α-4-β-7異二聚體特異性拮抗劑抗體本申請是國際申請日為2010年3月16日的國際申請PCT/US2010/027422進(jìn)入中國、申請?zhí)枮?01080013557.9的題為“α-4-β-7異二聚體特異性拮抗劑抗體”的發(fā)明專利申請的分案申請。相關(guān)申請的交叉引用根據(jù)35U.S.C.119(e)條款，本申請要求保護(hù)2009年3月20日提交的美國專利申請?zhí)?1/162,154和2010年2月22日提交的美國專利申請?zhí)?1/306,829的權(quán)益，所述申請通過引用結(jié)合到本文中。發(fā)明領(lǐng)域本申請?zhí)峁┯嘘P(guān)α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白的組合物和方法。背景整聯(lián)蛋白是異二聚體的I型跨膜蛋白，由兩個亞基(一個是α亞基，一個是β亞基)形成，并且介導(dǎo)許多不同的細(xì)胞-細(xì)胞間和細(xì)胞-胞外基質(zhì)間的相互作用。從功能上看，已證實整聯(lián)蛋白參與多種生物進(jìn)程，包括白細(xì)胞遷移和再循環(huán)以及免疫應(yīng)答。哺乳動物中，有18種已知的α亞基和8種已知的β亞基，其組合形成24種截然不同的整聯(lián)蛋白。配體特異性大多取決于所表達(dá)的α亞基和β亞基的特定組合，而配體的親和力受整聯(lián)蛋白構(gòu)象變化調(diào)節(jié)，并且是二價陽離子依賴性的。整聯(lián)蛋白的配體形成結(jié)構(gòu)上不同的組別，包括胞外基質(zhì)蛋白，例如膠原、纖連蛋白、玻連蛋白和層粘連蛋白；反受體，例如細(xì)胞黏著分子(例如血管細(xì)胞黏著分子或VCAM)和血漿蛋白。許多致病微生物亦利用整聯(lián)蛋白發(fā)起感染或作為毒素結(jié)合的部位。結(jié)構(gòu)上不同的配體共有暴露的谷氨酸或天冬氨酸殘基，通常存在于延伸的柔性環(huán)上，這對于被整聯(lián)蛋白識別是重要的。α4整聯(lián)蛋白(α4與β1或β7亞基搭配)在免疫系統(tǒng)中起重要作用。Α4β1在淋巴細(xì)胞和髓樣細(xì)胞上表達(dá)；它似乎是血管細(xì)胞黏著分子(VCAM)的主要結(jié)合配偶體。VCAM在血管內(nèi)皮上遍在表達(dá)，在炎癥期間增量調(diào)節(jié)，并且結(jié)合α4β7以及α4β1(但與α4β7弱結(jié)合)。雖然在外周T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和嗜伊紅粒細(xì)胞上也檢測到α4β7，但是α4β7在CD4+CD45RA記憶T細(xì)胞亞群中的表達(dá)最高，該亞群已被證實優(yōu)先歸巢至腸中。α4β7異二聚體的主要配體是在腸內(nèi)皮中表達(dá)的黏膜地址素細(xì)胞黏著分子1(MAdCAM-1或MAdCAM)。除了與α4鏈配對外，β7亞基還與αE搭配形成αEβ7，其主要在在腸、肺和生殖泌尿道的上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IEL)中表達(dá)。αEβ7還在腸的樹突細(xì)胞上表達(dá)。αEβ7異二聚體與在上皮細(xì)胞上表達(dá)的E-鈣黏著蛋白結(jié)合。一般認(rèn)為IEL細(xì)胞在上皮區(qū)室內(nèi)提供免疫監(jiān)視機(jī)制。結(jié)合α4并抑制α4β1與VCAM-1和纖連蛋白結(jié)合的抗體定位在介于殘基152和203之間的α4的52個氨基酸區(qū)域(Schiffer等,J.Biol.Chem.270:14270；1995)。Tidswell等人(J.Immuno159:1497；1997)在小鼠/人嵌合β7亞基方法中，利用一組結(jié)合β7的抗體，鑒定出對與MAdCAM-1結(jié)合重要的β7結(jié)構(gòu)域。他們發(fā)現(xiàn)抑制與MAdCAM-1和E-鈣黏著蛋白結(jié)合的7種抗體中，有6種定位在包含氨基酸176-250的區(qū)域中，該區(qū)域似乎與其它整聯(lián)蛋白亞基的金屬離子依賴性黏著位點(diǎn)(metal-iondependentadhesionsite,MIDAS)具有同源性。Tidswell等人使用的抗體之一是稱為ACT-1的α4β7異二聚體特異性抗體。Lazarovitz等人(J.Immunol.133:1857；1984)最初將ACT-1抗體描述為用得自PBMC的人破傷風(fēng)類毒素特異性T淋巴細(xì)胞系給小鼠免疫接種而產(chǎn)生的抗體。后來，研究表明ACT-1與α4β7異二聚體特異性結(jié)合(Schweighoffer等，J.Immunol.151:717，1993)。雖然ACT-1不結(jié)合鼠α4β7，但卻結(jié)合來源于最少一些非人類靈長類動物物種的α4β7，而且研究表明在關(guān)養(yǎng)的裸面犭胥中減輕自發(fā)性結(jié)腸炎(Hesterberg等，Gastroenterology111:1373；1996)。已將ACT-1人源化，并對在潰瘍性結(jié)腸炎(Feagan等，NEnglJMed.352:2499；2005)以及最近在克羅恩病(Crohn’sdisease)(Feagan等，ClinicalGastroenterologyandHepatology6:1370，2008)中作為人用治療藥進(jìn)行了評價。人源化ACT-1，亦稱為vedolizumab，披露于WO98/06248和美國專利7,147,85以及WO07/061679和US2007-0122404。另一種人源化抗體即那他珠單抗(Tysabri?)已被用于治療克羅恩病。那他珠單抗是α4特異性鼠抗體的人源化形式。已經(jīng)證實在部分患者中Vedolizumab中和抗人源化抗體應(yīng)答，而那他珠單抗與進(jìn)行性多灶性白質(zhì)腦病(PML)有關(guān)，PML是一種在無免疫應(yīng)答的個體中與用JC病毒感染前的再活化有關(guān)的神經(jīng)障礙。因此，需要改正這些缺點(diǎn)同時破壞α4β7/MAdCAM-1途徑的治療藥物。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供與人α4β7特異性結(jié)合的分離的抗原結(jié)合蛋白(即α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白)。在本發(fā)明的另一個方面，抗原結(jié)合蛋白與以下動物的α4β7特異性結(jié)合：非人類靈長類動物、食蟹猴(cynomologousmonkey)、黑猩猩、非靈長類哺乳動物、嚙齒動物、小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、貓或狗。在另一個實施方案中，分離的抗原結(jié)合蛋白包括以下抗體：人抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、重組抗體、抗原結(jié)合抗體片段、單鏈抗體、雙鏈抗體(diabody)、三鏈抗體(triabody)、四鏈抗體(tetrabody)、Fab片段、F(ab’)2片段、結(jié)構(gòu)域抗體、IgD抗體、IgE抗體、IgM抗體、IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體、IgG4抗體或在鉸鏈區(qū)具有降低形成H鏈內(nèi)二硫鍵的趨勢的至少一個突變的IgG4抗體。另一方面，分離的抗原結(jié)合蛋白包含前述抗體之一的重鏈恒定區(qū)；另一方面，恒定區(qū)是包含SEQIDNO:72的多肽；與SEQIDNO:72有至少90%同一性的多肽；具有其中剔除了1、2、3、4或5個N端和/或C端氨基酸的SEQIDNO:72所示氨基酸序列的多肽；或者加入一種或多種翻譯后修飾的前述多肽之一。在一個實施方案中，分離的抗原結(jié)合蛋白包含κ輕鏈恒定區(qū)，在另一個實施方案中，它包含λ輕鏈區(qū)。在一個實施方案中，輕鏈恒定區(qū)是包含SEQIDNO:70的多肽；與SEQIDNO:70有至少90%同一性的多肽；具有其中剔除了1、2、3、4或5個N端和/或C端氨基酸的SEQIDNO:70所示氨基酸序列的多肽；或加入一種或多種翻譯后修飾的前述多肽之一。本發(fā)明的一個實施方案提供具有重鏈和輕鏈的α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，每條重鏈和輕鏈都包含一個或多個互補(bǔ)決定區(qū)，即CDR。在本發(fā)明的另一個方面，重鏈可變區(qū)包含CDR1、CDR2和CDR3，而輕鏈可變區(qū)包含CDR1、CDR2和CDR3，其中各個相應(yīng)CDR選自SEQIDNO:55的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:58的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:56的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:59的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；以及SEQIDNO:57的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:60的重鏈CDR1、CDR2和CDR3。在本發(fā)明的另一個方面，重鏈可變區(qū)還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(qū)(FR)，輕鏈可變區(qū)還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(qū)(FR)。一方面，F(xiàn)R選自與CDR相同的SEQIDNO；另一方面，F(xiàn)R選自不同的SEQIDNO。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，其中輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:55，重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:58；輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:56，重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:59；或者輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:57，重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:60。在本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明提供具有重鏈和輕鏈的分離的α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，每條重鏈和輕鏈都包含一個或多個互補(bǔ)決定區(qū)，即CDR。在本發(fā)明的另一個方面，重鏈可變區(qū)包含CDR1、CDR2和CDR3，輕鏈可變區(qū)包含CDR1、CDR2和CDR3。在一個實施方案中，輕鏈CDR選自分別與SEQIDNO:3的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3；分別與SEQIDNO:5的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3；分別與SEQIDNO:7的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3；分別與SEQIDNO:22的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3；分別與SEQIDNO:24的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3；并且重鏈可變CDR1、CDR2和CDR3來自SEQIDNO:58。在本發(fā)明的另一個方面，重鏈可變區(qū)還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(qū)(FR)，輕鏈可變區(qū)還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(qū)(FR)。一方面，F(xiàn)R選自與CDR相同的SEQIDNO；另一方面，F(xiàn)R選自不同的SEQIDNO。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，其中輕鏈可變區(qū)選自與SEQIDNO:3有至少90%同一性的輕鏈可變區(qū)、與SEQIDNO:5有至少90%同一性的輕鏈可變區(qū)、與SEQIDNO:7有至少90%同一性的輕鏈可變區(qū)、與SEQIDNO:22有至少90%同一性的輕鏈可變區(qū)以及與SEQIDNO:24有至少90%同一性的輕鏈可變區(qū)；并且重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:58。本發(fā)明的另一個方面提供分離的α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，其具有包含CDR1、CDR2和CDR3的重鏈可變區(qū)及包含CDR1、CDR2和CDR3的輕鏈可變區(qū)，其中輕鏈CDR1、CDR2和CDR3選自分別與SEQIDNO:12的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3；分別與SEQIDNO:25的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3；以及分別與SEQIDNO:26的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3；而且重鏈CDR1、CDR2和CDR3選自分別與SEQIDNO:41的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3；以及分別與SEQIDNO:54的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDR1、CDR2和CDR3。在一個實施方案中，輕鏈可變區(qū)選自與SEQIDNO:12、25和26中的任一個有至少90%同一性的可變區(qū)，重鏈可變區(qū)選自與SEQIDNO:41和54中的任一個有至少90%同一性的可變區(qū)。在本發(fā)明的另一個方面，重鏈可變區(qū)還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(qū)(FR)，輕鏈可變區(qū)還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(qū)(FR)。一方面，F(xiàn)R選自與CDR相同的SEQIDNO；另一方面，F(xiàn)R選自不同的SEQIDNO。在一個實施方案中，本發(fā)明提供分離的α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，其具有包含CDR1、CDR2和CDR3的重鏈可變區(qū)及包含CDR1、CDR2和CDR3的輕鏈可變區(qū)，其中各個相應(yīng)的CDR與選自以下的CDR有至少90%同一性：SEQIDNO:10的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:38的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:2的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:30的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:20的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:51的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:11的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:39的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:13的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:42的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:17的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:46的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:8的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:36的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:19的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:49的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:18的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:47的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:21的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:52的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:3的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:31的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:7的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:35的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:6的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:34的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:1的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:29的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:22的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:50的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:24的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:40的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:9的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:37的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:4的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:32的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:28的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:53的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:16的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:45的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:15的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:44的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:14的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:43的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:27的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:43的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:5的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:33的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:12的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:41的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:23的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:48的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；SEQIDNO:25的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:54的重鏈CDR1、CDR2和CDR3；以及SEQIDNO:26的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及SEQIDNO:54的重鏈CDR1、CDR2和CDR3。