1號(hào)染色體替換野生小家鼠品系C57BL/6.棗莊2-Chr1的構(gòu)建技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明屬小鼠品系的構(gòu)建領(lǐng)域，特別是涉及1號(hào)染色體替換野生小家鼠C57BL/6.棗莊2-Chr1的構(gòu)建。

背景技術(shù)：
實(shí)驗(yàn)小家鼠品系遺傳多樣性缺乏會(huì)對(duì)復(fù)雜性狀研究造成較大的障礙，這主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面：首先，群體中各個(gè)基因座位的等位基因數(shù)量較少，在針對(duì)多基因相關(guān)性狀的研究時(shí)，會(huì)由于基因背景的類同而導(dǎo)致部分性狀相關(guān)基因信息的遺漏；其次，基因組連鎖不平衡程度較大，這對(duì)性狀相關(guān)基因的初步定位有利，但對(duì)精細(xì)定位造成很大的困難，導(dǎo)致耗費(fèi)大量的時(shí)間和個(gè)體。野生小家鼠生存環(huán)境復(fù)雜多樣，且經(jīng)歷了漫長的進(jìn)化，小鼠遺傳多樣性的表現(xiàn)就是表型性狀豐富多樣：(1)野生小家鼠群體中存在更豐富的性狀差異，如野生小家鼠與實(shí)驗(yàn)小鼠相比對(duì)病原體感染的易感性具有明顯差異。由于實(shí)驗(yàn)小鼠生存的環(huán)境使之躲避了病原體的侵襲，野生小家鼠則經(jīng)歷了選擇，因此可以在野生小家鼠群體中找對(duì)特定病原體具有抗性的個(gè)體或群體，有些野生小家鼠群體本身就是某些病原體的天然宿主，這對(duì)研究人類病原體感染的免疫遺傳學(xué)機(jī)制具有重大意義。(2)野生小家鼠豐富的遺傳多樣性也體現(xiàn)在基因相互作用上。例如將野生小家鼠與實(shí)驗(yàn)小鼠雜交可出現(xiàn)各種基因相互作用，在進(jìn)化上分化幾百萬年的基因產(chǎn)物表達(dá)于同一個(gè)體中，不可避免會(huì)發(fā)生強(qiáng)烈的基因相互作用。中國野生小家鼠大致分為兩個(gè)亞種，即北方的musculus亞種及南方的castaneus亞種，棗莊位于山東，位于長江以北。通過DNA測序技術(shù)，對(duì)F1代小鼠1號(hào)染色體進(jìn)行連鎖不平衡分析得知，棗莊2(來源自山東棗莊的野生小家鼠)屬于M.m.musculus和castaneus混合亞種，其野生小家鼠毛色為灰色，小家鼠與人類生活密切相關(guān)，隨著交通的發(fā)展和人員的流動(dòng)，有部分南方亞種小鼠被帶入北方，因?yàn)闂椙f在遠(yuǎn)離長江流域，因此只含有較少的castaneus亞種基因。C57BL/6是第一個(gè)高質(zhì)量的小鼠基因組序列草圖是通過C57BL/6繪制的。其基因信息明確、生育力強(qiáng)，廣泛應(yīng)用于重大疾病的研究。鑒于C57BL/6小鼠基因信息明確，有必要以之作為背景，通過染色體替換試驗(yàn)，來研究棗莊2小鼠各染色體及其上的基因的功能。目前對(duì)于棗莊2小鼠的研究較少，其遺傳學(xué)特性較為不清楚。因此，克服技術(shù)難度以獲得引進(jìn)了棗莊2小鼠染色體的C57BL/6小鼠品系是研究的關(guān)鍵。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供1號(hào)染色體替換野生小家鼠品系C57BL/6.棗莊2-Chr1的構(gòu)建。在本發(fā)明的第一方面，提供一種1號(hào)染色體替換實(shí)驗(yàn)小鼠品系C57BL/6.棗莊2-Chr1的建立方法，所述方法包括：(1)以棗莊2品系雄性小鼠作為父本、C57BL/6品系雌性小鼠作為母本進(jìn)行雜交，獲得F1代小鼠；(2)將F1代雌性小鼠與C57BL/6品系雄性小鼠雜交，獲得回交一代小鼠；該雄性回交小鼠中，Y染色體和線粒體DNA已被替換為C57BL/6品系來源的；使用多核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)鑒定雄性回交小鼠的1號(hào)染色體，選擇1號(hào)染色體多核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串聯(lián)重復(fù)序列位點(diǎn)鑒定選擇到的雄性回交小鼠，選擇1號(hào)染色體短串聯(lián)重復(fù)序列位點(diǎn)鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的回交小鼠；(3)將選擇到的雄性回交小鼠與C57BL/6品系雌性小鼠雜交，獲得下一代回交小鼠，該雄性回交小鼠中，X染色體已被替換為C57BL/6品系來源的；(4)使用多核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)鑒定雄性回交小鼠的1號(hào)染色體，選擇1號(hào)染色體多核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串聯(lián)重復(fù)序列位點(diǎn)鑒定選擇到的雄性回交小鼠，選擇1號(hào)染色體短串聯(lián)重復(fù)序列位點(diǎn)鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；(5)重復(fù)步驟(3)～(4)5-50次；從而獲得染色體替代動(dòng)物品系，其以C57BL/6品系小鼠為背景，且其1號(hào)染色體被棗莊2品系小鼠的1號(hào)染色體替換。在另一優(yōu)選例中，所述的1號(hào)染色體的多核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)包括：rs30719154，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：3052360；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T；rs31426703，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：12720994；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T；rs32086848，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：17643006；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs31928308，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：28659508；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；rs32139742，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：40806614；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs31336640，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：47136503；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs6297658，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：57382018；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；rs6302815，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：69463837；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；rs30146639，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：76144374；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs32011713，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：79917356；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs6212353，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：84131501；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs32662004，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：98333575；