背景已知許多金屬離子(例如銅、鈷、銀、錳、鎳和鋅)具有抗微生物活性。它們的作用方式仍不清楚，但可能涉及靶細(xì)胞中的氧化應(yīng)激、蛋白質(zhì)功能障礙或膜損傷。金屬離子源(例如，金屬鹽)通常摻入口腔護(hù)理制劑中以賦予組合物抗微生物特性。測定組合物中金屬離子的生物利用度的當(dāng)前方法(即，金屬離子可在所需生理部位作用以產(chǎn)生所需臨床或生物效應(yīng)的程度)依賴于測量組合物中可溶性離子的量。通常在這些方法中，將組合物離心以使不溶性物質(zhì)沉淀，并且測量所得澄清的上清液中給定金屬離子的量以測定可溶性金屬離子的量，并且因此測定“生物可用的”金屬離子的量。然而，單獨測量金屬離子的溶解度可能不提供生物利用度的精確指示。例如，在離心和傾析上清液(例如，通過吸附到固體上)之后，可溶性離子可能不經(jīng)意地保留在不溶性級分中。因此，將期望提供不單獨依賴于溶解度的測定金屬離子的生物利用度的改進(jìn)方法。概述本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，測量組合物的可溶性級分中的金屬離子的量通常不是金屬離子的生物利用度的良好指示。本發(fā)明人已經(jīng)開發(fā)了基于金屬離子調(diào)節(jié)細(xì)菌代謝和/或生長的能力來測定組合物中金屬離子的生物利用度的更有效方法。因此，在第一方面，提供用于測定包含金屬離子源的組合物中的所述金屬離子的生物利用度的方法，其中所述金屬離子具有抗微生物活性，并且其中所述方法包括：a)將包含所述金屬離子源的所述組合物的樣品與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育，以及b)測定孵育后所述細(xì)菌細(xì)胞的生活力。任選地，組合物還包含螯合劑。進(jìn)一步任選地，螯合劑選自焦磷酸四鈉(tspp)、焦磷酸四鉀(tkpp)、三聚磷酸鈉(stpp)和乙二胺四乙酸(edta)。再進(jìn)一步任選地，組合物基本上由水、所述金屬離子和螯合劑組成。任選地，組合物為口腔護(hù)理組合物或皮膚護(hù)理組合物。任選地，口腔護(hù)理組合物還包含選自以下的一種或多種試劑：表面活性劑、脫敏劑、增白劑、牙垢控制劑、粘結(jié)劑、增稠劑、清潔劑、粘合劑、泡沫調(diào)節(jié)劑、ph調(diào)節(jié)劑、口感劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、保濕劑、氟化物源及其組合。任選地，皮膚護(hù)理組合物還包含選自以下的一種或多種試劑：染料、香料、ph調(diào)節(jié)劑、增稠劑、粘度調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、抗氧化劑、螯合劑、遮光劑和保濕劑。任選地，在步驟b)中，使用代謝指示劑染料測定所述細(xì)菌細(xì)胞的生活力。優(yōu)選地，代謝指示劑染料包括氧化還原敏感性指示劑染料。更優(yōu)選地，代謝指示劑染料包括四唑鎓基染料。最優(yōu)選地，代謝指示劑染料包括選自以下的染料：3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(mtt)、2，3-雙-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-2h-四唑鎓-5-甲酰苯胺(xtt)、3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2h-四唑鎓)(mts)和2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺基苯基)-2h-四唑鎓)(wst)。任選地，代謝指示劑染料包括7-羥基-3h-吩噁嗪-3-酮10-氧化物(刃天青)。優(yōu)選地，細(xì)菌細(xì)胞選自粘性放線菌(actinomycesviscosus)、干酪乳桿菌(lactobacilluscasei)、口腔鏈球菌(streptococcusoralis)、具核梭桿菌(fusobacateriumnucleatum)、小韋榮氏球菌(veillnoellaparvula)、大腸桿菌(escherischia.coli)、金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)和粘質(zhì)沙雷氏菌(serratiamarcescens)或其混合物。