另一方面，重鏈和輕鏈CDR與所述SEQIDNO相應(yīng)的CDR相同。在本發(fā)明的一個實施方案中，重鏈可變區(qū)還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(qū)(FR)，輕鏈可變區(qū)還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(qū)(FR)。一方面，F(xiàn)R選自與CDR相同的SEQIDNO；另一方面，F(xiàn)R選自不同的SEQIDNO。在另一個實施方案中，α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，其中輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:10有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:38有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:2有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:30有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:20有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:51有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:11有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:39有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:13有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:42有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:17有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:46有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:8有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:36有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:19有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:49有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:18有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:47有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:21有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:52有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:3有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:31有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:7有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:35有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:6有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:34有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:1有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:29有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:22有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:50有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:24有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:40有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:9有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:37有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:4有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:32有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:28有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:53有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:16有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:45有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:15有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:44有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:14有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:43有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:27有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:43有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:5有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:33有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:12有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:41有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:23有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:48有至少90%同一性；輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:25有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:54有至少90%同一性；或者輕鏈可變區(qū)與SEQIDNO:26有至少90%同一性，重鏈可變區(qū)與SEQIDNO:54有至少90%同一性。另一方面，重鏈和輕鏈可變區(qū)與所述SEQIDNO的相應(yīng)可變區(qū)相同。本發(fā)明的一個方面提供分離的α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，其在CD4+記憶T細(xì)胞結(jié)合測定法中具有小于35ng/ml的EC50；另一個方面提供分離的α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，其在CD4+記憶T細(xì)胞結(jié)合測定法中具有小于10ng/ml的EC50。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供分離的α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，其在MAdCAM競爭測定法中具有小于30ng/m的IC50；在另一個實施方案中提供分離的α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，其在MAdCAM競爭測定法中具有小于10ng/ml的IC50。本發(fā)明的一個方面提供分離的α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白，其結(jié)合α4β7的S250N突變體。在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供編碼上述多肽的核酸。在本發(fā)明的另一個方面，所述核酸為載體。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明提供用本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。在本發(fā)明的另一個方面，提供制備多肽的方法，所述方法包括在促進(jìn)多肽表達(dá)的條件下培育宿主細(xì)胞，并收獲所述多肽。另一方面，本發(fā)明提供分泌結(jié)合α4β7的抗原結(jié)合蛋白的分離細(xì)胞。在另一個實施方案中，所述細(xì)胞是雜交瘤。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供制備特異性結(jié)合α4β7(即人α4β7)的抗原結(jié)合蛋白的方法，所述方法包括在允許表達(dá)所述抗原結(jié)合蛋白的條件下培育所述分離細(xì)胞。一方面，本發(fā)明提供與α4β7異二聚體特異性結(jié)合的分離的抗原結(jié)合蛋白。在另一個實施方案中，分離的抗原結(jié)合蛋白當(dāng)與人α4β7結(jié)合時，抑制α4β7與MAdCAM-1結(jié)合。因此，本發(fā)明的一個實施方案提供抑制α4β7的至少一種活性的方法，所述方法包括使表達(dá)α4β7的細(xì)胞與α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白接觸，使得活性被部分或全部抑制。一方面，這種方法在體內(nèi)進(jìn)行。在本發(fā)明的一個方面，分離的抗原結(jié)合蛋白抑制表達(dá)α4β7的細(xì)胞與表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞粘附。在本發(fā)明的又一個方面，分離的抗原結(jié)合蛋白抑制表達(dá)α4β7的細(xì)胞運(yùn)輸至表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞所定居的區(qū)域或組織中；在這類實施方案的一個實例中，分離的抗原結(jié)合蛋白抑制淋巴細(xì)胞運(yùn)輸至腸中。另一方面，本發(fā)明提供包含抗原結(jié)合蛋白的藥物組合物。在一個實施方案中，本發(fā)明提供治療受試者的病況的方法，所述方法包括將藥物組合物給予受試者，其中可通過降低受試者的α4β7活性(部分或全部)治療所述病況。在另一個實施方案中，受試者是人類。在另一個實施方案中，所述病況是胃腸系統(tǒng)的炎性疾病。因此，提供治療患有以下病況的個體的方法，所述病況的特征在于表達(dá)α4β7的細(xì)胞不恰當(dāng)?shù)剡\(yùn)輸?shù)桨磉_(dá)MAdCAM的細(xì)胞的組織中，所述方法包括以足以抑制(部分或全部)表達(dá)α4β7的細(xì)胞運(yùn)輸?shù)桨磉_(dá)MAdCAM的細(xì)胞的組織中的量，將α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白給予所述個體。在一個實施方案中，所述病況是炎性腸病，例如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、乳糜瀉(非熱帶性口炎性腹瀉)、腸病伴發(fā)血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、顯微鏡下結(jié)腸炎(microscopiccolitis)或膠原性結(jié)腸炎、嗜酸性胃腸炎或直腸與結(jié)腸切除術(shù)和回腸肛管吻合術(shù)后所致的回腸囊袋炎(pouchitis)。在另一個實施方案中，所述病況是胰腺炎、胰島素依賴性糖尿病、乳腺炎、膽囊炎、膽管炎、膽管周圍炎、慢性支氣管炎、慢性鼻竇炎、哮喘或移植物抗宿主病。在另一個實施方案中，所述方法還包括給予受試者第二種治療。在另一個實施方案中，在將藥物組合物給予受試者之前和/或與之同時和/或之后給予受試者第二種治療。在另一個實施方案中，第二種治療包括抗炎藥。在另一個實施方案中，第二藥物組合物包含選自非甾體抗炎藥、類固醇和免疫調(diào)節(jié)劑的物質(zhì)。在另一個實施方案中，所述方法包括給予受試者第三種治療。另一方面，本發(fā)明提供延長受試者壽命的方法，所述方法包括將藥物組合物給予受試者。另一方面，本發(fā)明提供在有需要的受試者中降低α4β7活性的方法，所述方法包括將藥物組合物給予受試者。另一方面，本發(fā)明提供在有需要的受試者中降低α4β7介導(dǎo)的運(yùn)輸(例如α4β7介導(dǎo)的腸歸巢)的方法，所述方法包括將藥物組合物給予受試者。發(fā)明詳述本發(fā)明提供涉及結(jié)合整聯(lián)蛋白α4β7(“α4β7”)的分子的組合物、藥盒和方法，所述分子包括激動或拮抗α4β7的分子，例如抗α4β7抗體、抗體片段和抗體衍生物，例如拮抗性抗α4β7抗體、抗體片段或抗體衍生物。還提供核酸及其衍生物和片段，其包含編碼與α4β7結(jié)合的多肽的全部或部分的核苷酸序列，例如編碼抗α4β7抗體、抗體片段或抗體衍生物的全部或部分的核酸、包含這類核酸的質(zhì)粒和載體以及包含這類核酸和/或載體和質(zhì)粒的細(xì)胞或細(xì)胞系。所提供的方法包括例如制備、鑒定或分離與α4β7結(jié)合的分子(例如抗α4β7抗體)的方法、確定分子是否與α4β7結(jié)合的方法、確定分子是否刺激或拮抗α4β7的方法、制備包含與α4β7結(jié)合的分子的組合物(例如藥物組合物)的方法以及將與α4β7結(jié)合的分子給予受試者的方法，例如用于治療α4β7介導(dǎo)的病況的方法，以及用于體內(nèi)或體外刺激或拮抗α4β7的生物活性的方法。多核苷酸和多肽序列使用標(biāo)準(zhǔn)一字母或三字母縮寫詞表示。除非另有說明，否則每個多肽序列在左邊具有氨基端，在右邊具有羧基端；各單鏈核酸序列和每個雙鏈核酸序列的上鏈在左邊具有5’端，在右邊具有3’端。還可通過解釋多肽或多核苷酸序列如何不同于參比序列來描述具體的多肽或多核苷酸序列。除非本文另外定義，否則與本發(fā)明聯(lián)用的科技術(shù)語應(yīng)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。此外，除非文中另有要求，否則單數(shù)術(shù)語應(yīng)包括復(fù)數(shù)，而復(fù)數(shù)術(shù)語應(yīng)包括單數(shù)。一般地講，所使用的與本文所描述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)及蛋白質(zhì)與核酸化學(xué)和雜交有關(guān)的命名以及關(guān)聯(lián)技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知和通用的。通常按照本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)方法以及如本說明書全文所引用和討論的各種一般性的和更為具體的參考文獻(xiàn)所述實施本發(fā)明的方法和技術(shù)，除非另有說明。參見例如Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual，第2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，N.Y.(1989)和Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssociates(1992)，以及Harlow和LaneAntibodies:ALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1990)，所述文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中。按照生產(chǎn)商的說明書、按照本領(lǐng)域常規(guī)實施方法或按照本文所述方法進(jìn)行酶促反應(yīng)和純化技術(shù)。所使用的與本文描述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和醫(yī)學(xué)與藥物化學(xué)有關(guān)的術(shù)語以及關(guān)聯(lián)實驗室規(guī)程和技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知和通用的。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、制劑和遞藥以及患者治療。除非另有說明，否則下列術(shù)語應(yīng)理解為具有以下含義：術(shù)語“分離的分子”(其中所述分子為例如多肽、多核苷酸或抗體)是以下分子，根據(jù)其起源或衍生源，其(1)不與在其天然狀態(tài)與之相伴的天然締合的組分締合，(2)基本不含來自同一物種的其它分子，(3)由不同物種的細(xì)胞表達(dá)，或(4)實質(zhì)上無人干預(yù)時不會出現(xiàn)。因此，化學(xué)合成的分子，或在與其天然起源細(xì)胞不同的細(xì)胞系統(tǒng)中合成的分子，為與其天然締合的組分“分離的”。還可采用本領(lǐng)域眾所周知的純化技術(shù)，通過分離使分子基本上不含天然締合的組分。可通過本領(lǐng)域眾所周知的多種方法測定分子純度或均質(zhì)性。例如，可采用聚丙烯酰胺凝膠電泳并采用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)使凝膠染色以呈現(xiàn)多肽，來測定多肽樣品的純度。出于某些目的，可通過采用HPLC或本領(lǐng)域眾所周知的其它純化方法來提供更高的分辨率。術(shù)語“α4β7抑制劑”和“α4β7拮抗劑”可互換使用。各為可檢測地抑制α4β7的至少一種功能的分子。相反地，“α4β7激動劑”是可檢測地增強(qiáng)α4β7的至少一種功能的分子。由α4β7抑制劑引起的抑制不必是完全的，只要通過例如采用測定法可檢出即可。可采用α4β7功能的任何測定法，本文提供了有關(guān)實例?？杀沪?β7抑制劑抑制(或被α4β7激動劑增強(qiáng))的α4β7的功能的實例包括配體結(jié)合(即與MAdCAM-1結(jié)合)、與表達(dá)配體的細(xì)胞粘附、運(yùn)輸至特定區(qū)室(例如腸)、細(xì)胞因子、趨化因子和其它介質(zhì)的釋放、炎癥反應(yīng)和組織損傷加重或惡化等。α4β7抑制劑和α4β7激動劑的類型的實例包括但不限于α4β7結(jié)合多肽，例如抗原結(jié)合蛋白(例如α4β7抗原結(jié)合蛋白)、抗體、抗體片段和抗體衍生物。術(shù)語“肽”、“多肽”和“蛋白質(zhì)”分別是指包含通過肽鍵彼此連接的兩個或更多個氨基酸殘基的分子。這些術(shù)語包括例如天然和人工蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)序列的蛋白質(zhì)片段和多肽類似物(例如突變蛋白、變體和融合蛋白)以及翻譯后修飾的蛋白質(zhì)或者其它共價或非共價修飾的蛋白質(zhì)。肽、多肽或蛋白質(zhì)可以是單體的或是多聚體的。本文使用的術(shù)語“多肽片段”是指與相應(yīng)的全長蛋白質(zhì)相比，具有氨基端和/或羧基端缺失的多肽。片段的長度可為例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、90、100、150或200個氨基酸。片段的長度也可為例如至多1,000、750、500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11或10個氨基酸。片段還可由蛋白酶水解(或其它)加工產(chǎn)生，所述加工例如導(dǎo)致在1-5個氨基酸的氨基端和/或羧基端方面偏離所預(yù)測的。片段還可在其末端的任一端或兩端包含一個或多個其它氨基酸，例如得自不同的天然存在的蛋白質(zhì)(例如Fc或亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域)或人工氨基酸序列(例如人工接頭序列或標(biāo)簽蛋白)的氨基酸序列。本發(fā)明的多肽包括以任何方式和出于以下任何理由被修飾的多肽，例如以：(1)降低對蛋白酶解的敏感性，(2)降低對氧化的敏感性，(3)改變對形成蛋白質(zhì)復(fù)合體的結(jié)合親和力，(4)改變結(jié)合親和力，和(4)提供或改變其它物理化學(xué)性質(zhì)或功能性質(zhì)。