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs32495825，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：124737843；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs31580048，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：133446374；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs30694738，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：142191205；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；rs30902647，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：150127783；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C；rs3678938，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：158391632；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs30776510，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：168028380；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；rs32297231，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：183890447；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；rs31145145，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：192018789；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T；rs32357522，其在1號(hào)染色體上所處位置為chr1：192018789；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T。在另一優(yōu)選例中，通過SNP位點(diǎn)引物PCR結(jié)合連接酶檢測反應(yīng)來確定1號(hào)染色體多核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)鑒定結(jié)果。在另一優(yōu)選例中，所述的1號(hào)染色體的短串聯(lián)重復(fù)序列位點(diǎn)包括：D1MIT64，其在1號(hào)染色體上所處位置為3.7cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異20bp，棗莊2品系小鼠C57BL/6品系小鼠比少10個(gè)2bp堿基重復(fù)；D1MIT236，其在1號(hào)染色體上所處位置為25.7cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異16bp，棗莊2品系小鼠C57BL/6品系小鼠比少8個(gè)2bp堿基重復(fù)；D1MIT303，其在1號(hào)染色體上所處位置為32cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異20bp，棗莊2品系小鼠C57BL/6品系小鼠比多10個(gè)2bp堿基重復(fù)；D1MIT49，其在1號(hào)染色體上所處位置為44cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異6bp，棗莊2品系小鼠C57BL/6品系小鼠比少3個(gè)2bp堿基重復(fù)；D1mit445，其在1號(hào)染色體上所處位置為58cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異14bp，棗莊2品系小鼠C57BL/6品系小鼠比多7個(gè)2bp堿基重復(fù)；D1MIT506，其在1號(hào)染色體上所處位置為71cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異30bp，棗莊2品系小鼠C57BL/6品系小鼠比多15個(gè)2bp堿基重復(fù)；D1MIT113，其在1號(hào)染色體上所處位置為79cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異14bp，棗莊2品系小鼠C57BL/6品系小鼠比多7個(gè)2bp堿基重復(fù)；D1MIT150，其在1號(hào)染色體上所處位置為81cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異10bp，棗莊2品系小鼠C57BL/6品系小鼠比多5個(gè)2bp堿基重復(fù)；D1MIT209，其在1號(hào)染色體上所處位置為96cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異8bp，棗莊2品系小鼠C57BL/6品系小鼠比多4個(gè)2bp堿基重復(fù)。在本發(fā)明的另一方面，提供用于區(qū)分棗莊2品系小鼠和C57BL/6品系小鼠1號(hào)染色體的試劑盒，其中包括以下引物：rs30719154上游引物SEQIDNO:1和下游引物SEQIDNO:2；rs31426703上游引物SEQIDNO:3和下游引物SEQIDNO:4；rs32086848上游引物SEQIDNO:5和下游引物SEQIDNO:6；rs31928308上游引物SEQIDNO:7和下游引物SEQIDNO:8；rs32139742上游引物SEQIDNO:9和下游引物SEQIDNO:10；rs31336640上游引物SEQIDNO:11和下游引物SEQIDNO:12；rs6297658上游引物SEQIDNO:13和下游引物SEQIDNO:14；rs6302815上游引物SEQIDNO:15和下游引物SEQIDNO:16；rs30146639上游引物SEQIDNO:17和下游引物SEQIDNO:18；rs32011713上游引物SEQIDNO:19和下游引物SEQIDNO:20；rs6212353上游引物SEQIDNO:21和下游引物SEQIDNO:22；rs32662004上游引物SEQIDNO:23和下游引物SEQIDNO:24；rs32495825上游引物SEQIDNO:25和下游引物SEQIDNO:26；rs31580048上游引物SEQIDNO:27和下游引物SEQIDNO:28；rs30694738上游引物SEQIDNO:29和下游引物SEQIDNO:30；rs30902647上游引物SEQIDNO:31和下游引物SEQIDNO:32；rs3678938上游引物SEQIDNO:33和下游引物SEQIDNO:34；rs30776510上游引物SEQIDNO:35和下游引物SEQIDNO:36；rs32297231上游引物SEQIDNO:37和下游引物SEQIDNO:38；rs31145145上游引物SEQIDNO:39和下游引物SEQIDNO:40；rs32357522上游引物SEQIDNO:41和下游引物SEQIDNO:42。在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括以下探針(位點(diǎn)特異性探針)：用于鑒定rs30719154位點(diǎn)的SEQIDNO:43、SEQIDNO:44和SEQIDNO:45所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs31426703位點(diǎn)的SEQIDNO:46、SEQIDNO:47和SEQIDNO:48所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs32086848位點(diǎn)的SEQIDNO:49、SEQIDNO:50和SEQIDNO:51所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs31928308位點(diǎn)的SEQIDNO:52、SEQIDNO:53和SEQIDNO:54所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs32139742位點(diǎn)的SEQIDNO:55、SEQIDNO:56和SEQIDNO:57所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs31336640位點(diǎn)的SEQIDNO:58、SEQIDNO:59和SEQIDNO:60所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs6297658位點(diǎn)的SEQIDNO:61、SEQIDNO:62和SEQIDNO:63所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs6302815位點(diǎn)的SEQIDNO:64、SEQIDNO:65和SEQIDNO:66所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs30146639位點(diǎn)的SEQIDNO:67、SEQIDNO:68和SEQIDNO:69所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs32011713位點(diǎn)的SEQIDNO:70、SEQIDNO:71和SEQIDNO:72所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs6212353位點(diǎn)的SEQIDNO:73、SEQIDNO:74和SEQIDNO:75所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs32662004位點(diǎn)的SEQIDNO:76、SEQIDNO:77和SEQIDNO:78所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs32495825位點(diǎn)的SEQIDNO:79、SEQIDNO:80和SEQIDNO:81所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs31580048位點(diǎn)的SEQIDNO:82、SEQIDNO:83和SEQIDNO:84所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs30694738位點(diǎn)的SEQIDNO:85、SEQIDNO:86和SEQIDNO:87所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs30902647位點(diǎn)的SEQIDNO:88、SEQIDNO:89和SEQIDNO:90所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs3678938位點(diǎn)的SEQIDNO:91、SEQIDNO:92和SEQIDNO:93所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs30776510位點(diǎn)的SEQIDNO:94、SEQIDNO:95和SEQIDNO:96所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs32297231位點(diǎn)的SEQIDNO:97、SEQIDNO:98和SEQIDNO:99所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs31145145位點(diǎn)的SEQIDNO:100、SEQIDNO:101和SEQIDNO:102所示核苷酸序列的探針；用于鑒定rs32357522位點(diǎn)的SEQIDNO:103、SEQIDNO:104和SEQIDNO:105所示核苷酸序列的探針。在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括以下通用探針：SEQIDNO:106和SEQIDNO:107所示核苷酸序列的探針。在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括以下引物：D1MIT64上游引物SEQIDNO:108和下游引物SEQIDNO:109；D1MIT236上游引物SEQIDNO:110和下游引物SEQIDNO:111；D1MIT303上游引物SEQIDNO:112和下游引物SEQIDNO:113；D1mit49上游引物SEQIDNO:114和下游引物SEQIDNO:115；D1mit445上游引物SEQIDNO:116和下游引物SEQIDNO:117；D1MIT506上游引物SEQIDNO:118和下游引物SEQIDNO:119；D1MIT113上游引物SEQIDNO:120和下游引物SEQIDNO:121；D1MIT150上游引物SEQIDNO:122和下游引物SEQIDNO:123；D1MIT209上游引物SEQIDNO:124和下游引物SEQIDNO:125。在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括：PCR擴(kuò)增試劑(包括但不限于：DNA聚合酶，PCR緩沖液，Q-Solution，dNTPmix)；LDR反應(yīng)試劑(包括但不限于：TaqDNA連接酶，LDR反應(yīng)緩沖液)；電泳試劑(如瓊脂糖凝膠電泳試劑)；序列分析軟件(如GeneMapperIDv3.2)；和/或使用說明書。在本發(fā)明的另一方面，提供所述的試劑盒的用途，用于鑒別棗莊2品系小鼠和C57BL/6品系小鼠的1號(hào)染色體。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。附圖說明圖1、回交遺傳效應(yīng)示意圖。按照?qǐng)D示所標(biāo)記，(A)代表非輪回親本棗莊2雄，(B)代表輪回親本C57BL/6雌，(B’)代表C57BL/6雄，(C)代表F1雌，(D)代表C57BL/61.棗莊2-Chr1雄(回交一代)，(E)代表C57BL/62.棗莊2-Chr1雄，(F)代表C57BL/63.棗莊2-Chr1雄，(G)代表C57BL/610.棗莊2-Chr1雄，(H)代表1號(hào)染色體，(I)代表X染色體，(J)代表Y染色體，(K)代表線粒體。圖2、親本(C57BL/6，棗莊2)和染色體替換(C57BL/610.棗莊2-Chr1)小鼠圖。按照?qǐng)D示所標(biāo)記，(A)C57BL/6小鼠，(B)棗莊2小鼠，(C)C57BL/610.棗莊2-Chr1小鼠。具體實(shí)施方式本發(fā)明人經(jīng)過深入的研究，構(gòu)建了一種新的染色體C57BL/6替代實(shí)驗(yàn)小鼠品系，該小鼠品系的遺傳背景以C57BL/6小鼠為主，但其中1號(hào)染色體以棗莊2小鼠為主。本發(fā)明的染色體替換品系可用于研究在相同基因組背景下，由不同的1號(hào)染色體基因組帶來的性狀差異，是采用遺傳學(xué)方法研究染色體基因組功能的有用工具。如本文所用，所述的“單核苷酸多態(tài)性(SingleNucleotidePolymorphisms；SNP)”是指在基因組上單個(gè)核苷酸的變異形成的遺傳標(biāo)記。如本文所用，所述的“簡單重復(fù)序列”又稱為“串聯(lián)重復(fù)序列(ShortTandemRepeats，STR)，或“微衛(wèi)星DNA(MicrosatelliteDNA)”，是指一種短序列，例如一種單、二、三、四、或五-核苷酸，其在某一特定的核苷酸序列中至少重復(fù)一次。如本文所用，所述的“連接酶檢測反應(yīng)(LigaseDetectionReaction，LDR)”是基于在DNA連接酶(如TaqDNA連接酶)的作用下，當(dāng)SNP位點(diǎn)上下游兩條寡核苷酸探針與目的DNA序列完全互補(bǔ)，并且兩條探針之間沒有空隙時(shí)才能發(fā)生連接反應(yīng)這一原理所形成的技術(shù)。通過熒光掃描片段長度，實(shí)現(xiàn)對(duì)SNP位點(diǎn)的檢測。SNP及STR位點(diǎn)對(duì)于采用SNP位點(diǎn)為遺傳標(biāo)記的種群遺傳學(xué)研究，選擇出合適的SNP位點(diǎn)顯得尤為重要。這些SNP位點(diǎn)及附近序列要具有高度特異性；這些SNP位點(diǎn)要存在于合適的位置，以便于制定檢測方案時(shí)引物、探針的設(shè)計(jì)；這些SNP位點(diǎn)之間要有合適的距離，以便于各自分別地被檢測到。因此，合適的SNP位點(diǎn)的選擇需要經(jīng)過大量的分析和試驗(yàn)工作。對(duì)于采用STR位點(diǎn)為遺傳標(biāo)記的種群遺傳學(xué)研究，選擇出合適的STR位點(diǎn)也非常重要。首先，其單元結(jié)構(gòu)要求簡單，因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)復(fù)雜(重復(fù)的堿基多，或者有其非重復(fù)堿基的插入)將會(huì)對(duì)后續(xù)分析帶來一定的偏差；其次，微衛(wèi)星位點(diǎn)所在的位置應(yīng)該遠(yuǎn)離基因編碼區(qū)，如果處于或接近基因編碼區(qū)，這些位點(diǎn)就可能會(huì)在種群的傳代過程中丟失，不能真實(shí)地反映群體的遺傳特征；第三，所選取的微衛(wèi)星位點(diǎn)原始序列要具有高度的特異性。此外，在被研究樣本大小的選擇上也有很高的要求，如果選取的樣本數(shù)量太小，可能會(huì)失去一些等位基因，從而給樣本之間遺傳差異的計(jì)算帶來偏差。