任選地，細(xì)菌細(xì)胞包括粘性放線菌、干酪乳桿菌、口腔鏈球菌、具核梭桿菌和小韋榮氏球菌。進(jìn)一步任選地，細(xì)菌細(xì)胞包括大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和粘質(zhì)沙雷氏菌。任選地，金屬離子源為金屬離子的鹽。優(yōu)選地，金屬離子選自銅、鈷、銀、錳、鎳和鋅。更優(yōu)選地，金屬離子為鋅。最優(yōu)選地，鋅源包括氯化鋅、檸檬酸鋅和氧化鋅中的一種或多種。任選地，步驟b)包括通過與活細(xì)菌細(xì)胞和非活細(xì)菌細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)組合比較來定量測定孵育后所述細(xì)菌細(xì)胞的生活力。在第二方面，提供了測定包含金屬離子源的組合物的抗微生物功效的如本文所定義的方法的用途。組合物可如本文所定義。在第三方面，提供評估試劑、優(yōu)選的口腔護(hù)理劑或皮膚護(hù)理劑對包含所述金屬離子源和試劑的組合物中的金屬離子的生物利用度的影響的如本文所定義的方法的用途。組合物可如本文所定義。在第四方面，提供評定試劑對包含金屬離子源的組合物中的所述金屬離子的生物利用度的影響的方法，其中所述金屬離子具有抗微生物活性，并且所述方法包括：a)將包含所述金屬離子源的所述組合物的第一樣品與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育，b)測定孵育后細(xì)菌細(xì)胞的生活力，c)將所述試劑摻入包含所述金屬離子源的所述組合物的第二樣品中，d)將包含所述金屬離子源和所述試劑的所述組合物的第二樣品與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育，e)測定孵育后細(xì)菌細(xì)胞的生活力，以及f)比較步驟b)和e)中所測定的生活力。任選地，試劑為螯合劑。進(jìn)一步任選地，螯合劑選自焦磷酸四鈉(tspp)、焦磷酸四鉀(tkpp)、三聚磷酸鈉(stpp)和乙二胺四乙酸(edta)。再進(jìn)一步任選地，組合物基本上由水、所述金屬離子和螯合劑組成。任選地，試劑為口腔護(hù)理劑或皮膚護(hù)理劑。任選地，組合物為口腔護(hù)理組合物或皮膚護(hù)理組合物。優(yōu)選地，口腔護(hù)理組合物還包含選自以下的一種或多種試劑：表面活性劑、脫敏劑、增白劑、牙垢控制劑、粘結(jié)劑、增稠劑、清潔劑、粘合劑、泡沫調(diào)節(jié)劑、ph調(diào)節(jié)劑、口感劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、保濕劑、氟化物源及其組合。任選地，組合物為皮膚護(hù)理組合物。優(yōu)選地，皮膚護(hù)理組合物還包含選自以下的一種或多種試劑：染料、香料、ph調(diào)節(jié)劑、增稠劑、粘度調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、抗氧化劑、螯合劑、遮光劑和保濕劑。任選地，在步驟b)和e)中，使用代謝指示劑染料測定所述細(xì)菌細(xì)胞的生活力。優(yōu)選地，代謝指示劑染料包括氧化還原敏感性指示劑染料。更優(yōu)選地，代謝指示劑染料包括四唑鎓基染料。最優(yōu)選地，代謝指示劑染料包括選自以下的染料：3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(mtt)、2，3-雙-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-2h-四唑鎓-5-甲酰苯胺(xtt)、3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2h-四唑鎓)(mts)和2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺基苯基)-2h-四唑鎓)(wst)。任選地，代謝指示劑染料包括7-羥基-3h-吩噁嗪-3-酮10-氧化物(刃天青)。