亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

多特異性FAB融合蛋白及其使用方法與流程

文檔序號:12846015閱讀:來源:國知局
多特異性FAB融合蛋白及其使用方法與流程

技術特征:
1.多特異性Fab融合蛋白,其包含:能與CD3ε的N端結合的Fab片段;與所述Fab片段中VL的N端連接的融合部分A;和與所述Fab片段中VH的N端連接的融合部分B;其中所述Fab片段能結合CD3ε的第1-27位氨基酸內的表位,其中融合部分A包含第一結合結構域且融合部分B包含第二結合結構域,所述第一結合結構域和所述第二結合結構域為抗體的抗原結合片段,且所述抗原結合片段為scFv;所述第一結合結構域能結合腫瘤抗原,所述第二結合結構域能結合腫瘤抗原,且其中:a.所述Fab片段包含:i.包含分別如SEQIDNO:26-28所示的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(VL),免疫球蛋白輕鏈恒定區(qū)(CL),如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH),以及免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)1(CH1);或ii.包含分別如SEQIDNO:23-25所示的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列的VH,CH1,如SEQIDNO:56所示的氨基酸序列的VL,以及CL;其中所述CL區(qū)和CH1區(qū)任選通過二硫鍵連接;b.所述融合部分A的C端與所述Fab片段的VL結構域的N末端共價連接;且c.所述融合部分B的C端與所述Fab片段的VH結構域的N末端共價連接;且d.第一接頭位于所述融合部分A和所述Fab片段的VL結構域之間;并且e.第二接頭位于所述融合部分B和所述Fab片段的VH結構域之間;且所述第一接頭和所述第二接頭是長度為0-20個氨基酸的肽接頭。2.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其包含SEQIDNO:96和SEQIDNO:98的氨基酸序列。3.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述VH選自SEQIDNO:34、38、42、46、50和54所示的任一氨基酸序列。4.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中VL選自SEQIDNO:56、58、62、66和70所示的任一氨基酸序列。5.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其包含選自SEQIDNO:84、90、96和100的任一氨基酸序列;和選自SEQIDNO:32、60、64、68和72的任一氨基酸序列。6.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其包含選自SEQIDNO:86、92、98和102的任一氨基酸序列;和選自SEQIDNO:30、36、40、44、48和52的任一氨基酸序列。7.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述融合部分A和所述融合部分B序列相同。8.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述融合部分A和所述融合部分B包含不同的序列。9.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一結合結構域和所述第二結合結構域能結合相同的細胞表面抗原。10.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一結合結構域和所述第二結合結構域能結合不同的細胞表面抗原。11.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一結合結構域和所述第二結合結構域能結合相同的表位。12.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一結合結構域和所述第二結合結構域能結合不同的表位。13.如權利要求9所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一結合結構域和所述第二結合結構域能結合選自以下的靶標:FcγRIIb、CD28、CTLA-4、FAS、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、GITR、LTβR、TLR、TRAIL受體1、TRAIL受體2、CD28、CEA、PSMA、BCMA、CAIX、cMet、EGFR1、Her2/neu、ErbB3、EpCAM、葉酸受體、Ephrine受體、CD19、CD20、CD30、CD33、CD40、CD37、CD38和CD138。14.如權利要求13所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一結合結構域和所述第二結合結構域選自SEQIDNO:78、88和94所示的任一氨基酸序列。15.如權利要求10所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一結合結構域和所述第二結合結構域能結合不同的靶標,所述靶標選自:FcγRIIb、CD28、CTLA-4、FAS、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、GITR、LTβR、TLR、TRAIL受體1、TRAIL受體2、CD28、CEA、PSMA、BCMA、CAIX、cMet、EGFR1、Her2/neu、ErbB3、EpCAM、葉酸受體、Ephrine受體、CD19、CD20、CD30、CD33、CD40、CD37、CD38和CD138。16.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述抗原結合片段是人源化的。