一種地黃多糖的制備方法
【專利摘要】一種地黃多糖的制備方法。該方法包括如下步驟：(1)將地黃粉碎；(2)在粉碎的地黃中加入水、纖維素酶，調(diào)節(jié)pH，攪拌，加熱下酶解；(3)酶解后進(jìn)行分離，取濾液；(4)在濾液中加乙醇溶液并用堿調(diào)節(jié)溶液的pH沉淀多糖，收集沉淀；(5)對(duì)收集的沉淀進(jìn)行干燥，得到地黃多糖產(chǎn)品。本發(fā)明方法得到的地黃多糖純度高，工藝簡(jiǎn)單，使用的乙醇溶液能夠回收利用，對(duì)環(huán)境無污染，適合工業(yè)生產(chǎn)。
【專利說明】一種地黃多糖的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明天然藥物領(lǐng)域，特別涉及一種用酶解法和乙醇沉淀從地黃中提取地黃多糖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]地黃為玄參科植物地黃的干燥根莖。生地黃具有滋陰清熱作用，熟地黃具有補(bǔ)血滋陰、益精填髓的功效，是優(yōu)良的滋陰補(bǔ)血藥，被譽(yù)為“壯水之主，補(bǔ)血之君”，廣泛用于陰虛、血虛所致的各種疾病。地黃多糖是地黃中的有效成分之一。
[0003]許多植物多糖具有免疫促進(jìn)作用。抗腫瘤作用，抗衰老活性，降血糖活性，抗病毒活性，以及降血脂活性等。而且多糖因其特殊的生物活性和無毒副作用而被廣泛用于臨床用藥、疫苗和保健食品。多糖作為提高機(jī)體免疫功能的保健品已被廣泛開發(fā)，但許多多糖產(chǎn)品僅僅停留在保健品階段，未能開發(fā)成藥物，主要原因是多糖的分離純化困難，技術(shù)不過關(guān)。
[0004]如CN101402691A公開了一種用醇沉淀和氯化鈣脫蛋白制備熟地黃多糖的方法，包括如下步驟:將熟地黃加8倍體積重量的水，在98~100°C浸提4H，過濾，藥渣再加8倍原藥物體積重量的水在98~100°C浸提4H，擠盡藥渣水分，過濾，合并濾液，濃縮至相當(dāng)于原藥材0.5G/ML,加乙醇攪拌使含醇量達(dá)80 %，緩加快攪，醇沉24h，抽濾，用4倍藥材體積重量的95%乙醇洗滌沉淀，揮至無醇味，加水溶解至藥材體積重量的2倍，調(diào)PH至8~9，加入無水氯化鈣，使W/V達(dá)7%，溶解，放置室溫，離心，取上清液濃縮至稠膏，95°C減壓干燥即得。但該方法的脫蛋白效率僅為50%左右，熟地黃多糖保存率70%左右，距離工業(yè)生產(chǎn)的要求仍有一定距離。
[0005]CN101041675A公開了一種地黃提取地黃寡糖、地黃多糖的方法，是將地里收獲的鮮地黃用清水洗凈、磨碎或干地黃水浸I~10小時(shí)后磨碎，用離心機(jī)高速離心得地黃濾液和地黃渣，而后將濾液通過50000D (道爾頓)超濾膜、10000D超濾膜、1000D鈉濾膜、500D鈉濾膜的多級(jí)分離，將10000D超濾膜分離后的膜上液用真空蒸發(fā)器加熱濃縮至含糖量10~50%,冷卻后加I~9倍乙醇攪拌0.1~I小時(shí)，過濾棄液，濾渣在100°C以下烘干可得地黃多糖成品，將500D鈉濾膜分離后的膜上液用真空蒸發(fā)器濃縮至含糖量10~50%，噴霧干燥可得含水蘇糖> 80%地黃寡糖成品。該方法的地黃多糖的提取率仍然較低且工藝復(fù)雜。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種高效率、高純度的地黃多糖的制備方法。
[0007]為達(dá)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0008]一種地黃多糖的制備方法，包括如下步驟:
[0009](I)將地黃粉碎；
[0010](2)在粉碎的地黃中加入水、纖維素酶，調(diào)節(jié)pH，攪拌，加熱下酶解；[0011 ] (3)酶解后進(jìn)行分離，取濾液；
[0012](4)在濾液中加入乙醇溶液并用堿調(diào)節(jié)溶液的pH沉淀多糖，收集沉淀；
[0013](5)對(duì)收集的沉淀進(jìn)行干燥，得到地黃多糖產(chǎn)品。
[0014]作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述的制備方法，步驟(2)加入的水的質(zhì)量為地黃粉末質(zhì)量的3-15倍，例如為5倍、9倍、13倍等，優(yōu)選為6-8倍，纖維素酶的含量3_6%，例如為3.3%,3.9%,4.5%,5.2 %、5.8%等，纖維素酶的含量為纖維素酶占加入纖維素酶后的混合物總量的比例。