類似物包括多肽的突變蛋白。例如，可以在天然存在的序列上進(jìn)行單個或多個氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)(例如在一個或多個形成分子間接觸的結(jié)構(gòu)域外的多肽部分上)。可以使用共有序列選擇用于取代的氨基酸殘基；本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)可的是，還可取代其它氨基酸殘基?！氨Ｊ匕被崛〈笔腔旧喜桓淖冇H本序列的結(jié)構(gòu)特征的取代(例如置換氨基酸應(yīng)不會破壞親本序列中出現(xiàn)的螺旋，或者破壞作為親本序列特征或者對其功能性必需的其它二級結(jié)構(gòu)類型)。公認(rèn)的多肽二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)的實例可參見Proteins,StructuresandMolecularPrinciples(Creighton編著,W.H.FreemanandCompany,NewYork(1984))；IntroductiontoProteinStructure(C.Branden和J.Tooze編著,GarlandPublishing,NewYork,N.Y.(1991))；以及Thornton等，Nature354:105(1991)，所述文獻(xiàn)各自通過引用結(jié)合到本文中。本發(fā)明還提供α4β7結(jié)合多肽的非肽類似物。作為具有與模板肽類似的特性的藥物，非肽類似物常用于制藥工業(yè)。非肽化合物的這些類型稱為“肽模擬物”或“模擬肽(peptidomimetics)”，參見例如Fauchere,J.Adv.DrugRes.15:29(1986)；Veber和FreidingerTINS第392頁(1985)；以及Evans等,J.Med.Chem.30:1229(1987)，所述文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中?？墒褂迷诮Y(jié)構(gòu)上類似于治療上有益的肽的肽模擬物以產(chǎn)生等同的治療或預(yù)防效果?？偟膩碇v，模擬肽在結(jié)構(gòu)上類似于范例多肽(即具有所需要的生化性質(zhì)或藥理活性的多肽)，例如人抗體，但卻具有一個或多個通過本領(lǐng)域眾所周知的方法用選自以下的鍵任選置換的肽鍵：--CH2NH--、--CH2S--、--CH2--CH2--、--CH=CH-(順式和反式)、--COCH2--、--CH(OH)CH2--和--CH2SO--。用相同類型的D-氨基酸對共有序列的一個或多個氨基酸的系統(tǒng)取代(例如D-賴氨酸替換L-賴氨酸)也可用來產(chǎn)生更穩(wěn)定的肽。另外，可通過本領(lǐng)域已知的方法產(chǎn)生包含共有序列或基本相同的共有序列變化的約束肽(Rizo和GieraschAnn.Rev.Biochem.61:387(1992)，通過引用結(jié)合到本文中)，例如通過加入能夠形成使肽環(huán)化的分子內(nèi)二硫鍵的內(nèi)部半胱氨酸殘基。多肽(例如抗體)的“變體”包含這樣的氨基酸序列，其中與另一個多肽序列相比，一個或多個氨基酸殘基插入、從中缺失和/或取代入所述氨基酸序列。本發(fā)明的變體包括融合蛋白。多肽的“衍生物”是例如通過與另一個化學(xué)部分(例如聚乙二醇或白蛋白，例如人血清白蛋白)綴合、磷酸化和/或糖基化而被化學(xué)修飾的多肽(例如抗體)。除非另有說明，否則術(shù)語“抗體”除包含2條全長重鏈和2條全長輕鏈的抗體外，還包括其衍生物、變體、片段和突變蛋白，下面描述了有關(guān)實例?！翱乖Y(jié)合蛋白”是包含與抗原結(jié)合的部分和任選支架或框架部分的蛋白質(zhì)，所述支架或框架部分允許抗原結(jié)合部分呈促進(jìn)抗原結(jié)合蛋白與抗原結(jié)合的構(gòu)象?？乖Y(jié)合蛋白的實例包括抗體、抗體片段(例如抗體的抗原結(jié)合部分)、抗體衍生物和抗體類似物?？乖Y(jié)合蛋白可包含例如具有移植CDR或CDR衍生物的備選蛋白質(zhì)支架或人工支架。這類支架包括但不限于抗體衍生的支架，其包含引入以例如穩(wěn)定抗原結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)的突變以及包含例如生物相容性聚合物的完全合成支架。參見例如Korndorfer等，2003，Proteins:Structure,Function,andBioinformatics,第53卷，第1期:121-129；Roque等，2004,Biotechnol.Prog.20:639-654。另外，可以使用肽抗體模擬物(“PAM”)，以及以利用纖連蛋白組分作為支架的抗體模擬物為基礎(chǔ)的支架?？乖Y(jié)合蛋白可具有例如天然存在的免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)。“免疫球蛋白”是四聚體分子。在天然存在的免疫球蛋白中，各種四聚體由兩個相同的多肽鏈對組成，每對具有一條“輕”鏈(約25kDa)和一條“重”鏈(約50-70kDa)。每條鏈的氨基端部分包括約100-110個或更多個氨基酸的可變區(qū)，主要負(fù)責(zé)抗原識別。每條鏈的羧基端部分界定了主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。人輕鏈分為κ或λ輕鏈。重鏈分為μ、δ、γ、α或ε，并將抗體同種型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內(nèi)，可變區(qū)和恒定區(qū)通過約12個或更多個氨基酸的“J”區(qū)連接，其中重鏈還包括約10個以上氨基酸的“D”區(qū)。一般參見FundamentalImmunology第7章(Paul,W.主編,第2版.RavenPress,N.Y.(1989))(通過引用以其整體結(jié)合用于所有目的)。每個輕鏈/重鏈對的可變區(qū)形成抗體結(jié)合部位，使得完整的免疫球蛋白具有兩個結(jié)合部位。天然存在的免疫球蛋白鏈的可變區(qū)具有相同的通用結(jié)構(gòu)，其相對保守的框架區(qū)(FR)被3個超變區(qū)(亦稱互補(bǔ)決定區(qū)或CDR)連接。輕鏈和重鏈兩者從N端到C端包含結(jié)構(gòu)域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。各結(jié)構(gòu)域的氨基酸的分配與Kabat等人的定義(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,美國衛(wèi)生與公眾服務(wù)部(USDept.ofHealthandHumanServices),PHS,NIH,NIH出版號：91-3242,1991)一致。免疫球蛋白鏈中氨基酸的其它編號系統(tǒng)包括IMGT?(國際ImMunoGeneTics信息系統(tǒng);Lefranc等,Dev.Comp.Immunol.29:185-203;2005)和AHo(Honegger和Pluckthun,J.Mol.Biol.309(3):657-670;2001)。可從含有具有不同抗原特異性的免疫球蛋白的來源(例如血清或血漿)獲得抗體。如果對這類抗體進(jìn)行親和純化，則它們可富集特定的抗原特異性。通常由小于約10%對具體抗原具有特定結(jié)合活性的抗體制備抗體的這類富集制備物。對這些制備物進(jìn)行若干輪親和純化可提高對抗原具有特異性結(jié)合活性的抗體的比例。按這種方式制備的抗體通常稱為“單特異性的”。單特異性抗體制備物可由約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、99%或99.9%的對具體抗原具有特異性結(jié)合活性的抗體組成?！翱贵w”是指完整免疫球蛋白或其與完整抗體競爭特異性結(jié)合的抗原結(jié)合部分，除非另有說明?？赏ㄟ^重組DNA技術(shù)或者通過酶促切割或化學(xué)裂解完整抗體來產(chǎn)生抗原結(jié)合部分。抗原結(jié)合部分尤其包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)和互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)片段、可變區(qū)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和含有足以賦予多肽特異性抗原結(jié)合的免疫球蛋白的至少一部分的多肽。Fab片段是具有VL、VH、CL和CH1結(jié)構(gòu)域的一價片段；F(ab')2片段是具有在鉸鏈區(qū)通過二硫鍵連接的2個Fab片段的二價片段；Fd片段具有VH和CH1結(jié)構(gòu)域；Fv片段具有抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域；而dAb片段具有VH結(jié)構(gòu)域、VL結(jié)構(gòu)域或者VH或VL結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合片段(美國專利號6,846,634、6,696,245；美國申請公布號05/0202512、04/0202995、04/0038291、04/0009507、03/0039958；Ward等，Nature341:544-546，1989)。單鏈抗體(scFv)是其中VL和VH區(qū)通過接頭(例如氨基酸殘基的合成序列)連接形成連續(xù)的蛋白質(zhì)鏈的抗體，其中接頭足夠長，以允許蛋白質(zhì)鏈在自身上折疊起來并形成一價抗原結(jié)合部位(參見例如Bird等，1988，Science242:423-26以及Huston等，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-83)。雙鏈抗體是包含2條多肽鏈的二價抗體，其中每條多肽鏈包含通過接頭連接的VH和VL結(jié)構(gòu)域，所述接頭太短以至于不允許在同一鏈上的兩個結(jié)構(gòu)域間配對，因而只允許每個結(jié)構(gòu)域與另一多肽鏈上的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(參見例如Holliger等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-48以及Poljak等，1994，Structure2:1121-23)。如果雙鏈抗體的兩條多肽鏈相同，則由其配對產(chǎn)生的雙鏈抗體會具有兩個相同的抗原結(jié)合部位。可使用具有不同序列的多肽鏈來制備具有兩個不同抗原結(jié)合部位的雙鏈抗體。同樣，三鏈抗體和四鏈抗體是分別包含3條和4條多肽鏈的抗體，分別形成3個和4個可以是相同或不同的抗原結(jié)合部位。可采用Kabat等人(同上)、Lefranc等人(同上)和/或Honegger和Pluckthun(同上)描述的系統(tǒng)鑒定給定抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)和框架區(qū)(FR)?？蓪⒁粋€或多個CDR共價或非共價地加入分子中使之成為抗原結(jié)合蛋白。抗原結(jié)合蛋白可加入一個或多個CDR作為較長的多肽鏈的部分，可使一個或多個CDR與另一條多肽鏈共價連接，或者可非共價地加入一個或多個CDR。CDR允許抗原結(jié)合蛋白與特定的目標(biāo)抗原特異性結(jié)合?？乖Y(jié)合蛋白可具有一個或多個結(jié)合部位。如果有超過一個結(jié)合部位，則結(jié)合部位彼此可相同或不同。例如，天然存在的人免疫球蛋白通常具有2個相同的結(jié)合部位，而“雙特異性”或“雙功能”抗體則具有2個不同的結(jié)合部位。術(shù)語“人抗體”包括具有一個或多個來源于人免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的所有抗體。在一個實施方案中，所有的可變結(jié)構(gòu)域和恒定結(jié)構(gòu)域都來源于人免疫球蛋白序列(完全人抗體)?？梢远喾N方法制備這些抗體，下面描述這些方法的實例，包括用目標(biāo)抗原給小鼠免疫接種，該小鼠經(jīng)遺傳修飾成表達(dá)來源于人重鏈和/或輕鏈編碼基因的抗體。人源化抗體具有因一個或多個氨基酸取代、缺失和/或添加而不同于來源于非人類物種的抗體序列的序列，使得將其給予人受試者時，與非人類物種抗體相比，人源化抗體較小可能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，和/或誘導(dǎo)較不嚴(yán)重的免疫應(yīng)答。在一個實施方案中，使非人類物種抗體重鏈和/或輕鏈框架和恒定結(jié)構(gòu)域的某些氨基酸突變以產(chǎn)生人源化抗體。在另一個實施方案中，使得自人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域與非人類物種的可變結(jié)構(gòu)域融合。在另一個實施方案中，改變非人類抗體的一個或多個CDR序列中的一個或多個氨基酸殘基，以在將其給予人受試者時降低非人類抗體可能的免疫原性，其中改變的氨基酸殘基對于抗體與其抗原的免疫特異性結(jié)合不是關(guān)鍵的，或者所進(jìn)行的氨基酸序列的改變是保守改變，使得人源化抗體與抗原的結(jié)合不比非人類抗體與抗原的結(jié)合明顯更差。如果制備人源化抗體的實例可參見美國專利號6,054,297、5,886,152和5,877,293。術(shù)語“嵌合抗體”是指含有來自一種抗體的一個或多個區(qū)和來自一種或多種其它抗體的一個或多個區(qū)的抗體。在一個實施方案中，一個或多個CDR來源于人抗α4β7抗體。在另一個實施方案中，所有CDR都來源于人抗α4β7抗體。在另一個實施方案中，將得自不止一種人抗α4β7抗體的CDR混合并匹配于嵌合抗體中。例如，嵌合抗體可包含第一人抗α4β7抗體輕鏈的CDR1、第二人抗α4β7抗體輕鏈的CDR2和CDR3和第三抗α4β7抗體重鏈的CDR。其它組合是可行的，也包括本發(fā)明的實施方案中。此外，框架區(qū)可來源于一種相同的抗α4β7抗體、來源于一種或多種不同的抗體(例如人抗體)，或來源于人源化抗體。在嵌合抗體的一個實例中，重鏈和/或輕鏈的一部分與特定物種的抗體或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體相同、同源或者來源于所述抗體，而鏈的剩余部分與另一種物種的抗體或?qū)儆诹硪环N抗體類別或亞類的抗體相同、同源或者來源于所述抗體。還包括具有所需生物活性(即特異性結(jié)合α4β7的能力)的這類抗體的片段。參見例如美國專利號4,816,567和Morrison，1985，Science229:1202-07?！爸泻涂贵w”或“抑制抗體”是抑制α4β7與MAdCAM-1相互作用的抗體，當(dāng)采用某種測定法(例如本文實施例中描述的測定法)測定時，過量的抗α4β7抗體降低相互作用的量達(dá)至少約20%。在不同的實施方案中，抗原結(jié)合蛋白降低α4β7與MAdCAM-1α4β7的相互作用達(dá)至少30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、99%和99.9%。按照本說明書的教導(dǎo)以及采用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可容易地制備抗體的片段或類似物。片段或類似物的氨基端和羧基端出現(xiàn)在功能結(jié)構(gòu)域的邊界附近。可通過將核苷酸和/或氨基酸序列數(shù)據(jù)與公共或?qū)Ｓ行蛄袛?shù)據(jù)庫進(jìn)行比較來鑒定結(jié)構(gòu)和功能結(jié)構(gòu)域?？蓱?yīng)用計算機(jī)化比較方法鑒定存在于已知結(jié)構(gòu)和/或功能的其它蛋白質(zhì)中的序列基序或預(yù)測的蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)域。鑒定折疊成已知三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)序列的方法是已知的。參見例如Bowie等，1991，Science253:164?！癈DR移植抗體”是包含一個或多個來源于特定物種或同種型的抗體的CDR和相同或不同物種或同種型的另一抗體框架的抗體?！岸嗵禺愋钥贵w”是識別一種或多種抗原上多于一個的表位的抗體。該抗體類型的亞類是“雙特異性抗體”，該抗體識別相同或不同抗原上的2個截然不同的表位。如果抗原結(jié)合蛋白與抗原結(jié)合的解離常數(shù)為1納摩爾或更少，則抗原結(jié)合蛋白與抗原(例如人α4β7)“特異性結(jié)合”。如本文中所用，如果抗原結(jié)合蛋白結(jié)合第一異二聚體整聯(lián)蛋白但不結(jié)合與第一整聯(lián)蛋白具有共同的一條鏈的其它整聯(lián)蛋白，則所述抗原結(jié)合蛋白是“異二聚體特異性的”。例如，α4β7異二聚體特異性的抗體可結(jié)合α4β7但不結(jié)合α4β1或αEβ7。已知整聯(lián)蛋白呈不同構(gòu)象，這取決于表達(dá)整聯(lián)蛋白的細(xì)胞的活化狀態(tài)和某些金屬離子存在與否。呈“活性”構(gòu)象的整聯(lián)蛋白以比呈“無活性”構(gòu)象的同一整聯(lián)蛋白高的親和力結(jié)合其同源配體?？乖Y(jié)合蛋白可與呈僅其活性構(gòu)象、呈僅其無活性構(gòu)象或者呈兩種構(gòu)象或任一種構(gòu)象的整聯(lián)蛋白結(jié)合。例如，α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白可在存在或缺乏二價陽離子錳2+(Mn2+)時結(jié)合α4β7，這就表明了抗原結(jié)合蛋白既結(jié)合活性的α4β7又結(jié)合無活性的α4β7?！翱乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域”、“抗原結(jié)合區(qū)”或“抗原結(jié)合部位”是含有與抗原相互作用并有利于抗原結(jié)合蛋白對抗原的特異性和親和力的氨基酸殘基(或其它部分)的抗原結(jié)合蛋白的一部分。對于與其抗原特異性結(jié)合的抗體，這可包括至少一個其CDR結(jié)構(gòu)域的至少部分?！氨砦弧笔潜豢乖Y(jié)合蛋白(例如被抗體)結(jié)合的分子的部分。表位可包含分子的非鄰接部分(例如多肽中，在多肽的一級序列中不鄰接，但在多肽的三級和四級結(jié)構(gòu)的情況下彼此足夠靠近以被抗原結(jié)合蛋白結(jié)合的氨基酸殘基)。應(yīng)用GAP計算機(jī)程序(GCGWisconsin軟件包，10.3版的一部分(Accelrys，SanDiego，CA))，采用其默認(rèn)參數(shù)，通過比較序列來確定2個多核苷酸序列或2個多肽序列的“百分比同一性”。術(shù)語“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸”始終可互換使用，其包括DNA分子(例如cDNA或基因組DNA)、RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸類似物(例如肽核酸和非天然存在的核苷酸類似物)產(chǎn)生的DNA或RNA的類似物，及其雜合體。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的。在一個實施方案中，本發(fā)明的核酸分子包含編碼本發(fā)明的抗體或其片段、衍生物、突變蛋白或變體的連續(xù)可讀框。如果2個單鏈多核苷酸的序列可以反平行方向排列使得一個多核苷酸中的每個核苷酸與另一個多核苷酸的互補(bǔ)核苷酸相對，而又不引入空位，而且在任一序列的5’端或3’端又無未配對核苷酸，則2個單鏈多核苷酸的序列彼此是“互補(bǔ)序列”。如果兩個多核苷酸在中等嚴(yán)格條件下可彼此雜交，則一個多核苷酸與另一多核苷酸“互補(bǔ)”。因此，多核苷酸可與另一多核苷酸互補(bǔ)而又不是其互補(bǔ)序列?！拜d體”是可用來將與之連接的另一種核酸導(dǎo)入細(xì)胞的核酸。載體的一種類型是“質(zhì)?！?，它是指其中可連接其它核酸區(qū)段的線性或環(huán)狀雙鏈DNA分子。載體的另一種類型是病毒載體(例如復(fù)制缺陷型反轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺伴隨病毒)，其中可將其它的DNA區(qū)段引入病毒基因組。某些載體能夠在其導(dǎo)入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(例如包含細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和附加型哺乳動物載體)。其它載體(例如非附加型哺乳動物載體)在導(dǎo)入宿主細(xì)胞時整合到宿主細(xì)胞的基因組，從而與宿主基因組一起復(fù)制?！氨磉_(dá)載體”是可指導(dǎo)選定多核苷酸表達(dá)的載體類型。如果調(diào)節(jié)序列影響核苷酸序列的表達(dá)(例如表達(dá)的水平、時機(jī)或位置)，則該核苷酸序列與調(diào)節(jié)序列“有效連接”?！罢{(diào)節(jié)序列”是影響與之有效連接的核酸表達(dá)(例如表達(dá)的水平、時機(jī)或位置)的核酸。例如，調(diào)節(jié)序列可直接對所調(diào)節(jié)的核酸發(fā)揮其作用，或者通過一個或多個其它分子(例如與調(diào)節(jié)序列和/或核酸結(jié)合的多肽)的作用發(fā)揮其作用。調(diào)節(jié)序列的實例包括啟動子、增強(qiáng)子和其它表達(dá)調(diào)控元件(例如多腺苷酸化信號)。調(diào)節(jié)序列的更多實例可參見例如Goeddel,1990,GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185,AcademicPress,SanDiego,CA和Baron等,1995,NucleicAcidsRes.23:3605-06。