一種從海帶中提取海帶多糖的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從海帶中提取海帶多糖的方法，包括下述步驟:原料處理、超聲波處理、酶解、脫色、除蛋白、干燥即得成品。相比現(xiàn)有的三氯乙酸沉淀法及savage法等，海帶多糖的收率高、含量高。
【專利說明】一種從海帶中提取海帶多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多糖的制備方法，具體涉及一種從海帶中提取海帶多糖的方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]海帶(Laminaria Japonica Aresch)是褐藻門海帶目海帶科海帶屬的大型海藻。海帶富含多種功能性成分，具有極高的食用和藥用價(jià)值，其藥用價(jià)值在《本草綱目》、《神農(nóng)本草經(jīng)》和《食物本草》等傳統(tǒng)醫(yī)書中都已有記載。研究表明海帶的多種生物功能大多與海帶中的生理活性多糖有關(guān)，如免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗凝血、降脂、降糖、抗氧化等。
[0003]目前，對于海帶多糖的提取方法已有一些海帶多糖提取的文獻(xiàn)或報(bào)道，傳統(tǒng)方法主要為酸提取法、堿提取法、酶提取法等，這些提取方法都存在一定的缺陷:酸提可造成多糖水解，堿提取法造成多糖生物活性降低，酶提取法耗時(shí)，工業(yè)生產(chǎn)需要使用的酶量大，成本高，熱水提取醇沉的方法簡便，但是耗時(shí)耗能。脫除多糖中蛋白的方法有三氯乙酸沉淀法及savage法等,利用三氯乙酸沉淀蛋白，多糖收率較高，但常伴有糖鏈降解；savage法采用氯仿及戊醇等有機(jī)試劑使蛋白變性、沉淀，其處理?xiàng)l件溫和，能較好的避免多糖降解，但處理效率低，多糖損失嚴(yán)重。如中國專利CN103421126A，公開了一種提取海帶多糖的方法，將海帶洗凈后，曬干、粉碎、過篩后浸泡到水中，經(jīng)過水提和超聲波浸提，然后再醇沉，得到海帶多糖沉淀，最后將沉淀烘干，即的粗品的海帶多糖，該方法得到海帶多糖含量低?，F(xiàn)有方法均存在不足，這在一定程度上制約了海帶多糖的精深加工與應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種工藝成熟、適合生產(chǎn)的從海帶中提取海帶多糖的方法。
[0005]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0006]一種從海帶中提取海帶多糖的方法，包括下述步驟:
[0007]a.原料處理:將海帶干制后，粉碎；
[0008]b.超聲波處理:粉碎后的海帶粉中加入10-20倍的純凈水，超聲波處理20_40min，作用溫度70-85°C，功率為200-350W，完成后過濾，收集濾液；
[0009]c.酶解:加入濾液重量1.5-2.5%的胰蛋白酶，攪拌均勻，35_45°C酶解l_3h，調(diào)pH值至3.0-5.0，再加入濾液重量1.5-2.5%的胃蛋白酶，攪拌均勻，35-45°C酶解l_3h，然后沸水浴10-20min，過濾，收集濾液；
[0010]d.脫色:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫25_35min進(jìn)行脫色，抽濾，收集濾液；
[0011]e.除蛋白:向步驟d得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向?yàn)V液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心10-15min,沉淀進(jìn)行冷凍干燥得成品。
[0012] 優(yōu)選的，步驟a中粉碎至40-60目。[0013]優(yōu)選的，步驟b中粉碎后的海帶粉中加入15倍純凈水。
[0014]優(yōu)選的，步驟b中超聲波處理時(shí)間30min。
[0015]優(yōu)選的，步驟b中超聲波作用溫度80°C。
[0016]優(yōu)選的，步驟b中超聲波功率300W。
[0017]優(yōu)選的，步驟c中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解溫度為40°C。
[0018]優(yōu)選的，步驟c中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解時(shí)間為2h。
[0019]優(yōu)選的，步驟c中胰蛋白酶或胃蛋白酶的用量為2.0%。
[0020]優(yōu)選的，步驟d中，向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，沉淀加入步驟c中，再次酶解。
[0021]優(yōu)選的,步驟e中，離心為5000r/min。
[0022]采用本發(fā)明的得方法得到的海帶多糖，具有如下性狀:
[0023]白色略帶黃色的粉末，易吸濕，易溶于水。
[0024]采用本發(fā)明的方法以海帶為原料提取海帶多糖，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)
占-
^ \\\.[0025]1、本法明方法將超聲波、蛋白酶解、醇沉、冷凍干燥等先進(jìn)技術(shù)綜合使用來制備海帶多糖，工藝成熟、可靠，該法能夠節(jié)約成本、減少能耗，提高提取效率。
[0026]2、本發(fā)明在原料處理上，采取超聲波處理后再酶解，能很好地保持多糖蛋白的性狀，而現(xiàn)有技術(shù)采用長時(shí)間高溫加熱處理，造成原料膠化、多糖蛋白的變性。
[0027]3、使用雙酶分解海帶多糖，先采用超聲波處理后，再加入復(fù)合酶時(shí)便能對海帶多糖蛋白進(jìn)行徹底酶解，無需進(jìn)行原料的超微粉碎及納米粉碎，同時(shí)，本發(fā)明中，酶解脫色后的濾渣再次進(jìn)行酶解，從而節(jié)約成本和有效保證產(chǎn)品的色澤。
[0028]4、采用醋酸鉀進(jìn)行除蛋白，安全性高且易回收再利用，去除蛋白率高反應(yīng)條件易控制，避免了傳統(tǒng)Sevage法去除蛋白中高毒性有機(jī)溶劑氯仿的使用，也避免了采用雙氧水除蛋自而造成的目標(biāo)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)異構(gòu)化導(dǎo)致海帶多糖含量下降，生產(chǎn)相對較安全，產(chǎn)品含量較聞。
[0029]5、采用冷凍干燥來干燥海帶多糖，得到的產(chǎn)品晶形較好、產(chǎn)品的含量可高達(dá)98.5%以上、色澤好。
【具體實(shí)施方式】
[0030]下面以實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
[0031]實(shí)施例1:
[0032]一種從海帶中提取海帶多糖的方法，包括下述步驟:
[0033]a.原料處理:取新鮮海帶10kg,曬干后,粉碎至40目；