[0015]作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述的制備方法，步驟(2)中的pH為2-7，例如為2.5、
3.4,4.1,4.9,5.2,5.8,6.6 等，優(yōu)選為 4-5。
[0016]作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述的制備方法，步驟(2)中酶解的溫度為30-70°C，例如為33°C、39°C、45°C、53°C、61°C、69°C等，優(yōu)選為40-60°C ;酶解的時(shí)間為Ih以上，例如為 1.5h、2.3h、2.9h、4.0h,5.5h、6.6h 等，優(yōu)選為 2h。
[0017]本發(fā)明的分離可以不作具體限定，只要能達(dá)到有效分離的方法均可用于本發(fā)明。但是作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述的制備方法，步驟(3)所述的分離采用離心分離。
[0018]優(yōu)選的離心的條件為:離心的轉(zhuǎn)速為5000g，離心的時(shí)間為30min。
[0019]作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述的制備方法，步驟(4)中乙醇溶液的質(zhì)量濃度為70% 以上，例如為 75%、81%、85%、89%、92%、96%等，優(yōu)選為 85-95% ;pH 為 7.5 以上，優(yōu)選為8-9。
[0020]作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述的制備方法，步驟(4)中的堿為可揮發(fā)性堿性鹽，優(yōu)選為碳酸氫銨。
[0021]作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述的制備方法，步驟(5)中的干燥通過減壓蒸餾進(jìn)行。
[0022]本發(fā)明的使用酶解技術(shù)提高多糖的提取率，同時(shí)在醇沉淀的時(shí)候使用堿性條件達(dá)到脫除蛋白的目的，得到的地黃多糖提取率高于90%，脫蛋白效率可達(dá)85%左右，更易實(shí)現(xiàn)擴(kuò)大生產(chǎn)的目的。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為更好地說明本發(fā)明，便于理解本發(fā)明的技術(shù)方案，本發(fā)明的典型但非限制性的實(shí)施例如下:
[0024]實(shí)施例1:
[0025](I)粉碎，取地黃20g粉碎；
[0026](2)酶解，在粉碎的地黃中加入水120ml、纖維素酶3%，調(diào)節(jié)pH為4.0，充分?jǐn)嚢?，?0°C下酶解2小時(shí)；
[0027](3)離心分離，酶解后轉(zhuǎn)速5000g，離心30分鐘，取濾液；
[0028](4)醇沉淀，在濾液中加入85%乙醇溶液，并用碳酸氫銨調(diào)節(jié)pH為8.0，沉淀多糖，收集沉淀；
[0029](5)干燥，對(duì)收集的沉淀進(jìn)行減壓蒸餾，得到地黃多糖產(chǎn)品，其多糖提取率91.3%，脫蛋白效率85.1%0
[0030]實(shí)施例2:[0031](I)粉碎，取地黃20g粉碎；
[0032](2)酶解，在粉碎的地黃中加入水160ml、纖維素酶6%，調(diào)節(jié)pH為5.0，充分?jǐn)嚢瑁?0°C下酶解2小時(shí)；
[0033](3)離心分離，酶解后轉(zhuǎn)速5000g，離心30分鐘，取濾液；
[0034](4)醇沉淀，在濾液中加入95%乙醇溶液，并用碳酸氫銨調(diào)節(jié)pH為9.0，沉淀多糖，收集沉淀；
[0035](5)干燥，對(duì)收集的沉淀進(jìn)行減壓蒸餾，得到地黃多糖產(chǎn)品，其多糖提取率93.5%，脫蛋白效率86.3%。
[0036]實(shí)施例3:
[0037](I)粉碎，取地黃20g粉碎；
[0038](2)酶解，在粉碎的地黃中加入水300ml、纖維素酶5%，調(diào)節(jié)pH為3.0，充分?jǐn)嚢?，?0°C下酶解4小時(shí)；