因此，合適的STR位點(diǎn)的選擇需要經(jīng)過大量的分析和試驗(yàn)工作。本發(fā)明人經(jīng)過廣泛的研究后，確定了一系列適合于鑒別棗莊2小鼠和C57BL/6小鼠的1號(hào)染色體的SNP位點(diǎn)以及STR位點(diǎn)。這些位點(diǎn)均勻地分布在1號(hào)染色體上，可非常有效地用于鑒別來自兩種小鼠的1號(hào)染色體。針對(duì)所確定的鑒別1號(hào)染色體的SNP位點(diǎn)，本發(fā)明人還從簡化操作過程以及提高分析的準(zhǔn)確性出發(fā)，設(shè)計(jì)了一系列基于“連接酶檢測反應(yīng)”的檢測原理的引物和探針。每一對(duì)引物擴(kuò)增100～400bp之間長度的片段，且該片段中包含一個(gè)SNP位點(diǎn)。針對(duì)每一SNP位點(diǎn)有三條探針，其中一條探針(modify)可與SNP位點(diǎn)的上游(5’端)第1個(gè)堿基及之前的一段序列互補(bǔ)；另兩條探針的3’末端分別帶有一個(gè)與相應(yīng)的SNP位點(diǎn)互補(bǔ)的堿基，該堿基之前的序列可與SNP位點(diǎn)的下游(3’端)第1個(gè)堿基及之后的一段序列互補(bǔ)，并且該兩條探針的長度是不同的，從而便于通過測序儀(如3730測序儀)和序列分析方便地區(qū)分和鑒定。更優(yōu)選地，為了實(shí)現(xiàn)通過一次試驗(yàn)鑒定多個(gè)SNP位點(diǎn)的目的，本發(fā)明人在設(shè)計(jì)探針時(shí)，在保證探針與帶有SNP位點(diǎn)的擴(kuò)增片段互補(bǔ)的前提下，對(duì)探針的長度進(jìn)行調(diào)整，使得針對(duì)各SNP位點(diǎn)的探針在經(jīng)過連接酶反應(yīng)后，獲得的產(chǎn)物長度均不同，這就大大簡化了檢測的程序，一次檢測獲得多個(gè)SNP位點(diǎn)的檢測結(jié)果，無需重復(fù)勞動(dòng)。1號(hào)染色體替換品系的獲得染色體替代品系是將某一小鼠品系的一對(duì)染色體作為供體，另一品系作為受體，兩個(gè)品系雜交后與受體品系回交，借助基因分型挑選出未發(fā)生重組的個(gè)體與受體品系反復(fù)回交，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)特定染色體的替換構(gòu)建出一系列染色體替換品系。利用染色體替代小鼠研究復(fù)雜性狀調(diào)控機(jī)制，在各染色體替代品系中分析性狀表型數(shù)據(jù)可快速將調(diào)控復(fù)雜性狀的QTL定位到特定染色體上。染色體替換品系是迅速大規(guī)模定位性狀疾病染色體調(diào)控區(qū)段的有力手段，針對(duì)每一個(gè)染色體替換品系都可以進(jìn)行廣泛的性狀研究，并能明確該替換染色體是否調(diào)控某一性狀。本發(fā)明人首先通過以棗莊2品系小鼠作為父本、C57BL/6品系小鼠作為母本進(jìn)行雜交，獲得F1代小鼠，之后將F1代雌性小鼠與C57BL/6品系雄性小鼠雜交，獲得回交一代小鼠；該雄性回交小鼠中，Y染色體和線粒體DNA已被替換為C57BL/6品系來源的；這是由于線粒體DNA只能通過雌性動(dòng)物的卵母細(xì)胞進(jìn)行傳代，藉由雌性的C57BL/6小鼠只能傳代C57BL/6品系的線粒體DNA。對(duì)上述獲得的回交小鼠，鑒定其1號(hào)染色體的SNP位點(diǎn)，選擇1號(hào)染色體SNP位點(diǎn)鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的回交小鼠，將選擇到的雄性回交小鼠再用STR進(jìn)行鑒定，將選擇到的雄性回交小鼠與C57BL/6品系雌性小鼠雜交，獲得下一代回交小鼠，該雄性回交小鼠中，X染色體已被替換為C57BL/6品系來源的；選擇到的雄性小鼠與C57BL/6品系雌性小鼠雜交，獲得下一代回交小鼠，使用多核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)和短串聯(lián)重復(fù)序列位點(diǎn)鑒定回交小鼠，鑒定選擇到的雌性小鼠或雄性小鼠都可用于傳代；經(jīng)過多代(一般多于5代，較佳地多于8代，更佳地多于10代)選擇后獲得以C57BL/6品系小鼠為背景且其1號(hào)染色體被棗莊2品系小鼠的1號(hào)染色體替換的染色體替代動(dòng)物品系。作為一個(gè)實(shí)施例，所述方法包括：(i)回交：取棗莊2和C57BL/6兩種品系的小鼠，以棗莊2做父本，C57BL/6做母本雜交得F1代，在雜交F1代雌鼠中，已將棗莊2中的線粒體DNA替換為C57BL/6；將F1代雌鼠與C57BL/6雄鼠雜交得C57BL/61.棗莊2-Chr1，為回交一代，在C57BL/61.棗莊2-Chr1雄鼠中，已將棗莊2中的Y染色體替換為C57BL/6；將F2代雄鼠與C57BL/6母鼠雜交得C57BL/62.棗莊2-Chr1，在C57BL/62.棗莊2-Chr1雄鼠中，已將X染色體替換為C57BL/6，以此輪回雜交十代，得到回交十代的小鼠C57BL/610.棗莊2-Chr1。(ii)鑒定回交：(a)初篩：從NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)中選取平均覆蓋1號(hào)染色體的21個(gè)小鼠SNP(shorttandemrepeat)位點(diǎn)，設(shè)計(jì)引物和探針。以棗莊2、回交和C57BL/6小鼠DNA為模板，鑒定回交小鼠的基因組DNA。(b)復(fù)篩：從NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)中選取小鼠9個(gè)STR(shorttandemrepeat)位點(diǎn)，設(shè)計(jì)STR引物。以棗莊2、回交和C57BL/6小鼠DNA為模板，鑒定回交小鼠的基因組DNA。通過初篩和復(fù)篩，使目標(biāo)染色體的掃描分辨率達(dá)到3.33cM。染色體替代品系將某一野生小家鼠品系的染色體作為供體，本發(fā)明中供體為棗莊2小鼠；另一品系作為受體(本發(fā)明中為C57BL/6小鼠)，兩個(gè)品系雜交后與受體品系回交，通過與輪回親本回交10代后，得到的小鼠1號(hào)染色體來源于棗莊2，其余背景跟受體品系是一致的。棗莊2小鼠和C57BL/6小鼠因遺傳背景不同，導(dǎo)致核苷酸差異，且1號(hào)染色體在所有染色體中最長，將棗莊2小鼠1號(hào)染色體替換到C57BL/6小鼠的基因組背景上，可以對(duì)一些基因的功能進(jìn)行更全面的研究，以及它們是否參與了某些性狀的調(diào)控。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于：(1)1號(hào)染色體替換品系可以研究在相同基因組背景下，由不同的1號(hào)染色體基因組帶來的性狀差異，是用遺傳學(xué)方法研究染色體基因組功能的有用工具。(2)通過選擇特定的SNP位點(diǎn)以及STR位點(diǎn)分別進(jìn)行初篩和復(fù)篩，使目標(biāo)染色體的掃描分辨率達(dá)到約3.33cM，可精確地區(qū)分棗莊2品系小鼠和C57BL/6品系小鼠的染色體，排除1號(hào)染色體發(fā)生重組的動(dòng)物。(3)操作方法簡便，避免重復(fù)操作，成本低廉。(4)本方面將來自棗莊的野生小家鼠與實(shí)驗(yàn)小鼠C57BL/6J雜交構(gòu)建染色體替換系，將豐富多樣的野生小鼠引入實(shí)驗(yàn)，為復(fù)雜性狀的研究提供了新資源。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1、染色體替換小鼠的構(gòu)建辦法棗莊2小鼠的胚胎獲自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，將含有冷凍胚胎的冷凍管從液氮中取出；開蓋，室溫30秒后，加入預(yù)熱的0.25M蔗糖溶液，小心吹打10次，將混合液移到培養(yǎng)皿中，然后用洗卵針將胚胎吸出，放入預(yù)熱的M2溶液中，靜止片刻，用M2溶液清洗5次，移入M16溶液，培養(yǎng)箱培養(yǎng)待用。將胚胎移植到母鼠子宮內(nèi)，發(fā)育成與凍存胚胎基因型相同的小鼠。取棗莊2(在山東棗莊獲取的野生小家鼠)和C57BL/6兩種品系的成年小鼠，以棗莊2做父本，C57BL/6做母本雜交得F1代。將F1代雌鼠與C57BL/6雄鼠雜交，獲得的雄性回交小鼠依次采用SNP和STR進(jìn)行鑒定(后續(xù)實(shí)施例中詳述)；選擇1號(hào)染色體SNP位點(diǎn)鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用STR位點(diǎn)進(jìn)一步鑒定SNP法選擇到的雄性回交小鼠，選擇1號(hào)染色體STR位點(diǎn)鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠，得C57BL/61.棗莊2-Chr1(為回交一代)，在C57BL/61.