“宿主細(xì)胞”是可用于表達(dá)核酸(例如本發(fā)明的核酸)的細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是原核生物，例如大腸桿菌(E.coli)，或者可以是真核生物，例如單細(xì)胞真核生物(例如酵母或其它真菌)、植物細(xì)胞(例如煙草或番茄植物細(xì)胞)、動物細(xì)胞(例如人細(xì)胞、猴細(xì)胞、倉鼠細(xì)胞、大鼠細(xì)胞、小鼠細(xì)胞或昆蟲細(xì)胞)或雜交瘤。宿主細(xì)胞的實例包括猴腎細(xì)胞COS-7系(ATCCCRL1651)(參見Gluzman等,1981,Cell23:175)、L細(xì)胞、C127細(xì)胞、3T3細(xì)胞(ATCCCCL163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或其衍生物，例如在無血清培養(yǎng)基中生長的VeggieCHO和相關(guān)細(xì)胞系(參見Rasmussen等，1998，Cytotechnology28:31)或在DHFR中為缺陷型的CHO品系DX-B11(參見Urlaub等，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216-20)、HeLa細(xì)胞、BHK(ATCCCRL10)細(xì)胞系、來源于非洲綠猴腎細(xì)胞系CV1(ATCCCCL70)的CV1/EBNA細(xì)胞系(參見McMahan等，1991,EMBOJ.10:2821)、人胚腎細(xì)胞例如293、293EBNA或MSR293、人表皮A431細(xì)胞、人Colo205細(xì)胞、其它轉(zhuǎn)化的靈長類動物細(xì)胞系、正常二倍體細(xì)胞、來源于初生組織體外培養(yǎng)物的細(xì)胞品系、原代外植體、HL-60、U937、HaK或Jurkat細(xì)胞。宿主細(xì)胞通常是可用多肽編碼核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細(xì)胞，所述多肽編碼核酸然后可在宿主細(xì)胞中表達(dá)。表述“重組宿主細(xì)胞”可用來表示已用待表達(dá)的核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞還可以是這樣的細(xì)胞，其包含核酸但除非將調(diào)節(jié)序列導(dǎo)入宿主細(xì)胞使得調(diào)節(jié)序列與核酸有效連接，否則不按所需水平表達(dá)所述核酸。要理解的是，術(shù)語宿主細(xì)胞不僅僅是指特定的受試者細(xì)胞，而且還是指這類細(xì)胞的子代或潛在子代。因為由于例如突變或環(huán)境影響，某些修飾可發(fā)生在后代中，這類子代實際上可能與親本細(xì)胞不同，但是仍包括在本文使用的該術(shù)語的范圍內(nèi)?？乖Y(jié)合蛋白一方面，本發(fā)明提供與α4β7(例如人α4β7)結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白(例如抗體、抗體片段、抗體衍生物、抗體突變蛋白和抗體變體)。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包括抑制α4β7的生物活性的抗原結(jié)合蛋白。這類生物活性的實例包括α4β7與MAdCAM-1結(jié)合、表達(dá)α4β7的細(xì)胞和表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞之間的粘附。其它生物活性包括由α4β7體內(nèi)介導(dǎo)的活性，例如運(yùn)輸或歸巢；具體地講，α4β7參與淋巴細(xì)胞運(yùn)輸至腸內(nèi)，在炎性腸中MAdCAM-1表達(dá)的提高促進(jìn)將表達(dá)α4β7的淋巴細(xì)胞募集至腸中，在腸中異常的淋巴細(xì)胞活化增加炎癥反應(yīng)和組織損傷。不同的抗原結(jié)合蛋白可與α4β7的不同結(jié)構(gòu)域或表位結(jié)合或通過不同的作用機(jī)制發(fā)揮作用。實例包括但不限于干擾α4β7結(jié)合MAdCAM-1的能力的抗原結(jié)合蛋白或抑制細(xì)胞相互作用(例如表達(dá)α4β7的細(xì)胞和表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞之間的粘附)的抗原結(jié)合蛋白。作用部位可以是例如細(xì)胞內(nèi)(例如通過干擾胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián))或細(xì)胞外?？乖Y(jié)合蛋白不必完全抑制α4β7誘導(dǎo)的活性以可用于本發(fā)明中；相反，還考慮使用降低α4β7的特定活性的抗原結(jié)合蛋白。(本文有關(guān)結(jié)合α4β7的抗原結(jié)合蛋白在治療具體疾病中的特定作用機(jī)制的論述僅是說明性的，本文提供的方法不局限于此)。本發(fā)明范圍內(nèi)的抗α4β7抗體的其它衍生物包括抗α4β7抗體或其片段與其它蛋白質(zhì)或多肽的共價或聚集綴合物，例如通過表達(dá)包含與抗α4β7抗體多肽的N端或C端融合的異源多肽的重組融合蛋白。例如，綴合肽可以是異源信號(或前導(dǎo)序列)多肽，例如酵母α-因子前導(dǎo)序列，或肽例如表位標(biāo)簽。含有抗原結(jié)合蛋白的融合蛋白可包含加入以促進(jìn)純化或鑒定抗原結(jié)合蛋白的肽(例如聚-His)?？乖Y(jié)合蛋白還可與Hopp等(Bio/Technology6:1204，1988)和美國專利5,011,912中描述的FLAG?肽Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys(DYKDDDDK)(SEQIDNO:62)連接。FLAG?肽是高抗原性的，并且提供被特異性單克隆抗體(mAb)可逆結(jié)合的表位，使得能夠?qū)λ磉_(dá)的重組蛋白進(jìn)行快速的測定和簡易的純化?？捎糜谥苽淦渲蠪LAG?肽與給定多肽融合的融合蛋白的試劑是市售的(Sigma-Aldrich,St.LouisMO)。含有一個或多個抗原結(jié)合蛋白的寡聚體可用作α4β7拮抗劑。寡聚體可呈共價連接的或非共價連接的二聚體、三聚體或更高寡聚體的形式。還考慮使用包含兩個或更多個抗原結(jié)合蛋白的寡聚體，其中一個實例為同二聚體。其它寡聚體包括異二聚體、同三聚體、異三聚體、同四聚體、異四聚體等。一個實施方案涉及包含多個抗原結(jié)合蛋白的寡聚體，所述抗原結(jié)合蛋白通過與抗原結(jié)合蛋白融合的肽部分之間的共價或非共價相互作用連接。這類肽可以是肽接頭(間隔基)或具有促進(jìn)寡聚化性質(zhì)的肽。亮氨酸拉鏈和來源于抗體的某些多肽也在可促進(jìn)與之連接的抗原結(jié)合蛋白寡聚化的肽之中，下面將更詳細(xì)予以描述。在具體的實施方案中，寡聚體包含2-4個抗原結(jié)合蛋白。寡聚體的抗原結(jié)合蛋白可呈任何形式，例如上述任何形式，例如變體或片段。優(yōu)選寡聚體包含具有α4β7結(jié)合活性的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，寡聚體使用來源于免疫球蛋白的多肽制備。包含與抗體衍生多肽的不同部分(包括Fc結(jié)構(gòu)域)融合的某些異源多肽的融合蛋白的制備披露于例如Ashkenazi等，1991，PNASUSA88:10535；Byrn等，1990，Nature344:677；以及Hollenbaugh等，1992"ConstructionofImmunoglobulinFusionProteins"，載于CurrentProtocolsinImmunology,增刊4,第10.19.1-10.19.11頁。本發(fā)明的一個實施方案涉及包含通過使抗α4β7抗體的α4β7結(jié)合片段與抗體的Fc區(qū)融合而產(chǎn)生的2個融合蛋白的二聚體。例如，可如下制備二聚體：通過將編碼融合蛋白的基因融合物插入合適的表達(dá)載體，在用重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中表達(dá)基因融合物，并且允許表達(dá)的融合蛋白非常像抗體分子地裝配，于是在Fc部分之間形成鏈間二硫鍵以得到二聚體。本文使用的術(shù)語“Fc多肽”包括來源于抗體的Fc區(qū)的多肽的天然和突變蛋白形式。還包括含有促進(jìn)二聚化的鉸鏈區(qū)的這類多肽的截短形式。包含F(xiàn)c部分的融合蛋白(和由其形成的寡聚體)提供在A蛋白或G蛋白柱上通過親和色譜法而易于純化的優(yōu)勢。一種合適的Fc多肽，參見PCT申請WO93/10151(通過引用結(jié)合到本文中)，是從N端鉸鏈區(qū)延伸到人IgG1抗體Fc區(qū)的天然C端的單鏈多肽。另一種有益的Fc多肽是Fc突變蛋白，參見美國專利5,457,035和Baum等，1994,EMBOJ.13:3992-4001。這種突變蛋白的氨基酸序列除以下不同之外與WO93/10151提供的天然Fc序列相同：氨基酸19由Leu變?yōu)锳la，氨基酸20由Leu變?yōu)镚lu，氨基酸22由Gly變?yōu)锳la。突變蛋白對Fc受體的親和力降低。在其它實施方案中，抗α4β7抗體的重鏈和/或輕鏈的可變部分可取代某一抗體重鏈和/或輕鏈的可變部分?；蛘?，寡聚體是含或不含肽接頭(間隔基肽)的包含多個抗原結(jié)合蛋白的融合蛋白。合適的肽接頭可參見美國專利4,751,180和4,935,233中的肽接頭。用于制備寡聚體抗原結(jié)合蛋白的另一種方法包括使用亮氨酸拉鏈。亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域是促進(jìn)亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域存在于其中的蛋白質(zhì)寡聚化的肽。最初在若干種DNA結(jié)合蛋白中鑒定出亮氨酸拉鏈(Landschulz等，1988，Science240:1759)，此后在多種不同蛋白質(zhì)中也發(fā)現(xiàn)了亮氨酸拉鏈。在已知的亮氨酸拉鏈中的是天然存在的二聚化或三聚化的肽及其衍生物。適于產(chǎn)生可溶性寡聚蛋白的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域的實例參見PCT申請WO94/10308，來源于肺表面活性蛋白D(SPD)的亮氨酸拉鏈參見Hoppe等，1994，F(xiàn)EBSLetters344:191，所述文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中。允許與之融合的異源蛋白質(zhì)穩(wěn)定三聚化的修飾亮氨酸拉鏈的使用參見Fanslow等，1994，Semin.Immunol.6:267-78。在一種方法中，包含與亮氨酸拉鏈肽融合的抗α4β7抗體片段或衍生物的重組融合蛋白在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)，并從培養(yǎng)物上清液中回收形成的可溶性寡聚抗α4β7抗體片段或衍生物。一方面，本發(fā)明提供干擾α4β7與MAdCAM-1結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白。這類抗原結(jié)合蛋白可針對α4β7或其片段、變體或衍生物產(chǎn)生，并在干擾α4β7與MAdCAM-1結(jié)合的能力的常規(guī)測定法中篩選。合適測定法的實例是測定抗原結(jié)合蛋白抑制MAdCAM-1(即可溶性MAdCAM-1)與表達(dá)α4β7的細(xì)胞結(jié)合的能力的測定法，或者測定抗原結(jié)合蛋白減少由MAdCAM-1和α4β7的相互作用(即表達(dá)α4β7的細(xì)胞與MAdCAM-1或表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞粘附)引起的生物反應(yīng)或細(xì)胞反應(yīng)的能力的測定法。測定抗原結(jié)合蛋白的其它測定法包括對抗原結(jié)合蛋白與α4β7多肽的結(jié)合和已知抗原結(jié)合蛋白與α4β7多肽的結(jié)合進(jìn)行定性或定量比較的測定法，本文公開了測定法的若干實例。另一方面，本發(fā)明提供具有物種選擇性的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白與一種或多種哺乳動物α4β7結(jié)合，例如與人α4β7和一種或多種小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、沙鼠(gerbil)、貓、兔、狗、山羊、綿羊、牛、馬、駱駝和非人類靈長類動物α4β7結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白與一種或多種靈長類動物α4β7結(jié)合，例如與人α4β7和一種或多種食蟹猴、狨猴、恒河猴、絹毛猴和黑猩猩α4β7結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白與人、食蟹猴、狨猴、恒河猴、絹毛猴或黑猩猩α4β7特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白不與一種或多種小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、沙鼠、貓、兔、狗、山羊、綿羊、牛、馬、駱駝和非人類靈長類動物α4β7結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白不與新世界猴物種例如狨猴結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白對α4β7以外的任何天然存在的蛋白質(zhì)沒有特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白對哺乳動物α4β7以外的任何天然存在的蛋白質(zhì)沒有特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白對靈長類動物α4β7以外的任何天然存在的蛋白質(zhì)沒有特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白對人α4β7以外的任何天然存在的蛋白質(zhì)沒有特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白與至少一種非人類靈長類動物(例如食蟹猴)的α4β7和人α4β7特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白以相似的結(jié)合親和力與非人類靈長類動物、食蟹猴和人α4β7特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白阻斷非人類靈長類動物、食蟹猴和人α4β7的活性。在另一個實施方案中，在本文所述測定法中，抗原結(jié)合蛋白對于非人類靈長類動物、食蟹猴和人α4β7具有相似的IC50或EC50。可采用本領(lǐng)域眾所周知的方法并按照本說明書的教導(dǎo)來測定抗原結(jié)合蛋白對α4β7的選擇性。例如，可以采用蛋白質(zhì)印跡、FACS、ELISA或RIA測定選擇性。另一方面，本發(fā)明提供具有一個或多個下列特征的結(jié)合α4β7的抗原結(jié)合蛋白(例如抗α4β7抗體)：與人和非人類靈長類動物α4β7兩者結(jié)合、抑制MAdCAM-1與α4β7的結(jié)合、抑制表達(dá)α4β7的細(xì)胞與MAdCAM-1粘附、抑制表達(dá)α4β7的細(xì)胞與表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞粘附、抑制表達(dá)α4β7的細(xì)胞運(yùn)輸至包含表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞的組織中，結(jié)合活性和無活性形式的α4β7兩者、引起細(xì)胞表面表達(dá)的α4β7相對小地減量調(diào)節(jié)。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白的抗原結(jié)合片段可通過常規(guī)技術(shù)產(chǎn)生。這類片段的實例包括但不限于Fab和F(ab')2片段。還考慮通過遺傳工程技術(shù)產(chǎn)生的抗體片段和衍生物。其它實施方案包括嵌合抗體，例如人源化形式的非人類(例如鼠)單克隆抗體。這類人源化抗體可通過已知技術(shù)制備，并且提供在將抗體給予人時免疫原性降低的優(yōu)勢。在一個實施方案中，人源化單克隆抗體包含鼠抗體的可變結(jié)構(gòu)域(或其所有或部分抗原結(jié)合部位)和來源于人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域?；蛘?，人源化抗體片段可包含鼠單克隆抗體的抗原結(jié)合部位和來源于人抗體的可變結(jié)構(gòu)域片段(缺乏抗原結(jié)合部位)。制備嵌合單克隆抗體和其它改造的單克隆抗體的方法包括以下文獻(xiàn)描述的方法：Riechmann等，1988，Nature332:323；Liu等，1987，Proc.Nat.Acad.Sci.USA84:3439；Larrick等，1989，Bio/Technology7:934；以及Winter等，1993，TIPS14:139。在一個實施方案中，嵌合抗體是CDR移植抗體。以下列文獻(xiàn)中論述了將抗體人源化的技術(shù)：例如美國專利申請?zhí)?0/194,975(2003年2月27公布)；美國專利號5,869,619、5,225,539、5,821,337、5,859,205；Padlan等，1995，F(xiàn)ASEBJ.9:133-39；以及Tamura等，2000，J.Immunol.164:1432-41。已經(jīng)開發(fā)出在非人類動物中產(chǎn)生人或部分人抗體的方法。例如，已制備了其中通過各種方法使一種或多種內(nèi)源免疫球蛋白基因失活的小鼠。已將人免疫球蛋白基因?qū)胄∈笾幸灾脫Q失活的小鼠基因。將在動物中產(chǎn)生的抗體摻入由導(dǎo)入該動物的人遺傳物質(zhì)編碼的人免疫球蛋白多肽鏈中。在一個實施方案中，非人類動物(例如轉(zhuǎn)基因小鼠)用α4β7多肽免疫接種，使得在該動物中產(chǎn)生針對α4β7多肽的抗體。合適免疫原的一個實例是可溶性人α4β7，例如包含部分α4β7的多肽，或其它免疫原性片段α4β7。合適免疫原的另一個實例是表達(dá)高水平α4β7的細(xì)胞或其細(xì)胞膜制備物。用于產(chǎn)生和使用轉(zhuǎn)基因動物以制備人或部分人抗體的技術(shù)的實例參見美國專利5,814,318、5,569,825和5,545,806；Davis等,2003,Productionofhumanantibodiesfromtransgenicmice載于Lo主編的AntibodyEngineering:MethodsandProtocols,HumanaPress,NJ:191-200；Kellermann等,2002,CurrOpinBiotechnol.13:593-97；Russel等,2000,InfectImmun.68:1820-26；Gallo等,2000,EurJImmun.30:534-40；Davis等,1999,CancerMetastasisRev.18:421-25；Green,1999,JImmunolMethods.231:11-23；Jakobovits,1998,AdvDrugDelivRev31:33-42；Green等,1998,JExpMed.188:483-95；JakobovitsA,1998,Exp.Opin.Invest.Drugs.7:607-14；Tsuda等,1997,Genomics42:413-21；Mendez等,1997,NatGenet.15:146-56；Jakobovits,1994,CurrBiol.4:761-63；Arbones等,1994,Immunity.1:247-60；Green等,1994,NatGenet.7:13-21；Jakobovits等,1993,Nature362:255-58；Jakobovits等,1993,ProcNatlAcadSciUSA.90:2551-55；Chen,J.等,1993,IntImmunol5:647-656；Choi等,1993,NatureGenetics4:117-23；Fishwild等,1996,NatBiotechnol14:845-51；Harding等,1995,AnnNYAcadSci；Lonberg等,1994,Nature368:856-59；Lonberg,1994,TransgenicApproachestoHumanMonoclonalAntibodies，載于HandbookofExperimentalPharmacology113:49-101；Lonberg等,1995,IntRevImmunol13:65-93；Neuberger,1996,NatBiotechnol14:826；Taylor等,1992,NucleicAcidsResearch20:6287-95；Taylor等,1994,IntImmunol6:579-91；Tomizuka等,1997,NatGen16:133-43；Tomizuka等,2000,ProcNatlAcadSciUSA.97:722-27；Tuaillon等,1993,ProcNatlAcadSciUSA.90:3720-24；以及Tuaillon等,1994,JImmunol152:2912-20。2007年5月3日公布的美國專利申請公開文本2007-0098715還論述了這些實例和其它實例。另一方面，本發(fā)明提供結(jié)合α4β7的單克隆抗體。單克隆抗體可采用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)產(chǎn)生，例如在完成免疫方案后，使由轉(zhuǎn)基因動物收獲的脾細(xì)胞永生化?？