[0039](3)離心分離，酶解后轉(zhuǎn)速5000g，離心30分鐘，取濾液； [0040](4)醇沉淀，在濾液中加入70%乙醇溶液，并用碳酸氫銨調(diào)節(jié)pH為7.6，沉淀多糖，收集沉淀；
[0041](5)干燥，對(duì)收集的沉淀進(jìn)行減壓蒸餾，得到地黃多糖產(chǎn)品，其多糖提取率92.4%，脫蛋白效率83.1%。
[0042]實(shí)施例4:
[0043](I)粉碎，取地黃20g粉碎；
[0044](2)酶解，在粉碎的地黃中加入水80ml、纖維素酶4%，調(diào)節(jié)pH為6.5，充分?jǐn)嚢?，?0°C下酶解I小時(shí)；
[0045](3)離心分離，酶解后轉(zhuǎn)速5000g，離心30分鐘，取濾液；
[0046](4)醇沉淀，在濾液中加入80%乙醇溶液，并用碳酸氫銨調(diào)節(jié)pH為10.5，沉淀多糖，收集沉淀；
[0047](5)干燥，對(duì)收集的沉淀進(jìn)行減壓蒸餾，得到地黃多糖產(chǎn)品，其多糖提取率91.7%，脫蛋白效率84.9% ο
[0048] 申請(qǐng)人:聲明，本發(fā)明通過上述實(shí)施例來說明本發(fā)明的詳細(xì)方法，但本發(fā)明并不局限于上述詳細(xì)方法，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細(xì)方法才能實(shí)施。所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對(duì)本發(fā)明的任何改進(jìn)，對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種地黃多糖的制備方法，包括如下步驟: (1)將地黃粉碎； (2)在粉碎的地黃中加入水、纖維素酶，調(diào)節(jié)pH，攪拌，加熱下酶解； (3)酶解后進(jìn)行分離，取濾液； (4)在濾液中加入乙醇溶液并用堿調(diào)節(jié)溶液的pH沉淀多糖，收集沉淀； (5)對(duì)收集的沉淀進(jìn)行干燥，得到地黃多糖產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)加入的水的質(zhì)量為地黃粉末質(zhì)量的3-15倍,優(yōu)選為6-8倍,纖維素酶的含量3-6%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中的pH為2-7，優(yōu)選為4-5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中酶解的溫度為30-70°C，優(yōu)選為40-60°C ;酶解的時(shí)間為Ih以上，優(yōu)選為2h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述的分離采用離心分離。 優(yōu)選，離心的轉(zhuǎn) 速為5000g，離心的時(shí)間為30min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)中乙醇溶液的質(zhì)量濃度為70%以上，優(yōu)選為85-95% ;pH為7.5以上，優(yōu)選為8-9。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)中的堿為可揮發(fā)性堿性鹽，優(yōu)選為碳酸氫銨。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)中的干燥通過減壓蒸餾進(jìn)行。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK104017101SQ201410272686
【公開日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2014年6月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月18日
【發(fā)明者】孔英俊, 張貴鋒, 蘇志國, 康躋耀 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院過程工程研究所