謝產(chǎn)物容易地進(jìn)行交換，有利于細(xì)胞的培養(yǎng)。

CN102864119B公開了“用于細(xì)胞培養(yǎng)的載體及其制備方法”。它介紹了用三維多孔石墨烯支架作為細(xì)胞載體放入培養(yǎng)池中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，多孔石墨烯支架含有金屬泡沫，模擬細(xì)胞的體內(nèi)生長環(huán)境，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞的三維培養(yǎng)，有利于維持細(xì)胞的生長狀態(tài)和活性，促進(jìn)細(xì)胞生長。

仔細(xì)分析上述現(xiàn)有技術(shù)，它們存在的不足之處在于：當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞逐漸增多時，會阻塞孔隙形成生理死腔或者是營養(yǎng)物質(zhì)富集區(qū)，致使?fàn)I養(yǎng)物或新陳代謝物難以流動，并阻礙細(xì)胞的遷移生長，也會使細(xì)胞在培養(yǎng)體內(nèi)生長分布不均勻，生長狀況欠佳。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，而提供一種有利于細(xì)胞在三維空間自由正常生長的組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置。

發(fā)明人認(rèn)為如果提供一種細(xì)胞培養(yǎng)裝置，即使在細(xì)胞生長繁殖過程中，隨著細(xì)胞數(shù)量逐漸增多致使細(xì)胞培養(yǎng)體的孔隙變小或堵塞，仍具備滿足營養(yǎng)液或新陳代謝物在多孔的培養(yǎng)體內(nèi)自由遷移的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，以保證細(xì)胞的正常生長條件，則能克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明目的通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置，包括組織細(xì)胞培養(yǎng)體，其特征在于：作為該組織細(xì)胞培養(yǎng)體的多孔材料是以材料孔徑大小進(jìn)行分級的孔腔及圍繞形成各級孔腔的腔壁構(gòu)成，且圍繞構(gòu)成上級大孔腔的腔壁上設(shè)置下級小孔腔；同級孔腔均相互貫通，且各級孔腔相互間也彼此貫通。將多孔材料孔腔進(jìn)行分級，且在圍繞形成上級大孔腔的腔壁上設(shè)置下級小孔腔，使得細(xì)胞生長繁殖過程中，即使細(xì)胞數(shù)量逐漸增多使得培養(yǎng)體孔隙變小，該組織細(xì)胞培養(yǎng)體仍能使?fàn)I養(yǎng)液在組織細(xì)胞培養(yǎng)體內(nèi)流動，并能使細(xì)胞在組織細(xì)胞培養(yǎng)體內(nèi)自由遷移，以利于細(xì)胞在三維空間自由正常生長。

進(jìn)一步地，上述多孔材料中，圍繞構(gòu)成上級大孔腔的腔壁是由下級小孔腔均布填充構(gòu)成，以密布充滿為佳。

上述組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，作為組織細(xì)胞培養(yǎng)體的多孔材料以材料孔徑大小進(jìn)行分級的孔腔至少分為兩級以上。當(dāng)該多孔材料的孔腔分為三級時，圍繞構(gòu)成上一級大孔腔的腔壁上設(shè)置有下一級小孔腔；或者是圍繞構(gòu)成最大一級孔腔的腔壁上設(shè)置有下級兩級小孔腔。以此類推，分為更多級的多孔材料的孔腔，其每上級孔腔的腔壁上設(shè)置有下一級的小孔腔，或者圍繞構(gòu)成上級大孔腔的腔壁上設(shè)置有下級的各級小孔腔或者圍繞構(gòu)成上級大孔腔的腔壁上設(shè)置有任意組合的各級小孔腔。

發(fā)明人還認(rèn)為，當(dāng)多孔材料的孔腔分為三級時，其中圍繞構(gòu)成上一級孔腔的腔壁是由下一級小孔腔均布填充為佳。這樣的孔腔分級不僅利于細(xì)胞生長，而且也便于制備。

上述組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，較小級孔腔中，至少最小級孔腔的孔徑要小于培養(yǎng)細(xì)胞的平均直徑，剩余的其他級孔腔的孔徑至少要大于培養(yǎng)細(xì)胞的平均直徑。