刹捎帽绢I(lǐng)域已知的任何技術(shù)使脾細(xì)胞永生化，例如通過使之與骨髓瘤細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜交瘤。用于產(chǎn)生雜交瘤融合體方法中的骨髓瘤細(xì)胞優(yōu)選是不產(chǎn)抗體的，具有高的融合效率，并且缺乏酶使其無法在僅支持所需要的融合細(xì)胞(雜交瘤)生長的某些選擇性培養(yǎng)基中生長。用于小鼠融合的合適細(xì)胞系的實例包括Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NS1/1.Ag41、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG1.7和S194/5XX0Bul；可用于大鼠融合的細(xì)胞系的實例包括R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和4B210。用于細(xì)胞融合的其它細(xì)胞系為U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2和UC729-6。在一個實施方案中，如下產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞系：通過用α4β7免疫原免疫接種動物(例如具有人免疫球蛋白序列的轉(zhuǎn)基因動物)；從免疫動物中收獲脾細(xì)胞；使收獲的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞系融合，從而產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞；由雜交瘤細(xì)胞建立雜交瘤細(xì)胞系，并鑒定產(chǎn)生結(jié)合α4β7多肽的抗體的雜交瘤細(xì)胞系。本發(fā)明包括這類雜交瘤細(xì)胞系及通過其產(chǎn)生的抗α4β7單克隆抗體。通過雜交瘤細(xì)胞系分泌的單克隆抗體可采用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)純化?？蓪﹄s交瘤或mAb進(jìn)行進(jìn)一步篩選以鑒定具有特定性質(zhì)的mAb，例如阻斷α4β7誘導(dǎo)的活性的能力。下面的實施例中提供了這類篩選法的實例。還可以采用稱為基因免疫的方法產(chǎn)生單克隆抗體。例如，可將編碼目標(biāo)抗原的核酸摻入病毒載體(例如腺病毒載體)中。然后使用所得載體在合適的宿主動物(例如非肥胖性糖尿病即NOD小鼠)中產(chǎn)生針對目標(biāo)抗原的免疫應(yīng)答。Ritter等人(Biodrugs16(1):3-10(2002))相當(dāng)詳盡充實地描述了該技術(shù)，所述文獻(xiàn)的公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。在抗體結(jié)合部位中心的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的分子進(jìn)化也被用于來分離親和力增強(qiáng)的抗體，例如對c-erbB-2的親和力增強(qiáng)的抗體，如Schier等，1996，J.Mol.Biol.263:551所述。因此，這類技術(shù)可用于制備抗α4β7的抗體。針對α4β7的抗原結(jié)合蛋白可用于例如體外或體內(nèi)檢測α4β7多肽或表達(dá)α4β7的細(xì)胞的存在情況的測定法中?？乖Y(jié)合蛋白還可用于通過免疫親和色譜法來純化α4β7蛋白。另外可阻斷MAdCAM-1和α4β7的相互作用的抗原結(jié)合蛋白可用于抑制因這類相互作用而產(chǎn)生的生物活性。阻斷抗原結(jié)合蛋白可用于本發(fā)明的方法。起α4β7拮抗劑作用的這類抗原結(jié)合蛋白可用于治療任何α4β7誘導(dǎo)的病況，包括但不限于炎性病況。在一個實施方案中，通過包括給轉(zhuǎn)基因小鼠免疫接種的方法而產(chǎn)生的人抗α4β7單克隆抗體可用于治療這類病況?？蓪⒖乖Y(jié)合蛋白用于體外方法，或體內(nèi)給予以抑制α4β7誘導(dǎo)的生物活性。因此，可以治療由α4β7及其與MAdCAM-1的相互作用而引起或加重(直接或間接)的病癥，本文提供了所述病癥的實例。在一個實施方案中，本發(fā)明提供治療方法，所述方法包括以對降低α4β7誘導(dǎo)的生物活性有效的量，將α4β7阻斷性抗原結(jié)合蛋白體內(nèi)給予有需要的哺乳動物。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包括抑制α4β7的生物活性的部分人和完全人單克隆抗體。一個實施方案涉及至少部分阻斷人α4β7與MAdCAM-1的相互作用的人單克隆抗體。在一個實施方案中，抗體通過用α4β7免疫原給轉(zhuǎn)基因小鼠免疫接種來產(chǎn)生。在另一個實施方案中，免疫原是人α4β7多肽(例如經(jīng)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染以表達(dá)α4β7的細(xì)胞，或者天然表達(dá)α4β7的細(xì)胞)。本文還提供來源于這類免疫小鼠的雜交瘤細(xì)胞系，其中雜交瘤分泌結(jié)合α4β7的單克隆抗體。雖然人抗體、部分人抗體或人源化抗體可適于許多應(yīng)用，特別是包括將抗體給予人受試者的那些應(yīng)用，但是其它類型的抗原結(jié)合蛋白也可適于某些應(yīng)用。例如，本發(fā)明的非人類抗體可以來源于任何產(chǎn)抗體動物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、驢或非人類靈長類動物(例如猴(例如食蟹猴或恒河猴)或類人猿(例如黑猩猩))。本發(fā)明的非人類抗體可用于例如體外和基于細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用，或者其中對本發(fā)明抗體的免疫應(yīng)答不會發(fā)生、不明顯、可被阻止、無需擔(dān)心或是所需要的任何其余應(yīng)用。在一個實施方案中，將本發(fā)明的非人類抗體給予非人類受試者。在另一個實施方案中，非人類抗體不會在非人類受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。在另一個實施方案中，非人類抗體來自與非人類受試者相同的物種，例如將本發(fā)明的小鼠抗體給予小鼠?？扇缦轮苽鋪碜蕴囟ㄎ锓N的抗體：通過例如用所需免疫原(例如表達(dá)α4β7的細(xì)胞，或可溶性α4β7多肽)給該物種的動物免疫接種，或者采用產(chǎn)生該物種的抗體的人工系統(tǒng)(例如用于產(chǎn)生特定物種的抗體的基于細(xì)菌或噬菌體展示的系統(tǒng))，或者通過例如用其它物種的恒定區(qū)置換抗體的恒定區(qū)，將一種物種的抗體轉(zhuǎn)化成另一種物種的抗體，或者通過置換抗體的一個或多個氨基酸殘基使得抗體更像其它物種的抗體序列。在一個實施方案中，抗體為包含來源于兩種或更多種不同物種的抗體的氨基酸序列的嵌合抗體?？赏ㄟ^多種常規(guī)技術(shù)的任一種制備抗原結(jié)合蛋白。例如，可采用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)，從天然表達(dá)抗原結(jié)合蛋白的細(xì)胞中純化出抗原結(jié)合蛋白(例如可從產(chǎn)生抗體的雜交瘤中純化出抗體)，或者在重組表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生抗原結(jié)合蛋白。參見例如MonoclonalAntibodies,Hybridomas:ANewDimensioninBiologicalAnalyses,Kennet等(編輯),PlenumPress,NewYork(1980)；以及Antibodies:ALaboratoryManual,Harlow和Land(編輯),ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,(1988)。本領(lǐng)域已知的任何表達(dá)系統(tǒng)可用來制備本發(fā)明的重組多肽。一般而言，宿主細(xì)胞用包含編碼所需多肽的DNA的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化。在可采用的宿主細(xì)胞中的是原核生物、酵母或高等真核細(xì)胞。原核生物包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物，例如大腸桿菌或桿菌。高等真核細(xì)胞包括昆蟲細(xì)胞和哺乳動物源的確立細(xì)胞系。合適哺乳動物宿主細(xì)胞系的實例包括猴腎細(xì)胞的COS-7系(ATCCCRL1651)(Gluzman等，1981，Cell23:175)、L細(xì)胞、293細(xì)胞、C127細(xì)胞、3T3細(xì)胞(ATCCCCL163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、BHK(ATCCCRL10)細(xì)胞系和來源于非洲綠猴腎細(xì)胞系CVI的CVI/EBNA細(xì)胞系(ATCCCCL70)(參見McMahan等，1991,EMBOJ.10:2821)。用于細(xì)菌、真菌、酵母和哺乳動物細(xì)胞宿主的合適克隆和表達(dá)載體參見Pouwels等(CloningVectors:ALaboratoryManual,Elsevier,NewYork,1985)。可將轉(zhuǎn)化細(xì)胞在促進(jìn)多肽表達(dá)的條件下培養(yǎng)，并通過常規(guī)蛋白質(zhì)純化方法回收多肽。這類純化方法之一包括例如在具有與之結(jié)合的全部或部分(例如胞外結(jié)構(gòu)域)α4β7的基質(zhì)上應(yīng)用親和色譜法。本文考慮使用的多肽包括基本均質(zhì)的重組哺乳動物抗α4β7抗體多肽，其基本上不含污染的內(nèi)源物質(zhì)。多肽的氨基酸序列可用本領(lǐng)域已知的任何方法證實，并且可與本文序列表中公開的序列相同，或者可因加工所致以一個或多個氨基酸殘基不同于那些序列。例如，在全部或部分的基本均質(zhì)多肽中，可通過蛋白酶解加工或在培養(yǎng)期間發(fā)生的其它加工(例如C端Lys殘基的加工)，從輕鏈或重鏈(或相關(guān)單鏈分子)中剔除C端氨基酸?；蛘撸蕹恢挂粋€C端氨基酸殘基，例如2個C端氨基酸，或者3、4或5個C端氨基酸。例如，如所公開的一樣，可將C端截短至抗體重鏈的酰胺化脯氨酸。同樣，可缺失N端氨基酸，例如可缺失1、2、3、4或5個N端氨基酸。備選或另外地，氨基酸殘基可進(jìn)行翻譯后修飾，例如但不限于可使谷氨酰胺(特別是N端的谷氨酰胺)環(huán)化或轉(zhuǎn)化成焦谷氨酸；另外或備選地，氨基酸可以進(jìn)行脫酰胺化、異構(gòu)化、糖化和/或氧化。本發(fā)明的多肽可在本領(lǐng)域眾所周知的位點(diǎn)進(jìn)行其它的翻譯后修飾，包括糖基化，例如N連接或O連接的糖基化。如前所述，可在多肽氨基酸序列中進(jìn)行改變以阻止這類變動或使這類變動最小化，或者在這類處理是有益的情況下促進(jìn)這類變動。基本均質(zhì)的多肽的制備物可包含約1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%已進(jìn)行一種或多種特定形式的加工的多肽。基本均質(zhì)的多肽的制備物可包含一些(小于或等于50%)、大部分(大于50%但小于90%)或基本上全部(大于90%)的特定形式的加工多肽。此外，這類制備物可包含具有不同水平的不止一種加工相關(guān)修飾類型的多肽，例如，多肽的一些、大部分或基本上全部的C端賴氨酸可被剔除(例如SEQIDNO:72的C端賴氨酸)，以及一些、大部分或基本上全部的N端氨基酸轉(zhuǎn)化成焦谷氨酸(例如表1和/或表2或共有序列中所顯示的任何多肽)。可通過多種已知技術(shù)的任一種針對所需要的性質(zhì)制備并篩選抗原結(jié)合蛋白。某些技術(shù)包括分離編碼目標(biāo)抗原結(jié)合蛋白(例如抗α4β7抗體)的多肽鏈(或其部分)的核酸，和通過重組DNA技術(shù)操作核酸。例如，核酸可與另一種目標(biāo)核酸融合，或者可被改變(例如通過誘變或其它常規(guī)技術(shù))以添加、缺失或取代一個或多個氨基酸殘基。一方面，本發(fā)明提供本發(fā)明的抗α4β7抗體的抗原結(jié)合片段。這類片段可完全由抗體衍生的序列組成或者可包含其它序列?？乖Y(jié)合片段的實例包括Fab、F(ab')2、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和結(jié)構(gòu)域抗體。其它實例參見Lunde等，2002，Biochem.Soc.Trans.30:500-06?？赏ㄟ^經(jīng)由氨基酸橋(短肽接頭)連接重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(Fv區(qū))片段得到單條多肽鏈，來形成單鏈抗體。通過使編碼肽接頭的DNA在編碼2個可變結(jié)構(gòu)域多肽(VL和VH)的DNA之間融合來制備這類單鏈Fv(scFv)。所得多肽可在自身上折疊起來形成抗原結(jié)合單體，或者可以形成多聚體(例如二聚體、三聚體或四聚體)，這取決于2個可變結(jié)構(gòu)域間的柔性接頭的長度(Kortt等，1997，Prot.Eng.10:423；Kortt等，2001，Biomol.Eng.18:95-108)?？赏ㄟ^使不同的包含VL和VH的多肽組合，形成結(jié)合不同表位的多聚體scFv(Kriangkum等，2001，Biomol.Eng.18:31-40)。開發(fā)用于產(chǎn)生單鏈抗體的技術(shù)包括以下文獻(xiàn)中所述的這些技術(shù)：美國專利號4,946,778；Bird，1988，Science242:423；Huston等，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879；Ward等，1989，Nature334:544，deGraaf等，2002，MethodsMolBiol.178:379-87。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白(例如抗體、抗體片段和抗體衍生物)可包含本領(lǐng)域已知的任何恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)可以是例如κ型或λ型輕鏈恒定區(qū)，例如人κ型或λ型輕鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)可以是例如α型、δ型、ε型、γ型或μ型重鏈恒定區(qū)，例如人α型、δ型、ε型、γ型或μ型重鏈恒定區(qū)。在一個實施方案中，輕鏈或重鏈恒定區(qū)是天然存在的恒定區(qū)的片段、衍生物、變體或突變蛋白。已知從目標(biāo)抗體得到不同亞類或同種型的抗體的技術(shù)，即亞類轉(zhuǎn)換(subclassswitching)。因此，例如可由IgM抗體得到IgG抗體，反之亦然。這類技術(shù)允許制備具有既定抗體(親本抗體)的抗原結(jié)合性質(zhì)，但亦顯示與親本抗體性質(zhì)不同的抗體同種型或亞類有關(guān)的生物性質(zhì)的新抗體。可以應(yīng)用重組DNA技術(shù)。編碼特定抗體多肽的克隆DNA可應(yīng)用于這類方法，例如編碼所需同種型抗體恒定結(jié)構(gòu)域的DNA。另參見Lantto等，2002，MethodsMol.Biol.178:303-16。此外，如果需要IgG4，則同樣可能需要在鉸鏈區(qū)中引入點(diǎn)突變(CPSCP->CPPCP)(參見Bloom等，1997，ProteinScience6:407，通過引用結(jié)合到本文中)，以降低形成可在IgG4抗體中導(dǎo)致異質(zhì)性的H鏈內(nèi)二硫鍵的趨勢。此外，用來得到具有不同性質(zhì)(即對其結(jié)合的抗原具有變化的親和力)的抗原結(jié)合蛋白的技術(shù)也是已知的。這類技術(shù)之一稱為鏈改組，包括在絲狀噬菌體表面展示免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域基因庫，通常稱為噬菌體展示。鏈改組已被用來制備抗半抗原2-苯基唑-5-酮的高親和力抗體，參見Marks等，1992，BioTechnology，10:779。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供具有自α4β7解離的低解離常數(shù)的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的Kd為100pM或更低。在另一個實施方案中，Kd為10pM或更低；在另一個實施方案中，Kd為5pM或更低，或者為1pM或更低。在另一個實施方案中，Kd與本文實施例所述抗體的基本相同。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白以與本文實施例所述抗體基本相同的Kd與α4β7結(jié)合。另一方面，本發(fā)明提供抑制α4β7活性的抗原結(jié)合蛋白，所述活性為例如與MAdCAM-1結(jié)合(或粘附)、與表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞結(jié)合或者表達(dá)α4β7的細(xì)胞和表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞之間的粘附。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的IC50為1000pM或更低。在另一個實施方案中，IC50為500pM或更低；在另一個實施方案中，IC50為100pM或更低。在另一個實施方案中，IC50與本文實施例所述抗體的IC50基本相同。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白以與本文實施例所述抗體基本相同的IC50抑制α4β7的活性。在一個實施方案中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白對α4β7(或表達(dá)α4β7的細(xì)胞)的表觀親和力為1000pM或更低。在其它實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的表觀親和力為500pM或更低、200pM或更低、100pM或更低、80pM或更低、40pM或更低或者15pM或更低。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的表觀親和力與本文實施例所述抗體的基本相同。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的表觀親和力與本文實施例所述抗體的基本相同。另一方面，本發(fā)明提供結(jié)合活性和無活性形式的α4β7兩者的抗原結(jié)合蛋白。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白只結(jié)合α4β7的一種形式，或優(yōu)先結(jié)合一種形式。例如，抗原結(jié)合蛋白可在Mn2+存在或不存在時結(jié)合α4β7(即結(jié)合活性和無活性形式兩者)?；蛘?，抗原結(jié)合蛋白只可在Mn2+存在或只在缺乏Mn2+時結(jié)合α4β7，或其可在這一種條件下以比在另一種條件下更高的親和力結(jié)合，這就表明了優(yōu)先與特定的α4β7形式結(jié)合。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供與本文公開的抗體競爭結(jié)合α4β7的抗原結(jié)合蛋白。這種競爭能力可通過本領(lǐng)域眾所周知的方法測定，例如通過采用熒光激活細(xì)胞分選(FACS)技術(shù)或其它類似測定法觀察到的競爭結(jié)合表達(dá)α4β7的細(xì)胞、通過在測定法例如粘附測定法(即表達(dá)α4β7的細(xì)胞和表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞之間粘附)中的競爭，或者通過在本文所述另一種測定法中的競爭。一方面，與本文公開的抗體競爭結(jié)合α4β7的抗原結(jié)合蛋白結(jié)合與所述抗體相同的表位或重疊(或鄰接)表位。另一方面，與本文公開的抗體競爭結(jié)合α4β7的抗原結(jié)合蛋白抑制α4β7的活性。另一方面，本發(fā)明提供以下抗原結(jié)合蛋白，其與在細(xì)胞表面上表達(dá)的人α4β7結(jié)合，并且當(dāng)如此結(jié)合時，抑制α4β7與MAdCAM-1的相互作用而不引起細(xì)胞表面上α4β7的量的顯著減少。可以采用測定或估算細(xì)胞表面上和/或細(xì)胞內(nèi)α4β7的量的任何方法。在一個實施方案中，本發(fā)明提供以下抗原結(jié)合蛋白，其與在細(xì)胞表面上表達(dá)的α4β7結(jié)合，并且當(dāng)如此結(jié)合時，抑制α4β7與MAdCAM-1的相互作用而又不顯著提高細(xì)胞表面上α4β7的內(nèi)化率。在其它實施方案中，抗原結(jié)合蛋白與表達(dá)α4β7的細(xì)胞的結(jié)合引起小于約75%、50%、40%、30%、20%、15%、10%、5%、1%或0.1%的細(xì)胞表面α4β7被內(nèi)化。另一方面，本發(fā)明提供具有至少1天體外或體內(nèi)(例如給予人受試者時)半壽期的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的半壽期至少為3天。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的半壽期為4天或更長。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的半壽期為8天或更長。