17.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述抗原結合片段來源于小鼠、大鼠或兔的單克隆抗體。18.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述抗原結合片段來源于全人抗體。19.如權利要求18所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述全人抗體產生自噬菌體展示、酵母展示或人抗體基因的轉基因小鼠。20.如權利要求1所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述抗原結合片段:1)包含分別如SEQIDNos:139-144所示的VHCDR和VLCDR;2)包含分別如SEQIDNos:145-150所示的VHCDR和VLCDR;3)包含SEQIDNos:78、88和94的任一氨基酸序列所示的scFv中存在的VH;4)包含SEQIDNos:78、88和94的任一氨基酸序列所示的scFv中存在的VL;或5)包含選自SEQIDNO:78、88和94所示的任一氨基酸序列的ScFv。21.多特異性Fab融合蛋白,其包含:能與CD3ε的N端結合的Fab片段;與所述Fab片段中VL的N端連接的融合部分A;和與所述Fab片段中VH的N端連接的融合部分B;其中所述Fab片段能結合CD3ε的第1-27位氨基酸內的表位,其中融合部分A包含第一結合結構域,且其中融合部分B包含第二結合結構域,其中所述第一和第二結合結構域結合相同的細胞表面抗原,且其中所述第一和第二結合結構域包含抗體的抗原結合片段,所述抗原結合片段包含分別如SEQIDNO:145-150所示的VHCDR1-3和VLCDR1-3,且其中:a.所述Fab片段包含:i.包含分別如SEQIDNO:26-28所示的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(VL),以及免疫球蛋白輕鏈恒定區(qū)(CL),和ii.包含分別如SEQIDNO:23-25所示的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH),以及免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)1(CH1);其中所述CL區(qū)和CH1區(qū)任選通過二硫鍵連接;和b.所述融合部分A的C端與所述Fab片段的VL結構域的N末端共價連接;且c.所述融合部分B的C端與所述Fab片段的VH結構域的N末端共價連接;且d.第一接頭位于所述融合部分A和所述Fab片段的VL結構域之間;并且e.第二接頭位于所述融合部分B和所述Fab片段的VH結構域之間;且所述第一接頭和所述第二接頭是長度為0-20個氨基酸的肽接頭。22.多特異性Fab融合蛋白,其包含:能與CD3ε的N端結合的Fab片段;與所述Fab片段中VL的N端連接的融合部分A;和與所述Fab片段中VH的N端連接的融合部分B;其中所述Fab片段能結合CD3ε的第1-27位氨基酸內的表位,其中融合部分A包含第一結合結構域,且其中融合部分B包含第二結合結構域,其中所述第一和第二結合結構域結合相同的細胞表面抗原,且其中所述第一和第二結合結構域為如SEQIDNO:94所示的氨基酸序列且其中:a.所述Fab片段包含:i.包含分別如SEQIDNO:26-28所示的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(VL),以及免疫球蛋白輕鏈恒定區(qū)(CL),和ii.包含分別如SEQIDNO:23-25所示的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH),以及免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)1(CH1);其中所述CL區(qū)和CH1區(qū)任選通過二硫鍵連接;和b.所述融合部分A的C端與所述Fab片段的VL結構域的N末端共價連接;且c.所述融合部分B的C端與所述Fab片段的VH結構域的N末端共價連接;且d.第一接頭位于所述融合部分A和所述Fab片段的VL結構域之間;并且e.第二接頭位于所述融合部分B和所述Fab片段的VH結構域之間;且所述第一接頭和所述第二接頭是長度為0-20個氨基酸的肽接頭。23.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述Fab片段與CD3的結合被所述融合部分A和融合部分B導致的空間位阻所抑制。24.如權利要求23所述的多特異性Fab融合蛋白,其中在不存在所述第一結合結構域和所述第二結合結構域與細胞表面抗原結合的情況下所述Fab片段與CD3的結合,與存在所述第一結合結構域和所述第二結合結構域與細胞表面抗原結合的情況下所述Fab片段與CD3的結合相比,降低了50%-90%。25.如權利要求23所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述Fab片段與CD3的結合與沒有所述融合部分A和所述融合部分B的相同Fab片段的結合相比,減少了50%-90%。26.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)類型選自α、δ、ε、γ和μ。27.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述免疫球蛋白重鏈來源于IgG抗體。28.如權利要求27所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述IgG抗體的亞型選自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。29.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述免疫球蛋白輕鏈VL和CL選自免疫球蛋白κ輕鏈和免疫球蛋白λ輕鏈。30.