棗莊2-Chr1雄鼠中，已將Y染色體和線粒體DNA替換為C57BL/6品系來源的(即該代小鼠中，不存在棗莊2中的Y染色體和線粒體DNA)，但1號(hào)染色體為棗莊2品系來源的。將C57BL/61.棗莊2-Chr1雄鼠與C57BL/6母鼠雜交，獲得的雄性小鼠依次采用SNP和STR進(jìn)行鑒定，選擇1號(hào)染色體SNP和STR位點(diǎn)鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；命名為C57BL/62.棗莊2-Chr1，在C57BL/62.棗莊2-Chr1雄鼠中，已將X染色體替換為C57BL/6。采用相同的雜交和篩選方法(每一代均采用的SNP位點(diǎn)和STR位點(diǎn)鑒定方法進(jìn)行1號(hào)染色體的鑒定)，輪回雜交十代，得到回交十代的小鼠，命名為C57BL/610.棗莊2-Chr1，整個(gè)構(gòu)建過程的示意圖如圖1。實(shí)施例2、1號(hào)染色體基因組鑒定一、1號(hào)染色體基因組初篩鑒定針對(duì)棗莊2和C57BL/6兩種品系的小鼠1號(hào)染色體基因序列進(jìn)行比較(序列參照MGI(http://www.informatics.jax.org/)的公開信息)，選擇代表性的、兩種品系不同的SNP位點(diǎn)，這些SNP位點(diǎn)均勻地分布于1號(hào)染色體，且易于設(shè)計(jì)操作。然后對(duì)這些SNP位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物以擴(kuò)增帶有特點(diǎn)SNP位點(diǎn)的序列，將PCR擴(kuò)增片段的范圍設(shè)計(jì)在100～400bp之間，引物設(shè)計(jì)主要借助primer3在線軟件(http://frodo.wi.mit.edu/primer3/)和Oligo6.0程序(MolecularBiologyInsightsInc.,USA)完成。并針對(duì)這些SNP位點(diǎn)設(shè)計(jì)位點(diǎn)特異探針，LDR探針連接產(chǎn)物長度為80～130bp。針對(duì)棗莊2和C57BL/6小鼠的染色體SNP位點(diǎn)如表1。表1、本發(fā)明中選定的SNP位點(diǎn)針對(duì)上述SNP位點(diǎn)設(shè)計(jì)的引物為：(1)rs30719154rs30719154-上游引物：GCTGGGTATGATAGCACATGTTT(SEQIDNO:1)；rs30719154-下游引物：TCTCACAATTGGGGTCAATTACT(SEQIDNO:2)；(2)rs31426703rs31426703-上游引物：GCTCATGTGCACACACACAC(SEQIDNO:3)；rs31426703-下游引物：CGTCTAAAACTCGGGAAGCA(SEQIDNO:4)；(3)rs32086848rs32086848-上游引物：CAGCCCTAATTCTATGTCAATTCTG(SEQIDNO:5)；rs32086848-下游引物：GGAGGCAAGAGGATGGGTAT(SEQIDNO:6)；(4)rs31928308rs31928308-上游引物：CTGCCTGGATAGCTGACACA(SEQIDNO:7)；rs31928308-下游引物：GCCATACTTCCCCATCTGAA(SEQIDNO:8)；(5)rs32139742rs32139742-上游引物：TGGCAGAAGTGATAGCCAGA(SEQIDNO:9)；rs32139742-下游引物：TTATCAGGGGCATTCCTGAG(SEQIDNO:10)；(6)rs31336640rs31336640-上游引物：GCAGAGCAGGAGCAGGTATC(SEQIDNO:11)；rs31336640-下游引物：CAGAACATGGTGGGTGTGAG(SEQIDNO:12)；(7)rs6297658rs6297658-上游引物：TGTCACAAGAAATGCAAGGA(SEQIDNO:13)；rs6297658-下游引物：AACTGAGACGTCTGCCCATC(SEQIDNO:14)；(8)rs6302815rs6302815-上游引物：TGGATCCACTTCATGTGTGC(SEQIDNO:15)；rs6302815-下游引物：GTCCAATTCCCATTGACACC(SEQIDNO:16)；(9)rs30146639rs30146639-上游引物：AAGAACTTGGAGGGCAGGAT(SEQIDNO:17)；rs30146639-下游引物：GAGCCAACTTGTGGAAAGGA(SEQIDNO:18)；(10)rs32011713rs32011713-上游引物：GCAGACATCACTGCCAAGAA(SEQIDNO:19)；rs32011713-下游引物：GAAAACCAACCCAAGAGCAG(SEQIDNO:20)；(11)rs6212353rs6212353-上游引物：AACTGGTTCCCACCTGTCAC(SEQIDNO:21)；rs6212353-下游引物：TGGCATTGAGCTCTCTTGGT(SEQIDNO:22)；(12)rs32662004rs32662004-上游引物：TGCATTAGTCCTTGGCTCCT(SEQIDNO:23)；rs32662004-下游引物：GGCACTCCCTAATTCCACAA(SEQIDNO:24)；(13)rs32495825rs32495825-上游引物：AATGTAGGAGGGAGGGAAGC(SEQIDNO:25)；rs32495825-下游引物：GGCCAGAATATTGGTGTCCA(SEQIDNO:26)；(14)rs31580048rs31580048-上游引物：GGACTTCTTCTTGGCTTTGG(SEQIDNO:27)；rs31580048-下游引物：GGGGTAACCTGGAAACTGGT(SEQIDNO:28)；(15)rs30694738rs30694738-上游引物：CCACTCTTCTCCTCTTTAACATCC(SEQIDNO:29)；rs30694738-下游引物：ATAAATTTTGCGGCATGGTT(SEQIDNO:30)；(16)rs30902647rs30902647-上游引物：GGAAAAAGCAGTTTGCTTGG(SEQIDNO:31)；rs30902647-下游引物：ATAATGGTTTTGCTATACTTACCTTGT(SEQIDNO:32)；(17)rs3678938rs3678938-上游引物：GAGTGCTGCAAGGTGACAAG(SEQIDNO:33)；rs3678938-下游引物：GAGGTCAGAAGAGGGCACTG(SEQIDNO:34)；(18)rs30776510rs30776510-上游引物：GGAGAGGCCAGAATCACAAC(SEQIDNO:35)；rs30776510-下游引物：CTGTCACCAAAGGCCCTCTA(SEQIDNO:36)；(19)rs32297231rs32297231-上游引物：TTGTATCCTGGGCAGCATCT(SEQIDNO:37)；rs32297231-下游引物：CCTCACTGTCCAGACACAGCC(SEQIDNO:38)；(20)rs31145145rs31145145-上游引物：CTCCTTGGCACTGGACTCTC(SEQIDNO:39)；rs31145145-下游引物：GTTACAGCCCCATTCGTCAT(SEQIDNO:40)；(21)rs32357522rs32357522-上游引物：AGGACCCTTACAGGCTGGTT(SEQIDNO:41)；rs32357522-下游引物：GCTGGAAGCTGGATTCAGAG(SEQIDNO:42)。針對(duì)上述SNP位點(diǎn)設(shè)計(jì)的探針為：(1)rs30719154rs30719154_modify：TTTCCATCCACCTGTTTCATTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:43)；rs30719154_G：TTTTTTTTGTAACCCAAACTGACTTCAAAC(SEQIDNO:44)；rs30719154_T：TTTTTTTTTTGTAACCCAAACTGACTTCAAAA(SEQIDNO:45)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為92bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為94bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(2)rs31426703rs31426703_modify：CTTGTTCACCCTAGGAATGTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:46)；rs31426703_C：TGATGCTGGAGAATGAATGGAGGG(SEQIDNO:47)；rs31426703_T：TTTGATGCTGGAGAATGAATGGAGGA(SEQIDNO:48)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