上述組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，所述其他級孔腔中的較大級孔腔的孔徑至少為培養(yǎng)細(xì)胞平均直徑的兩倍以上。

上述組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，最小級孔腔的孔徑小于培養(yǎng)細(xì)胞的平均直徑，最大級孔腔的孔徑至少為培養(yǎng)細(xì)胞平均直徑的兩倍以上為佳。

上述組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置中所提及的組織細(xì)胞培養(yǎng)體特別適用作為醫(yī)用植入體的應(yīng)用。

該組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置還包括放置組織細(xì)胞培養(yǎng)體的培養(yǎng)皿，所述組織細(xì)胞培養(yǎng)體固定于所述培養(yǎng)皿中。

上述組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，所述組織細(xì)胞培養(yǎng)體制成板塊結(jié)構(gòu)為佳。

上述組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，呈板塊結(jié)構(gòu)的組織細(xì)胞培養(yǎng)體的板厚不大于所述多孔材料最大一級孔腔的平均孔徑的20倍。

上述組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，所述培養(yǎng)皿固定于振動工作臺上。

本發(fā)明的有益效果：

1、本發(fā)明提供了有利于細(xì)胞三維空間自由正常生長的組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置，將多孔材料作為組織細(xì)胞培養(yǎng)體，特別是該多孔材料以材料孔徑大小進(jìn)行分級的孔腔及圍繞形成孔腔的腔壁進(jìn)行合理設(shè)計(jì)，同級孔腔均相互貫通且各級孔腔相互間也彼此貫通，給細(xì)胞創(chuàng)造了適宜的三維自由正常生長的空間，小孔腔用于營養(yǎng)液或新陳代謝物的傳輸、流動，腔壁上的互為貫通的孔腔可保證營養(yǎng)液或新陳代謝物流動通過，構(gòu)成滿足細(xì)胞生長的微循環(huán)體系，大孔腔用于細(xì)胞貼壁寄居，細(xì)胞能在大孔腔及大孔腔之間的三維空間自由穿行，特別是當(dāng)孔分成三級時，最小級孔腔用于營養(yǎng)液或新陳代謝物的傳輸、流動，中間級孔腔用于細(xì)胞寄居，最大級孔用于細(xì)胞遷移、穿行。本發(fā)明提供的培養(yǎng)體在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不易形成生理死腔或濃度死腔，不會出現(xiàn)細(xì)胞生長障礙區(qū)或者是營養(yǎng)物質(zhì)富集區(qū)，即使細(xì)胞增多，孔腔變小或堵塞也不阻礙營養(yǎng)液或新陳代謝物在細(xì)胞培養(yǎng)體內(nèi)的任意浸潤或稱滲透，從而保障細(xì)胞的順利正常生長，更加符合細(xì)胞的生長規(guī)律。

2、本發(fā)明所述的組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置，對多孔材料的孔腔進(jìn)行分級設(shè)置，而且合理設(shè)計(jì)各級孔腔的級數(shù)及孔腔的大小，以滿足各類組織細(xì)胞的各種生長環(huán)境條件。特別是較小級的孔腔孔徑小于培養(yǎng)細(xì)胞的平均直徑，更利于充滿構(gòu)成營養(yǎng)液或新陳代謝物的傳輸、流動，其他級孔腔的孔徑至少大于培養(yǎng)細(xì)胞的平均直徑進(jìn)一步保證了細(xì)胞寄居的需求，較大級孔腔的孔徑至少為培養(yǎng)細(xì)胞平均直徑的兩倍以上則進(jìn)一步在滿足細(xì)胞寄居的需求下使細(xì)胞能順利地自由遷移、穿行，并保障細(xì)胞順利進(jìn)入培養(yǎng)體內(nèi)，在培養(yǎng)體內(nèi)遷移生長；而較小級孔腔孔徑小于培養(yǎng)細(xì)胞的平均直徑，由于孔徑小還會產(chǎn)生毛細(xì)力，能促進(jìn)培養(yǎng)液、新陳代謝物的浸潤流動，并能將細(xì)胞吸入細(xì)胞培養(yǎng)體內(nèi)，并促進(jìn)其在組織細(xì)胞培養(yǎng)體中的遷移，而由于毛細(xì)力的存在還會提高細(xì)胞的生長速度。