優(yōu)選地，細(xì)菌細(xì)胞選自粘性放線菌、干酪乳桿菌、口腔鏈球菌、具核梭桿菌、小韋榮氏球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和粘質(zhì)沙雷氏菌或其混合物。任選地，細(xì)菌細(xì)胞包括粘性放線菌、干酪乳桿菌、口腔鏈球菌、具核梭桿菌和小韋榮氏球菌。進(jìn)一步任選地，細(xì)菌細(xì)胞包括大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和粘質(zhì)沙雷氏菌。任選地，金屬離子源為金屬離子的鹽。優(yōu)選地，金屬離子選自銅、鈷、銀、錳、鎳和鋅。更優(yōu)選地，金屬離子為鋅。最優(yōu)選地，鋅源包括氯化鋅、檸檬酸鋅和氧化鋅中的一種或多種。任選地，步驟b)和e)包括通過與活細(xì)菌細(xì)胞和非活細(xì)菌細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)組合比較來定量測定孵育后所述細(xì)菌細(xì)胞的生活力。詳述以下對優(yōu)選實施方案的描述在性質(zhì)上僅是示例性的，并且決不意圖限制本發(fā)明、它的應(yīng)用或用途。如全篇中所用，范圍被用作描述范圍內(nèi)的各個和每個值的簡略表達(dá)方式。可選擇范圍內(nèi)的任何值作為范圍的終點。此外，本文中引用的所有參考文獻(xiàn)均特此以引用的方式整體并入。如果本公開中的定義和引用的參考文獻(xiàn)的定義出現(xiàn)沖突，以本公開為準(zhǔn)。除非另外指出，否則本文和本說明書中其他地方表述的所有百分比和量都應(yīng)理解為重量百分比。給出的量基于物質(zhì)的有效重量。在一種布置中，本文提供用于測定包含金屬離子源的組合物中的所述金屬離子的生物利用度的方法，其中所述金屬離子具有抗微生物活性，并且其中所述方法包括：a)將包含所述金屬離子的所述組合物的樣品與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育，以及b)測定孵育后所述細(xì)菌細(xì)胞的生活力。測定的細(xì)菌細(xì)胞的生活力反映組合物中金屬離子的生物利用度/與其負(fù)相關(guān)，使得高生活力指示出低生物利用度，并且低生活力指示出高生物利用度。如本文所用的術(shù)語“生物利用度”是指金屬離子可用于到達(dá)靶區(qū)域(優(yōu)選地為口腔)并在靶區(qū)域提供抗微生物效果的程度。優(yōu)選地，組合物是水性的。在一些實施方案中，組合物為口腔護(hù)理組合物。如本文所用的術(shù)語“口腔護(hù)理組合物”意指在平常使用過程中保留在口腔中持續(xù)足以接觸一些或所有牙齒表面和/或口腔組織的時間以實現(xiàn)至少一種口腔健康益處的產(chǎn)品。口腔健康益處無限制地包括口腔惡臭、釉質(zhì)侵蝕、齲齒、牙周病和牙齒過敏的預(yù)防或治療?？谇蛔o(hù)理組合物可以各種形式提供，無限制地包括牙膏、潔牙劑、牙膠、牙粉、片劑、漱口液(rinse)、齦下凝膠、泡沫和摩絲。當(dāng)進(jìn)行本發(fā)明的方法時，口腔護(hù)理組合物可在與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育之前稀釋或溶解于滲透性可接受的溶劑(例如，磷酸鹽緩沖鹽水)中。根據(jù)本文所定義的方法使用或測試的口腔護(hù)理組合物可包含選自以下的一種或多種試劑：表面活性劑、脫敏劑、增白劑、牙垢控制劑、粘結(jié)劑、增稠劑、清潔劑、粘合劑、泡沫調(diào)節(jié)劑、ph調(diào)節(jié)劑、口感劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、保濕劑、氟化物源及其組合。在一些實施方案中，組合物為皮膚護(hù)理組合物(例如，液體皂、沐浴凝膠或身體霜)。皮膚護(hù)理組合物可為了治療性、預(yù)防性或美容益處而施用到皮膚和/或指甲。皮膚護(hù)理組合物可例如用于增強(qiáng)外觀、清潔、控制或改善氣味，以及改善皮膚和/或指甲的感覺。根據(jù)本文所定義的方法使用或測試的皮膚護(hù)理組合物可包含選自以下的一種或多種試劑：染料、香料、ph調(diào)節(jié)劑、增稠劑、粘度調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、抗氧化劑、螯合劑、遮光劑和保濕劑。