如權利要求1或21所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述融合部分A包含含有scFv抗原結合結構域的第一結合結構域。31.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭包含蛋白酶不可切割的序列。32.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第二接頭包含蛋白酶不可切割的序列33.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭包含蛋白酶可切割的序列。34.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第二接頭包含蛋白酶可切割的序列。35.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭和所述第二接頭是可切割的。36.如權利要求21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭和所述第二接頭是可切割的,且其中若所述第一接頭被切割,則所述Fab片段與所述CD3ε的結合是可檢測到的。37.如權利要求21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭和所述第二接頭是可切割的,且其中若所述第二接頭被切割,則所述Fab片段與所述CD3ε的結合是可檢測到的。38.如權利要求21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭和所述第二接頭是可切割的,且其中若所述第一接頭和所述第二接頭均被切割,則所述Fab片段與所述CD3ε的結合是可檢測到的。39.如權利要求35所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭和所述第二接頭包含可被相同蛋白酶切割的蛋白酶可切割的序列。40.如權利要求35所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭和所述第二接頭包含可被不同蛋白酶切割的蛋白酶可切割的序列。41.如權利要求33所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述蛋白酶可切割的序列包含絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶或基質金屬蛋白酶(MMP)可切割的序列。42.如權利要求41所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述蛋白酶可切割的序列為MMP可切割的序列。43.如權利要求42所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述基質金屬蛋白酶可切割的序列為基質金屬蛋白酶-1(MMP-1)、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)或基質金屬蛋白酶14(MMP-14)可切割的序列。44.如權利要求34所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述蛋白酶可切割的序列包含絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶或基質金屬蛋白酶(MMP)可切割的序列。45.如權利要求44所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述蛋白酶可切割的序列為MMP可切割的序列。46.如權利要求45所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述基質金屬蛋白酶可切割的序列為基質金屬蛋白酶-1(MMP-1)、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)或基質金屬蛋白酶14(MMP-14)可切割的序列。47.如權利要求1,21或22所述所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭和/或所述第二接頭的長度為1-10個氨基酸。48.如權利要求47所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭和/或所述第二接頭包含GlyArgAla。49.如權利要求47所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述第一接頭和/或所述第二接頭包含SEQIDNO:133所示的氨基酸序列。50.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述Fab是人源化的。51.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述CL區(qū)和所述CH1區(qū)通過二硫鍵連接。52.如權利要求1,21或22所述的多特異性Fab融合蛋白,其中所述CL區(qū)包含杵狀結構或臼狀結構突變,并且所述CH1區(qū)包含對應的杵狀結構或臼狀結構突變得使所述CL區(qū)和CH1區(qū)是穩(wěn)定相互作用的。53.分離的多核苷酸,其編碼權利要求1,21或22所述中所述的多特異性Fab融合蛋白。54.表達載體,其包含權利要求53所述的分離的多核苷酸。55.分離的宿主細胞,其包含權利要求54所述的載體。56.表達多特異性Fab融合蛋白的方法,其包括在分離的多核苷酸表達所編碼的多特異性Fab融合蛋白的條件下培養(yǎng)權利要求55所述的宿主細胞。57.藥物組合物,其包含權利要求1,21或22所述中所述的多特異性Fab融合蛋白和藥學上可接受的載體。58.權利要求57所述的藥物組合物在制備用于治療有需要的受試對象的癌癥的藥物中的用途,其中所述癌癥與所述多特異性Fab融合蛋白可結合的抗原相關。
當前第2頁1 2 3 
網友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1