3、細(xì)胞培養(yǎng)體采用板塊結(jié)構(gòu)便于貼壁細(xì)胞長入內(nèi)部，避免細(xì)胞在表面阻塞，也便于細(xì)胞取出，便于培養(yǎng)液穿過細(xì)胞培養(yǎng)體。

4、將本發(fā)明提供的組織細(xì)胞培養(yǎng)體置于培養(yǎng)皿，對培養(yǎng)條件通過振動工作臺提供一種外部振動源，可以進(jìn)行垂直、水平、沿垂直軸轉(zhuǎn)動的振動，以及三種振動中至少兩個的復(fù)合振動，可促使培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液的流動，使其中的組織細(xì)胞的濃度、及各種成分分布均勻。

附圖說明

下面將結(jié)合附圖與實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。

圖1為本發(fā)明組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置示意圖；

圖2為圖1 A-A截面圖（去掉培養(yǎng)皿蓋8）；

圖3為組織細(xì)胞培養(yǎng)體結(jié)構(gòu)示意圖，3-1為主視圖，3-2為左視圖，3-3為俯視圖；

圖4為圖3局部B放大圖；

圖5為圖4 C-C截面圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式作說明，實(shí)施方式以本發(fā)明技術(shù)方案為前提，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不僅限于下述的實(shí)施方式。

在圖1、圖2中，1為培養(yǎng)皿，2為組織細(xì)胞培養(yǎng)體，3為固定組織細(xì)胞培養(yǎng)體的固定塊，它通過焊接固定在培養(yǎng)皿1內(nèi)，4為振動工作臺，5為固定塊3開的凹槽，用于使組織細(xì)胞培養(yǎng)體2放入固定，6為固定組織細(xì)胞培養(yǎng)體2的壓塊，7為螺釘，8為培養(yǎng)皿蓋。組織細(xì)胞培養(yǎng)體2放入固定塊3的凹槽5中，通過壓塊6、螺釘7使組織細(xì)胞培養(yǎng)體2固定于固定塊3上，從而在培養(yǎng)皿1中固定，培養(yǎng)皿1可通過常用的壓板、螺栓固定方式使培養(yǎng)皿1固定在振動工作臺4上，培養(yǎng)皿蓋8蓋在培養(yǎng)皿1上。

如圖3、圖4、圖5所示，其中，9為組織細(xì)胞培養(yǎng)體2的最大一級孔腔， 10為該孔腔的腔壁，該孔腔是三維貫通的。從圖4可知，孔腔9的腔壁10由更小的孔腔11（下一級孔）及圍繞孔腔11的腔壁12構(gòu)成，結(jié)合圖4對腔壁10的放大圖、圖5 C-C截面圖可知，孔腔11也是三維貫通的，且兩級孔腔彼此也三維貫通。

進(jìn)一步類推，可以形成三級以上的多級孔結(jié)構(gòu)的組織細(xì)胞培養(yǎng)體。

培養(yǎng)細(xì)胞時，將細(xì)胞置于組織細(xì)胞培養(yǎng)體2上，然后將培養(yǎng)液加入培養(yǎng)皿1中，將培養(yǎng)皿蓋8蓋在培養(yǎng)皿1上，啟動振動工作臺4，使培養(yǎng)皿1振動。培養(yǎng)完成后，將組織細(xì)胞培養(yǎng)體2上的細(xì)胞取出。

以下詳細(xì)給出本發(fā)明的實(shí)施例：

實(shí)施例1：

參見附圖，一種組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置，它包括組織細(xì)胞培養(yǎng)體2，細(xì)胞培養(yǎng)體2固定于培養(yǎng)皿1中，培養(yǎng)皿1固定在振動工作臺4上。該組織細(xì)胞培養(yǎng)體2為一多孔鉭材料；該多孔鉭材料是以材料孔徑大小進(jìn)行分級的孔腔及圍繞形成各級孔腔的腔壁構(gòu)成，且圍繞構(gòu)成上級大孔腔的腔壁上設(shè)置下級小孔腔；同級孔腔均相互貫通且各級孔腔相互間也彼此貫通。