當(dāng)進(jìn)行本發(fā)明的方法時，皮膚護(hù)理組合物可在與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育之前稀釋或溶解于滲透性可接受的溶劑(例如，磷酸鹽緩沖鹽水)中。在優(yōu)選的實施方案中，包含金屬離子的組合物還包含螯合劑。螯合劑可選自焦磷酸四鈉(tspp)、焦磷酸四鉀(tkpp)、三聚磷酸鈉(stpp)和乙二胺四乙酸(edta)。組合物可基本上由水、所述金屬離子和螯合劑組成。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本文所定義的方法用于測定螯合劑對金屬離子生物利用度的影響，并且雖然螯合劑可增加金屬離子的溶解度，但結(jié)果是金屬離子的生物利用度未必增加。在一種布置中，包含根據(jù)本文所定義的方法使用或測試的金屬離子的組合物不含防腐劑或除金屬離子之外的任何抗微生物劑。在此布置中，任何觀察到的對細(xì)菌細(xì)胞生活力的影響僅僅歸因于組合物中的金屬離子。通常在本文所定義的方法中，使用細(xì)菌細(xì)胞的混合物。細(xì)菌細(xì)胞可選自粘性放線菌、干酪乳桿菌、口腔鏈球菌、具核梭桿菌、小韋榮氏球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和粘質(zhì)沙雷氏菌或其混合物。在一種布置中，所述細(xì)菌細(xì)胞優(yōu)選地以1∶1∶1∶1∶1的比例包括粘性放線菌、干酪乳桿菌、口腔鏈球菌、具核梭桿菌和小韋榮氏球菌。所述混合物模擬口腔環(huán)境的復(fù)雜菌群。因此，在一個實施方案中，待使用粘性放線菌、干酪乳桿菌、口腔鏈球菌、具核梭桿菌和小韋榮氏球菌的混合物測試的組合物為如本文所定義的口腔護(hù)理組合物。細(xì)菌細(xì)胞通常在用于本文所述的方法之前在連續(xù)培養(yǎng)恒化器系統(tǒng)中一起培養(yǎng)。在另一種布置中，所述細(xì)菌細(xì)胞優(yōu)選地以0.45∶0.45∶0.1的比例包括大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和粘質(zhì)沙雷氏菌。該混合物代表正常皮膚菌群。因此，在一個實施方案中，待使用大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和粘質(zhì)沙雷氏菌的混合物測試的組合物為如本文所定義的皮膚護(hù)理組合物。這些細(xì)菌細(xì)胞通常在過夜培養(yǎng)物中分開培養(yǎng)，之后以以上所限定的比例混合并用于本文所述的方法中。細(xì)胞培養(yǎng)的合適方法和條件將是微生物學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的。優(yōu)選地在將在不存在測試組合物的條件下對細(xì)胞生活力最佳的條件下，將細(xì)菌培養(yǎng)物的樣品與包含金屬離子的測試組合物一起孵育。在一種布置中，孵育處于37℃下，持續(xù)30至60分鐘。然而，孵育條件可根據(jù)所用的細(xì)菌細(xì)胞的類型來調(diào)節(jié)。通常，將包含至少約1x106個細(xì)胞的1ml細(xì)菌細(xì)胞懸浮液與測試組合物一起孵育。在與含有金屬離子的測試組合物一起孵育后，測定細(xì)菌細(xì)胞的生活力。能夠區(qū)分活細(xì)胞與非活細(xì)胞的方法和試劑將是微生物學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的。通常，細(xì)菌細(xì)胞的生活力通過代謝指示劑染料來測定。在一種布置中，在與測試組合物一起孵育后，將細(xì)菌細(xì)胞洗滌并用染料染色。優(yōu)選地，使用氧化還原敏感性指示劑染料測定生活力。