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白是衍生化或修飾的，使得與未衍生化或未修飾的抗原結(jié)合蛋白相比，其具有較長的半壽期。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白含有延長血清半壽期的一個或多個點(diǎn)突變，例如參見2000年2月24日公布的WO00/09560，通過引用予以結(jié)合。本發(fā)明還提供多特異性抗原結(jié)合蛋白，例如雙特異性抗原結(jié)合蛋白，例如通過兩個不同的抗原結(jié)合部位或區(qū)域與α4β7的兩個不同表位結(jié)合或者與α4β7的一個表位和另一種分子的一個表位結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白。此外，本文公開的雙特異性抗原結(jié)合蛋白可包含一種本文所述抗體的α4β7結(jié)合部位和另一種本文所述抗體(包括本文通過參照其它出版物描述的抗體)的第二α4β7結(jié)合區(qū)?；蛘撸p特異性抗原結(jié)合蛋白可包含本文所述抗體之一的抗原結(jié)合部位和本領(lǐng)域已知的另一種α4β7抗體或者通過已知方法或本文所述方法制備的抗體的第二抗原結(jié)合部位。制備雙特異性抗體的多種方法是本領(lǐng)域已知的，可參見2001年4月20日提交的美國專利申請09/839,632(通過引用結(jié)合到本文中)。這類方法包括使用雜種雜交瘤(參見Milstein等，1983，Nature305:537)和其它雜交瘤(美國專利4,474,893、美國專利6,106,833)以及抗體片段的化學(xué)偶聯(lián)(Brennan等,1985，Science229:81；Glennie等,1987，J.Immunol.139:2367；美國專利6,010,902)。此外，雙特異性抗體可通過重組方法產(chǎn)生，例如通過使用亮氨酸拉鏈部分(即得自Fos和Jun蛋白，其優(yōu)先形成異二聚體；Kostelny等，1992，J.Immnol.148:1547)或其它鎖鑰相互作用結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)(參見美國專利5,582,996)。其它有益的技術(shù)包括以下文獻(xiàn)中描述的技術(shù)：Kortt等，1997，同上；美國專利5,959,083；以及美國專利5,807,706。另一方面，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包含抗體的衍生物。衍生化抗體可包含賦予抗體所需性質(zhì)(例如在具體應(yīng)用中延長的半壽期)的任何分子或物質(zhì)。衍生化抗體可包含例如可檢測(或標(biāo)記)部分(例如放射性分子、比色分子、抗原分子或酶分子、可檢測珠粒(例如磁珠或電子致密珠粒(例如金珠))或與其它分子(例如生物素或鏈霉抗生物素)結(jié)合的分子)、治療或診斷部分(例如放射性部分、細(xì)胞毒部分或藥用活性部分)或者提高用于特定用途(例如給予受試者例如人受試者，或者其它體內(nèi)或體外用途)的抗體適宜性的分子?？捎糜谘芑贵w的分子的實例包括白蛋白(例如人血清白蛋白)和聚乙二醇(PEG)。可采用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)制備抗體的白蛋白連接的衍生物和聚乙二醇化衍生物。在一個實施方案中，抗體與運(yùn)甲狀腺素蛋白(TTR)或TTR變體綴合或以其它方式連接。TTR或TTR變體可用例如選自以下的化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)修飾：葡聚糖、聚(n-乙烯基吡咯烷酮)、聚乙二醇、聚丙二醇(propropyleneglycol)均聚物、聚環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇和聚乙烯醇。美國專利申請?zhí)?0030195154。另一方面，本發(fā)明提供使用本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白篩選與α4β7結(jié)合的分子的方法?？刹捎萌魏魏线m的篩選技術(shù)。在一個實施方案中，將α4β7分子或其片段(本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白與之結(jié)合)與本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白和另一種分子接觸，其中如果所述另一種分子降低抗原結(jié)合蛋白與α4β7的結(jié)合，則該分子與α4β7結(jié)合?？刹捎萌魏魏线m的方法(例如ELISA)檢測抗原結(jié)合蛋白的結(jié)合?？扇缟纤鐾ㄟ^對抗原結(jié)合蛋白進(jìn)行可檢測標(biāo)記來簡化抗原結(jié)合蛋白與α4β7結(jié)合的檢測。在另一個實施方案中，對α4β7結(jié)合分子進(jìn)行進(jìn)一步分析，以確定它是否抑制α4β7活化和/或信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。核酸一方面，本發(fā)明提供分離的核酸分子。所述核酸包含例如編碼全部或部分抗原結(jié)合蛋白(例如本發(fā)明抗體的一條或兩條鏈)或其片段、衍生物、突變蛋白或變體的多核苷酸、足以用作雜交探針的多核苷酸、用于鑒定、分析、突變或擴(kuò)增編碼多肽的多核苷酸的PCR引物或測序引物、抑制多核苷酸的表達(dá)的反義核酸，以及前述多核苷酸的互補(bǔ)序列。核酸可為任何長度。其長度可為例如5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1,000、1,500、3,000、5,000個或更多個核苷酸，和/或可包含一個或多個其它序列例如調(diào)節(jié)序列，和/或為較大核酸(例如載體)的部分。核酸可為單鏈或雙鏈，并且可包含RNA和/或DNA核苷酸及其人工變體(例如肽核酸)?？蓮挠忙?β7免疫接種的小鼠的B細(xì)胞中分離出編碼抗體多肽(例如重鏈或輕鏈、僅可變結(jié)構(gòu)域或全長多肽)的核酸。核酸可通過常規(guī)方法分離，例如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)。本發(fā)明還提供在特定雜交條件下與其它核酸雜交的核酸。用于核酸雜交的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。參見例如CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6。本文定義的中等嚴(yán)格雜交條件使用含有5X氧化鈉/檸檬酸鈉(SSC)、0.5%SDS、1.0mMEDTA(pH8.0)的預(yù)洗溶液、約50%甲酰胺、6XSSC、雜交緩沖液并且雜交溫度為55℃(或其它類似的雜交溶液，例如一種雜交溶液含有約50%甲酰胺，雜交溫度為42℃)，以及60℃、在0.5XSSC、0.1%SDS中的洗滌條件。嚴(yán)格雜交條件在6XSSC中于45℃雜交，接著在0.1XSSC、0.2%SDS中于68℃一次或多次洗滌。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員可操控雜交和/或洗滌條件以提高或降低雜交的嚴(yán)格性，使得包含彼此有至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%同一性的核苷酸序列的核酸通常保持彼此雜交。影響雜交條件的選擇的基礎(chǔ)參數(shù)和設(shè)計合適條件的指導(dǎo)可參見例如Sambrook、Fritsch和Maniatis(1989,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,第9和11章；以及CurrentProtocolsinMolecularBiology,1995；Ausubel等主編,JohnWiley&Sons,Inc.,第2.10和6.3-6.4節(jié))，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可根據(jù)例如DNA的長度和/或堿基組成容易地確定。通過核酸突變可引入改變，從而導(dǎo)致其編碼的多肽(例如抗原結(jié)合蛋白)的氨基酸序列發(fā)生改變?？刹捎帽绢I(lǐng)域已知的任何技術(shù)引入突變。在一個實施方案中，采用例如位點(diǎn)定向誘變方案，改變一個或多個特定的氨基酸殘基。在另一個實施方案中，采用例如隨機(jī)誘變方案改變一個或多個隨機(jī)選擇的殘基。無論如何進(jìn)行，突變體多肽均可表達(dá)并針對所需要的性質(zhì)(例如與α4β7結(jié)合或阻斷α4β7與地址素(例如MAdCAM)的結(jié)合)篩選?？蓪⑼蛔円牒怂岫植伙@著改變其編碼的多肽的生物活性。例如，可以進(jìn)行核苷酸取代，導(dǎo)致在非必需氨基酸殘基上的氨基酸取代。在一個實施方案中，使核苷酸序列或其所需片段、變體或衍生物突變，使得其編碼包含一個或多個氨基酸殘基缺失或取代的氨基酸序列。在另一個實施方案中，誘變將氨基酸插入一個或多個氨基酸殘基附近?；蛘?，可將一個或多個突變引入核酸，這選擇性地改變其編碼的多肽的生物活性(例如α4β7的結(jié)合、抑制α4β7與地址素(例如MAdCAM)的結(jié)合等)。例如，突變可定量或定性地改變生物活性。定量改變的實例包括提高、降低或消除活性。定性改變的實例包括改變抗原結(jié)合蛋白的抗原特異性。另一方面，本發(fā)明提供適宜用作引物或雜交探針以檢測本發(fā)明的核酸序列的核酸分子。本發(fā)明的核酸分子可只包含編碼本發(fā)明全長多肽的核酸序列的一部分，例如可用作探針或引物的片段或者編碼本發(fā)明多肽的活性部分(例如α4β7結(jié)合部分)的片段?；诒景l(fā)明的核酸序列的探針可用來檢測所述核酸或類似核酸，例如編碼本發(fā)明多肽的轉(zhuǎn)錄物。探針可包含標(biāo)記基團(tuán)，例如放射性同位素、熒光化合物、酶或酶輔因子。這類探針可用來鑒定表達(dá)所述多肽的細(xì)胞。另一方面，本發(fā)明提供包含編碼本發(fā)明多肽或其部分的核酸的載體。載體的實例包括但不限于質(zhì)粒、病毒載體、非附加型哺乳動物載體和表達(dá)載體，例如重組表達(dá)載體。本發(fā)明的重組表達(dá)載體可包含本發(fā)明的核酸，其形式適于在宿主細(xì)胞中表達(dá)核酸。重組表達(dá)載體包括在用于表達(dá)的宿主細(xì)胞基礎(chǔ)上選出的一個或多個調(diào)節(jié)序列，其與待表達(dá)的核酸序列有效連接。調(diào)節(jié)序列包括在許多類型的宿主細(xì)胞中指導(dǎo)核苷酸序列的組成型表達(dá)的調(diào)節(jié)序列(例如SV40早期基因增強(qiáng)子、勞斯肉瘤病毒啟動子和巨細(xì)胞病毒啟動子)、只在某些宿主細(xì)胞中指導(dǎo)核苷酸序列表達(dá)的調(diào)節(jié)序列(例如組織特異性調(diào)節(jié)序列，參見Voss等，1986，TrendsBiochem.Sci.11:287；Maniatis等，1987，Science236:1237，通過引用以其整體結(jié)合到本文中)、以及響應(yīng)于特定處理或條件而指導(dǎo)核苷酸序列誘導(dǎo)型表達(dá)的調(diào)節(jié)序列(例如哺乳動物細(xì)胞的金屬硫蛋白(metallothionin)啟動子以及在原核和真核系統(tǒng)兩者中的tet-反應(yīng)性(tet-responsive)和/或鏈霉素反應(yīng)性啟動子，見上文)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解的是，表達(dá)載體的設(shè)計可取決于待轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的選擇、所需蛋白質(zhì)的表達(dá)水平等這類因素?？蓪⒈景l(fā)明的表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞從而產(chǎn)生蛋白質(zhì)或肽，包括由本文所述核酸編碼的融合蛋白或肽。另一方面，本發(fā)明提供向其中導(dǎo)入本發(fā)明的重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是任何原核細(xì)胞(例如大腸桿菌)或真核細(xì)胞(例如酵母、昆蟲或哺乳動物細(xì)胞(例如CHO細(xì)胞))。可通過常規(guī)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染技術(shù)將載體DNA導(dǎo)入原核或真核細(xì)胞。對于哺乳動物細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，已知的是取決于所采用的表達(dá)載體和轉(zhuǎn)染技術(shù)，僅一小部分的細(xì)胞可將外源DNA整合到其基因組中。為了鑒定和選擇這些整合子(integrant)，一般將編碼選擇標(biāo)記(例如抗生素抗性)的基因與目標(biāo)基因一起導(dǎo)入宿主細(xì)胞中。優(yōu)選的選擇標(biāo)記包括賦予抗藥性(例如G418、潮霉素和甲氨蝶呤抗性)的選擇標(biāo)記。除其它方法之外，可通過藥物選擇(例如已摻入選擇標(biāo)記基因的細(xì)胞可存活而其它細(xì)胞死亡)鑒定用導(dǎo)入的核酸穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。適應(yīng)癥一方面，本發(fā)明提供治療受試者的方法。該方法對受試者可具有例如整體有益作用，例如可延長受試者的預(yù)期壽命?；蛘撸摲椒衫缰委?、預(yù)防、治愈、減輕或改善(“治療”)疾病、病癥、病況或病(“病況”)。在待按照本發(fā)明治療的病況中的是，特征是α4β7不當(dāng)表達(dá)或活性的病況。這類病況包括與細(xì)胞不當(dāng)運(yùn)輸，例如白細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞或單核細(xì)胞)運(yùn)輸至胃腸道或包含表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞的其它組織中(由于白細(xì)胞與表達(dá)MAdCAM-1的細(xì)胞結(jié)合所致)有關(guān)的病況?？梢灾委煹募膊∫虼税ㄑ仔阅c病，例如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、乳糜瀉(非熱帶性口炎性腹瀉)、腸病伴發(fā)血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、顯微鏡下結(jié)腸炎或膠原性結(jié)腸炎、嗜酸性胃腸炎或直腸與結(jié)腸切除術(shù)和回腸肛管吻合術(shù)后所致的回腸囊袋炎。可按照本發(fā)明治療的其它病況包括胰腺炎、胰島素依賴性糖尿病、乳腺炎、膽囊炎、膽管炎、膽管周圍炎、慢性支氣管炎、慢性鼻竇炎、哮喘和移植物抗宿主病。治療方法和抗原結(jié)合蛋白的給予本文提供的某些方法包括將α4β7異二聚體特異性抗原結(jié)合蛋白給予受試者，從而降低在特定病況中起作用的α4β7誘導(dǎo)的生物應(yīng)答。在具體的實施方案中，本發(fā)明的方法包括例如通過給予受試者或在離體方法中，使內(nèi)源α4β7與α4β7抗原結(jié)合蛋白接觸。術(shù)語“治療”包括減輕或預(yù)防病況的至少一種癥狀或其它方面，或者減輕疾病的嚴(yán)重程度等?？乖Y(jié)合蛋白不必實現(xiàn)完全治愈或者根除疾病的每種癥狀或表現(xiàn)就可構(gòu)成可行的治療劑。正如相關(guān)領(lǐng)域所公認(rèn)的一樣，用作治療劑的藥物可減輕既定疾病狀態(tài)的嚴(yán)重程度，但是不必消除疾病的每種表現(xiàn)就可被視為有益的治療劑。同樣，預(yù)防性給予的治療在預(yù)防病況發(fā)作時不必完全有效就可構(gòu)成可行的預(yù)防劑。僅僅是減輕疾病的影響(例如通過減輕其癥狀數(shù)目或嚴(yán)重程度，或者通過提高另一種治療的療效，或者通過產(chǎn)生另一種有益的效果)，或者降低受試者中疾病將發(fā)生或惡化的可能性便足夠。本發(fā)明的一個實施方案涉及一種方法，所述方法包括以以下量給予患者α4β7拮抗劑達(dá)以下時間，所述量和時間足以在反映特定病癥的嚴(yán)重程度的指示物的基線方面誘導(dǎo)持續(xù)改善。如相關(guān)領(lǐng)域所了解的一樣，以與適應(yīng)癥相適應(yīng)的方式將包含本發(fā)明的分子的藥物組合物給予受試者。藥物組合物可通過任何合適的技術(shù)給予，包括但不限于胃腸外、局部或通過吸入。如要注射，則可通過例如關(guān)節(jié)內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、病灶內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下途徑、通過推注或連續(xù)輸注給予藥物組合物?？紤]局部給藥，例如在疾病或損害部位，透皮遞送和從植入物持續(xù)釋放亦是如此。通過吸入遞送包括例如經(jīng)鼻或經(jīng)口吸入、使用噴霧器、吸入氣霧劑形式的拮抗劑等。其它備選包括眼藥水；口服制劑包括丸劑、糖漿劑、錠劑或口香糖；以及局部制劑，例如洗劑、凝膠劑、噴霧劑和軟膏劑。還考慮在離體方法中使用抗原結(jié)合蛋白。例如，可使患者血液或其它體液與離體結(jié)合α4β7的抗原結(jié)合蛋白接觸?？乖Y(jié)合蛋白可與合適的不溶性基質(zhì)或固體支持材料結(jié)合。有利的是，以組合物的形式給予抗原結(jié)合蛋白，所述組合物包含一種或多種其它組分，例如生理上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。任選組合物另包含一種或多種生理活性劑，例如第二炎癥抑制物質(zhì)或免疫抑制物質(zhì)、抗血管生成物質(zhì)、鎮(zhèn)痛物質(zhì)等，本文提供了其非排他性實例。在各種具體的實施方案中，除α4β7結(jié)合性抗原結(jié)合蛋白以外，組合物還包含1、2、3、4、5或6種生理活性劑。在一個實施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白以及一種或多種選自以下的物質(zhì)：緩沖劑、抗氧化劑(例如抗壞血酸)、低分子量多肽(例如小于10個氨基酸的多肽)、蛋白質(zhì)、氨基酸、糖(例如葡萄糖、蔗糖或糊精)、螯合劑(例如EDTA)、谷胱甘肽、穩(wěn)定劑和賦形劑。中性緩沖鹽水或與同種血清白蛋白混合的鹽水是合適稀釋劑的實例。根據(jù)適當(dāng)?shù)墓I(yè)標(biāo)準(zhǔn)，還可加入防腐劑，例如苯甲醇?？墒褂煤线m的賦形劑溶液(例如蔗糖)作為稀釋劑將組合物配制成凍干物。所采用的劑量和濃度下合適組分對接受者是無毒的。可用于藥物制劑的組分的更多實例可參見Remington’sPharmaceuticalSciences，第16版(1980)和第20版(2000)，MackPublishingCompany，Easton，PA。醫(yī)療從業(yè)人員使用的藥盒包括本發(fā)明的α4β7抑制物質(zhì)和用于治療本文所述任何病況的標(biāo)簽或其它用法說明。在一個實施方案中，藥盒包括一種或多種α4β7結(jié)合性抗原結(jié)合蛋白的無菌制劑，其可呈上述組合物的形式，并且可裝入一個或多個小瓶。劑量和給藥頻率可隨例如給藥途徑、所采用的具體抗原結(jié)合蛋白、待治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、病況是急性還是慢性以及受試者的身材和一般情況等因素而改變。合適的劑量可通過相關(guān)領(lǐng)域已知方法確定，例如在可包括劑量遞增研究的臨床試驗中。例如，可在一段時間內(nèi)以固定間隔給予本發(fā)明的α4β7抑制物質(zhì)例如一次或不止一次。在具體的實施方案中，抗原結(jié)合蛋白在至少一個月或更多個月的時間內(nèi)給予，例如1、2或3個月，甚至無限期。對于治療慢性病況，長期治療一般最有效。然而，對于治療急性病況，給予較短時間(例如1-6周)便可足夠。一般而言，給予抗原結(jié)合蛋白直到患者在所選擇的一種或多種指示物的基線上表現(xiàn)出醫(yī)學(xué)上相關(guān)的改善程度。本發(fā)明的具體實施方案包括以約1ng抗原結(jié)合蛋白/kg受試者體重/天(“1ng/kg/天”)-約10mg/kg/天、更優(yōu)選約500ng/kg/天-約5mg/kg/天、最優(yōu)選約5μg/kg/天-約2mg/kg/天的劑量，將抗原結(jié)合蛋白給予受試者。在其它實施方案中，每周一次、每周二次或者每周三次或更多次將抗原結(jié)合蛋白給予成人，以治療α4β7介導(dǎo)的疾病、病況或病癥，例如本文公開的醫(yī)學(xué)病癥。如要注射，每位成人劑量的有效量的抗原結(jié)合蛋白的范圍可為1-20mg/m2，優(yōu)選為約5-12mg/m2?；蛘?，可以給予平頂劑量(flatdose)；該量的范圍可為5-100mg/劑。平頂劑量的一種范圍為約20-30mg/劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，通過注射重復(fù)給予25mg/劑的平頂劑量。如果采用注射以外的給藥途徑，則按照標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療實踐適當(dāng)調(diào)整劑量。治療方案的一個實例包括在至少三周的時間內(nèi)每周1-3次注射約20-30mg抗原結(jié)合蛋白的劑量，但可能需要較長期的治療以引起所需要的改善程度。對于兒科受試者(4-17歲)，一個示例性的合適方案包括每周2-3次給予皮下注射0.4mg/kg直到25mg抗原結(jié)合蛋白的最大劑量。本文所提供的方法的具體實施方案包括每周一次或兩次皮下注射0.5mg-10mg、優(yōu)選3-5mg的抗原結(jié)合蛋白。