具體在本例，該多孔鉭材料，它具有兩級孔腔，均勻分布、相互貫通的上級大孔腔的腔壁由均勻分布、相互貫通的下級小孔腔填充構(gòu)成，且兩級孔腔相互間也彼此貫通。上級大孔腔的孔徑為160μm～460μm，下級小孔腔孔徑為200nm～500nm；組織細(xì)胞培養(yǎng)體2為一板塊體材，其厚度為5.5mm，為上級大孔腔的平均孔徑的17倍。

本例培養(yǎng)平滑肌組織細(xì)胞，培養(yǎng)時，將平滑肌組織細(xì)胞置于組織細(xì)胞培養(yǎng)體2上，在培養(yǎng)皿1內(nèi)加入含有12%血清的MEM，將其溫度控制在35℃～37℃，將培養(yǎng)皿蓋5蓋在培養(yǎng)皿1上，其他具體操作與常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)相同。啟動振動工作臺4，使培養(yǎng)皿1振動，振動采用垂直振動方式，工作頻率為80Hz。培養(yǎng)3天，然后將組織細(xì)胞培養(yǎng)體2上的細(xì)胞取出觀察，結(jié)果表明，培養(yǎng)的細(xì)胞胞體豐滿，生長狀態(tài)良好。

本例中，該種多孔材料是按以下方法制得的：

（1）材料準(zhǔn)備

采用1-10μm的鉭粉作為原料，粒徑為300nm-600nm的尿素作為最小一級孔造孔劑，并用300nm-600nm的淀粉作為粘合劑，按照鉭粉：尿素：淀粉：蒸餾水按體積比1：1.5：1：7配制成漿料。

將所述漿料用泡沫浸漬法均勻填充入棱直徑為260μm-560μm的聚酯泡沫中，形成坯體并干燥，然后破碎制成粒徑為260μm-560μm的含有鉭粉原料、造孔劑與聚酯泡沫的混合顆粒。

（2）將混合顆粒、粒徑為260μm-560μm的甲基纖維素按體積比2：1均勻混合放入密閉模具壓制成致密坯體。

（3）將致密坯體真空燒結(jié)；燒結(jié)后的坯體按照鉭材工藝進(jìn)行常規(guī)后續(xù)處理得到具有二級孔的多孔鉭。

實(shí)施例2：

本實(shí)施例的組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置的細(xì)胞培養(yǎng)體2采用多孔二氧化硅材料，具有三級孔腔，均勻分布、相互貫通的第一級大孔腔的腔壁由相互貫通的第二級、第三級孔腔填充構(gòu)成，且各級孔腔相互間也彼此貫通。第一級大孔腔孔徑為1000μm～1500μm，第二級孔腔孔徑為70μm～90μm，第三級孔腔的孔徑為400nm～700nm，組織細(xì)胞培養(yǎng)體2的厚度為24mm，為第一級大孔腔的平均孔徑的19倍，培養(yǎng)液為含有20%小牛血清的EAGLE，培養(yǎng)細(xì)胞為上皮組織細(xì)胞。其他同實(shí)施例1。

振動工作臺采用沿垂直軸轉(zhuǎn)動的振動方式，工作頻率為70Hz。培養(yǎng)結(jié)果表明，細(xì)胞胞體豐滿，生長狀態(tài)良好。

本例中，該種多孔材料是按以下方法制得的：

（1）材料準(zhǔn)備

采用1-10μm的二氧化硅粉作為原料，粒徑為500nm～800nm的尿素作為最小一級（第三級）孔造孔劑，用粒徑為100μm～150μm的乙基纖維素作為第二級孔造孔劑，并用500nm～800nm的淀粉作為粘合劑，按照二氧化硅粉：尿素：乙基纖維素：淀粉：蒸餾水按體積比1：1.5：1：1：12配制成漿料。