氧化還原敏感性指示劑染料將是微生物學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的，并且包括四唑鎓基染料，諸如3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(mtt)、2，3-雙-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-2h-四唑鎓-5-甲酰苯胺(xtt)、3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2h-四唑鎓)(mts)和2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺基苯基)-2h-四唑鎓)(wst)。代謝活性活細(xì)胞中的nadh將四唑鎓化合物還原為亮色的甲臜(formazan)產(chǎn)物，所述甲臜產(chǎn)物可通過給定激發(fā)和發(fā)射波長下的熒光光譜技術(shù)檢測。因此，熒光強(qiáng)度越大，活細(xì)胞的數(shù)量越大。特別優(yōu)選的代謝指示劑染料為刃天青(7-羥基-3h-吩噁嗪-3-酮10-氧化物)。在其氧化狀態(tài)下，刃天青為藍(lán)色的非熒光染料。當(dāng)活細(xì)菌細(xì)胞與刃天青一起孵育時，非熒光染料被還原為粉紅色染料試鹵靈(resorufin)。在560nm激發(fā)和590nm發(fā)射下讀取樣品的熒光，以測定活細(xì)菌細(xì)胞的比例。其他生活力指示包括蛋白酶標(biāo)志物和atp。例如，僅存在于活細(xì)胞中的氨肽酶活性可使用細(xì)胞可滲透熒光底物來測量。類似地，atp可使用甲蟲熒光素酶反應(yīng)來測量，所述甲蟲熒光素酶反應(yīng)使用atp來產(chǎn)生光。依賴于膜滲透性作為細(xì)菌生活力的指示的熒光染色系統(tǒng)(例如，“背光live/”系統(tǒng))通常不適用于本文所述的方法，因為金屬離子通常不滲透過細(xì)胞膜。通常在本文所定義的方法中，定量處理過的細(xì)菌細(xì)胞的生活力。換句話說，可將活細(xì)菌細(xì)胞的比例測定作為與含有金屬離子的測試組合物一起孵育的細(xì)菌細(xì)胞的總數(shù)的百分比。這可通過測定活的和非活的細(xì)菌細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)混合物(例如，對應(yīng)于以0∶100、20∶80、40∶60、60∶40、80∶20和100∶1的比例用于測試測定中的細(xì)菌混合物的活細(xì)胞：非活細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)混合物)的生活力來進(jìn)行，以產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。通常，標(biāo)準(zhǔn)混合物中細(xì)菌細(xì)胞的總數(shù)、類型和濃度對應(yīng)于測定中使用的細(xì)菌細(xì)胞的總數(shù)、類型和濃度。然后可將測試組合物的生活力結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)混合物的那些生活力結(jié)果進(jìn)行比較，以將活細(xì)菌細(xì)胞的比例定量為細(xì)菌細(xì)胞總數(shù)的百分比。組合物中的金屬離子通常具有抗微生物活性，特別是抗細(xì)菌活性。具有抗微生物活性的金屬離子將是微生物學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的，并且無限制地包括銅、鈷、銀、錳、鎳和鋅。優(yōu)選地，金屬離子為鋅。組合物可包含一種或多于一種金屬離子。組合物中的金屬離子優(yōu)選以鹽形式提供。鹽可包括氯化物、檸檬酸鹽或氧化物。在優(yōu)選的實施方案中，鹽包括氯化鋅、檸檬酸鋅或氧化鋅。本發(fā)明人已意外地發(fā)現(xiàn)，金屬離子鹽的溶解度與金屬離子的生物利用度不相關(guān)。金屬離子的生物利用度可受到許多物理和生化參數(shù)影響。這些物理和生化參數(shù)包括溶液中的穩(wěn)定性、給定ph下的穩(wěn)定性，以及除了與其他組成成分形成不溶性或無活性復(fù)合物之外的其他組成成分的干擾或競爭。例如，金屬離子螯合劑諸如edta可將金屬離子轉(zhuǎn)移到組合物的可溶性級分中。然而，當(dāng)與edta絡(luò)合時，金屬離子不“可用”來作用于所需生理部位以產(chǎn)生所需生物或臨床活性。