為80bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為82bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(3)rs32086848rs32086848_modify：CTAGTATGGTGGAAATAAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:49)；rs32086848_A：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAACTTTGAAAAGATGATGCTAT(SEQIDNO:50)；rs32086848_G：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAACTTTGAAAAGATGATGCTAC(SEQIDNO:51)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為120bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為118bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(4)rs31928308rs31928308_modify：TATGGAAATTTCCTCCCTGTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:52)；rs31928308_A：TAGTGTGATATTGGATGCAAAGGT(SEQIDNO:53)；rs31928308_G：TTTAGTGTGATATTGGATGCAAAGGC(SEQIDNO:54)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為80bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為82bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(5)rs32139742rs32139742_modify：ACAGACAGTGATAAATTCCTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:55)；rs32139742_A：TGAAATAAAATAACATCACCCTTT(SEQIDNO:56)；rs32139742_G：TTTGAAATAAAATAACATCACCCTTC(SEQIDNO:57)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為90bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為88bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(6)rs31336640rs31336640_modify：TTTAAGGGAAAAGGAGATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:58)；rs31336640_A：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTGAGGGAATCTAAGGAACTTTTTT(SEQIDNO:59)；rs31336640_G：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGAGGGAATCTAAGGAACTTTTTC(SEQIDNO:60)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為116bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為114bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(7)rs6297658rs6297658_modify：CAAGCTTTGTGTCACTTCTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:61)；rs6297658_A：TTTTTGAGCATCCCTGCGTGTGAATAT(SEQIDNO:62)；rs6297658_G：TTTTTTTGAGCATCCCTGCGTGTGAATAC(SEQIDNO:63)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為88bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為90bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(8)rs6302815rs6302815_modify：TCTAAAAGTTAAACGGTGCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:64)；rs6302815_A：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGAGAATTGGTTTGGCAATTTCTT(SEQIDNO:65)；rs6302815_G：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGAGAATTGGTTTGGCAATTTCTC(SEQIDNO:66)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為122bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為124bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(9)rs30146639rs30146639_modify：CCTAAGGCCGAATTCCAAGTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:67)；rs30146639_A：TTTTTTTTTTAAAGAAATGAGGCCAAGACAAT(SEQIDNO:68)；rs30146639_G：TTTTTTTTTTTTAAAGAAATGAGGCCAAGACAAC(SEQIDNO:69)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為98bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為96bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(10)rs32011713rs32011713_modify：GTGACAGTTAAGGGCCATGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:70)；rs32011713_A：TTTTTTTTTTTTTTTTTTGAGGTTCTAGTTATTGTGAGTT(SEQIDNO:71)；rs32011713_C：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGAGGTTCTAGTTATTGTGAGTG(SEQIDNO:72)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為112bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為110bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(11)rs6212353rs6212353_modify：ACAGGCTAAGATTCAGTGTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:73)；rs6212353_A：TTTTTTTTTTTTGAAAATGTGGCTCCTGTAACTT(SEQIDNO:74)；rs6212353_C：TTTTTTTTTTTTTTGAAAATGTGGCTCCTGTAACTG(SEQIDNO:75)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為102bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為100bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(12)rs32662004rs32662004_modify：TACCTGCAAGGACCCCTATTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:76)；rs32662004_A：TTTTTTTGATTCTACCTTTTTAACTCAT(SEQIDNO:77)；rs32662004_G：TTTTTTTTTGATTCTACCTTTTTAACTCAC(SEQIDNO:78)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為90bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為88bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(13)rs32495825rs32495825_modify：AGGATGGTGATGTATCATGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:79)；rs32495825_A：TTTTTTTTTTTTTTTGAAAAACTTAGATACGTCTTTT(SEQIDNO:80)；rs32495825_G：TTTTTTTTTTTTTTTTTGAAAAACTTAGATACGTCTTTC(SEQIDNO:81)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為110bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為108bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(14)rs31580048rs31580048_modify：ATGACACCAAAGCCAAGAATTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:82)；rs31580048_A：TTAGTATCTGGTCCTAAAGTTTCT(SEQIDNO:83)；rs31580048_G：TTTTAGTATCTGGTCCTAAAGTTTCC(SEQIDNO:84)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為94bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為92bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(15)rs30694738rs30694738_modify：TGTTTGTCATTATTTGTGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:85)；rs30694738_A：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTAACAAAACATAAGTGGGT(SEQIDNO:86)；rs30694738_G：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTAACAAAACATAAGTGGGC(SEQIDNO:87)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為126bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為128bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(16)rs30902647rs30902647_modify：CTTTAAATCCAAGCAAACTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:88)；rs30902647_C：TTTTTTTTTTTTTTTCTGTACAATTACTTAATGACG(SEQIDNO:89)；rs30902647_T：TTTTTTTTTTTTTTTTTCTGTACAATTACTTAATGACA(SEQIDNO:90)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為106bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為104bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(17)rs3678938rs3678938_modify：AGTCTGGCCTTCAGTAAGCTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:91)；rs3678938_A：TTTGCAGTACTCAGAATTGTAAAGT(SEQIDNO:92)；rs3678938_G：TTTTTGCAGTACTCAGAATTGTAAAGTC(SEQIDNO:93)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為86bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為84bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(18)rs30776510rs30776510_modify：AATGAGACCCAGGTGATCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:94)；rs30776510_G：TTTTTTTTTTTTTTTTTGTTCTCTTCATTGAGGTTTCGC(SEQIDNO:95)；rs30776510_T：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTTCTCTTCATTGAGGTTTCGA(SEQIDNO:96)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為114bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為112bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(19)rs32297231rs32297231_modify：ACCAAAAAATCCACGTATCTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:97)；rs32297231_A：TTTAGCCTCTGATCTCCTGTTTCTCT(SEQIDNO:98)；rs32297231_G：TTTTTAGCCTCTGATCTCCTGTTTCTCC(SEQIDNO:99)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為86bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為84bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(20)rs31145145rs31145145_modify：ACCCATGAAGGTCTGGCCTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:100)；rs31145145_C：TCCTACACAGTAAGAGACCAGGAG(SEQIDNO:101)；rs31145145_T：TTTCCTACACAGTAAGAGACCAGGAA(SEQIDNO:102)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為112bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為114bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(21)rs32357522rs32357522_modify：AAGAAGTGTAGAGAATTCATTTTTTCGCAAACCTGTACTC(SEQIDNO:103)；rs32357522_C：TAAGGCCTGCAGCCACAGAGGAGG(SEQIDNO:104)；rs32357522_T：TTTAAGGCCTGCAGCCACAGAGGAGA(SEQIDNO:105)；該組探針配合的相應(yīng)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為116bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為118bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。通用探針為：UT：CCCTCTGAGTGATGCGAGTACAGGTTTGCG(SEQIDNO:106)；UF：p-GCATCACTCAGAGGG-FAM(SEQIDNO:107)。通用探針用于與SNP位點(diǎn)特異性探針的互補(bǔ)，從而使得探針產(chǎn)生熒光。以棗莊2，回交和C57BL/6小鼠DNA為模板，分別以上述SNP引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系如表2。