（2）采用孔徑為1100μm～1700μm的聚酯泡沫，將所述漿料用泡沫浸漬法均勻填充其中，形成坯體并干燥，然后真空燒結(jié)得到具有三級孔的多孔二氧化硅。

實(shí)施例3：

本實(shí)施例的組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置的組織細(xì)胞培養(yǎng)體2采用多孔鈮材料，具有三級孔腔，其中，均勻分布、相互貫通的最大一級孔腔（以下稱第一級孔腔）的腔壁由均勻分布、相互貫通的中間一級孔腔（以下稱第二級孔腔）填充構(gòu)成，第二級孔腔的腔壁由均勻分布、相互貫通的最小一級孔腔（以下稱第三級孔腔）填充構(gòu)成；且各級孔腔相互間也彼此貫通。第一級孔腔孔徑為140μm～600μm，第二級孔腔孔徑為50μm～90μm，第三級孔腔孔徑為300nm～600nm，組織細(xì)胞培養(yǎng)體2的厚度為7mm，為第一級孔腔的平均孔徑的18倍，培養(yǎng)液為含有18%血清的BME，培養(yǎng)細(xì)胞為成骨組織細(xì)胞，其他同實(shí)施例1。

培養(yǎng)條件是振動工作臺采用水平振動、沿垂直軸轉(zhuǎn)動的振動方式交替進(jìn)行，工作頻率分別為65Hz 、60Hz。培養(yǎng)結(jié)果表明，細(xì)胞生長狀態(tài)良好。

本例中，該種多孔材料是按以下方法制得的：

（1）材料準(zhǔn)備

采用粒徑為1-10μm的鈮粉為原料，粒徑為400nm-700nm 的甲基纖維素做為最小一級孔造孔劑，用粒徑為400nm-700nm的聚苯乙烯作為粘合劑，按照鈮粉：甲基纖維素：聚苯乙烯：蒸餾水按體積比1：2：1：7.5配制成漿料。

采用棱直徑為60μm～100μm、孔徑為200μm～400μm的聚酯泡沫，將所述漿料用泡沫浸漬法均勻填充其中，形成坯體并干燥，然后破碎制成粒徑為60μm～100μm的含有鈮粉原料、造孔劑與聚酯泡沫的混合顆粒。

（2）將混合顆粒、粒徑為60μm～100μm的乙基纖維素按體積比2：1均勻混合后均勻地灌入棱直徑為250μm -750μm、孔徑為400μm-600μm的三維貫通的聚酯泡沫中，然后將聚酯泡沫放入密閉模具壓制成致密坯體。

（3）將致密坯體真空燒結(jié)；燒結(jié)后的坯體按照鈮材工藝進(jìn)行常規(guī)后續(xù)熱處理得到具有三級孔的多孔鈮。

實(shí)施例4：

本實(shí)施例的組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置的組織細(xì)胞培養(yǎng)體2采用多孔鈦材料，具有四級孔腔，其中，均勻分布、相互貫通的最大一級孔腔（即第一級孔腔）的腔壁由均勻分布、相互貫通的第二級孔腔填充構(gòu)成，第二級孔腔的腔壁由均勻分布、相互貫通的第三級、第四級孔腔填充構(gòu)成；且各級孔腔相互間也彼此貫通。第一級孔腔孔徑為700μm～1200μm，第二級孔腔孔徑為200μm～300μm，第三級孔腔孔徑為400nm～700nm，第四級孔腔孔徑為10nm～100nm，組織細(xì)胞培養(yǎng)體2的厚度為17mm，為第一級孔腔的平均孔徑的16倍，培養(yǎng)液為含有10%的胎牛血清和雙抗的高糖DMEM，培養(yǎng)細(xì)胞為HUVEC細(xì)胞，其他同實(shí)施例1。

培養(yǎng)條件是振動工作臺采用水平振動、垂直振動方式交替進(jìn)行，各振動2分鐘，工作頻率分別為50Hz 、70Hz。培養(yǎng)結(jié)果表明，細(xì)胞生長狀態(tài)良好。