本文所定義的測定生物利用度的方法考慮了此類物理和生化參數(shù)的影響，并且因此優(yōu)于包括單獨測量溶解度的方法。用途本文所定義的方法可用來測定包含金屬離子源的組合物，任選的口腔護(hù)理組合物或皮膚護(hù)理組合物的抗微生物功效。組合物和金屬離子源可如本文所定義。此外，可使用本文所定義的方法，通過在存在和不存在試劑的情況下測定金屬離子的生物利用度來測試試劑，優(yōu)選的口腔護(hù)理劑或皮膚護(hù)理劑對金屬離子的生物利用度的影響。因此，提供了評估試劑對包含所述金屬離子源和試劑的組合物中的金屬離子的生物利用度的影響的如本文所定義的方法的用途。組合物和金屬離子源可如本文所定義。試劑可如下所定義。更具體地，提供了評定試劑對包含金屬離子的組合物中的所述金屬離子的生物利用度的影響的方法，其中所述金屬離子具有抗微生物活性，并且所述方法包括：a)將包含所述金屬離子的所述組合物的第一樣品與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育，b)測定孵育后細(xì)菌細(xì)胞的生活力，c)將所述試劑摻入包含所述金屬離子的所述組合物的第二樣品中，d)將包含所述金屬離子的所述組合物的第二樣品與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育，e)測定孵育后細(xì)菌細(xì)胞的生活力，以及f)比較步驟b)和e)中所測定的生活力。組合物、金屬離子源、測定步驟b)和e)中的細(xì)菌細(xì)胞的生活力的方法以及細(xì)菌細(xì)胞本身可如本文所定義。如上所述，確定的細(xì)菌細(xì)胞的生活力反映組合物中金屬離子的生物利用度/與其負(fù)相關(guān)，使得高生活力指示出低生物利用度，并且低生活力指示出高生物利用度。如果待維持抗微生物活性，則在試劑存在下的金屬離子生物利用度的降低將指示試劑與金屬離子不相容。在一些實施方案中，試劑為口腔護(hù)理劑或皮膚護(hù)理劑。術(shù)語“口腔護(hù)理劑”是指適用于摻入口腔護(hù)理組合物中的任何試劑，并且優(yōu)選地其具有治療性或預(yù)防性口腔健康益處或美容口腔益處。類似地，術(shù)語“皮膚護(hù)理劑”是指適用于摻入皮膚護(hù)理組合物中的任何試劑，并且優(yōu)選地其具有治療性、預(yù)防性或美容皮膚護(hù)理益處。在其他實施方案中，試劑為螯合劑，諸如焦磷酸四鈉(tspp)、焦磷酸四鉀(tkpp)、三聚磷酸鈉(stpp)和乙二胺四乙酸(edta)。以下實施例說明了本發(fā)明的方法及其用途。所述實施例是說明性的，并且并不限制本發(fā)明的范圍。實施例實施例1-鋅生物利用度(1)測定具有已知溶解度差異的鋅鹽(在無菌、去離子水中的氯化鋅、檸檬酸鋅和氧化鋅)的簡單溶液中鋅的生物利用度。在37℃下將測試溶液與已在連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)中一起生長的粘性放線菌、干酪乳桿菌、口腔鏈球菌、具核梭桿菌和小韋榮氏球菌的混合物一起孵育1小時。(這種細(xì)菌混合物模擬口腔環(huán)境的復(fù)雜菌群。)隨后，將細(xì)胞洗滌并與50μg/ml刃天青溶液混合。在560nm激發(fā)和590nm發(fā)射下讀取樣品的熒光，并將其與活細(xì)菌和非活細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)化混合物比較，以便測定在處理后保持生活力的總細(xì)菌群體的百分比。結(jié)果示于表1中。在兩種不同的鋅濃度下測試每種鹽。鋅的總量在不同的鹽之間是一致的。表1-鋅鹽測定的結(jié)果樣品生活力％標(biāo)準(zhǔn)誤差(％)pbs68.060.251/10pbs68.730.181.7％zncl22.581.800.17％zncl231.480.962.6％檸檬酸鋅16.662.800.26％檸檬酸鋅44.902.711％zno14.702.900.1％zno48.571.99如表1所示，當(dāng)稀釋10倍時，所有三種鋅鹽就鋅生物利用度而言均展現(xiàn)出劑量依賴性反應(yīng)。然而，已知檸檬酸鋅比氧化鋅顯著更易溶。然而，盡管溶解度的這種差異，鋅的生物利用度與兩種鹽大致相同，并且在測試的兩種鋅濃度下大致相同。這些數(shù)據(jù)表明單獨的溶解度不是生物利用度的良好指示。