另一個實施方案涉及一周一次經(jīng)肺給予(例如通過噴霧器)3mg以上的抗原結(jié)合蛋白。本文提供的治療方案的實例包括一周一次以1.5-3mg的劑量皮下注射抗原結(jié)合蛋白，以治療其中α4β7起作用的病況。本文提供了這類病況的實例，包括例如前述風(fēng)濕性病況和其中過量或不當(dāng)運(yùn)輸表達(dá)α4β7的細(xì)胞起作用的其它病況(本文所述的例如炎性腸病、胰腺炎等)。持續(xù)每周給予抗原結(jié)合蛋白直到達(dá)到所需效果，例如受試者的癥狀減輕?？砂葱枰謴?fù)治療，或者可以給予維持劑量。本文所提供的治療方案的其它實例包括皮下或靜脈內(nèi)給予1、3、5、6、7、8、9、10、11、12、15或20毫克本發(fā)明的α4β7抑制劑/千克受試者體重(mg/kg)的劑量?？蓪┝恳淮谓o予受試者，或以某一間隔不止一次給予，例如一天一次、一周三次、一周兩次、一周一次、一月三次、一月兩次、一月一次、每兩月一次、每三月一次、每六月一次或一年一次。在療程內(nèi)，可更改或變動治療持續(xù)時間及治療劑量和/或治療頻率的任何變化以滿足受試者的特殊需要。在另一個實施方案中，以足以引起至少一種反映待治療病癥的嚴(yán)重程度的指示物得到改善(優(yōu)選持續(xù)改善)的量和時間，將抗原結(jié)合蛋白給予受試者?？梢栽u價反映受試者病癥、疾病或病況的程度的各種指示物，以確定治療的量和時間是否足夠。這類指示物包括例如臨床公認(rèn)的所述病癥的疾病嚴(yán)重程度、癥狀或表現(xiàn)的指示物。在一個實施方案中，如果受試者在相隔2-4周的至少兩個時間內(nèi)都得到改善，則這種改善被視為是持續(xù)的。改善程度一般通過由醫(yī)生確定，醫(yī)生可根據(jù)體征、癥狀、活組織檢查或其它試驗結(jié)果加以確定，而且醫(yī)生還可應(yīng)用給予受試者的問卷，例如已開發(fā)的用于既疾病的生命質(zhì)量問卷。α4β7表達(dá)和/或α4β7活化和/或其結(jié)合配偶體MAdCAM-1的改變與許多病癥有關(guān)，包括例如胃腸系統(tǒng)炎癥性病況。可對患有既定病癥的受試者進(jìn)行篩選，以鑒定α4β7或MAdCAM-1表達(dá)和/或活化發(fā)生改變的那些個體，從而鑒定出可從α4β7結(jié)合性抗原結(jié)合蛋白治療中獲益最大的受試者。因此，本文提供的治療方法任選包括測定受試者的α4β7或MAdCAM-1活化或表達(dá)水平的第一個步驟?？蓪⒖乖Y(jié)合蛋白給予其中α4β7和/或MAdCAM-1表達(dá)和/或活化超出正常的受試者?？稍谟每乖Y(jié)合蛋白治療之前、期間和/或之后監(jiān)測受試者的α4β7或MAdCAM-1活性水平，以檢測α4β7或MAdCAM-1活性的改變(如有任何改變的話)。對于某些病癥，α4β7和/或MAdCAM-1活性升高的發(fā)生率可隨病期或疾病的特殊形式等這類因素而改變。例如，可應(yīng)用已知技術(shù)測定受試者血液或組織樣品中的這類活性。可應(yīng)用任何合適的技術(shù)測定Α4β7或MAdCAM1活性。本發(fā)明的方法和組合物的具體實施方案包括使用抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其它的α4β7拮抗劑，例如，兩種或更多種本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白，或者本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其它的α4β7拮抗劑。在進(jìn)一步的實施方案中，抗原結(jié)合蛋白單獨(dú)給予或與用于治療患者所患病況的其它物質(zhì)組合給予。這類物質(zhì)的實例同時包括蛋白質(zhì)性和非蛋白質(zhì)性藥物兩者。當(dāng)共同給予多種治療藥時，可因此按照相關(guān)領(lǐng)域公認(rèn)的方法調(diào)整劑量。“共同給予”和組合療法不限于同時給藥，而且還包括這樣的治療方案，其中在包括給予患者至少一種其它治療劑的療程期間至少一次給予抗原結(jié)合蛋白?？膳c抗原結(jié)合蛋白共同給予的其它物質(zhì)的實例為根據(jù)待治療的具體病況所選擇的其它抗原結(jié)合蛋白或治療性多肽?；蛘撸捎糜谥委熞环N上述特定病況的非蛋白質(zhì)性藥物可與α4β7拮抗劑共同給予。組合療法另一方面，本發(fā)明提供用抑制α4β7的抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其它治療治療受試者的方法。在一個實施方案中，這類組合療法通過例如攻擊腫瘤的多個部位或分子靶標(biāo)而實現(xiàn)協(xié)同或相加效應(yīng)?？膳c本發(fā)明聯(lián)用的組合療法類型包括抑制或激活(適當(dāng)時)單一疾病相關(guān)途徑的多個節(jié)點(diǎn)、靶細(xì)胞和靶組織內(nèi)多種細(xì)胞類型中的多個途徑。在另一個實施方案中，組合療法包括給予受試者2、3、4、5、6種或更多種本文所述的α4β7激動劑或拮抗劑。在另一個實施方案中，所述方法包括給予受試者兩種或更多種共同抑制或激活(直接或間接)α4β7介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的治療。這類方法的實例包括使用兩種或更多種抑制α4β7的抗原結(jié)合蛋白的組合、抑制α4β7的抗原結(jié)合蛋白和一種或多種具有抗炎性質(zhì)的其它治療部分(例如非甾體抗炎藥、類固醇、和/或免疫調(diào)節(jié)劑)的組合、或者抑制α4β7的抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其它治療(例如手術(shù)、超聲或有效減輕炎癥的治療)的組合?？膳cα4β7抑制劑組合的有益物質(zhì)包括用于治療例如克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎的物質(zhì)，例如氨基水楊酸鹽(例如5-氨基水楊酸)、皮質(zhì)甾類(包括潑尼松(predisone))、抗生素例如甲硝唑或環(huán)丙沙星(或用于治療例如瘺患者的其它抗生素)以及免疫抑制藥，例如硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、甲氨蝶呤、他克莫司和環(huán)孢菌素。這類物質(zhì)的組合亦考慮用于與本發(fā)明的α4β7抑制劑一起使用。這類物質(zhì)可以口服給予或通過另一種途徑給予，例如通過栓劑或灌腸劑。此外，一種或多種抗α4β7抗體或抗體衍生物可與一種或多種分子或其它治療組合使用，其中所述其它分子和/或治療不直接結(jié)合或影響α4β7，但其組合對治療或預(yù)防待治療的病況是有效的。例如，α4β7抑制劑可與益生菌療法(probiotictherapy)或用于恢復(fù)或維持正常腸菌群的其它療法組合使用。在一個實施方案中，一種或多種分子和/或治療治療或預(yù)防在治療過程中由一種或多種其它分子或治療引起的病況，例如惡心、疲倦、脫發(fā)、惡病質(zhì)、失眠等。在其中采用分子和/或其它治療的組合的各種情況下，各種分子和/或治療可以有效的任何順序在任何持續(xù)時間內(nèi)給予，例如同時、序貫或交替給予。在一個實施方案中，治療方法包括用一種分子或其它治療完成第一療程后再開始第二療程。第一療程結(jié)束與第二療程開始之間的時間長度可以是使總療程有效的任何時間長度，例如數(shù)秒鐘、分鐘、小時、天、周、月，甚至數(shù)年。在另一個實施方案中，所述方法包括給予一種或多種本文所述的α4β7拮抗劑和一種或多種其它治療(例如治療性治療或姑息療法)。如果方法包括給予受試者不止一種治療，則要理解的是，給藥的順序、時機(jī)、次數(shù)、濃度和體積僅限于醫(yī)學(xué)要求和治療限制，即可以例如同時、序貫、交替或者按照任何其它方案給予受試者兩種治療。提供下面既是實際的也是預(yù)測的實施例用于說明本發(fā)明的具體實施方案或特征，但是不限制其范圍。實施例1：抗體的制備通過用表達(dá)人α4β7的細(xì)胞(瞬時轉(zhuǎn)染的人胚腎(HEK)293細(xì)胞(293-a4b7)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞(CHO-a4b7))給XenoMouseTMXG2κλ(kl)和XG4kl小鼠(分別表達(dá)人IgG2或IgG4以及人κ和λ輕鏈的轉(zhuǎn)基因小鼠；AbgenixInc.,FremontCA)免疫接種，來產(chǎn)生抗人α4β7的單克隆抗體。通過熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)分析比較α4β7轉(zhuǎn)染的細(xì)胞與相應(yīng)的親代對照細(xì)胞，來監(jiān)測血清效價。將得自任一種免疫活動(immunizationcampaign)的超免疫動物處死，對脾和淋巴結(jié)組織進(jìn)行雜交瘤融合。采用一系列測定法鑒定Α4β7異二聚體特異性抗體。首先通過微體積熒光測定技術(shù)(FluorometricMicrovolumeAssayTechnology,FMATtmAppleraCorporation，F(xiàn)osterCityCA；高通量篩選細(xì)胞檢測系統(tǒng))篩選與模擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比結(jié)合α4β7轉(zhuǎn)染細(xì)胞的雜交瘤上清液。按照文獻(xiàn)所述類似方法(Erle,J.Immunol,(1994)153:517)，對鑒定為結(jié)合α4β7陽性的上清液(得自CHO-a4b7細(xì)胞免疫活動的1001種陽性結(jié)合上清液和得自293-a4b7細(xì)胞免疫活動的1143種陽性結(jié)合上清液)抑制HUT78細(xì)胞與MAdCAM-1-Fc粘附的能力進(jìn)行了評價。在該測定法中，得自CHO-a4b7活動的60種上清液和得自293-a4b7活動的174種上清液的抑制大于90%(n=2)，并進(jìn)行進(jìn)一步的特異性和功效分析。制備了α4β7轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞、α4β1轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞和αEβ7轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞，并與在抑制測定法中鑒定的雜交瘤上清液用于FACS分析。顯示只與α4β7轉(zhuǎn)染的細(xì)胞結(jié)合的上清液被歸類為異二聚體特異性的，因為抗該整聯(lián)蛋白的α4亞基的抗體也可與α4β1轉(zhuǎn)染細(xì)胞結(jié)合，并且結(jié)合β7鏈的抗體可結(jié)合αEβ7轉(zhuǎn)染細(xì)胞。通過FACS分析，還對雜交瘤上清液與食蟹猴α4β7轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞的結(jié)合活性進(jìn)行了分析。選出得自CHO-a4b7活動的7個品系和得自293-a4b7活動的25個品系用于亞克隆和進(jìn)一步的分析。實施例2：抗體的分析將得到的抗體分泌細(xì)胞克隆，分離出編碼抗體的核酸并進(jìn)行了測序。采用位點(diǎn)定向誘變制備在一個或多個氨基酸殘基上不同于分離序列的變體。抗體和變體的輕鏈和重鏈的氨基酸序列見下表1和表2。要了解的是，CDR和FR區(qū)的邊界像之前討論的一樣可與下列所顯示的不同。表1：輕鏈的序列分析輕鏈FR1CDR1FR21A10KDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVSSWLAWYQQKPGMAPKLLIY11E7K1EIVMTQSPATLSVSPGETATLSCRASQTVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIY11E7K2DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQRKPGKVPKLLIY2F12KDIQMTQSPSSVFASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPNLLIY14E4LQSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIY3A5KDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVISWLAWYQQKPGMAPKLLIY10D7KDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVNNWLAWYQQKPGKAPKLLIF27D8KEIVMMQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSTNLAWYQQKPGQAPRLLIY18A11KDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIY20D7KEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY23H6KEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIY27G8LQSVLTQPPSVSEAPRQRVTISCSGSNSNIGNNPVNWYQLFPGRAPKLLIY26C7KEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSDNLAWYQQKPGQPPRLLIY26H3KDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIY19G6KDIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCQASQDINTYLNWYQQKPGKVPKLLIY22B2KDVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITDYLNWYQQKPGKAPKLLIY24A2KEVMMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIF26E9KELVMTQSPATLSVSPGERATVSCRASQSVSSDLAWYQQKPGQAPRLLIY22F5KEIVMTQSPATLSVFPGEGATLSCRASQSVSSDLAWYQQKPGQAPRLLIY26C10KEIVLTQSPGTLSLSPGEGATLSCRASQTVTSSYLAWYQQSPSQSPRLLIY17C8KEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLVWYQQKPGQAPRLLIY25C9kDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQRKPGKAPKVLIY19E6LSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYACWYQQKPGQSPVLVIY26G2kDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQQKPGTAPKVLIY27G8L(a)QSVLTQPPSVSGAPRQRVTISCSGSNSNIGNNPVNWYQLFPGRAPKLLIY27G8L(b)QSVLTQPRSVSGAPRQRVTISCSGSNSNIGNNPVNWYQLFPGRAPKLLIY26H3K(c)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIY1A10K(d)DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGVSSWLAWYQQKPGKAPKLLIY表1(接上表)輕鏈CDR2FR31A10KAASILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC11E7K1GASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC11E7K2AASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYCC2F12KGASSLQNGVPLRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC14E4LDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSAILDITGLQTGDEADYYC3A5KAASILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC10D7KATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYYC27D8KGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYFC18A11KGASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFANYYC20D7KGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC23H6KGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC27G8LHDDLLPSGVSDRFSGSRSGTSASLAISGLQSEDETDYYC26C7KGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC26H3KDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTINSLQPEDIATYFC19G6KDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISGLQPEDIATYYC22B2KDTSNLEAGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC24A2KGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYCC26E9KGASSRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC22F5KGASARATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC26C10KGASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC17C8KGASTRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQSEDFAVYYC25C9kSASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC19E6LQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYC26G2kSASSLQNGVPSRFSGRGSGTDFALTISSLQPEDFATYYC27G8L(a)HDDLLPSGVSDRFSGSRSGTSASLAISGLQSADETDYYC27G8L(b)HDDLLPSGVSDRFSGSRSGTSASLAISGLRSADETDYYC26H3K(c)DASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTINSLQPEDIATYFC1A10K(d)AASILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC表1(接上表)輕鏈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(a)TAWDDSLNGWVFGGGTKLTVL27G8L(b)TAWDDSLNGWVFGGGTKLTVL26H3K(c)QQYDNLPSSFGQGTKLEIK1A10K(d)QQANSFPWTFGQGTKVEIK表2：重鏈的序列分析重鏈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(a)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLNDLSMHWVRQAPGKGLEWMG27G8H(b)EVQLVESGGGLVKPGRSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQASGKGLEWVA表2(接上表)重鏈CDR2FR31A10HGFDPAEGKIISAQKFQDRVTMTDDTSTDTAYMELSSLRSEDSAVYYCAT11E7H1YISSSGSAIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQLNSLRAEDTAVYYCAR11E7H2VIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLHLQMNSLRAEDTAVYYCAR2F12HGFDPQDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELRSLRSEDTAVYYCTT14E4HYISNSGSVVYYADSVKGRFTISRHNAKNSLYLQMNSLRADDTAVYYCAR3A5HGFDPAEGKIISAQKFQDRVTMTDDTSTDTAYMELSSLRSEDSAVYYCAT10D7HYISSTGSAMYDADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR27D8HYISSSGSATYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAVYYCAR18A11HGFDPQDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLKSEDTAVYYCAT20D7HYISSSGSAIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMDSLRAEDTAVFYCAR23H6HYISSSGSAMYSADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR26G2HYISSIGSAIHYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR27G8HNIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR26C7HYISRVGSTTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR26H3HIIYPYDSDTRYSPSFQGQVTISADKSINTAYLQWSSLKASDTAMFYCAS19G6HYISSSGSTMYYADSVKGRFTISRVNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR22B2HIIDPNDSDTRYSPSFQGQVTISADKSIHTAYLQWSSLKASDTAMYYCAT24A2HYISSSGSAIYYADSVKGRFTISRDNPKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR26E9HYISSSGSTSYCADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR19E6HAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK22F5HYISSTGSTLYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMDSLRADDAAVYYCTR25C9HYISSSGSAIHYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR26C10HYISSSGSAIHYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMDSLRAEDTAVFYCAR17C8HYISNSGSAMYYADSVKGRFTISRDNARNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR1A10H(a)GFDPAEGKIISAQKFQDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR27G8H(b)NIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCAR表2(接上表)重鏈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(a)LDFSSWFDPWGQGTLVTVSS27G8H(b)EGGYDWNYADYYGMDVWGQGTTVTVSS進(jìn)一步分析了抗體氨基酸序列的相似性。將κ輕鏈分成3組，并產(chǎn)生每組的共有序列。有3種具有λ輕鏈的抗體，沒有一種彼此具有足夠的相似性以形成一組可從中產(chǎn)生共有序列的相關(guān)序列。產(chǎn)生的兩種變體在λ輕鏈中不同。將重鏈分成4組，其中單一重鏈歸類為第5組，并產(chǎn)生1組-4組的共有序列。這些結(jié)果見下表3(a)和表3(b)；共有序列參見序列表。括號中的數(shù)字表示序列表中的SEQIDNO。表3(a)：通過κ輕鏈分組的抗體及相應(yīng)的重鏈表3(b)：通過λ輕鏈分組的抗體與相應(yīng)的重鏈共有序列的CDR邊界(如前所述是可以改變的)如下：第1κ組CDR124-35、CDR251-57、CDR390-99；第2κ組CDR124-34、CDR251-56、CDR389-97；第3κ組CDR124-34、CDR250-56、CDR389-97；第1重鏈組CDR131-35、CDR250-66、CDR399-110；第重2鏈組CDR131-35、CDR250-66、CDR399-107；第3重鏈組CDR131-35、CDR250-66、CDR399-114；第4重鏈組CDR131-35、CDR250-66、CDR399-114。實施例3：功能測定法本實施例描述了用于表征抗體的各種測定法。HUT78粘附測定法。將96孔板用磷酸緩沖液(pH9.0)中稀釋的20μg/mLMAdCAM-1(或相同濃度的作為包被對照的人IgG1)于4℃包被過夜，制備包被板(例如Costar?336896孔板；CorningIncorporatedLifeSciences，LowellMA)。除去包被液，將板用100μL3%BSA/PBS封閉，在室溫下溫育1小時或更久。將板用Hanks平衡鹽溶液(HBSS)洗滌3次。使生長至匯合的HUT78細(xì)胞(顯示具有誘導(dǎo)物/輔助細(xì)胞表型的成熟T細(xì)胞系的特征的人T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系；ATCCTIB161)沉淀，用HBSS洗滌3次，然后以適當(dāng)濃度重新懸浮于HBSS中，得到約30,000個細(xì)胞/50μL。將受測抗體稀釋至終濃度的兩倍，然后1:4滴定到含有1%BSA與1mMMn2+的無鈣、無鎂HBSS中。將50μL抗體滴定液或?qū)φ占尤隫EE底板的各孔中，接著加入50μLHUT78細(xì)胞。將細(xì)胞和抗體于4℃溫育30分鐘，然后加入包被板中，于37℃溫育40分鐘。將包被板上的細(xì)胞在室溫HBSS中洗滌3次，洗滌之間將HBSS輕輕彈出。將貼壁細(xì)胞在-20℃下凍融，接著加入100μLCyQuant?染料/裂解緩沖液(一種用于熒光型細(xì)胞定量測定法的緩沖液，該測定法可用于高通量篩選MolecularProbes?，LifeTechnologiesCorporation，Carlsbad，CA)。在485nm激發(fā)和530nm發(fā)射下定量測定各孔的熒光信號，例如采用TecanGENiosPro，多標(biāo)記微板讀數(shù)器(TecanGroupLtd.M?nnedorf,Switzerland)。人CD4+細(xì)胞粘附測定法板用100μL/孔人MAdCAM-1-Fc或人IgG(3μg/ml/20mM磷酸緩沖液(pH9.0)、130mMNaCl)于4℃包被過夜，然后用200μL/孔封閉試劑(3%牛血清白蛋白/PBS)于室溫封閉至少2小時。然后將板用粘附緩沖液(30mMHEPES(pH7.4)、120mMNaCl、1mMMnCl2、10μg/ml人IgG)洗滌3次。制備系列稀釋的待測抗體，加入板中(35μL/孔)；加入分離的CD4+T細(xì)胞(250,000個細(xì)胞/35μL/孔)后，使板于4℃溫育2小時。用粘附緩沖劑洗滌3次后，將板在-20℃下溫育過夜。加入檢測試劑(100μL.孔CyQUANT?試劑；LifeTechnologiesCorporation，Carlsbad，CA)，使板于37℃溫育45分鐘。通過在485nm激發(fā)和530nm發(fā)射下讀取熒光，求出結(jié)果。結(jié)合人CD4+CD45RA記憶T細(xì)胞的EC50將人外周血單核細(xì)胞(PBMC；新鮮的或凍融的，例如在含2%FBS的磷酸緩沖鹽溶液中)洗滌后，在含或不含1mMMnCl2(取決于實驗；Mn2+對于MAdCAM-1結(jié)合是必需的)時，重新懸浮于含1%BSA的HEPES緩沖液(30mMHEPES+140nMNaCl)中，并接種在96孔板(106個細(xì)胞/孔)中。將細(xì)胞在冰上與10μg/ml人IgG一起溫育30分鐘以阻斷非特異性結(jié)合。然后將細(xì)胞在冰上與系列稀釋的生物素化抗α4β7抗體一起在96孔板上溫育1小時，接著加入1:100稀釋的鏈霉抗生物素-藻紅蛋白(PE；JacksonImmunoResearchLaboratoriesInc.，WestGrove，PA)、4μLCD3-PacificBlue、CD4-PerCP-Cy5.5和CD45RA-異硫氰酸熒光素(FITC)(BDBiosciences，SanJoseCA)至終體積100μL，再在冰上溫育1小時。細(xì)胞用HEPES緩沖液(分別含或不含MnCl2)洗滌2次，然后在200μLHEPES緩沖液加0.5%低聚甲醛(再次分別含或不含MnCl2)中固定。采用熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)，例如BDtmLSRII臺式流式細(xì)胞儀(BDBiosciences，SanJoseCA)，測定結(jié)合CD4+CD45RA記憶T細(xì)胞的陽性α4β7抗體百分比。EC50定義為CD4CD45RA記憶細(xì)胞上50%的α4β7部位被α4β7抗體結(jié)合時α4β7抗體的濃度。阻斷MAdCAM-1-Fc與人CD4+CD45RA記憶T細(xì)胞結(jié)合的IC50。將PBMC(如前所述新鮮的或冰凍的)洗滌后，重新懸浮于含1%BSA和1mMMnCl的HEPES緩沖液(30mMHEPES+140nMNaCl)中至107個細(xì)胞/ml的終濃度。如前所述將細(xì)胞封閉；封閉后，將細(xì)胞在冰上與系列稀釋的抗α4β7抗體(或合適的對照)在96孔板上溫育30分鐘，然后再與0.3μg/ml生物素化MAdCAM-1-Fc蛋白溫育1小時。在含1mMMnCl的HEPES緩沖液中洗滌2次后，在終體積為100μL中如前所述將細(xì)胞用1:100稀釋的鏈霉抗生物素-PE、4mLCD3-PacificBlue、CD4-PerCP-Cy5.5和CD45RA-FITC處理。在冰上溫育1小時后，細(xì)胞用含1mMMnCl的HEPES緩沖液洗滌2次，然后在200μL緩沖液加0.5%低聚甲醛中固定。如前所述，通過熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)分析，測定結(jié)合CD4+CD45RA記憶T細(xì)胞的陽性MAdCAM-1-Fc百分比。IC50定義為MAdCAM-1-Fc與CD4CD45RA記憶細(xì)胞上的α4β7結(jié)合被抑制達(dá)50%時α4β7抗體的濃度。活化T細(xì)胞上由視黃酸誘導(dǎo)的α4β7在存在或缺乏視黃酸(1000nM)時，將分離的人PBMC用抗CD3(板結(jié)合的，5μg/ml)、人IL-2(20ng/ml)激活7天?；罨?xì)胞用染色緩沖液(PBS加0.5%BSA和1mMMnCl)洗滌2次，并與100μg/ml人Ig一起溫育30分鐘以阻斷非特異性結(jié)合。先將細(xì)胞在冰上在系列稀釋的抗α4β7抗體中溫育30分鐘，然后再用1μg/ml生物素化MAdCAM-1-Fc染色30分鐘。用染色緩沖液洗滌2次后，細(xì)胞用鏈霉抗生物素-PE(1:1000)染色30分鐘。通過熒光活化細(xì)胞分選術(shù)，例如用FACSCaliburtm(BDBiosciences，SanJoseCA)，對細(xì)胞進(jìn)行了分析。以這種方式制備的細(xì)胞可用于其它實驗，例如競爭測定法。競爭測定法基本上按照Fiscella等人(NatureBiotechnology21:302-307；2003)所述，通過微體積熒光測定技術(shù)即FMAT，還測定了α4β7抗體與其它抗α4β7和/或β7抗體競爭結(jié)合表達(dá)α4β7的細(xì)胞的能力。簡單地說，例如通過將細(xì)胞用編碼α4的核酸和表達(dá)β7的核酸瞬時共轉(zhuǎn)染，制備了表達(dá)高水平α4β7的細(xì)胞。以相似方式，采用適于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和方案，制備了穩(wěn)定的細(xì)胞系。例如通過FACS，使用抗α4抗體、抗β7抗體和/或配體(即MAdCAM-1，例如MAdCAM-1-Fc融合蛋白)，篩選出轉(zhuǎn)染細(xì)胞。細(xì)胞可進(jìn)行幾個循環(huán)的分選和選擇，以得到具有可再現(xiàn)的高α4β7表達(dá)水平的克隆細(xì)胞系。與S250N突變體結(jié)合還評價了抗體識別β7鏈中的S250N點(diǎn)突變的能力，已知所述突變對于ACT-1結(jié)合十分關(guān)鍵(JImmunol.159:1497，1997)。按照與對制備表達(dá)高水平α4β7的細(xì)胞先前所述相似的方式，制備瞬時共表達(dá)在β鏈中具有S250N突變的α4β7的293細(xì)胞(ref)。簡單來講，使用細(xì)胞解離溶液并以1000rpm離心5分鐘來收集用于分析的共1x106個轉(zhuǎn)染細(xì)胞。然后在振蕩的同時將細(xì)胞用0.5ml封閉緩沖液(1%山羊血清/PBS)于4℃封閉30分鐘至1小時。對于MAdCAM-1-Fc染色，在振蕩的同時將細(xì)胞在Mn2+緩沖液(1mMMnCl2/30mMHEPES+1%山羊血清)中于4℃溫育1小時。然后將細(xì)胞以1000rpm/5分鐘離心，加入0.5ml新鮮的封閉緩沖液以及10μg/ml第一抗體，接著在振蕩的同時于4℃溫育30分鐘至1小時。用4ml冷的PBS(每次洗滌)洗滌2次后，加入含第二抗體(即山羊-抗IgG-藻紅蛋白-綴合抗體；SouthernBiotech，1:250稀釋或0.1μg/106個細(xì)胞)的0.5ml封閉緩沖液，將細(xì)胞于4℃溫育20-30分鐘。細(xì)胞用4ml冷的PBS洗滌最后一次，然后重新懸浮于0.5mlFACS緩沖液用于分析。與單核苷酸多態(tài)性(SNP)結(jié)合對于α4亞基的SNP分析，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，使來自代表不同種族群的90名個體(180個單倍體基因組)的α4基因外顯子1-28擴(kuò)增，隨后測序。在α4基因的編碼區(qū)鑒定出3種候選SNP，3種之一引起氨基酸改變(Arg878Gln)。同樣對于β7亞基SNP分析，將來自代表不同種族群的90名個體(180個單倍體基因組)的β7基因外顯子2-15的編碼區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，隨后測序。鑒定出3種SNP，其中2種引起氨基酸改變。將本實驗室的SNP分析數(shù)據(jù)與NCBI數(shù)據(jù)庫(NCBI：國立生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)，國立衛(wèi)生研究院(NationalInstitutesofHealth，NIH)下國立醫(yī)學(xué)圖書館(NationalLibraryofMedicine，NLM)的一個部門)中的信息進(jìn)行了比較。在本實驗室SNP和公共數(shù)據(jù)庫兩者中，僅在α4亞基中的Gln878Arg產(chǎn)生的A/G突變以高頻率發(fā)生－分別為20%或30%。其它SNP以低頻率發(fā)生。該信息概括于下表4中。表4：人β7和α4的SNP的頻率制備了在α4和β7兩者的胞外結(jié)構(gòu)域中代表改變氨基酸的SNP(a4b7(E97V)、a4b7(R213S)、a4b7(G629S、a4(V824A)b7、a4(Q878R)b7)的點(diǎn)突變體構(gòu)建體。將各點(diǎn)突變體構(gòu)建體與野生型配偶體表達(dá)構(gòu)建體一起轉(zhuǎn)染至293細(xì)胞。轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞先用1μg/ml人IgG或抗α4β7抗體染色，用PBS洗滌，再用藻紅蛋白綴合的第二抗體山羊-抗人IgG染色。用PBS洗滌后，通過熒光活化細(xì)胞分選術(shù)，例如用FACSCaliburtm(BDBiosciences，SanJoseCA)，對細(xì)胞進(jìn)行了分析。各抗體染色的熒光染色強(qiáng)度(幾何平均值)見下表5。表5：與SNP結(jié)合野生型E97VR213SG629SV824AQ878RIgG8777771A101221353180102703A51241353180110712F1212913437801127318A11921053063825622B2971085865855826H3931064962825527G81021165968885826G2991133864865817C893964958745119G6941084659674625C99610633597751這些結(jié)果表明受測試的所有抗體均與已知的α4β7的SNP結(jié)合。幾種不同測定法中各種α4β7異二聚體特異性抗體的活性比較見下表6。表6：抗α4β7的抗體的表征Soler等人報道了稱為vedolizumab的人源化抗α4β7抗體的結(jié)合特異性(JPharmacolExpTher330:864；2009)。據(jù)報道，這種抗體對記憶CD4+T淋巴細(xì)胞的EC50為0.042μg/ml(42ng/ml)。Vedolizumab還抑制可溶性MAdCAM-1與α4β7hi記憶T細(xì)胞結(jié)合，IC50為0.034μg/ml(34ng/ml)。相比之下，表6所示許多抗體對記憶T細(xì)胞(即CD4+CD45RA-細(xì)胞)的EC50小于10ng/ml，全部的EC50均小于35ng/ml(在本測定法中，所有的EC50均大于0.1ng/ml)。另外，在MAdCAM競爭測定法中，表6所示幾種抗體的IC50小于10ng/ml，許多抗體的IC50小于30ng/ml(在本測定法中，所有抗體的IC50也大于0.1ng/ml)。雖然Soler等人未提到vedolizumab與α4β7的S250N突變體結(jié)合的能力，但是已知從中得到vedolizumab的鼠抗體ACT-1不能夠結(jié)合S250N突變體(Tidswell等，JImmunol159:1497；1997)，而且按照Soler等人所述，vedolizumab和ACT-1具有相同的抗原特異性。因此，與表6所示幾種抗體相比，vedolizumab也不會結(jié)合S250N突變體。實施例4：其它分析按照下述方法，選擇前述功能測定法中具有不同性質(zhì)的若干代表性抗體用于進(jìn)一步的分析。與人a4b7的結(jié)合親和力為了測定人抗α4β7抗體的細(xì)胞結(jié)合親和力，可采用測定溶液相中的結(jié)合事件的動力排斥測定法(KineticExclusionAssay)計算平衡解離常數(shù)Kd?；旧习碭ie等，J.Imm,Methods304:1(2005)和Rathanaswami等,Anal.Biochem.373:52(2008)之前描述，使用KinExA?技術(shù)(SapidyneInstruments，Boise，ID)。簡單來說，將表達(dá)人α4β7的HUT78細(xì)胞從約506個細(xì)胞/mL以1:3滴定至約400個細(xì)胞/mL，然后用終濃度為2pM或30pM的mAb2F12或18A11以及30pM或500pM的17C8于4℃平衡18小時。用KinExA?技術(shù)，使上清液通過用山羊抗人Fc預(yù)包覆的PMMA珠粒，并用山羊抗人(H+L)Cy5檢測，測定了平衡時上清液中余留的游離抗體(基本上如Rathanaswami等,BiochemBiophysResearchCommun:1004(2005)中的描述)。應(yīng)用KinExA?軟件，通過“n-曲線分析”得到平衡解離常數(shù)(Kd)，“n-曲線分析”將所有給定曲線同時與單一Kd值擬合(Rathanswami等,2005和Xie等，同上)；結(jié)果見下表7。表7：抗體的結(jié)合親和力這些抗體表明，在KinExA?測定法中，Kd大于0.05pM，但小于80pM、小于15pM或小于5pM。PK/PD特征在靜脈內(nèi)(IV；5mg/kg)或皮下(SC；0.5或5mg/kg)給藥后，在雄性食蟹猴中對3種完全人抗α4β7抗體進(jìn)行了單劑量藥代動力學(xué)(PK)和藥效學(xué)(PD)研究。觀察到在5mg/kg靜脈內(nèi)給藥后在中心循環(huán)內(nèi)類似的初始PK暴露(C0；零時間的濃度)和分布。在皮下給藥后，對于所有3種抗體，在0.5-5mg/kg皮下劑量范圍內(nèi)，Cmax(血清中的最大濃度)和AUC(濃度-時間曲線下面積)兩者均與劑量成比例。對于3種受測抗體，皮下給藥后的絕對生物利用度的范圍為44-68%。用PE-綴合的抗α4β7抗體27G8定量測定了在抗體治療之前和之后T細(xì)胞上的游離α4β7。在抗體治療之前和之后，通過在10mg/ml受測抗體存在時，用PE-綴合的抗α4β7抗體27G8染色控制背景水平。通過與各抗體治療前相比游離α4β7部位的百分比確定部分飽和度。使用CD4-PerCP、CD99-APC和CD28-FITC區(qū)分幼稚中心記憶細(xì)胞和效應(yīng)記憶細(xì)胞。研究表明幼稚T細(xì)胞上的α4β7部分飽和，因為食蟹猴記憶細(xì)胞群中的變化性和測定法靈敏度有限。對于18A11治療，所有3個劑量組從第1天到第14天均保持飽和。在第29天，所有3組都失去覆蓋。在2F12和17C8兩個治療中，在第14天，在低劑量(0.5mg/Kg)組觀察到失去目標(biāo)覆蓋。除游離α4β7檢測以外，還通過在缺乏或存在10mg/ml抗體時用PE-綴合的抗人抗體A35染色測定了目標(biāo)飽和度。將樣品與10mg/ml抗α4β7抗體預(yù)溫育，接著用抗人抗體染色來估算總的α4β7部位。用被各樣品的抗α4β7抗體占據(jù)的總α4β7部位的百分比求出目標(biāo)飽和度。3種完全人抗α4β7抗體表明，在靜脈內(nèi)給予5mg/kg后的14天內(nèi)，α4β7飽和度平均保持在81-100%。采用直接Emax模型，對血清抗α4β7抗體濃度和相應(yīng)的α4β7受體飽和度數(shù)據(jù)進(jìn)行PK/PD建模。模型估算的PD參數(shù)的Emax(最大α4β7受體飽和度)為92%、EC50(達(dá)到50%Emax時的抗α4β7抗體濃度)為52ng/mL，E0(初始α4β7受體飽和度)為18%。在食蟹猴中，對于使α4β7受體飽和，所有3種抗體均具有潛在的體內(nèi)PD作用，平均t1/2為約3-5天。