本例中，該種多孔材料是按以下方法制得的：

采用1-10μm的鈦粉作為原料，粒徑為5nm～120nm的尿素作為最小一級（第四級）孔腔造孔劑，用粒徑為500nm～800nm的乙基纖維素作為第三級孔腔造孔劑，并用5nm～120nm的淀粉作為粘合劑，按照鈦粉：尿素：乙基纖維素：淀粉：蒸餾水按體積比1：1.5：1：1：12配制成漿料。

采用棱直徑為300μm～400μm、孔徑為400μm～600μm的聚酯泡沫，將所述漿料用泡沫浸漬法均勻填充其中，形成坯體并干燥，然后破碎得到粒徑為300μm～400μm的含有鈦粉原料、造孔劑與聚酯泡沫的混合顆粒。

（2）將混合顆粒、粒徑為300μm～400μm的甲基纖維素按體積比2：1均勻混合后均勻地灌入棱直徑為800μm～1300μm、孔徑為1500μm-2000μm的三維貫通的聚酯泡沫中，然后將聚酯泡沫放入密閉模具壓制成致密坯體。

（3）將致密坯體真空燒結(jié)；燒結(jié)后的坯體按照鈦材工藝進(jìn)行常規(guī)后續(xù)熱處理得到具有四級孔的多孔鈦。

實(shí)施例5：

本實(shí)施例的組織細(xì)胞培養(yǎng)裝置的組織細(xì)胞培養(yǎng)體2采用多孔CoNiCrMo合金材料，具有五級孔腔，其中，均勻分布、相互貫通的最大一級孔腔（即第一級孔腔）的腔壁由均勻分布、相互貫通的第二級、第三級孔腔填充構(gòu)成，第二級、第三級孔腔的腔壁由均勻分布、相互貫通的第四級、第五級孔腔填充構(gòu)成；且各級孔腔相互間也彼此貫通。第一級孔腔孔徑為800μm～1300μm，第二級孔腔孔徑為100μm～200μm，第三級孔腔孔徑為30μm～70μm，第四級孔腔孔徑為500nm～700nm，第五級孔腔孔徑為50nm～200nm，組織細(xì)胞培養(yǎng)體2的厚度為20mm，為第一級孔腔的平均孔徑的18倍，培養(yǎng)液為含有10%的胎牛血清和雙抗的高糖DMEM，培養(yǎng)細(xì)胞為HUVEC細(xì)胞，其他同實(shí)施例1。

培養(yǎng)條件是振動工作臺采用水平振動方式，工作頻率為70Hz。培養(yǎng)結(jié)果表明，細(xì)胞生長狀態(tài)良好。

本例中，該種多孔材料是按以下方法制得的：

采用1-10μm的CoNiCrMo合金粉作為原料，粒徑為60nm～300nm的尿素作為最小一級（第五級）孔腔造孔劑，用粒徑為600nm～800nm的乙基纖維素作為第四級孔腔造孔劑，并用60nm～300nm的淀粉作為粘合劑，按照CoNiCrMo合金粉：尿素：乙基纖維素：淀粉：蒸餾水按體積比1：1.5：1：1：12配制成漿料。

采用棱直徑為40μm～80μm、孔徑為400μm～600μm的聚酯泡沫，將所述漿料用泡沫浸漬法均勻填充其中，形成坯體并干燥，然后破碎制成粒徑為40μm～80μm的含有CoNiCrMo合金粉原料、造孔劑與聚酯泡沫的混合顆粒。

（2）將混合顆粒、粒徑為200μm～300μm的甲基纖維素按體積比1：1均勻混合后均勻地灌入棱直徑為900μm～1400μm、孔徑為1500μm-2000μm的三維貫通的聚酯泡沫中，然后將聚酯泡沫放入密閉模具壓制成致密坯體。

（3）將致密坯體真空燒結(jié)；燒結(jié)后的坯體按照CoNiCrMo合金工藝進(jìn)行常規(guī)后續(xù)熱處理得到具有五級孔的多孔CoNiCrMo合金。