[0034]b.超聲波處理:粉碎后的海帶粉中加入10倍的純凈水，超聲波處理20min，作用溫度80°C，功率為300W，完成后過濾，收集濾液；
[0035]c.酶解:加入漿液重量1.5%的胰蛋白酶，攪拌均勻，45°C酶解lh，調(diào)pH值至3.0，再加入漿液重量2.5%的胃蛋白酶，攪拌均勻，350C酶解3h，然后沸水浴lOmin，過濾，收集濾液；
[0036]d.脫色:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫25min進(jìn)行脫色，抽濾，收集濾液；
[0037]e.除蛋白:向步驟d得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向?yàn)V液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心,5000r/min, IOmin,沉淀進(jìn)行冷凍干燥得海帶多糖2.18kg,海帶多糖含量98.65%。
[0038]實(shí)施例2:
[0039]一種從海帶中提取海帶多糖的方法，包括下述步驟:
[0040]a.原料處理:取曬干后的海帶IOkg,粉碎至60目；
[0041]b.超聲波處理:粉碎后的海帶粉中加入20倍的純凈水，超聲波處理40min，作用溫度70°C，功率為350W，完成后過濾，收集濾液；
[0042]c.酶解:加入漿液重量2.5%的胰蛋白酶，攪拌均勻，35°C酶解3h，調(diào)pH值至5.0，再加入漿液重量1.5%的胃蛋白酶，攪拌均勻，45°C酶解Ih，然后沸水浴20min，過濾，收集濾液；
[0043]d.脫色:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫35min進(jìn)行脫色保溫，抽濾，收集濾液；
[0044]e.除蛋白:向步驟d得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向?yàn)V液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心，5000r/min，15min，沉淀進(jìn)行冷凍干燥得海帶多糖2.02kg，海帶多糖含量98.52%。
[0045]實(shí)施例3:
[0046]一種從海帶中提取海帶多糖的方法，包括下述步驟:
[0047]a.原料處理:取新鮮海帶IOkg,曬干后,粉碎至60目；
[0048]b.超聲波處理:粉碎后的海帶粉中加入15倍的純凈水，超聲波處理30min，作用溫度85°C，功率為200W，完成后過濾，收集濾液；
[0049]c.酶解:加入漿液重量2.0%的胰蛋白酶，攪拌均勻，40°C酶解2h，調(diào)pH值至4.0，再加入漿液重量2.0%的胃蛋白酶，攪拌均勻，400C酶解2h，然后沸水浴15min，過濾，收集濾液；
[0050]d.脫色:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫30min進(jìn)行脫色保溫，抽濾，收集濾液，濾渣返回步驟c再次酶解；
[0051]e.除蛋白:向步驟d得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向?yàn)V液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心，5000r/min，12min，沉淀進(jìn)行冷凍干燥得海帶多糖2.22kg，海帶多糖含量99.11%。
【權(quán)利要求】
1.一種從海帶中提取海帶多糖的方法，包括下述步驟: a.原料處理:將海帶干制后，粉碎； b.超聲波處理:粉碎后的海帶粉中加入10-20倍的純凈水，超聲波處理20-40min，作用溫度70-85°C，功率為200-350W，完成后過濾，收集濾液； c.酶解:加入濾液重量1.5-2.5%的胰蛋白酶，攪拌均勻，35-45°C酶解l_3h，調(diào)pH值至3.0-5.0，再加入濾液重量1.5-2.5%的胃蛋白酶，攪拌均勻，35-45°C酶解l_3h，然后沸水浴10-20min,過濾,收集濾液； d.脫色:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫25-35min進(jìn)行脫色，抽濾，收集濾液； e.除蛋白:向步驟d得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向?yàn)V液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心10-15min,沉淀進(jìn)行冷凍干燥得成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海帶中提取海帶多糖的方法，其特征在于:步驟a中粉碎至40-60目。
3.根據(jù)權(quán)利要 求1所述的從海帶中提取海帶多糖的方法，其特征在于:步驟b中粉碎后的海帶粉中加入15倍純凈水。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海帶中提取海帶多糖的方法，其特征在于:步驟b中超聲波處理時(shí)間30min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海帶中提取海帶多糖的方法，其特征在于:步驟b中超聲波作用溫度80°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海帶中提取海帶多糖的方法，其特征在于:步驟b中超聲波功率300W。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海帶中提取海帶多糖的方法，其特征在于:步驟c中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解溫度為40°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海帶中提取海帶多糖的方法，其特征在于:步驟c中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解時(shí)間為2h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海帶中提取海帶多糖的方法，其特征在于:步驟c中胰蛋白酶或胃蛋白酶的用量為2.0%。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海帶中提取海帶多糖的方法，其特征在于:步驟d中，向步驟C得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，沉淀加入步驟c中，再次酶解。
【文檔編號】C08B37/00GK103936875SQ201410156584
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月18日
【發(fā)明者】歸三岷 申請人:廣西還珠海洋生物科技有限公司