表2、PCR反應(yīng)體系組分體積(μl)工作濃度10×PCR緩沖液11×5×Q-Solution21×50mMMg2+0.63mMdNTPmix(各2mM)1各200μM引物(2μM/對(duì))10.2μMHotStarTaqDNA聚合酶(5單位/μl)0.12.5單位模板DNA115～20ng/μlddH2O補(bǔ)足10總體積10PCR反應(yīng)程序如表3。表3、PCR反應(yīng)程序分別利用各組位點(diǎn)特異探針及通用探針，以PCR產(chǎn)物為模板進(jìn)行LDR連接，LDR反應(yīng)體系如表4，將表中除模板外其余各組分依次加入EP管中，混勻后再分裝到各PCR管中，再把以上得到的PCR產(chǎn)物分別加入各PCR管中，放入PCR儀上運(yùn)行。表4、LDR反應(yīng)體系采用LDR方案進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物用3730型測序儀分析。LDR反應(yīng)程序如表5。表5、LDR反應(yīng)程序根據(jù)LDR連接產(chǎn)物用3730型測序儀分析后得到的結(jié)果，選擇SNP位點(diǎn)為表1中棗莊2相應(yīng)位點(diǎn)的動(dòng)物，推定其1號(hào)染色體保留有棗莊2染色體的動(dòng)物，排除1號(hào)染色體來自于C57BL/6的動(dòng)物以及1號(hào)染色體發(fā)生重組的動(dòng)物。并且，進(jìn)一步還通過復(fù)篩來鑒定。二、1號(hào)染色體基因組STR復(fù)篩鑒定從NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)篩選得到STR位點(diǎn)的序列，然后對(duì)這些STR位點(diǎn)進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。引物設(shè)計(jì)主要借助Oligo6.0程序完成。篩選得到的針對(duì)棗莊2和C57BL/6小鼠的染色體STR位點(diǎn)如表6。表6、本發(fā)明中選定的STR位點(diǎn)針對(duì)上述STR位點(diǎn)設(shè)計(jì)的引物為：(1)D1MIT64D1MIT64-上游引物：FAM-CATCAGAAGTACATCCCATTTCC(SEQIDNO:108)；D1MIT64-下游引物：GAAAGTATTTAAGAAACATC(SEQIDNO:109)；該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為216bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為236bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(2)D1MIT236D1MIT236-上游引物：FAM-CGCAAACCTGTACGCAGCATGAGGACTTGAGTTAGGA(SEQIDNO:110)D1MIT236-下游引物：CCCTCTGAGTGATGCCCCACCTAGCCTTTGTATAGGA(SEQIDNO:111)；該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為207bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為223bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(3)D1MIT303D1MIT303-上游引物：FAM-TGTTCCTCCCAAATGGTTTC(SEQIDNO:112)；D1MIT303-下游引物：CCACCTACTGGGCATACTGG(SEQIDNO:113)；該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為255bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為235bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(4)D1mit49D1mit49-上游引物：FAM-CGCAAACCTGTACGCTCCAGTGTTGCTCTCTGACA(SEQIDNO:114)；D1mit49-下游引物：CCCTCTGAGTGATGCTGATTATGTGAATGAGGGACCTT(SEQIDNO:115)；該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為87bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為93bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(5)D1mit445D1mit445-上游引物：FAM-GTACACAGGCGCACACATTC(SEQIDNO:116)；D1mit445-下游引物：CCGTGAGCACACAGTACCAC(SEQIDNO:117)；該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為330bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為316bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(6)D1MIT506D1MIT506-上游引物：FAM-GGAGAACTGCACCCCCTATT(SEQIDNO:118)；D1MIT506-下游引物：CATTGGTTACACCAGGCTCA(SEQIDNO:119)；該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為379bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為349bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(7)D1MIT113D1MIT113-上游引物：FAM-TCTTTCCTCCTCAAAATCAGG(SEQIDNO:120)；D1MIT113-下游引物：AGGAAAATCCACTTCTAATCTGG(SEQIDNO:121)；該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為115bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為101bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(8)D1MIT150D1MIT150-上游引物：FAM-TAAGGCTTCCTCTGGTGTCC(SEQIDNO:122)；D1MIT150-下游引物：TGATTGCAATATACCAGGTTTCC(SEQIDNO:123)；該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為157bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為147bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。(9)D1MIT209D1MIT209-上游引物：FAM-AAACTGAGAGGTGGCTTGGA(SEQIDNO:124)；D1MIT209-下游引物：CCATGTCTGCTCTCTCCACA(SEQIDNO:125)；該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度為325bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了棗莊2特點(diǎn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物長度為317bp的代表相應(yīng)動(dòng)物保留了C57BL/6品系特點(diǎn)。以棗莊2，回交和C57BL/6小鼠DNA為模板，分別以上述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系如表2。PCR反應(yīng)程序如表3。采用多重PCR方案進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用3730型測序儀分析。結(jié)果，經(jīng)過10代回交，成功培育以C57BL/6為背景的包含棗莊2的1號(hào)染色體的染色體替換品系，該品系的遺傳背景已純合至95%以上，具有完全的來自C57BL/6J的線粒體和Y染色體，其1號(hào)染色體來自于棗莊2品系。從表型上看，10代回交獲得的小鼠與C57BL/6較為相近。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。