不希望受理論束縛，細(xì)菌附著或金屬離子被細(xì)菌細(xì)胞的攝取的差異可能導(dǎo)致觀察到的生物利用度的差異。實施例2-檸檬酸鹽對鋅生物利用度的影響以前，已經(jīng)提出將檸檬酸鹽添加到含鋅組合物中增加了可溶性鋅的量，并因此增加了鋅的生物利用度(wo2006012967a1，unilever)。為測試這種假設(shè)，如實施例1所述的那樣測試在存在和不存在不同水平的檸檬酸鹽的情況下以及在口腔護(hù)理組合物的典型ph下鋅鹽在去離子水中的簡單溶液。結(jié)果示于表2中。還指示了檸檬酸鹽與鋅的摩爾比。表2-鋅鹽和檸檬酸鹽測定的結(jié)果樣品生活力％標(biāo)準(zhǔn)誤差(％)檸檬酸鋅1.681.60檸檬酸鋅+檸檬酸鉀，ph6.8；2∶132.572.88檸檬酸鋅+檸檬酸鉀，ph8.1；2∶137.224.23檸檬酸鋅+檸檬酸鉀1∶18.971.15檸檬酸鋅+檸檬酸鉀1∶1.526.015.05zno23.754.89zno+檸檬酸鉀，ph6.8；2∶138.353.79zno+檸檬酸鉀，ph8.1；2∶139.053.99雙重zn混合物17.684.96雙重zn+檸檬酸鉀，ph6.8；2∶137.243.90雙重zn+檸檬酸鉀，ph8.1；2∶136.895.89從表2中可以看出，將檸檬酸鹽加入氧化鋅、檸檬酸鋅或兩種鹽的混合物的溶液中(雖然增加鋅的溶解度)降低了金屬離子的生物利用度，因此降低了溶液的抗微生物功效。因此，可得出結(jié)論，鋅的生物利用度不僅僅是溶解度的函數(shù)。實施例3-螯合劑對鋅生物利用度的影響為測定螯合劑對鋅的生物利用度的影響，在如實施例1所述的生物利用度測定中測試在存在或不存在螯合劑(焦磷酸四鈉(tspp)、焦磷酸四鉀(tkpp)、三聚磷酸鈉(stpp)和乙二胺四乙酸(edta))的情況下檸檬酸鋅或氧化鋅在去離子水中的簡單溶液。還通過使溶液離心以除去不溶性鋅，并通過使用icp-aa(具有原子吸收的感應(yīng)耦合等離子體)測試上清液來測定每種溶液中可溶性鋅的量。結(jié)果示于表3(檸檬酸鋅溶液)和表4(氧化鋅溶液)中。表3-檸檬酸鋅和螯合劑表4-氧化鋅和螯合劑表3和4示出，盡管螯合劑對鋅鹽的增強(qiáng)溶解度的影響，但是鋅生物利用度在螯合劑存在下未增加，并且事實上通常在螯合劑的存在下減少。實施例4-鋅生物利用度(2)鋅鹽在去離子水中的簡單溶液(檸檬酸鋅和氧化鋅)對大腸桿菌混合物的生活力的影響。測試了大腸桿菌(45％)、金黃色葡萄球菌(45％)和粘質(zhì)沙雷氏菌(10％)。所用的孵育和檢測方法如實施例1中所述。在使用氧化鋅的測驗和使用檸檬酸鋅的測試之間，鋅的總量是相當(dāng)?shù)?。結(jié)果示于表5中。將三氯生用作實驗的陽性抗微生物對照。表5-鋅鹽測定的結(jié)果如上所述，檸檬酸鋅比氧化鋅顯著更易溶。然而，表5表明，盡管溶解度的顯著差異，但與氧化鋅相比，來自檸檬酸鋅的鋅的生物利用度僅僅略高。因此，可得出結(jié)論，金屬離子的溶解度不是生物利用度的良好決定因素。實施例5-銅生物利用度使用去離子水中的簡單銅溶液進(jìn)行生物利用度測試。溶液含有0.5％或0.05％元素銅的最終濃度。如實施例1所述的那樣進(jìn)行生物利用度測試。結(jié)果示于表6和7中。表6-0.5％cu*cuf2存在下的生活力低于測試的檢測水平表7-0.05％cu表6和7示出測試的所有銅溶液的劑量依賴性反應(yīng)(即，在較高濃度下，活細(xì)菌的量減少，表明銅的生物利用度增加)。所測試的銅鹽在水中的理論溶解度如下：cucl2：75.7g/100ml；cuo：不可溶；cu2o：不可溶；cuso4：20g/100ml。因此，可看出，即使cucl2比cuso4具有顯著更高的溶解度，但是兩種鹽的對細(xì)菌細(xì)胞生活力的影響(以及因此對銅離子的生物利用度的影響)是相當(dāng)?shù)?。再者，這些數(shù)據(jù)表明，單獨的金屬離子的溶解度不是其生物利用度的良好決定因素。雖然已經(jīng)示出并描述了本發(fā)明的特定實施方案，但是將對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，可在不背離如所附權(quán)利要求中所限定的本發(fā)明范圍的情況下進(jìn)行各種變化和修改。當(dāng)前第1頁12